1000 resultados para Modèle d’évaluation d’actifs
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Summary [rsum franais voir ci-dessous] From the beginning of the 20th century the world population has been confronted with the human immune deficiency virus 1 (HIV-1). This virus has the particularity to mutate fast, and could thus evade and adapt to the human host. Our closest evolutionary related organisms, the non-human primates, are less susceptible to HIV-1. In a broader sense, primates are differentially susceptible to various retrovirus. Species specificity may be due to genetic differences among primates. In the present study we applied evolutionary and comparative genetic techniques to characterize the evolutionary pattern of host cellular determinants of HIV-1 pathogenesis. The study of the evolution of genes coding for proteins participating to the restriction or pathogenesis of HIV-1 may help understanding the genetic basis of modern human susceptibility to infection. To perform comparative genetics analysis, we constituted a collection of primate DNA and RNA to allow generation of de novo sequence of gene orthologs. More recently, release to the public domain of two new primate complete genomes (bornean orang-utan and common marmoset) in addition of the three previously available genomes (human, chimpanzee and Rhesus monkey) help scaling up the evolutionary and comparative genome analysis. Sequence analysis used phylogenetic and statistical methods for detecting molecular adaptation. We identified different selective pressures acting on host proteins involved in HIV-1 pathogenesis. Proteins with HIV-1 restriction properties in non-human primates were under strong positive selection, in particular in regions of interaction with viral proteins. These regions carried key residues for the antiviral activity. Proteins of the innate immunity presented an evolutionary pattern of conservation (purifying selection) but with signals of relaxed constrain if we compared them to the average profile of purifying selection of the primate genomes. Large scale analysis resulted in patterns of evolutionary pressures according to molecular function, biological process and cellular distribution. The data generated by various analyses served to guide the ancestral reconstruction of TRIM5a a potent antiviral host factor. The resurrected TRIM5a from the common ancestor of Old world monkeys was effective against HIV-1 and the recent resurrected hominoid variants were more effective against other retrovirus. Thus, as the result of trade-offs in the ability to restrict different retrovirus, human might have been exposed to HIV-1 at a time when TRIM5a lacked the appropriate specific restriction activity. The application of evolutionary and comparative genetic tools should be considered for the systematical assessment of host proteins relevant in viral pathogenesis, and to guide biological and functional studies. Rsum La population mondiale est confronte depuis le dbut du vingtime sicle au virus de l'immunodficience humaine 1 (VIH-1). Ce virus a un taux de mutation particulirement lev, il peut donc s'vader et s'adapter trs efficacement son hte. Les organismes volutivement le plus proches de l'homme les primates nonhumains sont moins susceptibles au VIH-1. De faon gnrale, les primates rpondent diffremment aux rtrovirus. Cette spcificit entre espces doit rsider dans les diffrences gntiques entre primates. Dans cette tude nous avons appliqu des techniques d'volution et de gntique comparative pour caractriser le modèle volutif des dterminants cellulaires impliqus dans la pathogense du VIH- 1. L'tude de l'volution des gnes, codant pour des protines impliques dans la restriction ou la pathogense du VIH-1, aidera la comprhension des bases gntiques ayant rcemment rendu l'homme susceptible. Pour les analyses de gntique comparative, nous avons constitu une collection d'ADN et d'ARN de primates dans le but d'obtenir des nouvelles squences de gnes orthologues. Rcemment deux nouveaux gnomes complets ont t publis (l'orang-outan du Borno et Marmoset commun) en plus des trois gnomes dj disponibles (humain, chimpanz, macaque rhsus). Ceci a permis d'amliorer considrablement l'tendue de l'analyse. Pour dtecter l'adaptation molculaire nous avons analys les squences l'aide de mthodes phylogntiques et statistiques. Nous avons identifi diffrentes pressions de slection agissant sur les protines impliques dans la pathogense du VIH-1. Des protines avec des proprits de restriction du VIH-1 dans les primates non-humains prsentent un taux particulirement haut de remplacement d'acides amins (slection positive). En particulier dans les rgions d'interaction avec les protines virales. Ces rgions incluent des acides amins cl pour l'activit de restriction. Les protines appartenant l'immunit inn prsentent un modèle d'volution de conservation (slection purifiante) mais avec des traces de "relaxation" compar au profil gnral de slection purifiante du gnome des primates. Une analyse grande chelle a permis de classifier les modèles de pression volutive selon leur fonction molculaire, processus biologique et distribution cellulaire. Les donnes gnres par les diffrentes analyses ont permis la reconstruction ancestrale de TRIM5a, un puissant facteur antiretroviral. Le TRIM5a ressuscit, correspondant l'anctre commun entre les grands singes et les groupe des catarrhiniens, est efficace contre le VIH-1 moderne. Les TRIM5a ressuscits plus rcents, correspondant aux anctres des grands singes, sont plus efficaces contre d'autres rtrovirus. Ainsi, trouver un compromis dans la capacit de restreindre diffrents rtrovirus, l'homme aurait t expos au VIH-1 une priode o TRIM5a manquait d'activit de restriction spcifique contre celui-ci. L'application de techniques d'volution et de gntique comparative devraient tre considres pour l'valuation systmatique de protines impliques dans la pathogense virale, ainsi que pour guider des tudes biologiques et fonctionnelles
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Contexte: la planification infirmire de sortie des personnes ges est une composante importante des soins pour assurer une transition optimale entre l'hpital et la maison. Beaucoup d'vnements indsirables peuvent survenir aprs la sortie de l'hpital. Dans une perspective de systme de sant, les facteurs qui augmentent ce risque incluent un nombre croissant de patients gs, l'augmentation de la complexit des soins ncessitant une meilleure coordination des soins aprs la sortie, ainsi qu'une augmentation de la pression financire. Objectif: valuer si les interventions infirmires lies la planification de sortie chez les personnes ges et leurs proches aidants sont prdictives de leur perception d'tre prts pour le dpart, du niveau d'anxit du patient le jour de la sortie de l'hpital et du nombre de recours non programm aux services de sant durant les trente jours aprs la sortie. Mthode: le devis est prdictif corrlationnel avec un chantillon de convenance de 235 patients. Les patients gs de 65 ans de quatre units d'hpitaux dans le canton de Vaud en Suisse ont t recruts entre novembre 2011 et octobre 2012. Les types et les niveaux d'interventions infirmires ont t extraits des dossiers de soins et analyss selon les composantes du modèle de Naylor. La perception d'tre prt pour la sortie et l'anxit ont t mesures un jour avant la sortie en utilisant l'chelle de perception d'tre prt pour la sortie et l'chelle Hospital Anxiety and Depression. Un mois aprs la sortie, un entretien tlphonique a t men pour valuer le recours non programm aux services de sant durant cette priode. Des analyses descriptives et un modèle randomis deux niveaux ont t utiliss pour analyser les donnes. Rsultats: peu de patients ont reu une planification globale de sortie. L'intervention la plus frquente tait la coordination (M = 55,0/100). et la moins frquente tait la participation du patient la planification de sortie (M = 16,1/100). Contrairement aux hypothses formules, les patients ayant bnfici d'un plus grand nombre d'interventions infirmires de prparation la sortie ont un niveau moins lev de perception d'tre prt pour le dpart (B = -0,3, p < 0,05, IC 95% [-0,57, -0,11]); le niveau d'anxit n'est pas associ la planification de sortie (r = -0,21, p <0,01) et la prsence de troubles cognitifs est le seul facteur prdictif d'une rhospitalisation dans les 30 jours aprs la sortie de l'hpital ( OR = 1,50, p = 0,04, IC 95% [1,02, 2,22]). Discussion: en se focalisant sur chaque intervention de la planification de sortie, cette tude permet une meilleure comprhension du processus de soins infirmiers actuellement en cours dans les hpitaux vaudois. Elle met en lumire les lacunes entre les pratiques actuelles et celles de pratiques exemplaires donnant ainsi une orientation pour des changements dans la pratique clinique et des recherches ultrieures. - Background: Nursing discharge planning in elderly patients is an important component of care to ensure optimal transition from hospital to home. Many adverse events may occur after hospital discharge. From a health care system perspective, contributing factors that increase the risk of these adverse events include a growing number of elderly patients, increased complexity of care requiring better care coordination after discharge, as well as increased financial pressure. Aim: To investigate whether older medical inpatients who receive comprehensive discharge planning interventions a) feel more ready for hospital discharge, b) have reduced anxiety at the time of discharge, c) have lower health care utilization after discharge compared to those who receive less comprehensive interventions. Methods: Using a predictive correlational design, a convenience sample of 235 patients was recruited. Patients aged 65 and older from 4 units of hospitals in the canton of Vaud in Switzerland were enrolled between November 2011 and October 2012. Types and level of interventions were extracted from the medical charts and analyzed according to the components of Naylor's model. Discharge readiness and anxiety were measured one day before discharge using the Readiness for Hospital Discharge Scale and the Hospital Anxiety and Depression scale. A telephone interview was conducted one month after hospital discharge to asses unplanned health services utilization during this follow-up period. Descriptive analyses and a two- level random model were used for statistical analyses. Results: Few patients received comprehensive discharge planning interventions. The most frequent intervention was Coordination (M = 55,0/100) and the least common was Patient participation in the discharge planning (M = 16,1/100). Contrary to our hypotheses, patients who received more nursing discharge interventions were significantly less ready to go home (B = -0,3, p < 0,05, IC 95% [-0,57, -0,11]); their anxiety level was not associated with their readiness for hospital discharge (r = -0,21, p <0,01) and cognitive impairment was the only factor that predicted rehospitalization within 30 days after discharge ( OR = 1,50, p = 0,04, IC 95% [1,02, 2,22]). Discussion: By focusing on each component of the discharge planning, this study provides a greater and more detailed insight on the usual nursing process currently performed in medical inpatients units. Results identified several gaps between current and Best practices, providing guidance to changes in clinical practice and further research.
