Isolation, N-glycosylations and Function of a Hyaluronidase-Like Enzyme from the Venom of the Spider Cupiennius salei.

STRUCTURE OF CUPIENNIUS SALEI VENOM HYALURONIDASE Hyaluronidases are important venom components acting as spreading factor of toxic compounds. In several studies this spreading effect was tested on vertebrate tissue. However, data about the spreading activity on invertebrates, the main prey organisms of spiders, are lacking. Here, a hyaluronidase-like enzyme was isolated from the venom of the spider Cupiennius salei. The amino acid sequence of the enzyme was determined by cDNA analysis of the venom gland transcriptome and confirmed by protein analysis. Two complex N-linked glycans akin to honey bee hyaluronidase glycosylations, were identified by tandem mass spectrometry. A C-terminal EGF-like domain was identified in spider hyaluronidase using InterPro. The spider hyaluronidase-like enzyme showed maximal activity at acidic pH, between 40-60°C, and 0.2 M KCl. Divalent ions did not enhance HA degradation activity, indicating that they are not recruited for catalysis. FUNCTION OF VENOM HYALURONIDASES Besides hyaluronan, the enzyme degrades chondroitin sulfate A, whereas heparan sulfate and dermatan sulfate are not affected. The end products of hyaluronan degradation are tetramers, whereas chondroitin sulfate A is mainly degraded to hexamers. Identification of terminal N-acetylglucosamine or N-acetylgalactosamine at the reducing end of the oligomers identified the enzyme as an endo-β-N-acetyl-D-hexosaminidase hydrolase. The spreading effect of the hyaluronidase-like enzyme on invertebrate tissue was studied by coinjection of the enzyme with the Cupiennius salei main neurotoxin CsTx-1 into Drosophila flies. The enzyme significantly enhances the neurotoxic activity of CsTx-1. Comparative substrate degradation tests with hyaluronan, chondroitin sulfate A, dermatan sulfate, and heparan sulfate with venoms from 39 spider species from 21 families identified some spider families (Atypidae, Eresidae, Araneidae and Nephilidae) without activity of hyaluronidase-like enzymes. This is interpreted as a loss of this enzyme and fits quite well the current phylogenetic idea on a more isolated position of these families and can perhaps be explained by specialized prey catching techniques.

Deutschlands Wiedergeburt! Gedicht: Seiner Kaiserlichen Hoheit, dem Erzherzoge Johann von Oesterreich, erwähltem ersten Deutschen Reichsverweser, am Tage Seines hochgefeierten Einzuges zu Frankfurt am Main, den 11. Juli 1848, in tiefster Ehrfurcht gewidmet

Welsch (Projektbearbeiter): Gedicht zu Ehren des am 29, Juni 1848 von der Nationalversammlung zum unverantwortlichen Reichsverweser gewählten Erzherzogs Johann

Das deutsche Volk in Frankfurt hat gesiegt! Erzherzog Johann ist in Gefahr! Nachrichten über Nachrichten durchlaufen die Residenz Wien über die blutigen Ereignisse in Frankfurt ...

Welsch (Projektbearbeiter): Nachricht über den Septemberaufstand in Frankfurt/Main. Meldung über den Tod der Abgeordneten Auerswald und Lichnowsky (zutreffend) und des Abgeordneten Heckscher (nicht zutreffend). Äußerung von Sorge um die Sicherheit von Erzherzog Johann bei grundsätzlich positiver Haltung zu den Geschehnissen.

Vivat Erzherzog Johann, der wackere Tiroler-Hanns: Welch' Glück uns wartet, und was wir hoffen, Liegt in diesen Worten frei uns offen! Welchen Vaterlandsfreund erfreuet nicht dieser Name ...

Welsch (Projektbearbeiter): Willkommensgruß an Erzherzog Johann samt kurzer biographischer Skizze anläßlich seines Eintreffens in Wien

Tagsbefehl für die Nationalgarde. Am 28. Juni 1848: Se. kaiserliche Hoheit der Erzherzog Johann äußerten sich so günstig über die Vortrefflichkeit der Garde ...

Welsch (Projektbearbeiter): Anton Pannasch, Oberkommandant der Wiener Nationalgarde gibt mit Genugtuung das Lob Erzherzog Johanns über den Ausbildungsstand der Garde bekannt

Der Geist Kaiser Joseph II. erscheint dem Erzherzog Johann, Reichsverweser Deutschlands: Wunderbarer Fürgang, der sich am 7. Juli 1848, in der Mitternachtsstunde in der k. k. Burg ereignete: Es war ein herrlicher Tag, der 7. Juli, ein Tag, der gewiß Jedem ...

