The ETS family member GABPα modulates androgen receptor signalling and mediates an aggressive phenotype in prostate cancer

In prostate cancer (PC), the androgen receptor (AR) is a key transcription factor at all disease stages, including the advanced stage of castrate-resistant prostate cancer (CRPC). In the present study, we show that GABPα, an ETS factor that is up-regulated in PC, is an AR-interacting transcription factor. Expression of GABPα enables PC cell lines to acquire some of the molecular and cellular characteristics of CRPC tissues as well as more aggressive growth phenotypes. GABPα has a transcriptional role that dissects the overlapping cistromes of the two most common ETS gene fusions in PC: overlapping significantly with ETV1 but not with ERG target genes. GABPα bound predominantly to gene promoters, regulated the expression of one-third of AR target genes and modulated sensitivity to AR antagonists in hormone responsive and castrate resistant PC models. This study supports a critical role for GABPα in CRPC and reveals potential targets for therapeutic intervention.

Tooth replacement for partially dentate elders: a willingness-to-pay analysis

Objectives: The primary aim of this study was to investigate partially dentate elders’ willingness-to-pay (WTP) for two different tooth replacement strategies: using Removable Partial Dentures (RPDs) and, functionally orientated treatment (SDA). The secondary aim was to measure the same patient group’s WTP for dental implants. Methods: Patients who had completed a previous RCT comparing two tooth replacement strategies (RPDs and SDA) were recruited. 59 patients were asked to indicate their WTP for treatment to replace missing teeth in a number of hypothetical scenarios using the payment card method of contingency evaluation coupled to different costs. Data were collected on patients’ social class, longest held occupation, income levels and social circumstances. Results: The median age for the patient sample was 72.0 years (IQR: 71-75 years). Patients who had previously been provided with RPDs indicated that their WTP for this treatment strategy was significantly higher than those patients who had received SDA treatment (Mann-Whitney U Test: p<0.001). This group were also WTP a higher price for SDA treatment than those patients who had previously been treated according to this modality (Mann-Whitney U Test: p=0.005). The results indicated that patients’ age was not correlated with WTP but both social class and current income levels were significantly correlated (Spearman’s rank correlation: p<0.05). Patients in both treatment groups exhibited llittle WTP for dental implant treatment with a median price recorded which was lower than either RPD or SDA treatment. Conclusions: Amongst this patient cohort previous treatment experience had a strong influence on WTP as did social class and current income levels. The patients’ WTP indicated that they did not value dental implants over simpler forms of tooth replacement such as RPDs or a SDA approach.

Derivatisable Cyanobactin Analogues: A Semisynthetic Approach

Many natural cyclic peptides have potent and potentially useful biological activities. Their use as therapeutic starting points is often limited by the quantities available, the lack of known biological targets and the practical limits on diversification to fine-tune their properties. We report the use of enzymes from the cyanobactin family to heterocyclise and macrocyclise chemically synthesised substrates so as to allow larger-scale syntheses and better control over derivatisation. We have made cyclic peptides containing orthogonal reactive groups, azide or dehydroalanine, that allow chemical diversification, including the use of fluorescent labels that can help in target identification. We show that the enzymes are compatible and efficient with such unnatural substrates. The combination of chemical synthesis and enzymatic transformation could help renew interest in investigating natural cyclic peptides with biological activity, as well as their unnatural analogues, as therapeutics.

Novel polymorphic microsatellite loci for the protogynous hermaphrodite slinger sea bream (Chrysoblephus puniceus, Sparidae)

As a result of the global decline of fish stocks, an increasing number of fish species are becoming targets of heavy exploitation, often concomitantly with a lack of biological knowledge on their structure and demographics. Here we present 11 new polymorphic microsatellite loci, isolated from the slinger sea bream (Chrysoblephus puniceus, Sparidae), a relatively recent target of coastal fisheries in eastern South Africa. Levels of genetic diversity were assessed in 39 individuals collected from the KwaZulu-Natal coast (Park Rynie, South Africa). Observed and expected heterozygosities varied between 0.39 and 0.97 and between 0.53 and 0.96, respectively. One locus (SL35) showed significant heterozygote deficiency and linkage disequilibrium was detected between SL35 and SL1. Importantly, five of these microsatellites cross-amplify in Cheimerius nufar, a sympatric species also subjected to exploitation.

