The identification of the transcriptional regulator CRP in Aeromonas hydrophila JMP636 and its involvement in amylase production and the 'acidic toxicity' effect

Aims: The physiological examination of amylase production by Aeromonas hydrophila JMP636 and identification of the mechanism of regulation. Methods and Results: Aeromonas hydrophila JMP636 was grown with single, then dual carbon sources; the growth cycle was followed and amylase activity throughout was monitored. The levels of cAMP, a known secondary messenger for the regulatory gene crp, were also examined. Amylase activity was regulated by catabolite repression. Physiological studies revealed that JMP636 exhibited both diauxic growth, with two carbon sources, and the 'acid toxicity' effect on glucose. The crp gene was cloned, expressed and inactivated from the JMP636 chromosome. Catabolite repression of amylase production and the 'acid toxicity' effect both require crp and were linked to cAMP levels. Conclusions: Regulation of amylase production was predicted to follow the model CRP-mediated cAMP-dependent Escherichia coli catabolite regulation system. Significance and Impact of the Study: This work provides an understanding of the physiology of the opportunistic pathogen Aer. hydrophila through identification of the mechanism of catabolite repression of amylase production and the existence of crp within this cell. It also provides a broader knowledge of global gene regulation and suggests regulatory mechanisms of other Aer. hydrophila gene/s.

The microbiological quality of beef tripe using different processing techniques

The microbiological quality of routinely processed tripe and rumen pillars were compared with those derived after emptying the rumen (paunch) without using water (dry dumping) and after deliberately bursting the paunches before processing. Prior to packing the mean:log(10) aerobic plate counts (APC) for the routinely processed tripe and rumen pillars were 3.55+/-1.08 and 3.28+/-0.87/g respectively. The corresponding mean log(10) total coliform counts (TCC) were 1.27+/-1.28 and 2.08+/-0.87. The mean log(10) APC counts on tripe and rumen pillars after dry-dumping were 3.06+/-0.60 and 3.90+/-0.75/g, respectively. The corresponding mean log(10) TCC were 1.03+/-0.60/g and 2.75+/-1.14/g respectively. After deliberately bursting the paunches, before processing, the mean log(10) APC counts on tripe and rumen pillars were 3.55+/-0.83/g and 3.50+/-0.59/g and the mean log(10) TCC were 1.54+/-0.95/g and 2.66+/-0.82/g respectively. In all cases the prevalence of Salmonella and Campylobacter spp. was less than 3%. The results indicate that both tripe and rumen pillars can be produced after dry dumping without compromising the quality of tripe and rumen pillars. Similarly, incidentally burst paunches that become contaminated with ingesta on the serosal surface can be processed without compromising product quality. Crown Copyright (C) 2002 Published by Elsevier Science Ltd. All rights reserved.

Use of heterologously-expressed cytochomre P450 and glutathione transferase enzymes in toxicity assays

Our groups have had a long-term interest in utilizing bacterial systems in the characterization of bioactivation and detoxication reactions catalyzed by cytochrome P450 (P450) and glutathione transferase (GST) enzymes. Bacterial systems remain the first choice for initial screens with new chemicals and have advantages, including high-throughput capability. Most human P450s of interest in toxicology have been readily expressed in Escherichia coli with only minor sequence modification. These enzymes can be readily purified and used in assays of activation of chemicals. Bicistronic systems have been developed in order to provide the auxiliary NADPH-P450 reductase. Alternative systems involve these enzymes expressed together within bacteria. In one approach, a lac selection system is used with E. coli and has been applied to the characterization of inhibitors of P450s 1A2 and 1131, as well as in basic studies involving random mutagenesis. Another approach utilizes induction of the SOS (umu) response in Salmonella typhimurium, and systems have now been developed with human P450s 1A1, 1A2, 1B1, 2C9, 2D6, 2E1, and 3A4, which have been used to report responses from heterocyclic amines. S. typhimurium his reporter systems have also been used with GSTs, first to demonstrate the role of rat GST 5-5 in the activation of dihalomethanes. These systems have been used to compare these GSTs with regard to activation of dihaloalkanes and potential toxicity. (C) 2002 Elsevier Science Ireland Ltd. All rights reserved.

