Influência do refluxo duodenogástrico nas alterações histológicas da mucosa gástrica em ratos infectados por Helicobacter pylori: modelo experimental

O Helicobacter pylori, é tido como o principal fator de risco para o carcinoma gástrico. Diferentes estudos experimentais em animais procuram relacionar essa carcinogênese a outros fatores carcinógenos sem sucesso. Neste estudo, procurou-se avaliar-se em ratos, se há correlação entre o refluxo duodenogástrico, o Helicobacter pylori e o desenvolvimento do câncer gástrico ou de seus precursores. Para tal, realizou-se nos três grupos de ratos (n de dez por grupo) as técnicas de: piloroplastia precedida de infecção, gastrectomia subtotal precedida de infecção e um grupo no qual foi praticada apenas a infecção. Apois seis meses, analisou-se as alterações da mucosa, comparando-se os três grupos. As alterações da mucosa pesquisadas foram as seguintes: gastrites, metaplasias, displasias e neoplasias epiteliais. Ao término do estudo, foi encontrado, no grupo submetido a piloroplastia precedida de infecção um alto percentual de alterações epiteliais. Conclui-se que, no rato, a operação de piloroplastia, levou ao maior desenvolvimento da população do Helicobacter pylori, que se relaciona com as lesões pré- malignas e o adenocarcinoma gástrico.

Dietary Phytase: an ideal approach for a cost effective and low-polluting aquafeed

Global fishmeal production from wild-catch sources cannot continue to increase indefinitely; suitable alternatives have to be found for sustainable aquaculture. Plant-based aquafeed seems to be the ideal alternative to this, but has its own limitations. Plant ingredients are rich in phytic acid, which reduces the bioavailability of nutrients like minerals and protein to the fish, thereby causing aquaculture pollution. Dietary phytase treatment reduces the aquaculture pollution by improving the bioavailability of nutrients, and reduces the feed cost as evident from poultry and piggery. Phytase activity is highly dependent upon the pH of the gut. Unlike mammals, fish are either gastric or agastric, and hence, the action of dietary phytase varies from species to species. In this article, the authors attempt to summarise various effects of phytase on nutrient utilization, growth of fish and aquatic pollution.

From the Cajal alumni Achucarro and Rio-Hortega to the rediscovery of never-resting microglia

Under the guidance of Ramon y Cajal, a plethora of students flourished and began to apply his silver impregnation methods to study brain cells other than neurons: the neuroglia. In the first decades of the twentieth century, Nicolas Achucarro was one of the first researchers to visualize the brain cells with phagocytic capacity that we know today as microglia. Later, his pupil Pio del Rio-Hortega developed modifications of Achucarro's methods and was able to specifically observe the fine morphological intricacies of microglia. These findings contradicted Cajal's own views on cells that he thought belonged to the same class as oligodendroglia (the so called "third element" of the nervous system), leading to a long-standing discussion. It was only in 1924 that Rio-Hortega's observations prevailed worldwide, thus recognizing microglia as a unique cell type. This late landing in the Neuroscience arena still has repercussions in the twenty first century, as microglia remain one of the least understood cell populations of the healthy brain. For decades, microglia in normal, physiological conditions in the adult brain were considered to be merely "resting," and their contribution as "activated" cells to the neuroinflammatory response in pathological conditions mostly detrimental. It was not until microglia were imaged in real time in the intact brain using two-photon in vivo imaging that the extreme motility of their fine processes was revealed. These findings led to a conceptual revolution in the field: "resting" microglia are constantly surveying the brain parenchyma in normal physiological conditions. Today, following Cajal's school of thought, structural and functional investigations of microglial morphology, dynamics, and relationships with neurons and other glial cells are experiencing a renaissance and we stand at the brink of discovering new roles for these unique immune cells in the healthy brain, an essential step to understand their causal relationship to diseases.