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RSUM : Le sexe des individus peut tre dtermin par l'environnement ou la gntique. Lorsque la dtermination du sexe est gntique, il y a dans le gnome, la prsence de chromosomes spcifiques qui dtermineront le sexe. Dans cette thse, j'ai tudi l'volution des chromosomes sexuels et dans quel contexte des marqueurs sur ces chromosomes peuvent tre utiliss. Pour explorer la formation du chromosome Y, nous avons tudi les caractristiques des chromosomes sexuels chez la rainette verte, Hyla arborea. Dans un premier temps, nous avons utilis un marqueur situ sur les chromosomes sexuels X et Y chez plusieurs espces appartenant au groupe de la rainette verte. Cela nous a permis de rvler chez toutes ces espces une htrogamtie mle. Dans un deuxime temps, nous avons tir profit de deux autres marqueurs situs sur les chromosomes sexuels pour montrer que la recombinaison est supprime chez les mles mais pas chez les femelles. Pour expliquer la rduction de la variabilit sur le chromosome Y, il n'est pas ncessaire d'invoquer le balayage slectif ou la slection d'arrire-plan : le nombre de copies plus petit du chromosome Y dans le gnome et l'absence de recombinaison suffisent l'expliquer. Nous avons galement analys plus en dtail la suppression de la recombinaison chez les mles de H. arborea. Les modèles classiques de l'volution des chromosomes sexuels supposent que la taille de la rgion non-recombinante augmente progressivement pendant l'volution du chromosome Y, due l'accumulation de changements structuraux. Dans cette tude, nous montrons un modèle diffrent, savoir que la recombinaison est supprime ou diminue non seulement sur les chromosomes sexuels mais aussi sur les autosomes chez les mles, d l'action de modificateurs gnraux. En utilisant des marqueurs localiss sur le chromosome Y, ainsi que sur l'ADN mitochondrial et le chromosome X, nous avons tudi l'histoire volutive de la musaraigne musette, Crocidura russula. Cette tude illustre que les analyses gntiques avec plusieurs types de marqueurs gntiques peuvent faciliter l'interprtation de l'histoire volutive des espces, mais que l'utilisation des marqueurs sur les chromosomes X et Y pour des tudes phylogographiques est limite par le peu de polymorphisme observ sur ces deux types de marqueurs. Le mme jeu de donnes combin avec des simulations a t employ pour comprendre les facteurs responsables de la faible variabilit sur le chromosome Y qui peut tre expliqu, dans notre tude, par la dmographie et les traits d'histoire de vie de C. russula. SUMMARY The sex of an individual is determined either by its environment or its genetics. Genetic sex determination relies on the presence of specific chromosomes that will determine the sex of their bearer. In this thesis, I studied the evolution of the sex chromosomes and the context in which markers on this type of chromosomes can be used. To explore the evolution of a Y chromosome, we studied the nascent sex chromosomes in the European tree frog Hyla arborea. First; we amplified a sex specific marker in several related species of European tree frog and found a homogeneous pattern of male heterogamety. Secondly, we used two additional sex-specific markers to show that recombination is suppressed in males but not in females. There is, therefore, no need to invoke background selection or selective sweeps to explain the reduced genetic variability on the Y chromosome, because the lower number of copies of the Y chromosomes per breeding pair and the absence of recombination are sufficient. To further analyze the suppression of recombination in male European. tree frogs, we constructed a microsatellite linkage map for this species. Classical models of sex-chromosome evolution assume that the non-recombining region expands progressively during the long-term evolution of the Y chromosome, owing to the accumulation of structural changes. Here we show a strikingly different pattern: recombination is suppressed or depressed both on sex chromosomes and autosomes in the heterogametic sex, presumably due to the action of general modifiers. We investigated the evolutionary history of the greater white-toothed shrew, Crocidura russula, using markers on both sex chromosomes and mtDNA. This study illustrates that multilocus genetic analyses facilitates the interpretation of a species' evolutionary history. It also demonstrates that phylogeographic inferences from X and Y chromosomal markers are restricted by the low levels of observed polymorphism. Combining this genetic study with simulations, we determined that the demography and the life-history traits of this species can alone be responsible for the low Y diversity. In conclusion, this thesis shows that sex chromosomes, in combination with autosomes or mtDNA, are necessary to understand the evolution of sex chromosomes and to precisely infer the population history of a species.
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La nouvelle organisation sociale du travail du dbut du 21e sicle pose une srie de questions et lance de nombreux dfis aux spcialistes de l'accompagnement en orientation professionnelle. Compte tenu de la mondialisation du conseil en orientation, c'est dans un cadre international que nous avons dcid d'aborder ces questions, puis de formuler des rponses potentiellement innovantes. Cette approche permet d'viter les difficults que soulve la cration de modèles et de mthodes dans un pays donn en tentant ensuite de les exporter dans d'autres, o ils doivent tre adapts pour tre utiliss. Cet article prsente le premier rsultat tangible de cette collaboration : un modèle et des mthodes d'accompagnement des personnes. Le modèle Construire sa vie , destin des interventions d'accompagnement en orientation se fonde sur cinq prsupposs concernant les personnes et leur vie professionnelle : des possibilits lies aux contextes, des processus dynamiques, une progression non linaire, des perspectives multiples et des configurations individuelles. En partant de ces prsupposs, nous avons bti un modèle en contexte, se rclamant de l'pistmologie du constructionnisme social, reconnaissant en particulier que les connaissances et l'identit d'un individu sont le produit d'interactions sociales et que le sens est co-construit, via la mdiation du discours. Le cadre gnral construire sa vie s'appuie sur les thories de la construction de soi (Guichard, 2005) et de la construction des parcours professionnels (Savickas, 2005), qui dcrivent les conduites d'orientation et leurs dveloppements. Ce cadre concerne toute la vie, il est holiste, tient compte des contextes et est prventif.
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Collection : Cost. de div. Pays ; N40
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Comment peut-on caractriser les relations de couple aujourd'hui ? Sont-elles marques par l'autonomie des conjoints ou au contraire par la valorisation du nous-couple ou du nous-famille ? Les couples se replient-ils sur eux-mmes ou s'ouvrent-ils sur le monde qui les entoure ? Du point de vue des rles et du pouvoir, l'galit entre hommes et femmes est-elle dsormais pratique ou au contraire les arrangements traditionnels perdurent-ils ?Ce livre montre que la situation est caractrise par une grande diversit de styles d'interactions conjugales plutt que par un modèle unique. Ces styles rpondent des logiques associes au statut social, la position dans le parcours de vie et la participation sociale des couples. De plus, ils gnrent des niveaux de problmes et de satisfaction trs differents.L'intrt d'une analyse sociologique du fonctionnement des couples contemporains ne tient pas qu' l'importance d'un groupe que l'on dit essentiel pour la construction de l'individu et pour l'intgration sociale, mais aussi l'interrogation sociale et politique gnre par les mutations familiales des trente dernires annes.