Identification and in vivo characterization of PpaA, a regulator of photosystem formation in Rhodobacter sphaeroides

A regulatory protein, PpaA, involved in photosystem formation in the anoxygenic phototrophic proteobacterium Rhodobacter sphaeroides has been identified and characterized in vivo. Based on the phenotypes of cells expressing the ppaA gene in extra copy and on the phenotype of the ppaA null mutant, it was concluded that PpaA activates photopigment production and puc operon expression under aerobic conditions. This is in contrast to the function of the PpaA homologue from Rhodobacter capsulatus, AerR, which acts as a repressor under aerobic conditions [Dong, C., Elsen, S., Swem, L. R. & Bauer, C. E. (2002). J Bacteriol 184, 2805-2814]. The expression of the ppaA gene increases several-fold in response to a decrease in oxygen tension, suggesting that the PpaA protein is active under conditions of low or no oxygen. However, no discernible phenotype of a ppaA null mutant was observed under anaerobic conditions tested thus far. The photosystem gene repressor PpsR mediates repression of ppaA gene expression under aerobic conditions. Sequence analysis of PpaA homologues from several anoxygenic phototrophic bacteria revealed a putative corrinoid-binding domain. It is suggested that PpaA binds a corrinoid cofactor and the availability or structure of this cofactor affects PpaA activity.

OxyR acts as a repressor of catalase expression in Neisseria gonorrhoeae

It has been reported that Neisseria gonorrhoeae possesses a very high level of catalase activity, but the regulation of catalase expression has not been investigated extensively. In Escherichia coli and Salmonella enterica serovar Typhimurium, it has been demonstrated that OxyR is a positive regulator of hydrogen peroxide-inducible genes, including the gene encoding catalase. The oxyR gene from N. gonorrhoeae was cloned and used to complement an E. coli oxyR mutant, confirming its identity and function. The gene was inactivated by inserting a kanamycin resistance cassette and used to make a knockout allele on the chromosome of N. gonorrhoeae strain 1291. In contrast to E. coli, the N. gonorrhoeae oxyR::kan mutant expressed ninefold-more catalase activity and was more resistant to hydrogen peroxide killing than the wild type. These data are consistent with OxyR in N. gonorrhoeae acting as a repressor of catalase expression.

Atividade antimicrobiana, antioxidante e teor de compostos fenólicos em casca e amêndoa de frutos de manga

O processamento industrial de frutos de manga gera elevada quantidade de resíduos agroindustriais, representados pelas cascas e sementes (amêndoa), os quais, sem aplicação viável, acabam sendo descartados diretamente no meio ambiente. Esses resíduos são ricos em compostos bioativos, amplamente reconhecidos pelas suas propriedades promotoras da saúde e em aplicações tecnológicas. Os objetivos foram avaliar as atividades antimicrobiana e antioxidante e o teor de compostos fenólicos de dois extratos: um obtido da casca (FC) e outro da amêndoa (FA) de manga variedade 'Tommy Atkins'. O teor de compostos fenólicos totais variou de 3.123 a 6.644 mg de catequina/100 g. Os extratos FC e FA demonstraram relevante atividade antimicrobiana frente às cepas das bactérias Escherichia coli, Salmonella sp., Pseudomonas aeruginosa . Staphylococcus aureus, determinadas pelo método de difusão em disco. A ação antioxidante de FC e FA aumentou com o aumento das concentrações testadas, atingindo o valor máximo de 88% (FC). Em todas as concentrações testadas os extratos FC apresentaram ação antioxidante significativamente superior às respectivas concentrações dos extratos FA. Esses resultados sugerem potencial aplicação dos resíduos de manga como fonte de compostos fenólicos, substâncias antimicrobianas e antioxidantes, podendo ser explorados pelas indústrias de alimentos.

Antibacterial activity of Baccharis trimera (Less.) DC. (carqueja) against bacteria of medical interest

Baccharis trimera (Less.) (Asteraceae), popularly know as "carqueja", is a species commonly used in folk medicine for the treatment or prevention of diseases. In this context, the purpose of this work was to study the antibacterial activity of crude hydroalcoholic extract from Baccharis trimera against Gram-positive bacterial strains (Staphylococcus aureus ATCC 29213, Staphylococcus saprophyticus ATCC 15305, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Enterococcus faecalis ATCC 19433) and Gram-negative bacteria (Escherichia coli EHEC ATCC 43895, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Klebsiella pneumoniae ATCC 27736, Salmonella typhi ATCC 19430) of clinical interest. Antibacterial susceptibility was evaluated by broth microdilution assay following the CLSI (formerly the NCCLS) guidelines. The extract from B. trimera showed antibacterial activity against Gram-positive bacteria and the most interesting result was obtained against S. epidermidis that presented Minimal Inhibitory Concentration of 250μg/mL. These results indicate that B. trimera have bacterisostatic potential against Gram-positive bacterial strains of medical interest and could serve as a base for further studies on the use of isolated compounds from this species as future antimicrobials.

