V(D)J recombination is not activated by demethylation of the kappa locus

V(D)J recombination is thought to be regulated by changes in the accessibility of target sites, such as modulation of methylation. To test whether demethylation of the kappa locus can activate recombination, we generated two recombinationally active B cell lines in which the gene for maintenance of genomic DNA methylation, Dnmt1, was flanked with loxP sites. Transduction with a retrovirus expressing both the cre recombinase and green fluorescent protein allowed us to purify recombinationally active cells devoid of methylation. Loss of methylation of the kappa locus was not sufficient to activate recombination, although transcription was activated in one line. It appears that demethylation of the kappa locus is not the rate-limiting step for altering accessibility and thus regulated demethylation does not generate specificity of recombination.

Swiveling-domain mechanism for enzymatic phosphotransfer between remote reaction sites.

The crystal structure of pyruvate phosphate dikinase, a histidyl multiphosphotransfer enzyme that synthesizes adenosine triphosphate, reveals a three-domain molecule in which the phosphohistidine domain is flanked by the nucleotide and the phosphoenolpyruvate/pyruvate domains, with the two substrate binding sites approximately 45 angstroms apart. The modes of substrate binding have been deduced by analogy to D-Ala-D-Ala ligase and to pyruvate kinase. Coupling between the two remote active sites is facilitated by two conformational states of the phosphohistidine domain. While the crystal structure represents the state of interaction with the nucleotide, the second state is achieved by swiveling around two flexible peptide linkers. This dramatic conformational transition brings the phosphocarrier residue in close proximity to phosphoenolpyruvate/pyruvate. The swiveling-domain paradigm provides an effective mechanism for communication in complex multidomain/multiactive site proteins.

Pregnenolone sulfate enhances post-training memory processes when injected in very low doses into limbic system structures: the amygdala is by far the most sensitive.

Immediate post-training, stereotactically guided, intraparenchymal administration of pregnenolone sulfate (PS) into the amygdala, septum, mammillary bodies, or caudate nucleus and of PS, dehydroepiandrosterone sulfate, and corticosterone into the hippocampus was performed in mice that had been weakly trained in a foot-shock active avoidance paradigm. Intrahippocampal injection of PS resulted in memory enhancement (ME) at a lower dose than was found with dehydroepiandrosterone sulfate and corticosterone. Intraamygdally administered PS was approximately 10(4) times more potent on a molar basis in producing ME than when PS was injected into the hippocampus and approximately 10(5) times more potent than when injected into the septum or mammillary bodies. ME did not occur on injection of PS into the caudate nucleus over the range of doses tested in the other brain structures. The finding that fewer than 150 molecules of PS significantly enhanced post-training memory processes when injected into the amygdala establishes PS as the most potent memory enhancer yet reported and the amygdala as the most sensitive brain region for ME by any substance yet tested.

Antichagásicos potenciais: síntese e modelagem molecular de híbridos de hidrazonas e liberadores de óxido nítrico