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Abstract Fundamental research in psychiatric neurosciences assumes that psychiatric disorders are associated with neurobiological factors. Identification of these factors would provide therapeutic targets as well as a better understanding of the relationship between- brain and behaviour in pathological processes. We conducted experiments in an animal model of schizophrenia. Several behavioural tasks were used to evaluate spatial and working memory in these animals. The model is based on glutathione deficit during cerebral development. Indeed, a 50% decrease of glutathione has been reported in prefrontal cortex of patients with schizophrenia. Glutathione is a major antioxidant in the brain and its deficit could lead to abnormal brain connectivity. The glutathione deficit was induced in rats by perinatal (PS-P16) subcutaneous injections with Lbuthionine-(S,R)-sullfoximine (BSO), an inhibitor of glutathione synthesis. This treatment leads to a transitory 50% glutathione levels during brain development. In parallel, we conducted behavioural testing in rats with a medial prefrontal cortex lesion. This allowed us to compare early damage induced by BSO treatment with a focal lesion in adults of a brain area known to present anomalies in schizophrenia. Finally, we conducted a series of experiments in senescent rats to evaluate if cognitive deficits could be related to neurobiological changes. Our results show that an early glutathione deficit provokes cognitive deficits in adulthood. These spatial and working memory deficits resemble the cognitive deficits observed in schizophrenia. The comparison with prefrontal rats revealed that the early brain glutathione deficit provoked more severe cognitive deficits than the prefrontal lesion in adult rats. Moreover, in both cases, we observed a dissociation in memory deficits depending on the type of locomotion that was used in behavioural experiments. Indeed, BSO treated rats as well as prefrontal rats showed place learning or working memory deficits in tasks conducted on dry surfaces where they had to walk. In contrast, they showed no deficit when the same cognitive functions were tested in the water maze. This dissociation might be sustained by a difference in requirement of sensory integration between walking and swimming tasks. Rsum La recherche fondamentale en neurosciences psychiatriques repose sur le prsuppos selon lequel les symptmes manifests dans les troubles psychiatriques auraient des concomitants neurobiologiques. Ceux-ci, une fois identifis, offriraient des cibles pour une dmarche thrapeutique ainsi que des modèles permettant de mieux comprendre les soubassements biologiques du comportement et des activits mentales. Nos expriences s'articulent autour de la question de la modlisation de la schizophrnie chez l'animal. Nous avons recherch chez ces animaux des troubles cognitifs et sensoriels associs la schizophrnie. En effet, chez l'homme comme chez l'animal, la mmoire spatiale et la mmoire de travail dpendent fortement de la capacit d'intgration et d'organisation des informations sensorielles. Les premires expriences ont t menes suite une perturbation prinatale du dveloppement crbral. Celle-ci visait reproduire une diminution du taux de glutathion dans le cerveau, des recherches prcdentes ayant observ une diminution de 50% du taux de glutathion dans le cortex prfrontal de patients schizophrnes. Le glutathion tant un antioxydant majeur dans le cerveau, son dficit pourrait conduire des perturbations de la circuiterie crbrale. Nous avons reproduit ce dficit chez le rat, par injection de Lbuthionine-(S,R)-sullfoximine (BSO), un inhibiteur de la synthse du glutathion... Ce traitement a t administr pendant la priode prinatale (du jour postnatal 5 au jour 16) provoquant une diminution de 50% du taux de glutathion. Nous avons ensuite valu ls rpercussions de cette atteinte prcoce sur le comportement des rats l'ge adulte. Ce modèle s'inscrit donc dans l'hypothse neurodveloppementale qui associe la schizophrnie une atteinte du dveloppement crbral normal. Nous avons ensuite conduit des expriences similaires chez des rats ayant subi une lsion du cortex prfrontal pour comparer les rpercussions du traitement prinatal avec une lsion, l'ge adulte, d'une aire crbrale connue pour prsenter des anomalies chez les patients. Finalement, nous avons valu si les processus sensoriels et cognitifs prcdemment tudis pouvaient galement tre affects lors du vieillissement normal en recherchant des corrlats biologiques des dficits de mmoire lis l'ge avanc. Nos rsultats montrent que ce dficit prcoce en glutathion peut avoir des rpercussions surale comportement l'ge adulte. On a relev une similarit avec les dficits cognitifs associs. la schizophrnie, incluant des dficits de mmoire de travail ainsi que des dficits de mmoire spatiale. Ces dficits taient fortement lis au type de locomotion utilise et n'ont t observs que dans les tches o les animaux devaient rejoindre un but en marchant mais pas dans ls tests dans lesquels ils devaient localiser une cible en nageant. Les dficits induits par la lsion prfrontale chez l'adulte taient beaucoup plus lgers que ceux dcoulant de l'atteinte prinatale mais prsentaient une dissociation analogue en fonction du type de locomotion. De plus, des tests similaires mens au cours du vieillissement confirment que la mmoire de travail peut tre affecte slectivement par le vieillissement dans une tche o les animaux doivent marcher, tout en restant intacte dans le bassin de Morris. Les dficits cognitifs lis au vieillissement taient significativement corrls des diffrences de niveaux des protines post-synaptiques PSD95 (postsynaptic density 95). L'ensemble des rsultats montre que les tests qui sont frquemment utiliss pour valuer la mmoire chez l'animal pourraient faire appel des processus diffrents. Cette diffrence pourrait notamment tenir au niveau d'intgration sensorielle requis pour rsoudre la tche, qui est particulirement sollicite au cours d'une locomotion intermittente.
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The general objective of the study was to empirically test a reciprocal model of job satisfaction and life satisfaction while controlling for some social demographic variables. 827 employees working in 34 car dealerships in Northern Quebec (56% responses rate) were surveyed. The multiple item questionnaires were analysed using correlation analysis, chi square and ANOVAs. Results show interesting patterns emerging for the relationships between job and life satisfaction of which 49.2% of all individuals have spillover, 43.5% compensation, and 7.3% segmentation type of relationships. Results, nonetheless, are far richer and the model becomes much more refined when social demographic indicators are taken into account. Globally, social demographic variables demonstrate some effects on each satisfaction individually but also on the interrelation (nature of the relations) between life and work satisfaction.
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Rsum : Malgr les immenses progrs raliss depuis plusieurs annes en mdecine obsttricale ainsi qu'en ranimation nonatale et en recherche exprimentale, l'asphyxie prinatale, une situation de manque d'oxygne autour du moment de la naissance, reste une cause majeure de mortalit et de morbidit neurologique long terme chez l'enfant (retard mental, paralysie crbrale, pilepsie, problmes d'apprentissages) sans toutefois de traitement pharmacologique rel. La ncessit de dvelopper de nouvelles stratgies thrapeutiques pour les complications de l'asphyxie prinatale est donc aujourd'hui encore essentielle. Le but gnral de ce travail est l'identification de nouvelles cibles thrapeutiques impliques dans des mcanismes molculaires pathologiques induits par l'hypoxie-ischmie (HI) dans le cerveau immature. Pour cela, le modèle d'asphyxie prinatale (proche du terme) le plus reconnu chez le rongeur a t dvelopp (modèle de Rice et Vannucci). Il consiste en la ligature permanente d'une artre carotide commune (ischmie) chez le raton de 7 jours combine une priode d'hypoxie 8% d'oxygne. Il permet ainsi d'tudier les lsions de type hypoxique-ischmique dans diffrentes rgions crbrales dont le cortex, l'hippocampe, le striatum et le thalamus. La premire partie de ce travail a abord le rle de deux voies de MAPK, JNK et p38, aprs HI nonatale chez le raton l'aide de peptides inhibiteurs. Tout d'abord, nous avons dmontr que D-JNKI1, un peptide inhibiteur de la voie de JNK prsentant de fortes proprits neuroprotectrices dans des modèles d'ischmie crbrale adulte ainsi que chez le jeune raton, peut intervenir sur diffrentes voies de mort dont l'activation des calpanes (marqueur de la ncrose prcoce), l'activation de la caspase-3 (marqueur de l'apoptose) et l'expression de LC3-II (marqueur de macroautophagie). Malgr ces effets positifs le traitement au D-JNKI1 ne modifie pas l'tendue de la lsion crbrale. L'action limite de D-JNKI1 peut s'expliquer par une implication modre des JNKs (faiblement actives et principalement l'isotype JNK3) aprs HI nonatale svre. Au contraire, l'inhibition de la voie de nNOS/p38 par le peptide DTAT-GESV permet une augmentation de 20% du volume du tissu sain court et long terme. Le second projet a tudi les effets de l'HI nonatale sur l'autophagie neuronale. En effet, l'autophagie est un processus catabolique essentiel au bien-tre de la