Sanitização com produto à Base de Cloro e com Ozônio: Efeito Sobre Compostos Bioativos de Amora-preta ( rubus fruticosus) cv. Tupy

RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar e comparar a eficiência da sanitização de amora-preta, com diferentes concentrações e tempos de imersão em hipoclorito de sódio e com ozônio, e avaliar a influência do processo sobre os compostos bioativos do produto. Foram feitas análises microbiológicas e a determinação dos compostos bioativos. Os compostos de cloro utilizados na sanitização induziram a perdas significativas dos compostos bioativos (compostos fenólicos, antocianinas, tocoferóis, ácido ascórbico e carotenoides), presentes na amora-preta, sendo eficientes na sanitização contra fungos, quando utilizados na concentração de 200 ppm e por 15 minutos de imersão. Já os frutos sanitizados com ozônio apresentaram adequação aos padrões microbiológicos (fungos, coliformes totais e termotolerantes, Escherichia coli e Salmonella spp) estabelecidos pela legislação, e não apresentaram alterações significativas no conteúdo dos compostos bioativos, sendo que a menor concentração de ozônio presente neste estudo apresentou maior eficácia na sanitização dos frutos, comparada com as soluções de cloro utilizadas.

Pesquisa de enterobacteriáceas e enterovírus em crianças normais e com quadros diarréicos agudos

Num grupo de 263 crianças de 0 a 24 meses de idade, atendidas de outubro de 1963 a setembro de 1964 no Centro de Saúde da Lapa, na Capital de São Paulo, foram feitos exames de fezes para a pesquisa de Escherichia coli, do grupo da gastroenterite infantil, Shigella, Salmonella, poliovírus, vírus Coxsackie e vírus ECHO. O agente mais freqüentemente isolado foi o vírus da poliomielite (15,97% de positividade), seguindo-se-lhe a Escherichia coli G.E.I. (10,65%), Shigella (9,51%), vírus Coxsackie (7,22%), Salmonella em 3,04% dos casos e vírus ECHO no mesmo percentual. Em 16,22% das 111 que apresentaram resultado positivo, o exame revelou a presença de dois ou mais agentes. Os agentes acima referidos foram isolados de 42,21% da totalidade das crianças examinadas. Dentre as 167 que apresentavam diarréia, a porcentagem de positividade chegou a 47,90%, e nas 96 que nao a referiam, desceu a 32,29%. Sòmente em relação às shigelas foi possível evidenciar associação entre isolamento de microrganismos e quadro diarréico. Para a E. coli 0111, salmonelas e vírus Coxsackie A, os resultados foram apenas sugestivos desta associação, e para os demais agentes não houve evidência alguma favorável à mesma.

Identificação de cepas de Escherichia coli enteropatogênicas em amostras de fezes, por reação de imunofluorescência direta

Foi realizado diagnóstico etiológico de casos de diarréia aguda em 121 pacientes internados na Clínica Pediátrica do Hospital da Santa Casa de São Paulo, Brasil. Foram utilizados os métodos bacteriológico clássico e de reação de imunofluorescência direta para a identificação de cepas de Escherichia coli enteropatogênicas: para estudo da sensibilidade das cepas de Escherichia coli isoladas, a diferentes antibióticos, foi usado o método de Concentração Inibitória Minima (CIM). Dos 56 casos positivos, 89,3% correspondiam a diferentes sorotipos enteropatogênicos de Escherichia coli, quando utilizada a técnica de imunofluorescência direta. O método bacteriológico clássico revelou ainda, nos 121 casos examinados, 4 cepas de Salmonella e 2 de Shigella. No estudo da CIM verificou-se maior sensibilidade das cepas de Escherichia coli enteropatogênicas estudadas à Gentamicina e Amikacina, do que aos outros antibióticos.

Níveis de aglutininas anti-tifoídicas em esquistossomóticos hepato-esplênicos

Dois grupos, constituídos de 43 esquistossomóticos hepato-esplênicos e 83 indivíduos controle, foram analisados quanto à prevalência de aglutininas anti-tifoídicas. Os esquistossomóticos apresentaram freqüência maior de aglutininas anti-tifoídicas (H e/ou O e/ou Vi) e de aglutininas anti-O do que os indivíduos "normais". Apesar de que estes dados se devam, pelo menos parcialmente, à maior exposição natural dos esquistossomóticos aos antígenos estudados, sugere-se não estar ocorrendo deficiência na síntese de anticorpos, hipótese esta freqüentemente associada às baixas taxas de positividade de anticorpos anti-O encontrados nestes pacientes com bacteremia prolongada pela Salmonella.