Good Laboratory Practice for optimization research

Good Laboratory Practice has been a part of non-clinical research for over 40 years. Optimization Research, despite having many papers discussing standards being published over the same period of time, has yet to embrace standards that underpin its research. In this paper we argue the need to adopt standards in optimization research. Building on previous papers, many of which have suggested that the optimization research community should adopt certain standards, we suggest a concrete set of recommendations that the community should adopt. We also discuss how the proposals in this paper could be progressed.

Serum Cytokines and Adipokines in Periodontitis

Objective: To investigate whether there was an association between serum levels of pro-inflammatory cytokines, adipokines and periodontitis in 60-70 year-old men in Northern Ireland. Methods: Test subjects (n=61) with established periodontitis, categorised by loss of periodontal attachment (PAL) and pocketing of at least 5mm, were matched for age, smoking and BMI with controls (n=60) who were periodontitis resistant (no PAL or pocketing over 3mm). Serum levels of IL 1 alpha, TNF alpha, IL 6, adiponectin, resistin, leptin and C-reactive protein (CRP) were measured from serum using a multiplex array (Randox, UK). Mann Whitney analysis was used with the level of significance set at p<0.05. Results: There was considerable inter-individual variability in all the analytes measured. There was a significantly higher level of IL 6 in men with periodontitis (3.25 pg/ml, SD 2.29) than in those with no periodontitis (2.38 pg/ml, SD1.62), p=0.0041 (after Bonferroni correction for multiple testing p=0.029). Serum IL 6 was strongly correlated with CRP: r=0.52 (95% CI 0.38-0.64), p<0.0001. There was a lower serum level of adiponectin in men with periodontitis (3662.1 ng/ml, SD 2383.4) compared with those who were periodontitis resistant (4265.9 ng/ml, SD 2266.0), which just escaped statistical significance at p=0.068. There were no significant differences in the serum levels of any of the other analytes measured in relation to periodontal status. Conclusions: There was evidence in the 60-70 year-old male population investigated that periodontitis was associated with an increased serum level of IL 6.

Neuropeptide Y in GCF in periodontal health and disease

Objectives: To determine whether neuropeptide Y (NPY) is present in gingival crevicular fluid (GCF) in both periodontal health and disease and to study the relationship of NPY with periodontal inflammation. Methods: GCF samples (30 s) were collected from one site with both pocket depth (>4mm) and loss of periodontal attachment (>4mm) in 20 patients with chronic periodontitis (mean age 41.4, SD 9.6 yrs; 10 m, 10 f). GCF was also collected from clinically healthy sites (< 3mm, no bleeding on probing) in 20 subjects with no periodontitis (mean age 37.4, SD 11.7; 10 m, 10 f). GCF was collected using the periopaper strip method, diluted in 500 ul of phosphate-buffered saline and stored at –70°C. Samples were analysed in duplicate for NPY by radioimmunoassay. NPY levels were compared using the Mann-Whitney test. Results: Measurable NPY was present in all the GCF samples collected from healthy subjects. NPY was below the level of detection in 4 (20%) of the diseased subjects. There was considerable variability in the amount of NPY collected from both groups. There were no differences between the levels of NPY measured in males compared with females in either the healthy or diseased groups. Significantly more (P< 0.0001) NPY (pg) was collected from healthy subjects (Median 165, IQR 80; mean 161, SD 64) than diseased subjects (Median 37.5, IQR 56.3; mean 39.8, SD 35.1). There was more variability in the NPY concentration (pg/ul) which was also significantly higher in healthy (Median 575.7, IQR 562.3; mean 645.7, SD 416.7) compared with diseased subjects (Median 43.6, IQR 117.4; mean 96.4, SD 124.5). Conclusions: It is concluded that the levels of NPY in GCF sampled