Diet and feeding ecology of two sizes of Barbodes gonionotus (=Puntius gonionotus) and Oreochromis sp. in ricefields in Bangladesh

Fish culture experiments were conducted to compare and evaluate the feeding pattern and strategies, daily ration, gastric evacuation rates, dietary breadth, similarity and overlap of silver barb, Barbodes gonionotus, and tilapia, Oreochromis sp. (natural hybrid of O. mossambicus x O. niloticus) in a rice-fish system. B. gonionotus was found to be a macrophtophagous column feeder while Oreochromis sp. was a detrivorous benthophagic browser. Ontogenic shifts in diet were clearly observed in B. gonionotus while absent in Oreochromis sp. For both species, daily food ration for the small fish was twice as large as that for the large fish. Mean rates of gastric evacuation were 0.18 h super(1) for small and 0.05 h super(1) for large B. gonionotus and 0.09 h super(1) and 0.14h super(1) for small and large Oreochromis sp., respectively. In terms of intraspecific dietary width, the smaller sized individuals of both species had a wider dietary niche than the larger conspecifics. Larger fish increased their specialization and reliance on few food items with increasing size and competitive ability. When both species were reared together, B. gonionotus showed a wider niche width than tilapia. Wider interspecific niche width of B. gonionotus compared to that of tilapia and significant interspecific dietary overlap is likely to result in suppression of the growth of tilapia in mixed culture due to: 1) a high degree of specialization and reliance of tilapia on food of low-nutrient value, and 2) slower gastric evacuation rates as compared to B. gonionotus, which would allow B. gonionotus to outgrow similar sized tilapia.

Expression and Localization of Opioid Receptors in Male Germ Cells and the Implication for Mouse Spermatogenesis

The presence of endogenous opioid peptides in different testicular cell types has been extensively characterized and provides evidence for the participation of the opioid system in the regulation of testicular function. However, the exact role of the opioid system during the spermatogenesis has remained controversial since the presence of the mu-, delta-and kappa-opioid receptors in spermatogenic cells was yet to be demonstrated. Through a combination of quantitative real-time PCR, immunofluorescence, immunohistochemistry and flow cytometry approaches, we report for the first time the presence of active mu-, deltaand kappa-opioid receptors in mouse male germ cells. They show an exposition time-dependent response to opioid agonist, hence suggesting their active involvement in spermatogenesis. Our results contribute to understanding the role of the opioid receptors in the spermatogenesis and could help to develop new strategies to employ the opioid system as a biochemical tool for the diagnosis and treatment of male infertility.

Níveis circulantes de Grelina, índices de adiposidade e fatores de risco cardiovascular e metabólico relacionados, em população multiétnica do Estado do Rio de Janeiro

O objetivo deste estudo foi analisar o comportamento dos níveis plasmáticos de grelina, em relação aos fatores de risco cardiometabólico, em uma população multiétnica de eutróficos e de obesos..A grelina é um peptídeo produzido predominantemente pelas células oxínticas gástricas, que desempenha importante papel na homeostase energética, promovendo estímulo do apetite e aumento do peso corporal, além de participar do controle do metabolismo lipídico e glicídico, interagindo diretamente com os fatores de risco cardiometabólico. Este é um estudo transversal. Duzentos indivíduos entre 18 e 60 anos com diferentes graus de índice de massa corporal (IMC) compuseram a amostra, assim dividida: cem eutróficos (IMC < 25 kg/m2) e 100 obesos (IMC ≥ 30 kg/m2). Todos foram avaliados para parâmetros antropométricos, determinação da pressão arterial (aferida por método oscilométrico através de monitor automático) e variáveis metabólicas (métodos usuais certificados). A grelina acilada foi mensurada pela técnica de sanduíche ELISA; a leptina, pelo método Milliplex MAP. O marcador inflamatório proteína C reativa ultrassensível(PCRUS)foi estimado por nefelometria ultrassensível. A insulina foi determinada por quimioluminescência e o HOMA-IR calculado pelo produto insulinemia (U/ml) X níveis de glicemia de jejum (mmol/L) / 22.5. Foram excluídos do estudo aqueles com história de comorbidades crônicas, doenças inflamatórias agudas, dependência de drogas e em uso de medicação nos dez dias anteriores à entrada no estudo. As concentrações de grelina acilada mostraram tendência de redução ao longo dos graus de adiposidade (P<0,001); a leptina se comportou de maneira oposta (P<0,001). Os níveis de grelina se correlacionaram negativamente com IMC (r = -.36; P<0,001), circunferência da cintura (CC) (r=-.34; P<0,001), relação cintura/quadril (RCQ) (r=-.22; P=0,001), diâmetro abdominal sagital (DAS) (r=-.28; P<0,001), pressão arterial sistólica (PAS) (r=-.21; P=0,001), insulina (r=-.27; P<0,001), HOMA-IR (r=-.24; P=0,001) e PCRUS (r=-.29; P<0,001); e positivamente com o HDL-colesterol (r=.30; P<0,001).A PCRUS acompanhou o grau de resistência insulínica e os níveis de grelina também mostraram tendência de redução ao longo dos tercis de resistência insulínica (P=0,001). Em modelo de regressão linear múltipla as principais associações independentes da grelina acilada foram sexo feminino (P=0,005) e HDL-colesterol (P=0,008), ambos com associação positiva e IMC (P<0,001) (associação negativa). Esses achados apontam para uma associação da grelina acilada com melhor perfil metabólico, já que seus níveis se correlacionaram positivamente com HDL-colesterol e negativamente com indicadores de resistência insulínica e atividade inflamatória.

