Covalent intermediate trapped in 2-keto-3-deoxy-6- phosphogluconate (KDPG) aldolase structure at 1.95-Å resolution

2-Keto-3-deoxy-6-phosphogluconate (KDPG) aldolase catalyzes the reversible cleavage of KDPG to pyruvate and glyceraldehyde-3-phosphate. The enzyme is a class I aldolase whose reaction mechanism involves formation of Schiff base intermediates between Lys-133 and a keto substrate. A covalent adduct was trapped by flash freezing KDPG aldolase crystals soaked with 10 mM pyruvate in acidic conditions at pH 4.6. Structure determination to 1.95-Å resolution showed that pyruvate had undergone nucleophilic attack with Lys-133, forming a protonated carbinolamine intermediate, a functional Schiff base precursor, which was stabilized by hydrogen bonding with active site residues. Carbinolamine interaction with Glu-45 indicates general base catalysis of several rate steps. Stereospecific addition is ensured by aromatic interaction of Phe-135 with the pyruvate methyl group. In the native structure, Lys-133 donates all of its hydrogen bonds, indicating the presence of an ɛ-ammonium salt group. Nucleophilic activation is postulated to occur by proton transfer in the monoprotonated zwitterionic pair (Glu-45/Lys-133). Formation of the zwitterionic pair requires prior side chain rearrangement by protonated Lys-133 to displace a water molecule, hydrogen bonded to the zwitterionic residues.

Análisis de la carga interna en los entrenamientos de fútbol sala femenino de 1ª división nacional

El objetivo de este estudio es analizar la frecuencia cardiaca (FC) y la percepción subjetiva del esfuerzo (RPE) en los entrenamientos de fútbol sala en jugadoras (25.42±4.42 años, 166.57±7.14 cm, 56.50±4.95 kg y 22.23±0.97 IMC) de un equipo de primera división de la liga nacional española. Se registraron, mediante monitores de ritmo cardiaco y la escala de Foster, ocho sesiones de entrenamiento de tipo técnico-táctico, físico y partidos modificados, distribuidas durante la mitad de la temporada. Los resultados de la FC máxima y media obtenida son 174.03±4.15 y 128.29±0.81 ppm en sesiones técnico-tácticas, 179.75±2.05 y 132±2.12 ppm en sesiones físicas, 180.99±1.06 y 133.63±5.52 ppm en partidos modificados, respectivamente. Habiendo diferencias significativas en los resultados de la FC máxima entre las sesiones técnico-tácticas y los partidos modificados (p=0.03) y entre la sesiones físicas y las técnico-tácticas (p=0.04). En cuanto a los resultados de la carga de entrenamiento y la RPE en las sesiones técnico-tácticas son 381.22±16.42 y 6.21±0.12 rpe, en las sesiones físicas 533.25±5.59 y 7.90±0.0 rpe, y en los partidos modificados 531.18±4.21 y 7.97±0.22 rpe, respectivamente. Encontrando diferencias significativas entre los resultados de la RPE y la magnitud de la carga de entrenamiento de las sesiones técnico-tácticas y los partidos modificados (p=0.00) y entre la sesiones físicas y las técnico-tácticas (p=0.00). Estos resultados muestran que la sesión de partido modificado obtiene unos valores de frecuencia cardiaca y de percepción subjetiva del esfuerzo mayor que las sesiones técnico-tácticas y las de trabajo físico.