cellule. Le type principal d'autophagie ( macroautophagie , que nous appellerons par la suite autophagie ) consiste en la squestration d'lments dgrader (protines ou organelles dficients) dans un compartiment spcialis, l'autophagosome, qui fusionne avec un lysosome pour former un autolysosome o le contenu est dgrad par les hydrolases lysosomales. Depuis peu, l'excs ou la drgulation de l'autoptiagie a pu tre impliqu dans la mort cellulaire en certaines conditions de stress. Ce travail dmontre que l'HI nonatale chez le raton active fortement le flux autophagique, c'est--dire augmente la formation des autophagosomes et des autolysosomes, dans les neurones en souffrance. De plus, la relation entre l'autophagie et l'apoptose varie selon la rgion crbrale. En effet, alors que dans le cortex les neurones en voie de mort prsentent des caractristiques mixtes apoptotiques et autophagiques, ceux du CA3 sont essentiellement autophagiques et ceux du CA1 sont principalement apoptotiques. L'induction de l'autophagie aprs HI nonatale semble donc participer la mort neuronale soit par l'enclenchement de l'apoptose soit comme mcanisme de mort en soi. Afin de comprendre la relation pouvant exister entre autophagie et apoptase un troisime projet a t ralis sur des cultures primaires de neurones corticaux exposs un stimulus apoptotique classique, la staurosporine (STS). Nous avons dmontr que l'apoptose induite par la STS tait prcde et accompagne par une forte activation du flux autophagique neuronal. L'inhibition de l'autophagie de manire pharmacologique (3-MA) ou plus spcifiquement par ARNs d'interfrence dirigs contre deux protines autophagiques importantes (Atg7 et Atg5) a permis de mettre en vidence des rles multiples de l'autophagie dans la mort neuronale. En effet, l'autophagie prend non seulement part une voie de mort parallle l'apoptose pouvant tre implique dans l'activation des calpanes, mais est galement partiellement responsable de l'induction des voies apoptotiques (activation de la caspase-3 et translocation nuclaire d'AIF). En conclusion, ce travail a montr que l'inhibition de JNK par D-JNKI1 n'est pas un outil neuroprotecteur efficace pour diminuer la mort neuronale provoque par l'asphyxie prinatal svre, et met en lumire deux autres voies thrapeutiques beaucoup plus prometteuses, l'inhibition de nNOS/p38 ou de l'autophagie. ABSTRACT : Despite enormous progress over the lastdecades in obstetrical and neonatal medicine and experimental research, perinatal asphyxia, a situation of lack of oxygen around the time of the birth, remains a major cause of mortality and long term neurological morbidity in children (mental retardation, cerebral palsy, epilepsy, learning difficulties) without any effective treatment. It is therefore essential to develop new therapeutic strategies for the complications of perinatal asphyxia. The overall aim of this work was to identify new therapeutic targets involved in pathological molecular mechanisms induced by hypoxia-ischemia (HI) in the immature brain. For this purpose, the most relevant model of perinatal asphyxia (near term) in rodents has been developed (model of Rice and Vannucci). It consists in the permanent ligation of one common carotid artery (ischemia) in the 7-day-old rat combined with a period of hypoxia at 8% oxygen. This model allows the study of the hypoxic-ischemic lesion in different brain regions including the cortex, hippocampus, striatum and thalamus. The first part of this work addressed the role of two MAPK pathways (JNK and p38) after rat neonatal HI using inhibitory peptides. First, we demonstrated that D-JNKI1, a JNK peptide inhibitor presenting strong neuroprotective properties in models of cerebral ischemia in adult and young rats, could affect different cell death mechanisms including the activation of calpain (a marker of necrosis) and caspase-3 (a marker of apoptosis), and the expression of LC3-II (a marker of macroautophagy). Despite these positive effects, D-JNKI1 did not modify the extent of brain damage. The limited action of D-JNKI1 can be explained by the fact that JNKs were only moderately involved (weakly activated and principally the JNK3 isotype) after severe neonatal HI. In contrast, inhibition of nNOS/p38 by the peptide D-TAT-GESV increased the surviving tissue volume by around 20% at short and long term. The second project investigated the effects of neonatal HI on neuronal autophagy. Indeed, autophagy is a catabolic process essential to the well-being of the cell. The principal type of autophagy ("macroautophagy", that we shall henceforth call "autophagy") involves the sequestration of elements to be degraded (deficient proteins or organelles) in a specialized compartment, the autophagosome, which fuses with a lysosome to form an autolysosome where the content is degraded by lysosomal hydrolases. Recently, an excess or deregulation of autophagy has been implicated in cell death in some stress conditions. The present study demonstrated that rat neonatal HI highly enhanced autophagic flux, i.e. increased autophagosome and autolysosome formation, in stressed neurons. Moreover, the relationship between autophagy and apoptosis varies according to the brain region. Indeed, whereas dying neurons in the cortex exhibited mixed features of apoptosis and autophagy, those in CA3 were primarily autophagc and those in CA1 were mainly apoptotic. The induction of autophagy after neonatal HI seems to participate in neuronal death either by triggering apoptosis or as a death mechanism per se. To understand the relationships that may exist between autophagy and apoptosis, a third project has been conducted using primary cortical neuronal cultures exposed to a classical apoptotic stimulus, staurosporine (STS). We demonstrated that STS-induced apoptosis was preceded and accompanied by a strong activation of neuronal autophagic flux. Inhibition of autophagy pharmacologically (3-MA) or more specifically by RNA interference directed against two important autophagic proteins (Atg7 and AtgS) showed multiple roles of autophagy in neuronal death. Indeed, autophagy was not only involved in a death pathway parallel to apoptosis possibly involved in the activation of calpains, but was also partially responsible for the induction of apoptotic pathways (caspase-3 activation and AIF nuclear translocation). In conclusion, this study showed that JNK inhibition by D-JNKI1 is not an effective neuroprotective tool for decreasing neuronal death following severe perinatal asphyxia, but highlighted two more promising therapeutic approaches, inhibition of the nNOSlp38 pathway or of autophagy.
Resumo:
La Bible souvre par deux compositions potiques dAlcuin qui encadrent lptre de saint Jrme Paulinus, Frater Ambrosius... (ff. 1-2r : Monumenta Germaniae Historica, Poetae latinae, I, 1, p. 287, LXVIII-LXX, v. 1-200 ; ff. 4r-v : Monumenta Germaniae Historica, Poetae latinae, I, 1, p. 283-284, LXV, I-III). La fin manque: la Bible s'interrompt la fin de l'Eptre de saint Paul aux Colossiens.
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Rsum Les changements climatiques du Quaternaire ont eu une influence majeure sur la distribution et l'volution des biota septentrionaux. Les Alpes offrent un cadre spatio-temporel bien tudi pour comprendre la ractivit de la flore et le potentiel d'adaptation d'une espce vgtale face aux changements climatiques. Certaines hypothses postulent une diversification des espces en raison de la disparition complte de la flore des Alpes et d'un isolement important des espces dans des refuges mridionaux durant les dernires glaciations (Tabula Rasa). Une autre hypothse stipule le maintien de poches de rsistance pour la vgtation au coeur des Alpes (Nunataks). Comme de nombreuses espces vgtales prsentant un grand succs cologique semblent avoir ragi aux glaciations par la multiplication de leur gnome (autopolyplodie), leur tude en milieu naturel devrait permettre de comprendre les avantages inhrents la polyplodie. Biscutella laevigata est un modèle emblmatique de biogographie historique, diverses tudes ayant montr que des populations diplodes sont actuellement isoles dans les zones restes dglaces durant le dernier maximum glaciaire, alors que des ttraplodes ont recolonis l'ensemble des zones alpines mises nu par le retrait des glaciers. Si le contexte priglaciaire semble avoir favoris ce jeune complexe autopolyplode, les circonstances et les avantages de cette mutation gnomique ne sont pas encore clairs. Y a-t-il eu de multiples vnements de polyplodisation ? Dans quelle mesure affecte(nt)il(s) la diversit gntique et le potentiel volutif des polyplodes ? Les polyplodes ont-ils une grande flexibilit gnomique, favorisant une radiation adaptative, ou doivent-ils leur succs une grande plasticit cologique ? Cette tude aborde ces questions diffrentes chelles spatiales et temporelles. L'chelle rgionale des Alpes occidentales permet d'aborder les facteurs distaux (aspects historiques), alors que l'chelle locale cherche apprhender les facteurs proximaux (mcanismes volutifs). Dans les Alpes occidentales, des populations ont t densment chantillonnes et tudies grce (1) leur cytotype, (2) leur appartenance taxonomique, (3) leur habitat et (4) des marqueurs molculaires de l'ADN chloroplastique, en vue d'tablir leurs affinits volutives. l'chelle locale, deux systmes de population ont t tudis : l'un o les populations persistent en priphrie de l'aire de distribution