Avaliação da morfologia testicular e dos parâmetros espermáticos em ratos espontaneamente hipertensos e tratados com enalapril

A hipertensão arterial sistêmica (HAS) é um problema de saúde pública, geralmente associada a outras doenças, como obesidade, diabetes, doença renal, aterosclerose, acidente vascular cerebral (AVC) e identificado como um dos fatores de risco mais prevalentes para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Orgãos-alvo, como coração, rins, cérebro e olhos, são comumente afetados em pacientes hipertensos. No entanto, o dano testicular causado pela hipertensão não foi claramente definido. A hipertensão é um fator de risco bem estabelecido para a disfunção erétil, mas sua relação com o dano testicular e a fertilidade masculina não é claramente compreendida. Este estudo avalia a morfologia testicular e alguns parâmetros espermáticos de ratos espontaneamente hipertensos (SHR), virgem de tratamento e tratados com enalapril. Ratos SHR foram distribuídos em dois grupos, um grupo hipertenso (H), e um grupo tratado com enalapril (HE). Ratos Wistar-Kyoto (WKY) foram utilizados como controles. A pressão arterial sistólica foi medida semanalmente, até o final do experimento. A concentração de espermatozóides, motilidade e viabilidade foram determinadas em amostras coletadas da cauda do epidídimo. Métodos estereológicos foram usados para analisar objetivamente a morfologia testicular macroscopicamente e microscopicamente. Todos os dados foram analisados por ANOVA com pós-teste de Tukey, considerando p <0,05. Ao final do experimento a pressão arterial sistólica no grupo HE (153,9 mmHg 21,03 ) foi semelhante a dos animais pertencentes ao grupo WKY (153,4 24,41) e menor que a dos animais H (205,1 24,9). A concentração espermática do grupo H (1,31 x 107 sptz/ml 0,27) foi inferior à do grupo WKY (2,11 x 107 sptz/ml 0,34), entretanto o controle da pressão arterial com o enalapril melhorou este parâmetro e a concentração espermática do grupo HE (2,46 x 107 sptz/ml 0,54) foi semelhante a do WKY. A densidade volumétrica vascular também foi alterada no grupo de hipertensos, enquanto que os animais do grupo HE foram semelhantes aos controles. O epitélio seminífero dos animais HE apresentou a maior densidade volumétrica, indicando um possível efeito protetor indireto do enalapril na espermatogênese. Neste modelo animal, a HAS promoveu alterações morfológicas no testículo, com conseqüências sobre a produção de espermatozóides. O controle da pressão arterial com o enalapril protegeu o testículo destas alterações, restabelecendo a produção normal dos espermatozóides.

