Regulation of single exocytotic events by the cAMP signaling pathway

Permanece por esclarecer como a via de sinalização do cAMP modula a exocitose regulada. Os principais objetivos deste trabalho foram: i) avaliar o efeito do cAMP nos eventos exocitóticos, nas propriedades dos poros de fusão e na secreção hormonal; ii) perceber o impacto da sinalização por cAMP-HCN na exocitose e nas propriedades do poro de fusão; e iii) estudar as propriedades do poro de fusão na presença de um agente neurotóxico comum, como o alumínio. Lactotrofos, isolados a partir da hipófise anterior de ratos Wistar machos, foram usados como modelo celular. Os eventos unitários de fusão exocitótica e a prolactina (PRL) libertada foram avaliados, respetivamente, em ensaios eletrofisiológicos efectuados segundo a técnica de contacto hermético no modo sobre a célula aderida à pipeta porta-elétrodo e com recurso a métodos imunológicos de deteção. Os níveis intracelulares de cAMP foram aumentados por 3-isobutil-1-metilxantina (IMBX), forscolina e N6,2'-O-dibutiril adenosina- 3',5'-monofosfato cíclico (dbcAMP). A expressão dos canais HCN foi determinada por Western-blot, qRT-PCR e imunocitoquímica em combinação com microscopia confocal. Culturas primárias de lactotrofos foram também transfetadas com DNA plasmídico que codifica HCN2 juntamente com a proteína-verde-fluorescente e um agente farmacológico foi usado para avaliar o efeito de cAMP-HCN na exocitose. Observou-se que os lactotrofos responderam à forscolina e ao dbcAMP libertando PRL de um modo bifásico e dependente da concentração, uma vez que a secreção aumentou e diminuiu, respectivamente, na gama de baixas e altas concentrações. Os compostos que elevaram os níveis de cAMP aumentaram os eventos transientes e impediram a fusão completa. Além disso, o dbcAMP promoveu o aparecimento de eventos exocitóticos transientes de elevada periodicidade, cujos poros de fusão, de maior diâmetro, se mativeram abertos durante mais tempo. A expressão das quatro isoformas de HCN foi confirmada nos lactotrofos ao nível do mRNA e, tal como no coração, rim e hipófise, o mais abundante codifica a isoforma HCN2. Nos lactotrofos com sobre-expressão desta isoforma, o dbcAMP não só aumentou a frequência dos eventos transientes e a condutância dos poros, mas também a frequência dos eventos de fusão completa. Enquanto o bloqueador dos canais HCN, ZD7288, reduziu a frequência dos eventos transientes e de fusão completa desencadeados por dbcAMP e diminuiu o diâmetro dos poros de fusão. A simultânea diminuição da libertação de PRL, da frequência dos eventos transientes e do diâmetro dos poros de fusão representaram as principais alterações observados após pré-tratamento dos lactotrofos com concentração micromolar de alumínio. Em conclusão, os resultados demonstram que elevados níveis de cAMP reduzem a secreção de PRL devido à estabilização dos poros de fusão no estado de maior abertura. Além disso, a via de sinalização cAMP-HCN afecta a actividade exocitótica e modifica as propriedades dos poros de fusão, que parecem ser igualmente importantes na citotoxicidade induzida por alumínio.

Estimating fuzzy membership functions parameters by the levenberg-marquardt algorithm

In previous papers from the authors fuzzy model identification methods were discussed. The bacterial algorithm for extracting fuzzy rule base from a training set was presented. The Levenberg-Marquardt algorithm was also proposed for determining membership functions in fuzzy systems. In this paper the Levenberg-Marquardt technique is improved to optimise the membership functions in the fuzzy rules without Ruspini-partition. The class of membership functions investigated is the trapezoidal one as it is general enough and widely used. The method can be easily extended to arbitrary piecewise linear functions as well.

Incipient turn-to-turn winding fault diagnosis of power transformers by the on-load exciting current Extended Park`s Vector Approach

This paper presents the application of the on-load exciting current Extended Park's Vector Approach for diagnosing incipient turn-to-turn winding faults in operating power transformers. Experimental and simulated test results demonstrate the effectiveness of the proposed technique, which is based on the spectral analysis of the AC component of the on-load exciting current Park's Vector modulus.

Detection of trasformer intermittent winding faults by the on-load exciting current Park`s vector approach

This paper presents the application of the on-load exciting current Park's Vector Approach for diagnosing permanent and intermittent turn-to-turn winding faults in operating power transformers. First, an experimental investigation of the behaviour of the transformer under the occurrence of both permanent and intermittent winding faults is presented. Finally, experimental test results demonstrate the effectiveness of the proposed diagnostic technique, which is based on the on-line monitoring of the on-load exciting current Park's Vector patterns.

GIS on tourism planning: preventing the impacts caused by the developing tourism activity in a specific site

The environment is one of the greatest concerns of humankind. Nowadays, the activities which improve or destroy it must be assessed and controlled by efficient means which should permit the control of environmental impact caused by the development of these activities. This document presents an information system implementation, as a Decision Support system, allowing the Decision Maker to evaluate, foresee and control the future environmental impact of Tourism through consultation, the management and the presentation of decision schemes based on defined measures of a regional tourism planning.

Contamination of farmed gilthead sea bream (Sparus aurata, Linnaeus, 1758) by the parasite Amyloodinium ocellatum: a proteomic approach

Dissertação de mestrado, Aquacultura e Pescas, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Uniersidade do Algarve, 2015

Rare, Threatened and Endangered Species and Communities Tracked by the SC DNR Heritage Trust Program

This species lists for South Carolina provides the scientific name, common name, USESA designation, state protection level, global rank, and state rank of rare, threatened, and endangered species and communities known to occur in the state.

Suggestions by the South Carolina Citizens’ Educational Association for the observance of American Education Week, December 3-9, 1922

The bulletin presents an outline for an educational talk for speakers promoting education in South Carolina.