Inhibition of Expression of HTLV-1 Structural Genes Mediated by Short Hairpin RNA In Vitro

Background: Human T-lymphotropic virus 1 (HTLV-1) is associated with the T-cell malignancy known as adult T-cell leukemia! lymphoma (ATLL) and with a disorder called HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). Currently, the treatment of these diseases is based on symptom relief. RNA interference (RNAi) technology has been described as an efficient mechanism for development of new therapeutic methods. Thus, the aim of this study was to evaluate the inhibition of HTLV-1 structural proteins using short hairpin RNAs (shRNAs) expressed by non-viral vectors. Materials and Methods: Reporter plasmids that express enhanced green fluorescent protein-Gag (EGFP-Gag) and EGFP-Env fusion proteins and vectors that express shRNAs corresponding to the HTLV-1 gag and env genes were constructed. shRNA vectors and reporter plasmids were simultaneously transfected into HEK 293 cells. Results: Fluorescence microscopy, flow cytometry and real-time PCR showed that shRNAs were effective in inhibiting the fusion proteins. Conclusion: These shRNAs are effective against the expression of structural genes and may provide an approach to the development of new therapeutic agents.

Silencing of HTLV-1 gag and env genes by small interfering RNAs in HEK 293 cells

Since the discovery of RNAi technology, several functional genomic and disease therapy studies have been conducted using this technique in the field of oncology and virology. RNAi-based antiviral therapies are being studied for the treatment of retroviruses such as HIV-1. These studies include the silencing of regulatory, infectivity and structural genes. The HTLV-1 structural genes are responsible for the synthesis of proteins involved in the entry, assembly and release of particles during viral infection. To examine the possibility of silencing HTLV-1 genes gag and env by RNA interference technology, these genes were cloned into reporter plasmids. These vectors expressed the target mRNAs fused to EGFP reporter genes. Three small interference RNAs (siRNAs) corresponding to gag and three corresponding to env were designed to analyze the effect of silencing by RNAi technology. The plasmids and siRNAs were co-transfected into HEK 293 cells. The results demonstrated that the expression of the HTLV-1 gag and env genes decreased significantly in vitro. Thus, siRNAs can be used to inhibit HTLV-1 structural genes in transformed cells, which could provide a tool for clarifying the roles of HTLV-1 structural genes, as well as a therapy for this infection. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

Galectin-3 regulates peritoneal B1-cell differentiation into plasma cells

Extracellular galectin-3 participates in the control of B2 lymphocyte migration and adhesion and of their differentiation into plasma cells. Here, we analyzed the role of galectin-3 in B1-cell physiology and the balance between B1a and B1b lymphocytes in the peritoneal cavity. In galectin-3(-/-) mice, the total number of B1a lymphocytes was lower, while B1b lymphocyte number was higher as compared to wild-type mice. The differentiation of B1a cells into plasma cells was associated with their abnormal adhesion and location on the mesentery. The B220 and CD43, constitutively expressed by B1 lymphocytes, were respectively up- and downregulated in galectin-3(-/-) mice. Mononuclear cells were strongly adhered to the mesenteric membranes of both CD43(-/-) and galectin-3(-/-) mice, but in contrast to CD43(-/-) mice, the accumulation of B1 cells in peritoneal membranes in galectin-3(-/-) mice was accompanied by their functional differentiation into plasma cells. We have shown that in the absence of galectin-3, B1-cell differentiation into plasma cells is favored and the dynamic equilibrium of B1-cell populations in the peritoneum is maintained through a compensatory increase in B1b lymphocytes.

Escrit??rio virtual

Este projeto refere-se ?? implementa????o de um modelo de gest??o que reduz os custos com as ??reas-meio, e volta o seu potencial para o provimento de solu????es das necessidades do cliente. ?? uma nova forma de conceber o tempo, o espa??o e os relacionamentos, mediante a cria????o de um escrit??rio virtual que visa aproximar os t??cnicos aos seus clientes. O funcion??rio carrega consigo o notebook e o aparelho celular podendo trabalhar em qualquer lugar e a qualquer hora, com o objetivo de atender as demandas dos clientes com prontid??o e agilidade no momento da solicita????o. Os resultados deste modelo podem ser percebidos tanto na satisfa????o dos clientes como dos funcion??rios envolvidos

Saúde, trabalho e processos de subjetivação nas escolas

Neste artigo se discute o conceito de subjetividade utilizado nas práticas de saúde. Parte-se da tese de que a concepção de subjetividade predominante no pensamento dos trabalhadores no campo da saúde não está em sintonia com valores e pressupostos de renovação de conceitos e práticas, neste âmbito, na atualidade. Defende-se o caráter processual e coletivo dos processos de produção de subjetividade, contra o caráter individualista, apriorístico e objetificado prevalente nas práticas em psicologia e campos afins. Desdobra-se desta reflexão a defesa das transformações dessas práticas tendo como norte as articulações entre gestão no trabalho e processos de subjetivação, com base nos pressupostos teórico-filosóficos da obra de M. Foucault e na ergologia de linhagem francesa. Nessa direção de análise, afirma-se a importância de se pesquisar as articulações entre organização do trabalho, produção de saúde-doença e processos de subjetivação em curso. O foco das análises é a escola pública.