Tooth replacement for partially dentate elders: a willingness-to-pay analysis

Objectives: The primary aim of this study was to investigate partially dentate elders’ willingness-to-pay (WTP) for two different tooth replacement strategies: using Removable Partial Dentures (RPDs) and, functionally orientated treatment (SDA). The secondary aim was to measure the same patient group’s WTP for dental implants.Methods: Patients who had completed a previous RCT comparing two tooth replacement strategies (RPDs and SDA) were recruited. 59 patients were asked to indicate their WTP for treatment to replace missing teeth in a number of hypothetical scenarios using the payment card method of contingency evaluation coupled to different costs. Data were collected on patients’ social class, longest held occupation, income levels and social circumstances.Results: The median age for the patient sample was 72.0 years (IQR: 71-75 years). Patients who had previously been provided with RPDs indicated that their WTP for this treatment strategy was significantly higher than those patients who had received SDA treatment (Mann-Whitney U Test: p<0.001). This group were also WTP a higher price for SDA treatment than those patients who had previously been treated according to this modality (Mann-Whitney U Test: p=0.005). The results indicated that patients’ age was not correlated with WTP but both social class and current income levels were significantly correlated (Spearman’s rank correlation: p<0.05).Patients in both treatment groups exhibited llittle WTP for dental implant treatment with a median price recorded which was lower than either RPD or SDA treatment.Conclusions: Amongst this patient cohort previous treatment experience had a strong influence on WTP as did social class and current income levels. The patients’ WTP indicated that they did not value dental implants over simpler forms of tooth replacement such as RPDs or a SDA approach.

Pharmacy students' use and views on over-the-counter (OTC) medicines; a questionnaire study

Introduction
The role of the pharmacist centers on ensuring the safe and effective use of medicines, including over-the-counter (OTC) medicines. It is important to ascertain pharmacy students’ use and opinions on OTC medicines, given that they are the pharmacists of the future and that this market continues to expand. This study aimed to investigate Queen’s University Belfast (QUB) final year pharmacy students’ use and views on OTC medicines. Scarce work has been conducted in this area to date.

Methods
Following ethical approval and a pilot study, all students (n=155) were invited to participate in a self-completed questionnaire (n=20 questions), distributed at a mandatory class. Descriptive statistics and non-parametric tests (Chi-squared and Mann Whitney U-test) were used for data analyses.

Results
The response rate was 99.4% (154/155). The majority (153/155) reported using OTC medicines; the key consideration during personal product selection was effectiveness. Most [96.1% (147/153)] were in agreement that safety was the over-riding concern during OTC consultations. While 96.1% (149/155) considered that using an evidence-based approach improved the quality of patient care, 68.0% (104/153) would be prepared to sell a product that lacks evidence of effectiveness, provided it would not cause harm.

Conclusions
The importance of evidence of effectiveness was acknowledged, yet many students in this study were prepared to recommend unproven products. Further strategies are required at QUB to ensure this routine consideration alongside safety in practice.

Novel Metabolite Biomarkers of Huntington's Disease As Detected by High-Resolution Mass Spectrometry

Huntington's disease (HD) is a fatal autosomal-dominant neurodegenerative disorder that affects approximately 3-10 people per 100 000 in the Western world. The median age of onset is 40 years, with death typically following 15-20 years later. In this study, we biochemically profiled post-mortem frontal lobe and striatum from HD sufferers (n = 14) and compared their profiles with controls (n = 14). LC-LTQ-Orbitrap-MS detected a total of 5579 and 5880 features for frontal lobe and striatum, respectively. An ROC curve combining two spectral features from frontal lobe had an AUC value of 0.916 (0.794 to 1.000) and following statistical cross-validation had an 83% predictive accuracy for HD. Similarly, two striatum biomarkers gave an ROC AUC of 0.935 (0.806 to 1.000) and after statistical cross-validation predicted HD with 91.8% accuracy. A range of metabolite disturbances were evident including but-2-enoic acid and uric acid, which were altered in both frontal lobe and striatum. A total of seven biochemical pathways (three in frontal lobe and four in striatum) were significantly altered as a result of HD. This study highlights the utility of high-resolution metabolomics for the study of HD. Further characterization of the brain metabolome could lead to the identification of new biomarkers and novel treatment strategies for HD.