et l'autre au niveau du front actif de colonisation, en marge altitudinale. Les rsultats l'chelle des Alpes occidentales rvlent les sites d'intrt (refuges glaciaires, principales barrires et voies de recolonisation) pour une espce reprsentative des pelouses alpines, ainsi que pour la biodiversit rgionale. Les Pralpes ont jou un rle important dans le maintien de populations proximit immdiate des Alpes centrales et dans l'volution du taxon, voire de la vgtation. Il est aussi dmontr que l'poque glaciaire a favoris l'autopolyplodie polytopique et la recolonisation des Alpes occidentales par des lignes distinctes qui s'hybrident au centre des Alpes, influenant fortement leur diversit gntique et leur potentiel volutif. L'analyse de populations locales en situations contrastes l'aide de marqueurs AFLP montre qu'au sein d'une ligne prsentant une grande expansion, la diversit gntique est faonne par des forces volutives diffrentes selon le contexte cologique et historique. Les populations persistant prsentent une dispersion des gnes restreinte, engendrant une diversit gntique assez faible, mais semblent adaptes aux conditions locales de l'environnement. l'inverse, les populations colonisant la marge altitudinale sont influences par les effets de fondation conjugus une importante dispersion des gnes et, si ces processus impliquent une grande diversit gntique, ils engendrent une rpartition alatoire des gnotypes dans l'environnement. Les autopolyplodes apparaissent ainsi comme capables de persister face aux changements climatiques grce certaines facults d'adaptation locale et de grandes capacits maintenir une importante diversit gntique lors de la recolonisation post-glaciaire. Summary The extreme climate changes of the Quaternary have had a major influence on species distribution and evolution. The European Alps offer a great framework to investigate flora reactivity and the adaptive potential of species under changing climate. Some hypotheses postulate diversification due to vegetation removal and important isolation in southern refugia (Tabula Rasa), while others explain phylogeographic patterns by the survival of species in favourable Nunataks within the Alps. Since numerous species have successfully reacted to past climate changes by genome multiplication (autopolyploidy), studies of such taxa in natural conditions is likely to explain the ecological success and the advantages of autopolyploidy. Early cytogeographical surveys of Biscutella laevigata have shed light on the links between autopolyploidy and glaciations by indicating that diploids are now spatially isolated in never-glaciated areas, while autotetraploids have recolonised the zones covered by glaciers- during the last glacial maximum. A periglacial context apparently favoured this young autopolyploid complex but the circumstances and the advantages of this genomic mutation remain unclear. What is the glacial history of the B. laevigata autopolyploid complex? Are there multiple events of polyploidisation? To what extent do they affect the genetic diversity and the evolutionary potential of polyploids? Is recolonisation associated with adaptive processes? How does long-term persistence affect genetic diversity? The present study addresses these questions at different spatiotemporal scales. A regional survey at the Western Alps-scale tackles distal factors (evolutionary history), while local-scale studies explore proximal factors (evolutionary mechanisms). In the Western Alps, populations have been densely sampled and studied from the (1) cytotypic, (2) morphotaxonomic, (3) habitat point of views, as well as (4) plastid DNA molecular markers, in order to infer their relationships and establish the maternal lineages phylogeography. At the local scale, populations persisting at the rear edge and populations recolonising the attitudinal margin at the leading edge have been studied by AFLPs to show how genetic diversity is shaped by different evolutionary forces across the species range. The results at the regional scale document the glacial history of a widespread species, representative of alpine meadows, in a regional area of main interest (glacial refugia, main barriers and recolonisation routes) and points out to sites of interest for regional biodiversity. The external Alps have played a major role in the maintenance of populations near the central Alps during the Last Glacial Maximum and influenced the evolution of the species, and of vegetation. Polytopic autopolyploidy in different biogeographic districts is also demonstrated. The species has had an important and rapid radiation because recolonisation took place from different refugia. The subsequent recolonisation of the Western Alps was achieved by independent lineages that are presently admixing in the central Alps. The role of the Pennic summit line is underlined as a great barrier that was permeable only through certain favourable high-altitude passes. The central Alps are thus viewed as an important crossroad where genomes with different evolutionary histories are meeting and admixing. The AFLP analysis and comparison of local populations growing in contrasted ecological and historical situations indicate that populations persisting in the external Alps present restricted gene dispersal and low genetic diversity but seem in equilibrium with their environment. On the contrary, populations colonising the attitudinal margin are mainly influenced by founder effects together with great gene dispersal and genotypes have a nearly random distribution, suggesting that recolonisation is not associated with adaptive processes. Autopolyploids that locally persist against climate changes thus seem to present adaptive ability, while those that actively recolonise the Alps are successful because of their great capacity to maintain a high genetic diversity against founder effects during recolonisation.
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Understanding the evolution of intraspecific variance is a major research question in evolutionary biology. While its importance to processes operating at individual and population levels is well-documented, much less is known about its role in macroevolutionary patterns. Nevertheless, both experimental and theoretical evidence suggest that the intraspecific variance is susceptible to selection, can transform into interspecific variation and, therefore, is crucial for macroevolutionary processes. The main objectives of this thesis were: (l) to investigate which factors impact evolution of intraspecific variation in Polygonaceae and determine if evolution of intraspecific variation influences species diversification; and (2) to develop a novel comparative phylogenetic method to model evolution of intraspecific variation. Using the buckwheat family, Polygonaceae, as a study system, I demonstrated which life-history and ecological traits are relevant to the evolution of intraspecific variation. I analyzed how differential intraspecific variation drives species diversification patterns. I showed with computer simulations the shortcomings of existing comparative methods with respect to intraspecific variation. I developed a novel comparative model that readily incorporates the intraspecific variance into phylogenetic comparative methods. The obtained results are complimentary, because they affect both empirical and methodological aspects of comparative analysis. Overall, I highlight that intraspecific variation is an important contributor to the macroevolutionary patterns and it should be explicitly considered in the comparative phylogenetic analysis. - En biologie volutive comprendre l'volution de la variance intraspcifique est un axe de recherche majeur. Bien que l'importance de cette variation soit bien documente au niveau individuel et populationnel, on en sait beaucoup moins sur son rle au niveau macrovolutif. Nanmoins, des preuves exprimentales et thoriques suggrent que la variance intraspcifique est sensible la slection et peut se transformer en variation interspcifique. Par consquent, elle est cruciale pour mieux comprendre les processus macrovolutifs. Les principaux objectifs de ma thse taient : (i) d'enquter sur les facteurs qui affectent l'volution de la variation intraspcifique chez les Polygonaceae et de dterminer si l'volution de cette dernire influence la diversification des espces, et (2) de dvelopper une nouvelle mthode comparative permettant de modliser l'volution de la variation intraspcifique dans un cadre phylogntique. En utilisant comme systme d'tude la famille du sarrasin, les Polygonaces, je dmontre que les traits d'histoire de vie sont pertinents pour comprendre l'volution de la variation intraspcifique. J'ai galement analys l'influence de la variation intraspcifique au niveau de la diversification des espces. J'ai ensuite dmontr avec des donnes simules les limites des mthodes comparatives existantes vis vis de la variation intraspcifique. Finalement, j'ai dvelopp un modèle comparatif qui intgre facilement la variance intraspcifique dans les mthodes comparatives phylogntiques existantes. Les rsultats obtenus lors de ma thse sont complmentaires car ils abordent aspects empiriques et mthodologiques de l'analyse comparative. En conclusion, je souligne que la variation intraspcifique est un facteur important en macrovolution et qu'elle doit tre explicitement considre lors d'analyses comparatives phylogntiques.
