Detergent-induced stabilization and improved 3D map of the human heteromeric amino acid transporter 4F2hc-LAT2.

Human heteromeric amino acid transporters (HATs) are membrane protein complexes that facilitate the transport of specific amino acids across cell membranes. Loss of function or overexpression of these transporters is implicated in several human diseases such as renal aminoacidurias and cancer. HATs are composed of two subunits, a heavy and a light subunit, that are covalently connected by a disulphide bridge. Light subunits catalyse amino acid transport and consist of twelve transmembrane α-helix domains. Heavy subunits are type II membrane N-glycoproteins with a large extracellular domain and are involved in the trafficking of the complex to the plasma membrane. Structural information on HATs is scarce because of the difficulty in heterologous overexpression. Recently, we had a major breakthrough with the overexpression of a recombinant HAT, 4F2hc-LAT2, in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. Microgram amounts of purified protein made possible the reconstruction of the first 3D map of a human HAT by negative-stain transmission electron microscopy. Here we report the important stabilization of purified human 4F2hc-LAT2 using a combination of two detergents, i.e., n-dodecyl-β-D-maltopyranoside and lauryl maltose neopentyl glycol, and cholesteryl hemisuccinate. The superior quality and stability of purified 4F2hc-LAT2 allowed the measurement of substrate binding by scintillation proximity assay. In addition, an improved 3D map of this HAT could be obtained. The detergent-induced stabilization of the purified human 4F2hc-LAT2 complex presented here paves the way towards its crystallization and structure determination at high-resolution, and thus the elucidation of the working mechanism of this important protein complex at the molecular level.

Validierung einer deutschsprachigen Version des Career Futures Inventory (CFI): Berufliche Anpassungsfähigkeit, beruflicher Optimismus, Arbeitsmarktwissen und Berufserfolg

Das Career Futures Inventory (CFI; Rottingaus, Day & Borgen, 2005) erfasst die drei laufbahnbezogenen Zukunftsfaktoren career adaptability (Berufliche Anpassungsfähigkeit), career optimism (Beruflicher Optimismus) und knowledge of job market (Arbeitsmarktwissen). Die Ziele dieser Studie waren (a) eine deutschsprachige Version des CFIs zu konstruieren und (b) an zwei Stichproben mit Erwerbstätigen mittels (c) unterschiedlicher Indikatoren des Berufserfolgs und anhand von Persönlichkeitseigenschaften zu validieren. Es konnte in beiden Stichproben (N1 = 153; N2 = 110) die 3-faktorielle Struktur des CFIs nachgewiesen werden. Zudem konnten Annahmen zur konvergenten und diskriminanten Validität in beiden Stichproben bestätigt werden, da die CFI-Faktoren in erwarteter Richtung mit Berufserfolg (z. B. Beförderungen, Karrierezufriedenheit) bzw. Persönlichkeitseigenschaften (d. h. Big Five) korrelierten bzw. nicht korrelierten. Eine Analyse der inkrementellen Validität zeigte, dass Arbeitsmarktwissen zusätzliche Varianz beim Gehalt über Kontrollvariablen und Persönlichkeit hinaus erklärte. Hinsichtlich Karrierezufriedenheit war dies für beruflichen Optimismus der Fall. Diese Validierungsstudie ermöglicht den Einsatz des CFIs im deutschsprachigen Raum.