Cadmium phytotoxicity and trophic transfer to isopods

O cádmio (Cd) é um metal não essencial e é considerado um poluente prioritário pela comunidade europeia. Este metal atinge o ambiente no decurso de várias actividades antropogénicas e tende a concentrar-se nos solos e sedimentos, onde está potencialmente disponível para as plantas, sendo posteriormente transferido através da cadeia trófica. Neste contexto, o principal objectivo da presente dissertação foi o estudo dos efeitos da assimilação e da acumulação de Cd em plantas e as suas consequências para animais consumidores. Numa primeira fase, foram estudados os principais efeitos fisiológicos e genotóxicos do Cd em plantas. As plantas de alface (Lactuca sativa L.) expostas a Cd apresentaram um decréscimo na eficiência fotossintética, aumento de peroxidação lipídica e alterações significativas na actividade de enzimas de stress oxidativo. Estas alterações culminaram num decréscimo do crescimento da parte aérea no final da exposição. As respostas obtidas pelos parâmetros bioquímicos sugerem que estes poderão ser utilizados como eventuais biomarcadores em testes ecotoxicológicos com Cd em abordagens integrantes em conjunto com parâmetros clássicos. Os efeitos mutagénicos de Cd foram avaliados através da determinação da instabilidade de microsatélites (IM). Não foi observada IM, nem nas folhas nem nas raízes de plantas de alface com 5 semanas de idade expostas a 100 μM Cd durante 14 dias, no entanto observou-se IM em raízes de alface exposta a 10 μM Cd durante 28 dias desde a germinação. A idade da planta e a maior acumulação de Cd nas raízes poderão explicar os resultados obtidos. A clastogenicidade de Cd foi analisada em três espécies vegetais com diferentes capacidades de destoxificação e acumulação de metais através de citometria de fluxo. Foram detectadas alterações significativas nos parâmetros analisados em raízes alface, mas não nas espécies Thlaspi caerulescens J & C Presl e Thlaspi arvense L. Estes resultados sugerem que o stress provocado pelo Cd originou clastogenicidade como consequência da perda de porções de cromossomas, uma vez que o conteúdo de ADN nuclear diminuiu. A transferência trófica através da cadeia alimentar permanece muito pouco estudada em termos ecotoxicológicos. A distribuição subcellular de metais num organismo pode ser utilizada para compreender a transferência trófica de um metal na cadeia alimentar. Como tal, numa última parte é estudado de que modo a distribuição subcellular do Cd em plantas com perfis de acumulação de Cd distintos afecta a biodisponibilidade e transferência trófica de Cd para isópodes. A distribuição de Cd entre as 4 fracções subcelulares obtidas através de centrifugação diferencial revelou a existência de diferenças significativas entre as espécies de plantas. Estes resultados em conjunto com a avaliação directa da eficiência de assimilação (EA) de Cd individual de cada uma das quatro fracções subcelulares das plantas em estudo, resultou em informação de grande relevância para a explicação das diferenças observadas na EA de Cd por parte de isópodes alimentados com folhas de diferentes espécies de plantas. Com base nos resultados obtidos, o Cd ligado a proteínas estáveis à temperatura (e.g. metaloteoninas e fitoquelatinas) é o menos biodisponível, sendo assim o que menos contribuiu para a transferência trófica, enquanto que o Cd ligado a proteínas desnaturadas pela temperatura foi a fracção mais disponível para transferência trófica de Cd ao isópode. Estes resultados realçam a relevância ecológica da distribuição subcelular de Cd em plantas que tem influência directa na tranferência trófica deste metal para os consumidores e ainda o facto de que alterações na distribuição subcelular de Cd em plantas devido a diferentes mecanismos de destoxificação poderá ter um impacto directo na transferência trófica de Cd para o animal consumidor.