Pesquisa de alguns microrganismos em saladas com maionese adquiridas em restaurantes, lanchonetes e "rotisseries"

Em vinte amostras de saladas com maionese foram efetuadas as contagens de bactérias mesófilas e psicrófilas, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, bolores e leveduras, a determinação do Número Mais Provável (NMP) de bactérias coliforme totais de Escherichia coli e de estreptococos fecais, bem como a pesquisa de salmonelas. A contagem de bactérias mesófilas variou de 2,64 x 10(4) a ³3 x 10(7)/g do produto. Quanto às bactérias psicrófilas, as contagens variaram de < 10 a ³ 3 x 10(7)/g. Para S. aureus, as contagens oscilaram de < 10² a 4 x 10(5)/g do alimento, enquanto que para B. cereus os números mínimo e máximo foram < 10² e ³ 3 x 10(4)/g, respectivamente. Para bolores e leveduras, as contagens variaram de 7,1 x 10² a 3,7 x 10(6)/g. Com relação ao NMP de coliformes totais e estreptococos fecais, os resultados obtidos mostraram-se compreendidos entre < 0,03 e ³ 4,3 x 10(5)/g. Quanto ao NMP de E. coli os números mínimo e máximo obtidos foram respectivamente de < 0,03 e ³ 2,4 x 10(4)/g de salada com maionese. Tais constatações indicam a ocorrência de contaminação inclusive por microrganismos de origem fecal. Todas as amostras revelaram-se negativas para bactérias do gênero Salmonella.

Exame microbiológico de sorvetes não pasteurizados

Realizou-se exame microbiológico em 24 amostras de sorvetes não pasteurizados, todos preparados de maneira não industrial e à base de leite (creme, nata, chocolate), fabricados por 12 sorveterias diferentes da cidade de Araraquara, SP. Colheram-se duas amostras de cada sorveteria com intervalo de 15 dias entre as colheitas. Realizaram-se as seguintes provas: contagem de bactérias aeróbicas ou facultativas mesófilas e psicrófilas e de Staphylococcus aureus; determinação do Número Mais Provável (NMP) de coliformes totais e fecais e da presença de Salmonella. As técnicas utilizadas foram aquelas convencionalmente usadas para tais determinações. Não foi encontrada Salmonella em nenhuma das amostras e de cerca de 16,6% delas isolou-se Staphylococcus aureus. Em proporções variáveis verificou-se a presença de microrgarnismos deteriorantes e daqueles indicadores de poluição de origem fecal.

Intoxicação alimentar por queijo Minas contaminado com Staphylococcus aureus

Relata-se surto de intoxicação alimentar ocorrido em julho de 1987, na cidade de Ouro Preto, MG (Brasil). O alimento causador foi um queijo Minas, contaminado por Staphylococcus aureus ao nível de 9,3 x 10(7) UFG/g. Detectaram-se cepas produtoras de enterotoxinas do tipo A,B,D e E. A amostra analisada revelou contaminação por coliformes fecais acima de 1,1 x 10(5)/g(NMP), mas não continha Salmonella.Devido aos sintomas característicos e à elevada contaminação, concluiu-se que o Staphylococcus aureus foi o patogênico responsável pelo surto.

Coeficiente fenólico na avaliação microbiológica de desinfetantes de uso hospitalar e doméstico

Analisou-se o coeficiente fenólico de 24 desinfetantes comercializados em São Paulo (Brasil). Seis produtos eram de uso hospitalar e os restantes de uso doméstico. Os compostos ativos eram à base de fenóis, amônio quaternário, formaldeído, etanol e cloro, sendo que alguns estavam associados. Os microrganismos utilizados foram Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 e Salmonella choleraesuis ATCC 10708. Os valores dos coeficientes fenólicos variaram de 58,3 a 0,1. Os desinfetantes hospitalares mostraram valores superiores aos de uso doméstico, mas estas diferenças, proporcionalmente, não significaram melhor qualidade dos mesmos. O método microbiológico adotado mostrou que alguns produtos, de uso doméstico, aparentemente possuiam atividade antibacteriana baixa ou inexistente porque o coeficiente fenólico não pôde ser obtido nas diluições utilizadas na avaliação.