Sterol regulatory element binding protein-1a transactivates 6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase gene promoter

6-Phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase (PFKFB)catalyzes the synthesis and degradation of fructose-2,6-bisphosphate, a key modulator of glycolysis-gluconeogenesis. To gain insight into the molecular mechanism behind hormonal and nutritional regulation of PFKFB expression, we have cloned and characterized the proximal promoter region of the liver isoform of PFKFB (PFKFB1) from gilthead sea bream (Sparus aurata). Transient transfection of HepG2 cells with deleted gene promoter constructs and electrophoretic mobility shift assays allowed us to identify a sterol regulatory element (SRE) to which SRE binding protein-1a (SREBP-1a)binds and transactivates PFKFB1 gene transcription. Mutating the SRE box abolished SREBP-1a binding and transactivation. The in vivo binding of SREBP-1a to the SRE box in the S. aurata PFKFB1 promoter was confirmed by chromatin immunoprecipitation assays. There is a great deal of evidence for a postprandial rise of PFKB1 mRNA levels in fish and rats. Consistently, starved-to-fed transition and treatment with glucose or insulin increased SREBP-1 immunodetectable levels, SREBP-1 association to PFKFB1 promoter, and PFKFB1 mRNA levels in the piscine liver. Our findings demonstrate involvement of SREBP-1a in the transcriptional activation of PFKFB1, and we conclude that SREBP-1a may exert a key role mediating postprandial activation of PFKFB1 transcription.

Prosessimuuttujien vaikutus märän rainan irrotustapahtumaan

Työn tavoitteena oli selvittää rainan irrotukseen puristinosan keskitelalta vaikuttavat tärkeimmät tekijät. Työn avulla pyrittiin ymmärtämään tuotantokoneella esiintyvien prosessimuuttujien vaikutusta rainan irrotustapahtumaan ja puristin- ja kuivatusosan väliseen vetoerotarpeeseen. Samalla tutkittiin märkävetojen vaikutusta paperin laatuun ja fluting-käyttäytymiseen HSWO-painossa. Kirjallisuusosassa käsiteltiin märän rainan irrotuksen perusteoriaa sekä rainan ja telapinnan väliseen adheesioon vaikuttavia tekijöitä. Kirjallisuusviitteiden avulla koottiin yhteen tärkeimmät rainan irrotukseen ja keskitelan ajettavuuteen vaikuttavat tekijät. Kirjallisuuden antamien viitteiden perusteella valittiin seurattavat prosessimuuttujat kokeelliseen osaan. Työn kokeellinen osa suoritettiin tuotantokoneella prosessiseurantana. Irrotusta tutkittiin rainan irrotuskohdan muutosten ja puristin- ja kuivatusosan välisen vetoeron avulla. Seurannan perusteella pyrittiin löytämään normaalissa ajotilanteessa rainan irrotusetäisyyteen suurimmat vaihteluita aiheuttavat tekijät. Lisäksi suoritettiin muutamia koeajoja, joiden uskottiin vaikuttavan irrotukseen. Valikoiduista koepisteistä analysoitiin myös vaikutus paperin laatusuureisiin. Työn perusteella selvitettiin suurin osa kyseisellä koneella irrotukseen vaikuttavista muuttujista. Tutkituista viira- ja puristinosan mekaanisista muuttujista eniten irrotukseen vaikuttivat koneen nopeus ja suihkuviirasuhde. Myös viiraosan vedenpoistoelementeillä ja puristinosan höyrylaatikolla havaittiin olevan vaikutusta irrotukseen. Prosessiin lisätyistä raaka-aineista irrotukseen vaikuttivat eniten CTMP:n osuus tuoremassasta, kationinen retentioaine sekä massatärkkelys. Massojen jauhatuksella sekä pohjapaperin täyteainepitoisuudella oli myös selvä vaste irrotukseen. Prosessin kemiallista tilaa kuvaavista suureista irrotukseen vaikutti selvimmin massasysteemin varaustila. Puristin- ja kuivatusosan välisen vetoeron korvaaminen viira- ja puristinosan välisellä vetoerolla helpotti irrotusta keskitelalta, mutta ei tuonut etuja paperin laatuominaisuuksiin eikä vähentänyt fluting-käyttäytymistä.

Sterol regulatory element binding protein-1a transactivates 6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase gene promoter

6-Phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase (PFKFB)catalyzes the synthesis and degradation of fructose-2,6-bisphosphate, a key modulator of glycolysis-gluconeogenesis. To gain insight into the molecular mechanism behind hormonal and nutritional regulation of PFKFB expression, we have cloned and characterized the proximal promoter region of the liver isoform of PFKFB (PFKFB1) from gilthead sea bream (Sparus aurata). Transient transfection of HepG2 cells with deleted gene promoter constructs and electrophoretic mobility shift assays allowed us to identify a sterol regulatory element (SRE) to which SRE binding protein-1a (SREBP-1a)binds and transactivates PFKFB1 gene transcription. Mutating the SRE box abolished SREBP-1a binding and transactivation. The in vivo binding of SREBP-1a to the SRE box in the S. aurata PFKFB1 promoter was confirmed by chromatin immunoprecipitation assays. There is a great deal of evidence for a postprandial rise of PFKB1 mRNA levels in fish and rats. Consistently, starved-to-fed transition and treatment with glucose or insulin increased SREBP-1 immunodetectable levels, SREBP-1 association to PFKFB1 promoter, and PFKFB1 mRNA levels in the piscine liver. Our findings demonstrate involvement of SREBP-1a in the transcriptional activation of PFKFB1, and we conclude that SREBP-1a may exert a key role mediating postprandial activation of PFKFB1 transcription.