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Summary Mood disorders are among the most prevalent, psychosocial^ debilitating, chronic and relapsing forms of psychiatric illnesses. Despite considerable advances in their characterization, the heterogeneous nature of susceptibility factors and patient's symptoms could account for the lack of totally effective and remissive treatment. The neurobiological hypothesis of mood disorders etiology has evolved since the monoamine and neurotrophin theories and current evidence is pointing toward their integration in a broader polygenic epistatic model resulting in defective neuroplasticity of circuitries involved in emotion processing. Consequently, the unraveling of molecular underpinning pathways involved in neuronal plasticity, commonly altered among mood disorder syndromes and symptoms, should shed light on their etiology and provide new drug target. The transcription factor CREB has been critically involved in the long-lasting forms of neuronal plasticity and in the regulation of several mood disorders susceptibility genes. In addition, altered CREB activity has been associated with mood disorders pathophysiology and pharmacotherapy. Interestingly, the newly-identified protein CREB-regulated transcription coactivator 1 (CRTC1) was shown by previous studies in the laboratory to be a neuroactivity- dependent cAMP and calcium sensor, a potent activator of CREB-dependent transcription and involved in neuroplasticity mechanisms associated with long-term synaptic potentiation. Furthermore, the major mood disorder susceptibility gene Bdnf was suggested to be transcriptional regulated by CRTC1. Therefore, we aimed to investigate a role for CRTC1 in mood disorders by generating and characterizing a Crtcl deficient mouse model at the behavioral and molecular levels. Interestingly, their comprehensive characterization revealed a behavioral profile mirroring several major symptoms comorbid in mood disorders, including altered social interactions, aggressive behaviors, obesity, psychomotor retardation, increased emotional response to stress, decreased sexual drive and depression-like behaviors. To investigate the molecular mechanisms underlying these pathological behaviors and the implication of CRTC1 in the regulation of CREB-regulated genes in vivo, we also quantified transcript levels of several relevant CREB-regulated susceptibility genes in brain structures involved in the pathophysiology of mood disorders. Strikingly, we found the underexpression of primary components of the neurotrophin system: Bdnf and its cognate receptor TrkB, a marked decrease in the Nr4a family of transcription factors, implicated in neuroplasticity and associated with dopamine-related disorders, as well as in several other relevant CREB regulated genes. Moreover, neurochemical analysis revealed that Crtcl null mice presented alteration in prefrontal cortical monoamine turnover as well as in hippocampal and accumbal serotonin levels, similarly associated with mood disorders etiology and pharmacotherapy. Together, the present thesis supports the involvement of CRTC1 pathway hypofunction in the pathogenesis of mood disorders and specifically in pathological aggression, obesity and depression-related behavior comorbidities. Ultimately, CRTC1 may represent an interesting antidepressant, antiaggressive or mood stabilizer drug target candidate through the modulation of major CREB regulated susceptibility genes. Les troubles de l'humeur comptent parmi les maladies psychiatriques les plus prvalentes, psychosocialement dbilitantes, chroniques et avec le plus grand risque de rechute. Malgr de considrable avances dans leur caractrisation, la nature htrogne des facteurs de susceptibilit et des symptmes prsents par les patients, semble justifier l'absence de traitement entranant une rmission complte de la maladie. L'hypothse de l'tiologie neurobiologique des troubles de l'humeur a volu depuis la thorie des monoamines et des neurotrophines. Actuellement, elle tend les englober dans un modèle polygnique pistatique induisant une dficience de la neuroplasticit des circuits impliqu dans la rgulation des motions. Par consquent, il apparat particulirement relevant de caractriser des voies molculaires impliques dans la plasticit neuronale, communment altres parmi les diffrents syndromes et symptmes des maladies de l'humeur, afin d'amliorer leur comprhension ainsi que de proposer de nouvelles cibles thrapeutiques potentielles. Le facteur de transcription CREB a t de faon rpte et cohrente impliqu dans les mcanismes long terme de la plasticit neuronale, ainsi que dans la rgulation de plusieurs gnes de susceptibilit aux maladies de l'humeur. De plus, une altration dans l'activit de CREB a t impliqu dans leur tiologie et pharmacothrapie. De faon intressante, des rsultats prliminaires sur la protine rcemment dcouverte CREB-regulated transcription coactivator 1 (CRTC1) ont indiqu que son activation tait dpendante de l'activit neuronale, qu'il tait un senseur du calcium et de l'AMPc, ainsi qu'un coactivateur de CREB requis et puissant impliqu dans les mcanismes de plasticit neuronale associs la potentialisation long terme. En outre, des rsultats ont suggr que le gne majeur de susceptibilit Bdnf est rgul par CRTC1. Ainsi, notre objectif a t d'investiguer un rle ventuel de CRTC1 dans les maladies de l'humeur en gnrant et caractrisant une ligne de souris dficiente pour Crtcl, tant au niveau comportemental que molculaire. De faon intressante, leur caractrisation dtaille a rvl un profil comportemental refltant de nombreux aspects des maladies de l'humeur incluant une altration des interactions sociales, une agression pathologique, l'obsit, un retard psychomoteur, une rponse motionnelle au stress accrue, une diminution de la motivation sexuelle, et des comportements relis la dpression. Afin d'investiguer les mcanismes molculaires sous- jacents cette altration du comportement, ainsi que l'implication de CRTC1 dans l'expression des gnes rguls par CREB in vivo, nous avons quantifi les niveaux de transcrits de plusieurs gnes de susceptibilit rguls par CREB et impliqus dans la physiopathologie des maladies de l'humeur. Remarquablement, nous avons trouv la sous-expression de composants primordiaux du systme neurotrophique: Bdnf et son rcepteur TrkB, une diminution majeure de la famille des facteurs de transcription Nr4a, impliqus dans la neuroplasticit et associs des dsordres lis la dopamine, ainsi que de nombreux autres gnes relevants rguls par CREB. De plus, une analyse neurochimique a rvl que les souris dficientes pour Crtc prsentent une altration du turn-over des monoamines du cortex prfrontal ainsi que des niveaux hippocampaux et accumbaux de srotonine, associs de faon similaire dans l'tiologie et la pharmacothrapie des maladies de l'humeur. Vue dans son ensemble, la prsente thse supporte l'implication d'une sous-rgulation de la voie de CRTCI dans la pathogense des maladies de l'humeur ainsi que dans la comorbidit de l'agression pathologique, l'obsit et la dpression. En conclusion, CRTCI pourrait reprsenter une cible mdicamenteuse intressante aux proprits antidpressante, antiagressive ou stabilisatrice de l'humeur au travers de la modulation de gnes de susceptibilit majeurs rguls par CREB.
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Summary One of the major goals of cancer immunotherapy is the induction of a specific and effective antitumor cytotoxic T lymphocyte (CTL) response. However, the downregulation of Class I Major Histocompatibility Complexes (MHC) expression and the low level of tumor peptide presentation on tumor cell surface, s well as the low immunogenicity of tumor specific antigens, limit the effectiveness of anti-tumor CTL responses. On the other hand, monoclonal antibodies, which bind with high affinity to tumor cell surface markers, are powerful tumor targeting tools. However, their capacity to .kill cancer cells is limited and mAb cancer treatments usually require the addition of different form of chemotherapy. The new cancer immunotherapy strategy described herein combines the advantage of the high tumor targeting capacity of monoclonal antibodies (mAb) with the powerful cytotoxicity of CD8 T lymphocytes directed against highly antigenic peptide-MHC complexes. Monoclonal antibody Fab fragments directed against a cell surface tumor associated antigen (TAA) are chemically coupled to soluble MHC class I complexes carrying a highly antigenic peptide. Antibody guided targeting and oligomerization of numerous antigenic class IMHC/peptide complexes on tumor cell surfaces can redirect the cytotoxicity of peptide-specific CD8 T cells towards target cancer cells. After the description of the production of murine anti-tumor xMHC/peptide conjugates in the first part of this thesis, the therapeutic potential of such conjugates were sequentially investigated in different syngeneic tumor mouse models. As a first proof of principle, transgenic OT-1 mice and later CEA transgenic C57BL/6 (B6) mice, adoptively transferred