Avaliação dos testículos de ratos submetidos à torção testicular antes, durante e após a puberdade, e o efeito do tratamento com L-arginina

Torção testicular (TT) é uma síndrome urológica comumente encontrada em recém nascidos, crianças e adolescentes. Neste trabalho foi estudada as lesões morfológicas e a função reprodutiva em ratos adultos que sofreram TT, em diferentes idades de maturidade sexual e o efeito protetor da L-arginina, contra os danos causados pela isquemia/reperfusão na torção testicular. Dezoito ratos pré-púberes (4 semanas de vida) dezessete púberes (6 semanas de vida) e dezessete adultos (9 semanas de vida) foram submetidos à TT. Sob anestesia o testículo direito foi rotacionado em 720 e fixado, sendo então destorcido após 4 horas. Vinte e quatro ratos (ARG4, n=8, ARG6, n=8 e ARG9 n=8) foram submetidos ao tratamento com 650mg/kg de L-arginina, por via oral, durante 7 dias. Outros trinta ratos de mesma idade sofreram cirurgia simulada (SH4, n=10, SH6, n=10 e SH9, n=10). Com 12 semanas de idade, foram submetidos ao acasalamento controlado com 3 fêmeas e ao vigésimo dia de gestação o número de fetos, corpos lúteos, absorções e implatações foram contados. Na 14 semana, os ratos foram mortos e os espermatozóides coletados da cauda dos epidídimos, foi anotado o peso corporal, o peso e volume testicular. O soro foi usado para dosagem de testosterona. Foram avaliadas a concentração, motilidade e a viabilidade espermática. Os testículos coletados foram fixados em Bouin, pós-fixados em formalina e processados em parafina. Utilizando o programa de imagem Image J, lâminas coradas com HE, mensuramos a altura do epitélio, densidade volumétrica e diâmetro do túbulo seminífero. Para avaliar a integridade do epitélio seminífero foi utilizado a frequência dos estágios do ciclo do epitélio e o escorre de Johnsen. Também foi avaliado a proliferação do compartimento tubular e intertubular, através da imunomarcação com PCNA. Os dados foram tabulados e as médias dos grupos comparadas pelo teste de ANOVA com pós-teste de Bonferroni ou teste de Kruskal-Wallis com pós teste de Dunns (programa Graphpad Prism, com p < 0,05). Os resultados revelaram grandes danos produzidos pela injuria testicular, no testículo ipsilateral, com diminuição da capacidade reprodutiva, da concentração, viabilidade e mobilidade, do peso e volume testicular. Animais TT9 não apresentaram espermatozoides nas amostras coletas. Houve diminuição do diâmetro dos túbulos seminíferos e da altura do epitélio, aumento do compartimento intertubular, com ênfase dos vasos sanguíneos, aumento da proliferação celular estromal e diminuição da proliferação epitelial. Houve diminuição da concentração sérica de testosterona no grupo TT4, quando comparado como grupo TT9. Em geral, os animais submetidos à torção na fase adulta foram os mais acometidos. Não foram encontradas alterações dignas de nota, nos testículo contralaterais. Animais tratados com L-arginina obtiveram melhora dos índices reprodutivos, com aumento da potência em todas as idades. Houve aumento da concentração espermática no testículo contralateral de ARG4 e ARG6, mostrando que a L-arginina atuou como antioxidante. Não houve proteção para as lesões causadas pela torção na maioria dos grupos, mas os animais tratados ARG9 apresentaram concentração espermática mensuravel, quando comparados aos ratos TT9, que tinham azospermia.

Estudo do tempo de trânsito colônico em crianças e adolescentes com constipação intestinal crônica e disfunção do trato urinário inferior