A doença de Chagas é uma parasitose extremamente negligenciada, cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi. Atualmente, 21 países da América Latina são considerados regiões endêmicas, onde 75-90 milhões de pessoas estão expostas à infecção, 6-7 milhões estão infectadas e mais de 41 mil novos casos surgem por ano. Entretanto, apenas os fármacos nifurtimox e benznidazol estão disponíveis no mercado. Estes, além da baixa eficácia na fase crônica da parasitose, apresentam diversos efeitos adversos, sendo que no Brasil apenas o benznidazol é utilizado. Este fato mostra a importância de se ampliar o número de fármacos disponíveis e propor quimioterapia mais eficaz para o tratamento da doença de Chagas. Como forma de contribuir para essa busca, este trabalho objetiva a síntese de compostos híbridos bioisostéricos N-acilidrazônicos e sulfonilidrazônicos, contendo grupo liberador de óxido nítrico, com potencial de interação com cisteíno-proteases parasitárias, tais como a cruzaína. Nestes derivados, os grupos liberadores de óxido nítrico utilizados foram os grupos furoxano (contendo substituinte metílico e fenílico) e éster nitrato. Propôs-se a variação de anéis aromáticos substituídos e não-substituídos, com o intuito de avaliar a possível relação estrutura-atividade (REA) desses análogos. Até o momento, somente os compostos da série N-acilidrazônica tiveram avaliação biológica realizada. Os valores de IC50 dos compostos na forma amastigota do parasita variaram entre >100 a 2,88 µM, sendo este último valor comparável ao fármaco de referência. A atividade inibitória frente à cruzaína foi de 25,2 µM a 2,2 µM. Já a liberação de óxido nítrico foi avaliada pelo método indireto de detecção de nitrato e os valores variaram entre 52,0 µM e 4.232,0 µM. Estes são bem inferiores ao composto padrão, além de não se identificar correlação direta entre a atividade biológica e a liberação de NO. Na sequência, os dois compostos mais ativos (6 e 14) foram submetidos a estudos de permeabilidade e de citotoxicidade. O composto 6 foi considerado o de maior permeabilidade segundo o Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) e todos os compostos apresentaram a taxa de fluxo menor que 2, indicando a ausência de mecanismo de efluxo. Na avaliação do potencial citotóxico desses compostos em células humanas, o derivado 6 apresentou índice de seletividade superior ao do benznidazol. Em estudos de modelagem molecular usando análise exploratória de dados (HCA e PCA), propriedades estéricas/geométricas e eletrônicas foram consideradas as mais relevantes para a atividade biológica. Além disso, estudos de docking mostraram que a posição do grupo nitro no anel aromático é importante para a interação com a cruzaína. Ademais o composto 6 não provocou mudanças significativas no ciclo celular e na fragmentação de DNA em células humanas, mostrando-se como líder promissor para futuros estudos in vivo. Atividade tripanomicida, citotoxicidade, potencial de liberação de NO e estudos de permeabilidade dos 23 derivados sulfonilidrazônicos e ésteres nitrato estão sendo avaliados.

Efeito do treinamento físico associado a um programa de perda de peso no controle clínico e nos fatores de saúde relacionados à qualidade de vida em asmáticos obesos

Introdução: O fenótipo asma-obeso caracteriza-se por uma asma mais grave, no qual o controle clínico é mais difícil de ser alcançado, mesmo sob terapia medicamentosa otimizada. A cirurgia bariátrica tem sido recomendada para perda de peso e melhora dos sintomas, porém os benefícios de intervenções não-cirúrgicas têm sido pouco estudados. Objetivo: Avaliar o efeito do treinamento físico associado a um programa de perda de peso no controle clínico da asma, qualidade de vida e sintomas psicossociais em asmáticos obesos. Métodos: 55 pacientes com asma moderada a grave e obesidade grau II (IMC >= 35 e < 39.9 kg/m2) foram alocados em 2 grupos: programa de perda de peso + placebo (PP+P) ou programa de perda de peso + exercícios (PP+E), sendo que o programa de perda de peso incluiu terapia nutricional e psicológica (12 sessões semanais de 60 minutos cada). O grupo PP+E associou exercícios aeróbios e resistidos programa de perda de peso, enquanto o grupo PP+P associou exercícios placebo (respiratórios e alongamentos), 2xvezes/semana, 60 minutos/sessão durante 3 meses. Antes e após as intervenções, foram avaliados o controle clínico da asma, os fatores de saúde relacionados a qualidade de vida (FSRQV), a capacidade física, a composição corporal, os sintomas de ansiedade e depressão, a qualidade do sono, a função pulmonar e as inflamações das vias aéreas e sistêmica. A comparação dos dados contínuos entre os grupos foi realizada por ANOVA de dois fatores com medidas repetidas e das variáveis categóricas pelo teste qui-quadrado. A correlação linear e a regressão linear múltipla foram utilizadas para avaliar associações entre as variáveis avaliadas. Resultados: Foram analisados os resultados de 51 pacientes que foram reavaliados. Comparado com o grupo PP+P, os pacientes que realizaram exercício apresentaram melhora no controle clínico da asma (- 0,7 [-1,3 - -0,3] vs. -0,3 [-0,9 - 0,4] escore ACQ; p=0,01) e nos FSRQV (0,8 [0,3 -2,0] vs. 0,4 [-0,3 - 0,9] escore AQLQ; p=0,02), respectivamente. Essa melhora parece ter sido consequência do aumento do condicionamento físico (3,0 [2,4-4,0] vs. 0,9 [-0,3-1,3] mL.O2/Kg/min; p < 0,001) e da perda de peso (6,8±3,5% vs. 3,1±2,6% do peso corpóreo; p < 0,001) nos pacientes do grupo PP+E, que também apresentaram uma melhora dos sintomas de depressão, da qualidade do sono (ronco, latência e eficiência) e dos níveis séricos de vitamina D. Houve também melhora da função pulmonar (capacidade vital forçada e volume de reserva expiratório) e das inflamações das vias aéreas (FeNO) e sistêmica (CCL2, CXCL9, IL-4, IL-6, TNF-alfa, IL-10 e leptina/adiponectina), que parecem ser possíveis mecanismos associados à melhora do controle clinico da asma nos pacientes do grupo PP+E (p < 0,05 para todas variáveis apresentadas). Conclusão: A inclusão do treinamento físico em um programa de perda de peso a curto prazo deve ser considerada como uma intervenção eficiente para associar à terapia medicamentosa da asma na melhora do controle clínico em asmáticos obesos

