Efeito inseticida de vicilinas isoladas de sementes de erythrina velutina em condições de semi-campo para moscas das frutas (ceratitis capitata)

Chitin-binding vicilins from legume seeds (Erythrina velutina. Canavalia ensiformes and Phaseolus vulgares) were isolated by ammonium sulfate followed by affinity chromatography on a chitin column. Effect of these vicilins on female adults of Ceratitis capitata was examined by bioassay and in a semi-field assay model. Mechanism of action of the vicilins was determined by in vivo digestibility and chitin affinity. Among the tested vicilins, E. velutina when added to diet caused strong effect on mortality at 10% dose. This insecticidal property was tested in a semi-field assay which showed the same effect observed in laboratory conditions, where doses of 10% and 15% were lethal to female adults of C. capitata. These deleterious effects were not only associated to the binding to chitin structures present in peritrophic membrane, but principally to its low digestibility in the C. capitata digestive tract. This fact was confirmed because chiting binding proteins as WGA and the other tested vicilins were not toxic to female adults of C. capitata due susceptibility of these proteins to digestive enzymes of the insects. By other side EvV was more resistant to digestive enzymes, causing deleterious effects on female adults of C. capitata. These results showed that EvV may be part of the pest management programs or an alternative in plant improvement program in the population control of this fruticulture pest

Degradação de Ocratoxina a: estudo de processo e toxicidade

A ocratoxina A (OTA), micotoxina encontrada em diferentes níveis e em diversas matrizes, apresenta efeitos carcinogênicos, nefrotóxicos e teratogênicos. O desenvolvimento de métodos capazes de diminuir esta contaminação a níveis permitidos pela legislação é incentivado e os processos biológicos utilizados envolvem o uso de enzimas e/ou microrganismos para degradação da OTA e são preferenciais pela especificidade, bem como pelas condições brandas para a detoxificação. O objetivo do trabalho foi estudar a ação de carboxipeptidase A nos níveis e na toxicidade de OTA, visando aplicar a técnica para detoxificar farinhas de trigo. Primeiramente foi estimado o risco de exposição à ocratoxina A pelo consumo de farinhas de trigo. Para isso foram estabelecidas condições de determinação de OTA em farinhas de trigo, empregando técnicas de estatística multivariada para definir os principais interferentes na extração de OTA pelo método de QuEChERS e detecção em CLAE-FL. O método validado permitiu a avaliação da ocorrência natural em 20 amostras de farinha de trigo, estando estas contaminadas na faixa de 0,22 a 0,85 µg.kg-1 , apresentando um valor de ingestão diária de 0,08 ngOTA.dia-1 .kgmassacorpórea -1 e uma disponibilidade de 94,4%. Em seguida foi realizada a padronização da extração de carboxipeptidase A em biomassa de Rhizopus oryzae que consistiu em agitação ultrassônica durante 30 minutos numa potencia fixa de 150 W e 40 kHz e a triagem de agentes biológicos para degradação de OTA. Para o estudo da degradação in vitro de OTA, método de extração e detecção de OTA e OTα em CLAEFL foi validado e o processo de degradação foi realizado com Rhizopus oryzae e Trichoderma reesei, obtendo-se uma redução máxima de 63,5% e 57,7%, respectivamente. A degradação apresentou uma correlação alta (R>0,9) e significativa (p<0,05) com a produção de Otα, indicando que ocorreu a produção de enzimas capazes de hidrolisar a micotoxina, por exemplo, a carboxipeptidase A. O estudo da toxicidade de OTA e seu metabólito OTα foi realizado em neutrófilos humanos, onde foi observado a ausência de efeito tóxico de OTα. Também foi determinado o mecanismo de toxicidade de OTA pelo aumento de Ca2+ intracelular pela liberação a partir das reservas internas. Esta liberação, subsequentemente, provoca uma cascata de eventos, nomeadamente: a produção de espécies reativas, depleção de ATP, perda de ΔΨm, levando à morte por necrose. Para reduzir o risco de exposição à micotoxina pela ingestão de matéria prima contaminada, carboxipeptidase A extraída de diferentes fontes foi aplicada na hidrólise de OTA em farinha de trigo para posterior determinação do conteúdo residual de OTA e OTα, empregando método validado. O estudo mostrou uma redução de OTA entre 16,8 e 78,5% e produção de OTα entre 2 a 8,2 ng.g-1 . As carboxipeptidases mais promissoras para degradação foram as provenientes de Rhizopus e Trichoderma e a carboxipeptidase comercial. Ficou demonstrado que se pode recomendar a aplicação de enzimas proteolíticas, tipo carboxipeptidase, para reduzir o risco de exposição à micotoxina quando utilizada matéria prima contaminada, por exemplo, farinha de trigo para diferentes processos. A transformação de OTA para OTα e seus efeitos na redução da toxicidade da micotoxina corroboram com esta afirmação.

Utilização de glúten de trigo na alimentação de dourada, Sparus aurata (Linnaeus, 1758)

