Placental hydroxymethylation vsmethylation at the imprinting control region 2 on chromosome 11p15.5

In addition to methylated cytosines (5-mCs), hydroxymethylcytosines (5-hmCs) are present in CpG dinucleotide-enriched regions and some transcription regulator binding sites. Unlike methylation, hydroxymethylation does not result in silencing of gene expression, and the most commonly used methods to study methylation, such as techniques based on restriction enzymatic digestion and/or bisulfite modification, are unable to distinguish between them. Genomic imprinting is a process of gene regulation where only one member of an allelic pair is expressed depending on the parental origin. Chromosome 11p15.5 has an imprinting control region (ICR2) that includes a differentially methylated region (KvDMR1) that guarantees parent-specific gene expression. The objective of the present study was to determine the presence of 5-hmC at the KvDMR1 in human placentas. We analyzed 16 third-trimester normal human placentas (chorionic villi). We compared two different methods based on real-time PCR after enzymatic digestion. The first method distinguished methylation from hydroxymethylation, while the other method did not. Unlike other methylation studies, subtle variations of methylation in ICRs could represent a drastic deregulation of the expression of imprinted genes, leading to important phenotypic consequences, and the presence of hydroxymethylation could interfere with the results of many studies. We observed agreement between the results of both methods, indicating the absence of hydroxymethylation at the KvDMR1 in third-trimester placentas. To the best of our knowledge, this is the first study describing the investigation of hydroxymethylation in human placenta using a genomic imprinting model.

Elevated levels of plasma osteoprotegerin are associated with all-cause mortality risk and atherosclerosis in patients with stages 3 to 5 chronic kidney disease

Osteoprotegerin (OPG) regulates bone mass by inhibiting osteoclast differentiation and activation, and plays a role in vascular calcification. We evaluated the relationship between osteoprotegerin levels and inflammatory markers, atherosclerosis, and mortality in patients with stages 3-5 chronic kidney disease. A total of 145 subjects (median age 61 years, 61% men; 36 patients on hemodialysis, 55 patients on peritoneal dialysis, and 54 patients with stages 3-5 chronic kidney disease) were studied. Clinical characteristics, markers of mineral metabolism (including fibroblast growth factor-23 [FGF-23]) and inflammation (high-sensitivity C-reactive protein [hsCRP] and interleukin-6 [IL-6]), and the intima-media thickness (IMT) in the common carotid arteries were measured at baseline. Cardiac function was assessed by color tissue Doppler echocardiography. After 36 months follow-up, the survival rate by Kaplan-Meier analysis was significantly different according to OPG levels (χ2=14.33; P=0.002). Increased OPG levels were positively associated with IL-6 (r=0.38, P<0.001), FGF-23 (r=0.26, P<0.001) and hsCRP (r=0.0.24, P=0.003). In addition, OPG was positively associated with troponin I (r=0.54, P<0.001) and IMT (r=0.39, P<0.0001). Finally, in Cox analysis, only OPG (HR=1.07, 95%CI=1.02-1.13) and hsCRP (HR=1.02, 95%CI=1.01-1.04) were independently associated with increased risk of death. These results suggested that elevated levels of serum OPG might be associated with atherosclerosis and all-cause mortality in patients with chronic kidney disease.

Effects of 5-aza-2′deoxycytidine on RECK gene expression and tumor invasion in salivary adenoid cystic carcinoma

Reversion-inducing cysteine-rich protein with kazal motifs (RECK), a novel tumor suppressor gene that negatively regulates matrix metalloproteinases (MMPs), is expressed in various normal human tissues but downregulated in several types of human tumors. The molecular mechanism for this downregulation and its biological significance in salivary adenoid cystic carcinoma (SACC) are unclear. In the present study, we investigated the effects of a DNA methyltransferase (DNMT) inhibitor, 5-aza-2′deoxycytidine (5-aza-dC), on the methylation status of the RECK gene and tumor invasion in SACC cell lines. Methylation-specific PCR (MSP), Western blot analysis, and quantitative real-time PCR were used to investigate the methylation status of the RECK gene and expression of RECK mRNA and protein in SACC cell lines. The invasive ability of SACC cells was examined by the Transwell migration assay. Promoter methylation was only found in the ACC-M cell line. Treatment of ACC-M cells with 5-aza-dC partially reversed the hypermethylation status of the RECK gene and significantly enhanced the expression of mRNA and protein, and 5-aza-dC significantly suppressed ACC-M cell invasive ability. Our findings showed that 5-aza-dC inhibited cancer cell invasion through the reversal of RECKgene hypermethylation, which might be a promising chemotherapy approach in SACC treatment.