with OT-1 spleen cells and immunized with ovalbumin, were used as a model of high frequency of ova peptide specific T cells. In these mice, growth inhibition and regression of palpable colon carcinoma expressing CEA, were obtained by systemic injection of anti-CEA Fab/H-2Kb/ova peptide conjugates. Next, LCMV virus and influenza virus infection of B6 mice were used as viral models to redirect natural antiviral CTL responses to tumors via conjugates loaded with viral peptides. We showed that in mice infected with the LCMV virus, subcutaneous CEA-expressing tumor cells were inhibited by the H2Db/GP33 restricted anti-viral CTL response when preincubated before grafting with anti-CEA Fab-H-2Db/GP33 peptide conjugates. In mice infected with the influenza virus, lung metastases expressing the HER2 antigen were inhibited by the H-2Db/NP366 restricted CTLs response when preincubated before injection with anti-Her2 Fab-H-2Db/NP366 peptide conjugates. In the last chapter, the stability of the peptide in the anti-CEA Fab-H-2Db/GP33 conjugates was improved by the covalent photocross-link of the GP33 peptide in the H-2Db MHC groove. Thus, LCMV immune mice could reject CEA expressing tumors when treated with systemic injections of anti-CEA FabH-2Db/GP33 cross-linked conjugates. These results are encouraging for the potential application of this strategy in clinic. Such conjugates could be used alone in patients boosted by the relevant virus, or used in combination with existing T cell based mmunotherapy. Rsum Une des principales approches utilises dans l'immunothrapie contre le cancer consiste en l'induction d'une rponse T cytotoxique (CTL) spcifiquement dirige contre la tumeur. Cependant, le faible niveau d'expression des complexes majeurs d'histocompatibilit de classe I (CMH I) et de prsentation des peptides tumoraux la surface des cellules cancreuses ainsi que la faible immunogenicit des antigens tumoraux, limitent l'efficacit de la rponse CTL. D'autre part,. l'injection d'anticorps monoclonaux (mAb), se liant avec une haute affinit aux marqueurs de surface des cellules tumorales, a fourni des rsultats cliniques encourageant. Cependant l'efficacit de ces mAbs contre des tumeur solides reste limite et necessite souvent l'addition de chimiotherapie. La nouvelle stratgie thrapeutique dcrite dans ce travail associe le fort pouvoir de localisation des anticorps monoclonaux et le fort pouvoir cytotoxique des lymphocytes T CD8+. Des fragments Fab d'anticorps monoclonaux, dirigs contre des antignes surexprims la surface de cellules tumorales, ont t chimiquement coupls des CMH I solubles, portant un peptide fortement antignique. Le ciblage et l'oligomrisation la surface des cellules tumorales de nombreux CMH I prsentant un peptide antignique, va rorienter la cytotoxicit des cellules T CD8+ spcifiques du peptide prsent, vers les cellules tumorales cibles. Aprs une description de la production de conjug anti-tumeur x CMH Upeptide dans la premire partie de cette thse, le potentiel thrapeutique de tels conjugs a t successivement tudis in vivo dans diffrents modèles de tumeur syngniques. Tout d'abord, des souris OT-1 transgniques, puis des souris C57BL/6 (B6) transfres avec des cellules de rate OT-1 puis immunises avec l'ovalbumine, ont t employes comme modèle de haute frquence de cellules T CD8+ spcifiques du peptide ova. Chez ces souris, l'inhibition de la croissance et la rgression de nodules palpables de carcinomes exprimant l'antigne caccino embryonaire (ACE), ont t obtenues par l'injection systmique de conjugs anti-ACE Fab/H-2Kb/ova. Par la suite, l'infection de souris B6 par le virus LCMV et par le virus de la grippe, ont t utiliss comme modèles viraux pour rediriges des rponses anti-virales naturelles vers les tumeurs, en utilisant des conjugs chargs avec des peptides viraux. Nous avons montr que .chez les souris infectes par le LCMV, la croissance de carcinome sous-cutan est empche par la rponse anti-virale, spcifique du complexe H2Db/GP33, lorsque les cellules tumorales greffes sont pr-incubes avec des conjugs anti-CEA Fab-H-2Db/GP33. Dans le cas de souris infectes par le virus de la grippe, la mtastatisation de mlanomes pulmonaires exprimant l'antigne HER-2 est inhibe par la rponse anti-virale spcifique du complexe H-2Db/NP366, aprs pr-incubation des cellules tumorales avec des conjugs anti-Her2 FabxH-2Db/NP366. Dans le dernier chapitre, la liaison covalente du peptide GP33 dans le complexe H-2Db a amlior la stabilit des conjugs correspondants et a permis le traitement systmique de souris greffes avec des tumeurs exprimant l'ACE et infectes par le LCMV. L'ensemble de ces rsultats sont encourageant pour l'application de cette strategie en clinique. De tels conjugus pourraient tre employs seuls ou en combinaison avec des protocols d'immunisation peptidique anti-tumoral. Rsum pour un large public Dans les pays industrialiss, le cancer se situe au deuxime rang des causes de mortalit aprs les maladies cardiovasculaires. Les principaux traitement de nombreux cancers sont la chirurgie, en association avec la radiothrapie et la chimiothrapie. L'immunothrapie est l'une des nouvelles approches mises en oeuvre pour la lutte contre le cancer. Elle peut tre humorale, et s'appuyer alors sur la perfusion d'anticorps monoclonaux dirigs contre des antignes tumoraux, par exemple les anticorps dirigs contre les protines oncogniques Her-2/neu dans le cancer du sein. Ces anticorps ont le grand avantage de spcifiquement se localiser la tumeur et d'induire la lyse ou d'inhiber la proliferation des cellules tumorales exprimant l'antigne. Certains sont utiliss en clinique pour le traitement de lymphomes, de carcinomes de l'ovaire et du sein ou encore de carcinomes metastatiques du clon. Cependant l'efficacit de ces anticorps contre des tumeurs solides reste limite et les traitements exigent souvent d'tre combiner avec de la chimiothrapie. L'immunothrapie spcifique peut galement tre cellulaire et reposer sur une dmarche de type vaccinal, consistant gnrer des lymphocytes T cytotoxiques (cytotoxic T lymphocytes :CTL) capables de dtruire spcifiquement les cellules malignes. Pour obtenir une rponse lymphocytaire T cytotoxique antitumorale, la cellule T doit reconnatre un antigne associ la tumeur, prsent sous forme de peptide dans un complexe majeur d'histocompatibilit de classe I. Or les cellules tumorales ne presentent pas efficacement les peptides antigniques, car elles se caractrisent par une diminution ou une absence d'expression des antignes d'histocompatibilit de classe I, des molcules d'adhsion et des cytokines costimulatrices, et par une faible expression des antignes associs aux tumeurs. C'est en partie pourquoi, malgr l'induction de fortes rponses CTL specifiquement dirigs contre des antigens tumoraux, les rgressions tumorales obtenus grace ces vaccinations sont relativement rares. Alors que chez les personnes atteintes du cancer on observe l'instauration d'une tolrance immunitaire vis--vis de la tumeur, l'inverse, notre systeme immunitaire reste parfaitement capable de combattre des infection virales classiques, tels que la grippe, qui font aussi appel une rponse T cytotoxique. Notre groupe de recherche a donc eu l'idee de dvelopper une nouvelle approche thrapeutique o une rponse immunitaire anti-virale trs efficace serait redirige vers les tumeurs par des anticorps monoclonaux. Concrtement, nous avons chimiquement coupls des fragments d'anticorps monoclonaux dirigs contre des antignes surexprims la surface de cellules tumorales, des CMH I portant un peptide viral antignique. Les cellules tumorales, cibles par le fragment anticorps et couvertes d' antignes viraux prsents par des molcules de CMH I, peuvent ainsi tromper les lymphocytes cytotoxiques anti-viraux qui vont dtruire les cellules tumorales comme si elles taient infectes par le virus. Suite des rsultats prometteurs obtenus in vitro avec diffrents conjugus anticorps-CMH humain de type HLA.A2/peptide Flu, le but du projet tait de tester in vivo des conjugus anticorps-CMH I murins sur des modèles exprimentaux de souris. Tout d'abord, des souris transgniques pour un recepteur T specifique du peptide ova, puis des transferts adoptifs de ces cellules T specifiques dans des souris immunocomptentes, ont t choisi comme modèle de haute frquence des cellules T spcifiques, et ont permi de valider le principe de la strategie in vivo. Puis, deux modèles viraux ont t elabor avec le virus LCMV et le virus Influenza, pour rorienter des rponses antivirales naturelles vers les tumeurs grce des conjugs chargs avec des peptides viraux. Nous avons montr la grande capacit de nos conjugus rediriger des rponses cytotoxiques vers les tumeurs et inhiber la croissance de tumeurs syngniques sous cutans et pulmonaires. Ces rsultats d'inhibition tumorales obtenus dans des souris immunocomptentes, grce l'injection de conjugus anticorps xCMH/peptide et rorientant deux rponses antivirales diffrentes vers deux modèles tumoraux syngeneiques, sont encourageant pour l'application de cette nouvelle stratgie en clinique.