Welsch (Projektbearbeiter): Erzherzog Johann ist der Vollender des Werkes der deutschen Einheit und Freiheit, das von Kaiser Joseph II. begonnen wurde, welcher " ... schon vor mehr denn 50 Jahren seinem Volke ... die Pforten der Freiheit öffnen wollte ... ". Dargestellt im Topos der Wiederauferstehung Josephs II., der seinem Neffen Ratschläge erteilt. Mit antiklerikaler Zielrichtung

Thronrede Seiner k. k. Hoheit des Erzherzogs Johann bei Eröffnung des constituirenden Reichstages am 22. Juli 1848: Von Sr. Majestät, unserm konstitutionellen Kaiser Ferdinand I. beauftragt, den konstituirenden Reichstag der österreichischen Monarchie zu eröffnen ...

Welsch (Projektbearbeiter): Rede Erzherzog Johanns anläßlich der Eröffnung des österreichischen Reichstages: Bestätigung der erworbenen Freiheiten, Gleichberechtigung aller Nationalitäten, Rechtfertigung des Krieges in Italien

Extra-Beilage zur 'Constitution' am 22. Juli 1848: Die Thronrede, womit Erzherzog Johann den constituirenden Reichstag eröfnet hat, und die Antwortsrede des Präsidenten: Der Erzherzog erschien um 12 Uhr begleitet vom Generalstabe und dem Ministerium ...

Welsch (Projektbearbeiter): Rede Erzherzog Johanns anläßlich der Eröffnung des österreichischen Reichstages: Bestätigung der erworbenen Freiheiten, Gleichberechtigung aller Nationalitäten, Rechtfertigung des Krieges in Italien. Samt Antwort des Reichstagspräsidenten

Offenes Sendschreiben an Sr. k. k. Hoheit Erzherzog Johann: Kaiserliche Hoheit! Der Jubel, der in vielfachem Echo wiederhallte, das treue Willkommen eines treuen Volkes ...

Welsch (Projektbearbeiter): Bitte an Erzherzog Johann, seine Ankündigung zurückzunehmen, er werde - als Reichsverweser ganz Deutschlands - die Funktion des Stellvertreters des österreichischen Kaisers ablegen

Kundmachung: Johann Horvath, aus Csodno, Oedenburger Comitates in Ungarn gebürtig ...

Welsch (Projektbearbeiter): Verurteilung des Schmiedegesellen und früheren Zeitsoldaten Johann Horváth zum Tode nach dem Standrecht wegen "vorsätzlicher Verhelung abzuliefernder Waffen und Munition"

Kundmachung: Johann Wegele, aus Wien gebürtig, 31 Jahre alt, katholisch ...

Welsch (Projektbearbeiter): Verurteilung des ehemaligen Militärarztes Wegele, des Lithographen Nowak sowie des Musiklehrers Hipfel wegen Teilnahme am Aufruhr zu fünf-, vier- und einjährigem schwerem Kerker resp.

Johann von Oestreich ist deutscher Kaiser oder Reichsverwester [sic!] geworden! Flesch, was sagst de nu? Also dadervor hab ick mir gemußt von meine Arbeet versäumen und die Wahlmänner von Frankfurth wählen, deß sie da sonne Streeche machen? ...

Welsch (Projektbearbeiter): Heftige Kritik an der Wahl Erzherzog Johanns zum Reichsverweser, an den Frankfurter Gesamtstaatsplänen sowie an der Rolle Österreichs: "Deutschland muß 'n Janzet bilden, det versteht sich ... Aber Preußen unterducken? Ne, davon wird nischt jereicht!"

Kundmachung: Johann Ritter von Vogtberg, zu Wien geboren, 20 Jahre alt, katholisch, ledig, Studirender ...

Welsch (Projektbearbeiter): Verurteilung des Studenten von Vogtberg, des Schulgehilfen Elgner sowie des Kattundruckers Schmalhofer (in Umwandlung der zuvor ausgesprochenen Todesstrafen) zu je vierjähriger Zwangsarbeit wegen Aufruhrs und bewaffneten Widerstands gegen das Militär

Johann Nestroy an das Publikum Wiens: Die freche Beschuldigung des Herrn C. Böhm, ich hätte die Grundidee seines Stückes "Eine Petition der Bürger einer kleinen Provinzstadt" ...

Welsch (Projektbearbeiter): Verwahrung des Dichters und Schauspielers Nestroy gegen den Plagiatsvorwurf eines gewissen C. Böhm sein am 1. Juli 1848 uraufgeführtes Stück "Freiheit in Krähwinkel" betreffend

Wolfgang Menzel über die Juden in der deutschen Literatur

L. G.