Sequence analysis of the 5′ third of glycoprotein C gene of South American bovine herpesviruses 1 and 5

Bovine herpesviruses 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) share high genetic and antigenic similarities, but exhibit marked differences in tissue tropism and neurovirulence. The amino-terminal region of glycoprotein C (gC), which is markedly different in each of the viruses, is involved in virus binding to cellular receptors and in interactions with the immune system. This study investigated the genetic and antigenic differences of the 5′ region of the gC (5′ gC) gene (amino-terminal) of South American BoHV-1 (n=19) and BoHV-5 (n=25) isolates. Sequence alignments of 374 nucleotides (104 amino acids) revealed mean similarity levels of 97.3 and 94.2% among BoHV-1 gC (gC1), respectively, 96.8 and 95.6% among BoHV-5 gC (gC5), and 62 and 53.3% between gC1 and gC5. Differences included the absence of 40 amino acid residues (27 encompassing predicted linear epitopes) scattered throughout 5′ gC1 compared to 5′ gC5. Virus neutralizing assays testing BoHV-1 and BoHV-5 antisera against each isolate revealed a high degree of cross-neutralization between the viruses, yet some isolates were neutralized at very low titers by heterologous sera, and a few BoHV-5 isolates reacted weakly with either sera. The virus neutralization differences observed within the same viral species, and more pronounced between BoHV-1 and BoHV-5, likely reflect sequence differences in neutralizing epitopes. These results demonstrate that the 5′ gC region is well conserved within each viral species but is divergent between BoHV-1 and BoHV-5, likely contributing to their biological and antigenic differences.

Análise de inosina-5'-monofosfato (5'-IMP) e seus derivados em diferentes músculos de bovinos, suínos e ovinos

As concentrações de inosina-5'-monofosfato e seus derivados (adenosina monofosfato, hipoxantina e inosina) nos músculos Psoas major, Latissimus dorsi, Tensor fascia e Extensor carpi radialis de bovinos, suínos e ovinos foram determinadas através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). A Análise de Variância (ANOVA) dos dados mostraram que as concentrações de 5'-IMP e seus derivados foram significativamente diferentes entre as três espécies (p < 0,001). A maior concentração de 5'-IMP foi detectada nos músculos de ovinos (média de 108,2 mg/100g) seguida pelos de suínos (média de 97 mg/100g) e pelos de bovinos (média de 69,3 mg/100g). Houve variações significativas nas concentrações no músculo, entre os animais nas espécies bovina (p < 0,01) e ovina (p < 0,05), porém não entre os da espécie suína (p > 0,05). Não houve diferenças significativas entre os tipos de músculo em bovinos e ovinos (p > 0,05), mas em suínos (p < 0,01) observou-se variação significativa.

SENSORY ANALYSIS OF A MODEL SYSTEM USING 5'-IMP AND CYSTEINE AT DIFFERENT pH

Sensory analysis was used to get an overall flavour description of a reaction mixtures containing 5'-IMP and Cysteine. Ribose/cysteine systems were used as reference systems. Results from triangle and aroma profiling show a clear correlation between the terms used and the volatile analysis described in literature for these model systems. For instance reactions at pH 3.0 and 4.5 for 5'-IMP/cysteine systems, which were described as "meaty" and "boiled meat" by panellists, presented, in the literature, the higher number of "meaty" compounds in volatile analysis (1, 7, 8, 20) .

Quantificação de 5-metiltetrahidrofolato no processamento e conservação de vinhos de uvas viníferas e híbridas

Os folatos compõem uma classe de vitaminas redescoberta nas últimas décadas pela sua importante associação com diversas funções, nos vários processos metabólicos no organismo humano. As principais fontes descritas na literatura são os vegetais, os cereais e as leveduras. Objetivou-se quantificar o 5-metiltetrahidrofolato (5-metilTFH) em vinhos durante o processamento e conservação. Foram coletadas amostras de vinhos tintos das variedades viníferas Cabernet Sauvignon, Merlot e Pinot noir, e das não viníferas Isabel (tinta) e Niágara (branca) na colheita, no final da fermentação alcoólica, e maloláctica e seguindo-se aos 4, 7, 12 e 24 meses de conservação a partir do início da fermentação. A técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) foi utilizada para a separação, identificação e quantificação. Os resultados mostraram que os níveis de 5-metil-THF aumentaram consideravelmente durante a fermentação alcoólica e continuaram aumentando até o término da fermentação maloláctica. Os níveis mantiveram-se estáveis durante um período de 3 a 6 meses para o vinho branco e de 1 a 2 anos para os vinhos tintos, dependendo da variedade. Os vinhos tintos de viníferas se mostraram uma boa fonte de 5-metilTHF.