Influence of speciation in the bioavailability of cadmium to an isopod

Devido às actividades antropogénicas várias substâncias químicas têm sido introduzidas no meio ambiente em concentrações que de outro modo não ocorreriam de forma tão elevada naturalmente. Assim, o conhecimento acerca das características de um químico, tais como, o potencial para se acumular em diferentes níveis tróficos, a sua mobilidade dentro do ecossistema, a toxicidade específica e a bioacumulação, é fundamental para compreender os seus efeitos nos ecossistemas. Esta tese investiga a influência de especiação, na biodisponibilidade do cádmio (Cd) para o isópode Porcellio dilatatus, incluindo os efeitos de especiação do metal: (i) na assimilação do Cd, (ii) no modo como o Cd se distribui internamente no organismo, e (iii) como a sobrevivência e a reprodução são afectadas em isópodes terrestres. Num primeiro ensaio laboratorial avaliou-se a importância da transferência trófica na assimilação do Cd em P. dilatatus. Para tal analisou-se a eficiência de assimilação (EA) do Cd em isópodes, adicionado superficialmente ao alimento (alface) na forma de Cd(NO3)2 e contaminando o meio de crescimento da alface. A hipótese era de que a alface contaminada biologicamente através do cultivo em meio hidropónico contaminado teria uma maior proporção de complexos com proteína ou conjugado na forma de Cd (ex. Cd cisteína). A EA de Cd foi maior entre os isópodes que foram alimentados com o sal (71%, SE = 7%), do que entre os isópodes que se alimentaram de alface contaminada biologicamente (52%, SE = 5%), demonstrando-se assim num teste laboratorial que é provável que a especiação do Cd influencie a taxa de assimilação e acumulação do Cd. Na experiência alimentar que se seguiu, estudou-se em detalhe a especiação do metal comparando as EA do Cd conjugado com cisteína (Cd(Cys)2) e na forma de Cd(NO3)2, com os quais se contaminou gelatina com alface. A utilização de Cd-cisteína, proporcionou uma forma experimental para explorar a biodisponibilidade do Cd complexado dentro do tecido biológico. Como esperado, a EA de Cd em isópodes alimentados com nitrato de Cd (64%, SE = 5%) foi maior do que no caso de isópodes alimentados com o conjugado de cisteína (20%, SE = 3%). De seguida estudou-se a distribuição subcelular das espécies de Cd assimilado através de um processo de fraccionamento. Supunha-se que as diferenças de especiação de Cd reflectiria diferentes estratégias de compartimentalização, com consequências ao nível da detoxificação, armazenamento celular e distribuição subcelular do metal. O “sequestro” na forma de metal biologicamente detoxificado (BDM = proteínas estáveis ao calor - HSP e grânulos ricos em metal - RMG) foi maior nos isópodes alimentados com Cd(NO3)2, sugerindo que são mais eficientes na detoxificação de Cd (22%) do que quando alimentados com Cd(Cys)2 (15%). Foi também demonstrado que os isópodes alimentados com Cd(Cys)2 possuíam níveis de armazenamento de Cd superior nas fracções sensíveis ao metal (MSF = organelos e proteínas desnaturadas pelo calor - HDP) consideradas fracções potencialmente vulneráveis e afectando os isópodes em termos de toxicidade. As diferentes distribuições internas que se seguiram à assimilação e detoxificação das diferentes espécies de Cd foram finalmente avaliadas em termos da sobrevivência e reprodução dos isópodes. O tratamento com Cd(Cys)2 teve maior mortalidade, provavelmente devido à maior disponibilidade de Cd ingerido com implicações ao nível dos processos fisiológicos. Os isópodes alimentados com Cd(NO3)2 armazenaram o Cd nos MRG, como estratégia de detoxificação, sendo mais eficientes a detoxificar o Cd ainda que aumentando a concentração total do metal que se tornou menos tóxico para o isópode. Desta forma, o Cd nos grânulos não estava disponível para os processos fisiológicos e deixou de ser tóxico. Isso poderia estar relacionado com a resistência e tolerância aos metais devido à capacidade dos isópodes compartimentalizarem o Cd no hepatopâncreas, que actua como um mecanismo de detoxificação e contribui para a tolerância a altos níveis de cádmio. Em termos de parâmetros reprodutivos, observou-se uma redução de gestações e duração da gestação na presença de ambas as espécies de metal, mas no caso do Cd(Cys)2 as gravidezes não se concluíram. O número de jovens produzido por fêmeas alimentadas com Cd(NO3)2 foi menor do que no controlo, mas os pesos dos juvenis foram superiores. Finalmente sugere-se assim que esta abordagem seja considerada em estudos do movimento trófico de metais nas cadeias alimentares dado que se espera que a especiação de metais implique diferentes fluxos, dentro de uma dada cadeia trófica.