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THESIS ABSTRACT Nucleation and growth of metamorphic minerals are the consequence of changing P-T-X-conditions. The thesis presented here focuses on processes governing nucleation and growth of minerals in contact metamorphic environments using a combination of geochemical analytics (chemical-, isotope-, and trace element composition), statistical treatments of spatial data, and numerical models. It is shown, that a combination of textural modeling and stable isotope analysis allows a distinction between several possible reaction paths for olivine growth in a siliceous dolomite contact aureole. It is suggested that olivine forms directly from dolomite and quartz. The formation of olivine from this metastable reaction implies metamorphic crystallization far from equilibrium. As a major consequence, the spatial distribution of metamorphic mineral assemblages in a contact aureole cannot be interpreted as a proxy for the temporal evolution of a single rock specimen, because each rock undergoes a different reaction path, depending on temperature, heating rate, and fluid-infiltration rate. A detailed calcite-dolomite thermometry study was initiated on multiple scales ranging from aureole scale to the size of individual crystals. Quantitative forward models were developed to evaluate the effect of growth zoning, volume diffusion and the formation of submicroscopic exsolution lamellae (<1 m) on the measured Mg-distribution in individual calcite crystals and compare the modeling results to field data. This study concludes that Mg-distributions in calcite grains of the Ubehebe Peak contact aureole are the consequence of rapid crystal growth in combination with diffusion and exsolution. The crystallization history of a rock is recorded in the chemical composition, the size and the distribution of its minerals. Near the Cima Uzza summit, located in the southern Adamello massif (Italy), contact metamorphic brucite bearing dolomite marbles are exposed as xenoliths surrounded by mafic intrusive rocks. Brucite is formed retrograde pseudomorphing spherical periclase crystals. Crystal size distributions (CSD's) of brucite pseudomorphs are presented for two profiles and combined with geochemistry data and petrological information. Textural analyses are combined with geochemistry data in a qualitative model that describes the formation periclase. As a major outcome, this expands the potential use of CSD's to systems of mineral formation driven by fluid-infiltration. RESUME DE LA THESE La nuclation et la croissance des minraux mtamorphiques sont la consquence de changements des conditions de pression, temprature et composition chimique du systme (PT-X). Cette thse s'intresse aux processus gouvernant la nuclation et la croissance des minraux au cours d'un pisode de mtamorphisme de contact, en utilisant la gochimie analytique (composition chimique, isotopique et en lments traces), le traitement statistique des donnes spatiales et la modlisation numrique. Il est montr que la combinaison d'un modèle textural avec des analyses en isotopes stables permet de distinguer plusieurs chemins de ractions possibles conduisant la croissance de l'olivine dans une aurole de contact riche en Silice et dolomite. Il est suggr que l'olivine se forme directement partir de la dolomie et du quartz. Cette raction mtastable de formation de l'olivine implique une cristallisation mtamorphique loin de l'quilibre. La principale consquence est que la distribution spatiale des assemblages de minraux mtamorphiques dans une aurole de contact ne peut pas tre considre comme un tmoin de l'volution temporelle d'un type de roche donn, puisque chaque type de roche suit diffrents chemins de ractions, en fonction de la temprature, la vitesse de rchauffement et le taux d'infiltration du fluide. Une tude thermomtrique calcite-dolomite dtaille a t ralise diverses chelles, depuis l'chelle de l'aurole de contact jusqu' l'chelle du cristal. Des modèles numriques quantitatifs ont t dvelopps pour valuer l'effet des zonations de croissance, de la diffusion volumique et de la formation de lamelles d'exsolution submicroscopiques (<1m) sur la distribution du magnsium mesur dans des cristaux de calcite individuels. Les rsultats de ce modèle ont t compars des chantillons naturels. Cette tude montre que la distribution du Mg dans les grains de calcite de l'aurole de contact de l'Ubehebe Peak (USA) rsulte d'une croissance cristalline rapide, associe aux processus de diffusion et d'exsolution. L'histoire de cristallisation d'une roche est enregistre dans la composition chimique, la taille et la distribution de ses minraux. Prs du sommet Cima Uzza situ au sud du massif d'Adamello (Italie), des marbres dolomitiques brucite du mtamorphisme de contact forment des xnolithes dans une intrusion mafique. La brucite constitue des pseudomorphes rtrogrades du priclase. Les distributions de taille des cristaux (CSD) des pseudomorphes de brucite sont prsentes pour deux profiles et sont combines aux donnes gochimiques et ptrologiques. Les analyses textorales sont combines aux donnes gochimiques dans un modèle qualitatif qui dcrit la formation du priclase. Ceci largit l'utilisation potentielle de la C5D aux systmes de formation de minraux controls par les infiltrations fluides. THESIS ABSTRACT (GENERAL PUBLIC) Rock textures are essentially the result of a complex interaction of nucleation, growth and deformation as a function of changing physical conditions such as pressure and temperature. Igneous and metamorphic textures are especially attractive to study the different mechanisms of texture formation since most of the parameters like pressure-temperature-paths are quite well known for a variety of geological settings. The fact that textures are supposed to record the crystallization history of a rock traditionally allowed them to be used for geothermobarometry or dating. During the last decades the focus of metamorphic petrology changed from a static point of view, i.e. the representation of a texture as one single point in the petrogenetic grid towards a more dynamic view, where multiple metamorphic processes govern the texture formation, including non-equilibrium processes. This thesis tries to advance our understanding on the processes governing nucleation and growth of minerals in contact metamorphic environments and their dynamic interplay by using a combination of geochemical analyses (chemical-, isotope-, and trace element composition), statistical treatments of spatial data and numerical models. In a first part the thesis describes the formation of metamorphic olivine porphyroblast in the Ubehebe Peak contact aureole (USA). It is shown that not the commonly assumed succession of equilibrium reactions along a T-t-path formed the textures present in the rocks today, but rather the presence of a meta-stable reaction is responsible for forming the olivine porphyroblast. Consequently, the spatial distribution of metamorphic minerals within a contact aureole can no longer be regarded as a proxy for the temporal evolution of a single rock sample. Metamorphic peak temperatures for samples of the Ubehebe Peak contact aureole were determined using calcite-dolomite. This geothermometer is based on the temperature-dependent exchange of Mg between calcite and dolomite. The purpose of the second part of this thesis was to explain the interfering systematic scatter of measured Mg-content on different scales and thus to clarify the interpretation of metamorphic temperatures recorded in carbonates. Numerical quantitative forward models are used to evaluate the effect of several processes on the distribution of magnesium in individual calcite crystals and the modeling results were then compared to measured field. Information about the crystallization history is not only recorded in the chemical composition of grains, like isotope composition or mineral zoning. Crystal size distributions (CSD's) provide essential information about the complex interaction of nucleation and growth of minerals. CSD's of brucite pseudomorphs formed retrograde after periclase of the southern Adamello massif (Italy) are presented. A combination of the textural 3D-information with geochemistry data is then used to evaluate reaction kinetics and to constrain the actual reaction mechanism for the formation of periclase. The reaction is shown to be the consequence of the infiltration of a limited amount of a fluid phase at high temperatures. The composition of this fluid phase is in large disequilibrium with the rest of the rock resulting in very fast reaction rates. RESUME DE LA THESE POUR LE GRAND PUBLIC: La texture d'une roche rsulte de l'interaction complexe entre les processus de nuclation, croissance et dformation, en fonction des variations de conditions physiques telles que la pression et la temprature. Les textures ignes et mtamorphiques prsentent un intrt particulier pour l'tude des diffrents mcanismes l'origine de ces textures, puisque la plupart des paramtres comme les chemin pression-temprature sont relativement bien contraints dans la plupart des environnements gologiques. Le fait que les textures soient supposes enregistrer l'histoire de cristallisation des roches permet leur utilisation pour la datation et la gothermobaromtrie. Durant les dernires dcennies, la recherche en ptrologie mtamorphique a volu depuis une visualisation statique, c'est--dire qu'une texture donne correspondait un point unique de la grille ptrogntique, jusqu' une visualisation plus dynamique, o les multiples processus mtamorphiques qui gouvernent 1a formation d'une texture incluent des processus hors quilibre. Cette thse a pour but d'amliorer les connaissances actuelles sur les processus gouvernant la nuclation et la croissance des minraux lors d'pisodes de mtamorphisme de contact et l'interaction dynamique existant entre nuclation et croissance. Pour cela, les analyses gochimiques (compositions chimiques en lments majeurs et traces et composition isotopique), le traitement statistique des donnes spatiales et la modlisation numrique ont t combins. Dans la premire partie, cette thse dcrit la formation de porphyroblastes d'olivine mtamorphique dans l'aurole de contact de l'Ubehebe Peak (USA). Il est montr que la succession gnralement admise des ractions d'quilibre le long d'un chemin T-t ne peut pas expliquer les textures prsentes dans les roches aujourd'hui. Cette thse montre qu'il s'agirait plutt d'une raction mtastable qui soit responsable de la formation des porphyroblastes d'olivine. En consquence, la distribution spatiale des minraux mtamorphiques dans l'aurole de contact ne peut plus tre interprte comme le tmoin de l'volution temporelle d'un chantillon unique de roche. Les pics de temprature des chantillons de l'aurole de contact de l'Ubehebe Peak ont t dtermins grce au gothermomtre calcite-dolomite. Celui-ci est bas sur l'change du magnsium entre la calcite et la dolomite, qui est fonction de la temprature. Le but de la deuxime partie de cette thse est d'expliquer la dispersion systmatique de la composition en magnsium diffrentes chelles, et ainsi d'amliorer l'interprtation des tempratures du mtamorphisme enregistres dans les carbonates. Des modèles numriques quantitatifs ont permis d'valuer le rle de diffrents processus sur la distribution du magnsium dans des cristaux de calcite individuels. Les rsultats des modèles ont t compars aux chantillons naturels. La composition chimique des grains, comme la composition isotopique ou la zonation minrale, n'est pas le seul tmoin de l'histoire de la cristallisation. La distribution de la taille des cristaux (CSD) fournit des informations essentielles sur les interactions entre nuclation et croissance des minraux. La CSD des pseudomorphes de brucite retrograde forms aprs le priclase dans le sud du massif Adamello (Italie) est prsente dans la troisime partie. La combinaison entre les donnes textorales en trois dimensions et les donnes gochimiques a permis d'valuer les cintiques de raction et de contraindre les mcanismes conduisant la formation du priclase. Cette raction est prsente comme tant la consquence de l'infiltration d'une quantit limite d'une phase fluide haute temprature. La composition de cette phase fluide est en grand dsquilibre avec le reste de la roche, ce qui permet des cintiques de ractions trs rapides.