Determinação do 5-hidroximetilfurfural em méis utilizando cromatografia eletrocinética capilar micelar

Neste trabalho foi investigado o índice de HMF (5-hidroximetilfurfural) em méis comercializados em Porto Alegre - RS, utilizando Cromatografia Capilar Eletrocinética Micelar. O HMF, produto da condensação da frutose, é um indicador da qualidade e conservação do mel. Foram analisadas 11 marcas de méis comercializados na cidade de Porto Alegre. O composto estudado esteve presente em todas as amostras, em um intervalo de concentração de 0,191 a 6,206 mg.kg-1. Para quantificar o HMF presente nos méis, utilizou-se a técnica de adição de padrão. A taxa de recuperação foi de 98% e o limite de detecção foi de 0,025 mg.kg-1. O limite permitido de HMF em méis, segundo a legislação brasileira, é de 60 mg.kg-1.

Avaliação da metodologia microbiológica para determinação de 5-metiltetrahidrofolato em suco de caju (Anacardium occidentale L.)

Embora o suco de caju seja bastante consumido no Brasil e muitos estudos sobre seu valor nutricional tenham sido publicados, a literatura não reporta estudos sobre a determinação de folatos nesse suco. Várias técnicas analíticas podem ser utilizadas visando à detecção da referida vitamina. Optou-se por utilizar o ensaio microbiológico oficial de determinação de folatos em alimentos, utilizando-se Lactobacillus casei como microrganismo de teste. Foram testados a utilização de ultrassom e tratamento enzimático como fases preparatórias, a fim de determinar qual a melhor metodologia a ser empregada. Foram comparados também o uso de padrões de ácido fólico e folato. Os resultados mostraram que o emprego de enzima é indicado como fase preparatória na determinação desta vitamina em suco de caju. A utilização de ultrassom não interferiu, significativamente, nos resultados encontrados, sendo seu emprego dispensável. Os teores de folato encontrados no suco de caju integral in natura indicam que o consumo de uma porção de 200 mL do suco equivale à ingestão de aproximadamente 500 µg de folato, valor superior à ingestão diária recomendada para adultos.

Geografia da diálise peritoneal no Brasil: análise de uma coorte de 5.819 pacientes (BRAZPD)

INTRODUÇÃO: O Brasil é um país continental com grande diversidade demográfica, social e cultural. Esse fator pode determinar diferenças demográficas, clínicas e no desfecho apresentado por pacientes portadores de doença renal crônica em diálise peritoneal (DP). OBJETIVO: Avaliar as características clínicas e os desfechos apresentados por pacientes em DP nas diversas regiões do Brasil, analisando uma coorte de pacientes (BRAZPD) no período de dezembro de 2004 a outubro de 2007. PACIENTES E MÉTODOS: Os dados foram coletados mensalmente e os pacientes foram acompanhados até o desfecho (óbito, transplante renal, recuperação da função renal, transferência para hemodiálise ou perda de seguimento). RESULTADOS: Avaliados 5.819 pacientes incidentes e prevalentes. A maioria dos pacientes realizava terapia renal substitutiva (TRS) no Sudeste, onde a média de tempo de acompanhamento foi maior (12,3 meses) e há maior percentual de idosos (36,4%). A prevalência de diabetes mellitus é maior no Sudeste e Sul do país (38,1% e 37%, respectivamente). A maioria dos pacientes da região Norte realizou hemodiálise previamente, 66,2%. A taxa de saída por óbito foi maior na região Norte (30,1%), assim como por falência da técnica (22,3%). CONCLUSÃO: Os dados revelam diferenças demográficas, clínicas e em taxas de mortalidade e falência da técnica de DP refletindo as peculiaridades demográficas e sociais do Brasil. A geografia da DP no Brasil demonstra ser um espelho da geografia do Brasil. Portanto, políticas de saúde devem levar em conta as características de cada região para que possamos melhorar a sobrevida dos pacientes e da técnica em diálise peritoneal.