Lacertid lizards as bioindicators of agricultural contamination

Apesar do recente aumento no número de estudos, os lagartos persistem como um dos grupos menos estudados em ecotoxicologia e o desconhecimento em relação à sua resposta à contaminação ambiental é enorme. A nível europeu, os lacertídeos têm sido identificados como potenciais espécies modelo para a ecotoxicologia com répteis. O principal objectivo deste projecto era determinar se um lacertídeo abundante pertencente ao género Podarcis, podia ser utilizado como bioindicador de exposição e toxicidade em zonas agrícolas. Para atingir este objectivo, utilizámos uma estratégia integrada com três fases. Numa primeira fase realizou-se um estudo de campo para documentar o tipo de exposição e parâmetros populacionais de populações de lacertídeos que ocorrem em zonas de uso intenso de pesticidas e zonas de agricultura orgânica. A segunda fase consistiu num estudo de mesocosmo em que se expuseram juvenis a um conjunto de pesticidas em condições controladas durante um período de um ano. Finalmente, a terceira fase incluiu um estudo laboratorial sobre os efeitos do clorpirifos, um dos insecticidas mais utilizado a nível global, em lagartixas. No término de cada um dos estudos, analisaram-se diversos biomarcadores e parâmetros de exposição e toxicidade a pesticidas nos diferentes indivíduos. Este conjunto abrangente de parâmetros foi analisado em diferentes níveis de organização biológica, incluindo parâmetros populacionais, bem como comportamentais, fisiológicos, bioquímicos e histológicos. Em geral, detectaram-se poucas diferenças estatísticas significativas entre as populações dos campos expostos a pesticidas e populações referência. Confirmando a dificuldade que existe em isolar os efeitos de diferentes contaminantes sobre as populações de outros factores locais, ciclos sazonais ou eventos estocásticos. As populações de P. bocagei parecem ser capazes de lidar com o nível observado de exposição a pesticidas. No entanto, indivíduos que vivem em locais expostos a pesticidas parecem estar menos adaptados ecologicamente do que aqueles que vivem em locais referência, apresentando um estado de depleção nutricional e sinais de stress metabólico. Os resultados obtidos com os animais da experiência de mesocosmo parecem reforçar estes resultados. Os animais prosperaram relativamente bem em todos os mesocosmos, independentemente do tratamento ou não com pesticidas, apresentando uma ampla gama de comportamentos naturais. A abordagem laboratorial confirmou P. bocagei como um valioso indicador de exposição sub-letal a doses ambientalmente realistas de clorpirifos. De acordo, com o conjunto d resultados obtidos, P. bocagei parece ser um bioindicador adequado de exposição a pesticidas.

Habilidades sociais, bem-estar psicológico e rendimento escolar

O propósito do presente estudo foi o de examinar o impacto da implementação de um programa de desenvolvimento de habilidades sociais no bem-estar psicológico (BEP) e no rendimento escolar numa amostra de estudantes adolescentes portugueses. Para aferir o BEP, foi utilizada a versão portuguesa de 30 itens para adolescentes das escalas de Ryff; o rendimento escolar foi aferido com recurso às avaliações finais de cada período letivo. O programa utilizado baseou-se no desenvolvimento das habilidades sociais de comunicação, assertividade e resolução de problemas, durante o ano letivo numa frequência semanal de 45 minutos nas aulas de Formação Cívica, em estudantes do 7º e 8º anos de escolaridade. Os dados longitudinais foram analisados através da estatística não paramétrica, recorrendo aos testes Wilcoxon-Mann-Whitney correlação de Spearman do programa SPSS®, versão 20.0. Os resultados mostram impacto do programa de desenvolvimento de habilidades sociais nas dimensões do BEP – autoaceitação, relações positivas com os outros, domínio do meio, crescimento pessoal, objetivos na vida e no BEP global em um ou mais momentos do pós teste. Os resultados demonstram igualmente correlações positivas entre as dimensões do BEP – autonomia, autoaceitação, domínio do meio, objetivos na vida e do BEP global e o rendimento escolar, em três ou mais momentos observados.