Managing Layoff Survivors

‰Û÷Survivor syndrome' or negative consequences of a layoff on survivors is the key reason why layoffs fail. This Capstone Project draws on downsizing-related research and proposes a customizable plan to revitalize the surviving workforce after a downsizing initiative. The plan divides downsizing-related interventions into three phases: pre-downsizing, day of the announcement, and post-downsizing. Key elements of this plan include linking the plan to a revised vision, detailed planning of the process, open, two-way communication systems, employee involvement in all stages of the process, respectable treatment of departing employees, plans to support survivors, training frontline managers, and implementing a top talent retention strategy. The Capstone also addresses roles and responsibilities of leaders, HR professionals, and managers in the survivor management process.

Transmedialidad: series de ficción y redes sociales. El caso de Pulseras Rojas en el grupo oficial de Facebook (Antena 3. España)

Analizamos el Facebook de la teleserie Pulseras Rojas emitida en España por Antena 3, en tanto recurso transmedia y fuente de oportunidades para estimular el engagement del espectador. Estudiamos el tráfico generado durante la emisión de la segunda temporada, entre julio y agosto de 2013. Siguiendo la propuesta de Askwith (2007), se pueden identificar siete modalidades de touchpoints, es decir, puntos de contacto con la narración, adicionales a la propia emisión televisiva: acceso expandido, contenido adaptado, contenido expandido, productos de marca, actividades relacionadas, interacción social e interactividad. El estudio exploratorio se basa en el análisis del contenido del grupo de la serie en Facebook e identifica las modalidades de touchpoints y sus resultados. Facebook se revela como un potente instrumento para involucrar al espectador, aunque la estrategia comunicativa de la cadena de televisión presenta una gestión incipiente, poco evolucionada, que desaprovecha el carácter interactivo y bidireccional de la red social.

An introduction to alysidal algebra (IV)

Purpose – Deontical impure systems are systems whose object set is formed by an s-impure set, whose elements are perceptuales significances (relative beings) of material and/or energetic objects (absolute beings) and whose relational set is freeways of relations, formed by sheaves of relations going in two-way directions and at least one of its relations has deontical properties such as permission, prohibition, obligation and faculty. The paper aims to discuss these issues. Design/methodology/approach – Mathematical and logical development of human society ethical and normative structure. Findings – Existence of relations with positive imperative modality (obligation) would constitute the skeleton of the system. Negative imperative modality (prohibition) would be the immunological system of protection of the system. Modality permission the muscular system, that gives the necessary flexibility. Four theorems have been formulated based on Gödel's theorem demonstrating the inconsistency or incompleteness of DISs. For each constructed systemic conception can happen to it one of the two following things: either some allowed responses are not produced or else some forbidden responses are produced. Responses prohibited by the system are defined as nonwished effects. Originality/value – This paper is a continuation of the four previous papers and is developed the theory of deontical impure systems.