Alteração do teor de cálcio no banho de DP para 2,5 mEq/L é eficaz no reestabelecimento dos valores preconizados por diretrizes atuais em pacientes com PTH < 150 pg/dL

INTRODUÇÃO/OBJETIVO: A doença óssea adinâmica (DOA) é um achado comum em diálise peritoneal (PD) e é considerada fator de risco para desenvolvimento de fraturas e doença cardiovascular. Dados do BRAZPD apontam as soluções de cálcio a 3,5 mEq/L presentes na maioria das prescrições no país, que possui quase 9.000 pacientes em PD. É comum o balanço positivo de cálcio com concentrações a 3,5 mEq/L contribuindo para o desenvolvimento de DOA. Diretrizes atuais recomendam um PTHi na DRC V em diálise entre 2 e 9 vezes (150-500 pg/mL) o valor máximo da normalidade. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta em 6 meses do PTH-i após a conversão para solução de cálcio a 2,5 mEq/L de pacientes que usavam soluções com cálcio a 3,5 mEq/L e com PTH-i basal < 150 pg/mL. MÉTODOS: Coorte prospectiva, observacional, na qual todos pacientes prevalentes em PD entre janeiro de 2008 e janeiro de 2009 de um único centro foram incluídos. Critérios de inclusão foram:(1) estar em uso de solução de DP com cálcio a 3,5 mEq/L; (2)PTH sérico < 150 pg/mL. A critério médico, os pacientes poderiam ser convertidos ou não para soluções cálcio a 2,5 mEq/L. RESULTADOS: 35 pacientes (idade média 62 ± 17 anos) foram incluídos. Desses, 22 foram convertidos para solução de cálcio 2,5 mEq/L. Nefropatia diabética foi a principal doença de base (36%) seguido por HAS (25%) e GNC (14%). Os grupos apresentavam valores basais semelhantes de PTH, cálcio, fósforo e fosfatase alcalina. No grupo-intervenção, houve aumento significativamente maior de PTH em 6 meses comparado com o grupo-controle (Δ194 pg/dL versus Δ 92/dL; p < 0,05). Dos convertidos, 41% atingiram os valores alvo de PTH contra 14% (p < 0,05) do grupo-controle. Fósforo, cálcio e fosfatase alcalina foram semelhantes entre os grupos. CONCLUSÃO: O uso de soluções com cálcio a 2,5 mEq/L para pacientes com PTHi < 150 pg/dL comparado a soluções de cálcio 3,5 mEq/L parece uma estratégia simples e efetiva para trazer os valores de PTHi dentro da faixa atualmente sugerida nas diretrizes.

Relato de caso: Insuficiência renal crônica estádio 5 D em paciente com doença renal crônica medicado com varfarina

ResumoIntroduçãoA terapêutica com varfarina pode provocar hematúria grave e lesão renal aguda pela formação de cilindros eritrocitários oclusivos. Estas alterações são sugestivas de uma doença recentemente conhecida como nefropatia relacionada pela varfarina.Caso Clínico:Apresentamos um doente de 74 anos de idade com doença renal crônica estádio 3 A, que progrediu com declínio na taxa de filtração glomerular (TFG) após o início de terapêutica com varfarina devido a um quadro fibrilação atrial. O diagnóstico foi confirmado pela histologia renal, que demonstrou a presença de oclusão tubular por cilindros eritrocitários, achados consistentes com este diagnóstico. O paciente não recuperou a TFG, tendo iniciado terapêutica substitutiva da função renal.Discussão:O objetivo da descrição deste caso clínico é alertar para a complicação associada a este fármaco e reforçar a necessidade de monitorização cuidada da função renal e dos parâmetros de coagulação em doentes tratados com a varfarina. A patogênese e o prognóstico desta entidade também serão discutidos.

Liberal versus neo-developmental convention to growth: why has Brazil shown a poor performance since the 1980s?

The main goal of our paper is to provide analytical arguments to explain why Brazil has not been able to restore its long-term capacity for economic growth, especially compared with its economy in the 1950-1979 period (7.3 per cent per year on average) or even with a select number of emerging economies in the 1980-2010 period(6.7 per cent per year on average, against 2.3 per cent per year on average in Brazil in the same period). We build our idea of convention to growth based on the Keynesian concept of convention. For our purposes, this concept could be briefly summarized as the way in which the set of public and private economic decisions related to different objectives, such as how much to produce and invest, how much to charge for products and services, how to finance public and private debt, how to finance research and development, and so on, are indefinitely - or at least until there is no change- carried out by the political, economic and social institutions. This analytical reference can be connected to the Neo-Schumpeterian National Innovation System (NIS) concept, which emphasizes not only institutions associated with science and technology per se, but also the complex interaction among them and other institutions. In this paper we identify two conventions to long-term growth in the last three decades in Brazil: the liberal and the neo-developmental. We show that the poor performance in the Brazilian economy in terms of real GDP growth from the 1980s on can be explained by a weak coordination between short-term macroeconomic policies and long-term industrial and technological policies. This weak coordination, in turn, can be associated with the prevalence of the liberal convention from the 1990s on, which has emphasized price stabilization to the detriment of a neo-developmental strategy whose primary goal is to sustain higher rates of growth and full employment in Brazil.