Constituição do campo sensível : apegos, renúncias e liberdade – uma contribuição da filosofia budista

Esta dissertação foi construída em interface com a tradição oral milenar da filosofia budista, respeitando um estilo tradicional dos ensinamentos em sua transmissão oral. Por meio da perspectiva de uma "filosofia prática", constitui-se uma metodologia onde as questões se desdobram em reflexões e ideias encadeadas, o que permite contemplar um tema de vários ângulos, tendo por fio norteador os ensinamentos budistas da linhagem Sakya, que orientam uma postura ética para a vida cotidiana. Abordam-se as "orientações para o viver" contidas nos ensinamentos com ênfase no domínio da mente, da motivação e da intenção da ação humana. Para a realização desse exercício ético, que transforma o campo da educação – processo de ensino e de aprendizagem – e o da produção de conhecimento – constituição de saberes sobre si e sobre o mundo –, a prática da meditação se coloca como delineadora de novos contornos para o pensar, o sentir e o agir, o que se evidencia por meio do ensinamento clássico “ Libertando-se dos Quatro Apegos”, referência central para este trabalho. Nesta perspectiva, a meditação é abordada como campo da experiência, como um método com o qual podemos viver a “não separatividade de sujeito-corpo-mente”. A importância da meditação para um processo de criação de experiências constitutivas de um estar desperto. Este despertar se faz por meio de práticas onde “nós somos a experiência da mente”, “nós somos a mente em si”, e a prática da meditação nos propicia essa experiência. A experiência de "estar presente em cada momento" pode nos levar ao domínio de nós mesmos, ao reconhecimento do outro como ser humano que também somos, e ao desenvolvimento da compaixão por todos os seres. Por meio desse processo podemos reconhecer o estado Búdico, ou melhor, o estado de Budeidade que todos temos em potencial. Budha é uma potência em nós, potência de desenvolvermos compaixão equânime para com todos os seres E podemos fazer isso reconhecendo dois aspectos importantes: os quatro apegos que nos aprisionam e a maneira de nos libertarmos deles para trilhar o caminho desperto.

Caracterização molecular de três espécies de Trachycephalus (Anura: Hylidae) : investigando potenciais híbridos interespecíficos

Animais híbridos representam um desafio à taxonomia e sistemática, pois correspondem a unidades evolutivas geralmente sem clara delimitação morfológica, comportamental e genética. Híbridos podem ser morfologicamente intermediários aos parentais ou, devido à introgressão e retrocruzamentos, suas características podem se misturar tornando difícil sua identificação. Uma das formas de identificação de híbridos é por meio de ferramentas de biologia molecular, que ao utilizarem marcadores de DNA mitocondrial (herança exclusiva materna) e DNA nuclear (herança materna e paterna), permitem a comparação entre informações genéticas. Além da hibridização existem outras fontes de conflito entre dados moleculares provenientes do DNA mitocondrial e DNA nuclear, como por exemplo a retenção de polimorfismos ancentrais. Em localidades do Espírito Santo, Brasil, foram coletados indivíduos de morfologia distinta de Trachycephalus mesophaeus e T. nigromaculatus, que são as únicas espécies do gênero conhecidas nesse estado. Porém, estudos piloto usando o gene mitocondrial Citocromo Oxidase subunidade I (COI) agruparam esses espécimes com amostras de T. typhonius. Devido a estas incongruências, foram sequenciados fragmentos de dois genes mitocondriais - COI e Nicotinamida Desidrogenase subunidade 2 (ND2) e um exon nuclear (tirosinase) de 173 indivíduos de Trachycephalus, de forma a esclarecer as identificações taxonômicas e investigar a correspondência entre caracteres morfológicos e genéticos nesta linhagem, na sua área de ocorrência As filogenias moleculares, divergências genéticas, redes de haplótipos e polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) confirmaram as três espécies acima mencionadas como linhagens evolutivas distintas e revelaram mais sete indivíduos potencialmente híbridos, mas morfologicamente assinalados a T. mesophaeus, T. nigromaculatus ou T. typhonius.. Devido à taxa de evolução lenta da tirosinase, as espécies mais recentes T. typhonius e T. nigromaculatus parecem não terem sido sorteadas completamente nesse gene. Já T. mesophaeus, que é a espécie mais antiga das três, foi recuperada inequivocamente em todas as análises. De forma inédita, as análises moleculares evidenciaram a ocorrência de introgressão bidirecional entre T. nigromaculatus e T. typhonius e entre T. nigromaculatus e T. mesophaeus, sendo que há indícios de indivíduos F1 (cruzamentos entre espécies parentais puras gerando híbridos). A utilização do gene ND2 mostrou-se mais eficiente do que o gene COI nas filogenias e, apesar da tirosinase ser um gene nuclear de evolução lenta, contribuiu para a identificação de incongruências citonucleares. Nossos resultados mostram que a história filogenética de Trachycephalus é complexa e que o uso de marcadores nucleares de evolução mais rápida e ampliação dessas análises para outras espécies do gênero podem revelar mais eventos de hibridização.