Experiencia de transferencia de conocimiento en el proyecto de investigación ITSAL (Inmigración, Trabajo y SALud) con representantes de la población diana

Se describe una experiencia de transferencia de conocimiento entre investigadores del proyecto ITSAL (Inmigración, Trabajo y SALud) y representantes de asociaciones que trabajan con población inmigrante para discutir los resultados obtenidos en esta investigación y las líneas de futuro. Para ello se llevó a cabo una reunión en la que participaron tres investigadoras y 18 representantes de 11 instituciones. Tras una exposición de la metodología y los resultados del proyecto ITSAL, todos los asistentes comentaron los resultados presentados y líneas de investigación de interés. Se pusieron de manifiesto coincidencias entre ambas partes y también se obtuvieron propuestas de interés para el proyecto ITSAL. Entendemos el proceso descrito como una aproximación a la validación social de algunos resultados principales del proyecto. Esta experiencia nos ha permitido abrir un canal de comunicación con la población diana del estudio, en línea con la necesaria interacción de investigadores y población.

La gastronomía como Industria Creativa en un contexto digital. Análisis de webs y redes sociales de los restaurantes españoles con estrella Michelin

En los últimos años es evidente el éxito creciente de la gastronomía, no sólo como mercado económico sino también desde una perspectiva comunicativa. Entendida como una Industria Creativa, la gastronomía está adquiriendo cada vez más peso en el mercado de la comunicación y se están desarrollando planes estratégicos que acercan progresivamente el sector gastronómico a todos los públicos, democratizando el arte de la cocina y haciendo de éste un talento accesible y disponible para todos los públicos. En pleno contexto de crecimiento, las estrategias y recursos comunicativos que utilizan tanto los mass media como los propios restaurantes y profesionales de la cocina, se han de convertir en objeto de estudio necesario para entender, por ejemplo, de qué manera se explotan los recursos comunicacionales y cuál es el alcance de los mismos así como sus oportunidades. El presente artículo se centra en un análisis de contenido de las páginas webs y las redes sociales utilizadas por los ocho restaurantes españoles galardonados con tres estrellas por la Guía Michelin España-Portugal (2014), sometidos a estudio en la misma semana (del 15 al 21 de septiembre). El objetivo principal es tratar de conocer estrategia de comunicación online llevada a cabo por estos restaurantes y establecer la importancia que se les atribuye a los recursos web a la hora de contribuir tanto a la consolidación de sus propias marcas como a la propia Industria Creativa gastronómica. Los resultados muestran cierta disparidad en el uso tanto de los recursos web como de los social media y avanzan que el sector gastronómico y de la restauración española tiene un reto: seguir comunicando implicándose en mayor medida con la bidireccionalidad e invitación a la participación de sus públicos, con el objetivo de captar nuevos contactos, fidelizar a los clientes actuales y convertir a todos ellos en prescriptores de sus servicios.

Effets de la stimulation magnétique transcrânienne dans la maladie de Parkinson avec déficits cognitifs légers