A incorporação de fontes proteicas alternativas à farinha de peixe na alimentação de espécies piscícolas tem sido objecto de variados estudos no âmbito da nutrição animal. Neste contexto realizou-se o presente trabalho, cujo objectivo foi determinar o nível de substituição ideal de farinha de peixe por glúten de trigo na alimentação de dourada. Foram realizados dois ensaios, um de crescimento e um de digestibilidade. O ensaio de crescimento efectuou-se para determinar qual o nível máximo de substituição sem que os animais apresentassem diferenças significativas em termos de taxa de crescimento. O ensaio de digestibilidade teve como principal objectivo determinar qual das dietas testadas proporcionaria melhores valores de utilização digestiva por parte dos animais. Tendo em conta os resultados dos ensaios e as condições experimentais em que se realizaram, verificou-se que a substituição até 40% não afecta significativamente o desempenho zootécnico das douradas. ABSTRACT; The incorporation of alternative protein sources in fish diets has been the aim of many scientific experiments in animal nutrition. ln this study, the main objective was to evaluate the ideal level of wheat gluten incorporation in substitution of fishmeal in diets for gilthead sea bream (Sparus aurata L). To reach this objective, two experiments were carried out, in which growth and digestibility were studied. The aim of the growth experiment was to evaluate the maximum level of fish meal substitution by wheat gluten (20%, 40%, 60% and 80%), without affecting significantly the animals growth rate. The digestibility experiment took place to evaluate which animals presented better food utilization with the tested diets (20%, 40%, 60% and 80%). Observing the results of these two experiments, it was concluded that the substitution until 40% did not affect significantly the performance of the fishes.

Efeito do teor proteico da dieta na digestibilidade da bolota em porcos alentejanos

O objectivo do presente ensaio é avaliar o efeito do teor proteico da dieta na digestibilidade da bolota em porcos Alentejanos. Para tal, nove animais foram seccionados e colocados em caixas metabólicas onde as dietas foram distribuídas aleatoriamente, segundo o Modelo de Quadrado Latino 3 x 3. O ensaio in vivo foi assim dividido em três períodos, durante os quais se recolheram amostras de alimento, refugos fezes e urina para posterior análise em laboratório. Foi determinada a composição química do alimento e calculada a digestibilidade e balanço de azoto dos três tratamentos. Também foi determinado o conteúdo em compostos fenólicos e taninos da bolota pelo método do Folin­ Ciocalteu, taninos condensados pelo método do Butanol-HCl e a capacidade complexante dos taninos pelo método da Difusão Radial. Devido à reduzida capacidade de os taninos complexarem as proteínas e à baixa ingestão da luzerna não foi possível verificar diferenças na proteína ingerida entre os tratamentos testados. ABSTRACT; The aim of present experiment is to evaluate the effect of protein content in diet digestibility of oak acorn in Alentejano pigs. For that, nine animals were selected and housed in metabolic cages where diets were given randomly, in a Latin Square model3 x 3. The in vivo experiment was divided in three periods, during which were collected feed, refusals, feces and urine samples for subsequent laboratory analyses. Chemical feed composition was determinate and calculated the digestibility and nitrogen balance in three treatments. It was also determinate the amount of phenolic compounds and tannins on oak acorn by Folin-Ciocalteu assay, condensed tannins by Butanol-HCl assay and the availability to form complex with protein by Radial Diffusion assay. It was observed a reduced availability of tannins to bind proteins and a low Lucerne intake, so it wasn't possible to verify differences on protein intake, between tested treatments.

Utilização de n-alcanos e álcoois de cadeia longa para estimar a ingestão e a digestibilidade em porcos alentejanos

O número diminuto de estudos sobre a técnica dos n-alcanos para porcos Alentejanos motivou o interesse em realizar um ensaio que simulasse as ingestões reais dos animais em Montanheira, no sentido de se compreender melhor o comportamento alimentar destes animais em condições extensivas. Para validar a técnica dos n-alcanos com altos níveis de ingestão em porcos Alentejanos, realizou-se um ensaio in vivo, em caixas metabólicas, com nove machos castrados da raça suína Alentejana com peso médio de 97,64 kg. O delineamento do ensaio experimental foi efectuado segundo o quadrado latino e os suínos foram alimentados três vezes por dia com bolota e luzerna desidratada foi também fornecido a cada animal diariamente, dois bolinhos contendo alcanos sintéticos (C32 e C36). No período experimental foram realizadas colheitas de fezes, refugos e alimento, para se estimar pelo método in vivo a digestibilidade e a ingestão. Calcularam-se as taxas de recuperação fecal para os n-alcanos e para os álcoois de cadeia longa, com o intuito de se identificar aqueles que apresentaram valores mais elevados e semelhantes entre si. O alcano que mostrou apresentar uma taxa de recuperação mais elevada e semelhante aos alcanos sintéticos foi o C29. Em relação aos álcoois de cadeia longa o que mostrou a taxa de recuperação fecal mais alta foi o C280H. Os n-alcanos naturais que melhor forneceram uma estimativa da digestibilidade foram o C25 e o C27. Na estimativa da ingestão os pares de alcanos que mais se aproximaram do valor real foram o C 29: C32 e o C29:C36· ABSTRACT; The miniature number of studies of the n-alkanes for Alentejano pigs motivated the interest in carrying 1hrough an essay that it simulated the real intake of the animal in "Montanheira”, the direction of to better understand the alimentary behavior of these animals in extensive conditions. To validate the technique of the n-alkanes with high levels of intake in Alentejano pigs, an in vivo essay was become fulfilled, in metabolic cages, with nine castred males of Alentejana swine race with average weight of97,64 kg. The delineation of the experimental essay was effected according to latin square and the swines had been fed 1hree times per day with acorn and deshydrated lucerne (Medicago sativa). Also it was supplied to each animal daily, two cookies contend synthetic alkanes (C32 e C36). ln experimental period had been carried through harvests of faeces, rubbishes and foods, to estimate digestibility and intake. The fecal recoveries for the n-alkanes and the long chain alcohols had been calculated, with the intention to identifying those that had presented higher and similar values. The alkane that showed to present a tax of higher and similar fecal recovery to synthetic alkanes was the C29. The long chain alcohol that it showed the higher fecal recovery was the C28OH. The natural alkanes that had better supplied an estimate of digestibility had been the C25 and C27. ln the estimate of intake the pairs of alkanes that been more come close to the real value had been the pair C29:C32 and the C29:C36.