Beaucoup de patients atteints de la maladie de Parkinson (MP) peuvent souffrir de troubles cognitifs dès les étapes initiales de la maladie et jusqu’à 80% d’entre eux vont développer une démence. Des altérations fonctionnelles au niveau du cortex préfrontal dorsolatéral (CPFDL), possiblement en relation avec le noyau caudé, seraient à l’origine de certains de ces déficits cognitifs. Des résultats antérieurs de notre groupe ont montré une augmentation de l’activité et de la connectivité dans la boucle cortico-striatale cognitive suite à la stimulation magnétique transcrânienne (SMT) utilisant des paramètres « theta burst » intermittent (iTBS) sur le CPFDL gauche. Pour cette étude, 24 patients atteints de la MP avec des troubles cognitifs ont été séparées en 2 groupes : le groupe iTBS active (N=15) et le groupe sham (stimulation simulée, N=9). Une batterie neuropsychologique détaillée évaluant cinq domaines cognitifs (attention, fonctions exécutives, langage, mémoire et habiletés visuo-spatiales) a été administrée lors des jours 1, 8, 17 et 37. Le protocole iTBS a été appliqué sur le CPFDL gauche durant les jours 2, 4 et 7. Les scores z ont été calculés pour chaque domaine cognitif et pour la cognition globale. Les résultats ont montré une augmentation significative de la cognition globale jusqu’à 10 jours suivant l’iTBS active, particulièrement au niveau de l’attention, des fonctions exécutives et des habiletés visuo-spatiales. Cet effet sur la cognition globale n’est pas répliqué dans le groupe sham. Ces résultats suggèrent donc que l’iTBS peut moduler la performance cognitive chez les patients atteints de MP avec des déficits cognitifs.

Testing for Subsidiarity. Bruges European Economic Policy (BEEP) Briefing 13/2006

In the EU circuit (especially the European Parliament, the Council and Coreper) as well as in national parliaments of the EU Member States, one observes a powerful tendency to regard 'subsidiarity' as a 'political' issue. Moreover, subsidiarity is frequently seen as a one-way street : powers going 'back to' Member States. Both interpretations are at least partly flawed and less than helpful when looking for practical ways to deal with subsidiarity at both EU and Member states' levels. The present paper shows that subsidiarity as a principle is profoundly 'functional' in nature and, hence, is and must be a two-way principle. A functional subsidiarity test is developed and its application is illustrated for a range of policy issues in the internal market in its widest sense, for equity and for macro-economic stabilisation questions in European integration. Misapplications of 'subsidiarity' are also demonstrated. For a good understanding, subsidiarity being a functional, two-way principle neither means that elected politicians should not have the final (political!) say (for which they are accountable), nor that subsidiarity tests, even if properly conducted, cannot and will not be politicised once the results enter the policy debate. Such politicisation forms a natural run-up to the decision-making by those elected for it. But the quality and reasoning of the test as well as structuring the information in a logical sequence ( in accordance with the current protocol and with the one in the constitutional treaty) is likely to be directly helpful for decisionmakers, confronted with complicated and often specialised proposals. EU debates and decision-making is therefore best served by separating the functional subsidiarity test (prepared by independent professionals) from the final political decision itself. If the test were accepted Union-wide, it would also assist national parliaments in conducting comparable tests in a relatively short period, as the basis for possible joint action (as suggested by the constitutional treaty). The core of the paper explains how the test is formulated and applied. A functional approach to subsidiarity in the framework of European representative democracy seeks to find the optimal assignment of regulatory or policy competences to the various tiers of government. In the final analysis, this is about structures facilitating the highest possible welfare in the Union, in the fundamental sense that preferences and needs are best satisfied. What is required for such an analysis is no less than a systematic cost/benefit framework to assess the (de)merits of (de)centralisation in the EU.

Análise da precisão e reprodutibilidade de um scanner intraoral: estudo clínico

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Avaliação in vitro da resistência adesiva à microtracção e caracterização morfológica com SEM de um novo sistema adesivo

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Exploring complementarities between goods and services trade in trade agreements

More than three decades of research on trade costs and goods trade have unveiled fundamental insights into the determinants, the nature and the consequences of goods trade agreements. A cottage literature has also evolved studying similar issues from a services trade perspective, but the two-way interaction between goods and services trade has not been explored formally. We bridge this gap by providing a formal treatment of the inter-linkages between goods and services trade. The model provides insights into how trade agreements impact goods and services trade. We also explore the impact of the complementarities of goods and services agreements on goods and services trade empirically using bilateral goods and services trade data for OECD and BRICS trading partners over 1995-2010.