A constipação intestinal e a disfunção do trato urinário inferior são condições associadas e bastante prevalentes na infância e adolescência. Existem múltiplas teorias para explicar essa associação, como: o efeito mecânico do reto cheio sobre a parede e o colo vesical; estimulo de reflexos sacrais a partir do reto distendido, e mais recentemente, a associação entre a bexiga e o reto no sistema nervoso central. Muitas destas crianças e adolescentes apresentam constipação refratária. Esse fato chama a atenção para a possibilidade de existência de uma desordem neuromuscular comum envolvendo o cólon e o trato urinário inferior. O objetivo desse estudo foi avaliar o trânsito colônico de crianças e adolescentes com constipação crônica refratária e sintomas do trato urinário inferior. Foi realizado um estudo observacional com análise transversal, no qual foram incluídos 16 indivíduos com constipação refratária e sintomas do trato urinário inferior, com idades entre sete e 14 anos (média de idade de 9,67 anos). Os participantes foram avaliados utilizando anamnese padrão; exame físico; diário miccional e das evacuações; escala de Bristol; Disfunctional Voiding Scoring System com versão validada para o português; ultrassonografia renal, de vias urinárias e medida de diâmetro retal; urodinâmica, estudo de trânsito colônico com marcadores radiopacos e manometria anorretal. O estudo de trânsito foi normal em três (18,75%) crianças, dez (62,5%) apresentaram constipação de trânsito lento e três (18,75%) obstrução de via de saída. A avaliação urodinâmica estava alterada em 14 das 16 crianças estudadas: dez (76,9%) apresentaram hiperatividade detrusora associada à disfunção miccional, três (23,1%) hiperatividade vesical isolada e um (6,25%) disfunção miccional sem hiperatividade vesical. Ao compararmos constipação de trânsito lento e disfunção do trato urinário inferior, dez (100%) sujeitos com constipação de trânsito lento e três (50%) sem constipação de trânsito lento apresentavam hiperatividade vesical (p=0,036). Sete (70%) sujeitos com constipação de trânsito lento e quatro (66,7%) sem constipação de trânsito lento apresentavam disfunção miccional (p=0,65). Ao compararmos constipação de trânsito lento e a presença de incontinência urinária, esta estava presente em nove (90%) participantes com constipação de trânsito lento e em um (16,7%) sem constipação de trânsito lento (p = 0,008). Quanto à urgência urinária, estava presente em 10 (100%) e três (50%) respectivamente (p = 0,036). O escore do Disfunctional Voiding Scoring System variou de 6 a 21. O subgrupo com constipação de trânsito lento mostrou um escore de Disfunctional Voiding Scoring System significativamente maior que o subgrupo sem constipação de trânsito lento. O presente estudo demonstrou alta prevalência de constipação de trânsito lento em crianças e adolescentes com constipação refratária e sintomas do trato urinário inferior. Este estudo foi pioneiro em demonstrar a associação entre hiperatividade vesical e constipação de trânsito lento e coloca em voga a possibilidade de uma desordem neuromuscular comum, responsável pela dismotilidade vesical e colônica. Futuros estudos envolvendo a motilidade intestinal e vesical são necessários para melhor compreensão do tema e desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas.

Hydrodynamic entrapment of bacteria swimming near a solid surface.

The near-surface motility of bacteria is important in the initial formation of biofilms and in many biomedical applications. The swimming motion of Escherichia coli near a solid surface is investigated both numerically and experimentally. A boundary element method is used to predict the hydrodynamic entrapment of E. coli bacteria, their trajectories, and the minimum separation of the cell from the surface. The numerical results show the existence of a stable swimming distance from the boundary that depends only on the shape of the cell body and the flagellum. The experimental validation of the numerical approach allows one to use the numerical method as a predictive tool to estimate with reasonable accuracy the near-wall motility of swimming bacteria of known geometry. The analysis of the numerical database demonstrated the existence of a correlation between the radius of curvature of the near-wall circular trajectory and the separation gap. Such correlation allows an indirect estimation of either of the two quantities by a direct measure of the other without prior knowledge of the cell geometry. This result may prove extremely important in those biomedical and technical applications in which the near-wall behavior of bacteria is of fundamental importance.

Collective Cell Migration: Leadership, Invasion and Segregation

A number of biological processes, such as embryo development, cancer metastasis or wound healing, rely on cells moving in concert. The mechanisms leading to the emergence of coordinated motion remain however largely unexplored. Although biomolecular signalling is known to be involved in most occurrences of collective migration, the role of physical and mechanical interactions has only been recently investigated. In this paper, a versatile framework for cell motility is implemented in-silico in order to study the minimal requirements for the coordination of a group of epithelial cells. We find that cell motility and cell-cell mechanical interactions are sufficient to generate a broad array of behaviours commonly observed in vitro and in vivo. Cell streaming, sheet migration and susceptibility to leader cells are examples of behaviours spontaneously emerging from these simple assumptions, which might explain why collective effects are so ubiquitous in nature. This analysis provides also new insights into cancer metastasis and cell sorting, suggesting in particular that collective invasion might result from an emerging coordination in a system where single cells are mechanically unable to invade.

Cryopreservation of sperm of common carp, Cyprinus carpio and silver barb, Barbonymus gonionotus for genetically improved seed production

Experiments were conducted to develop and standardize the protocols for cryopreservation of sperm of common carp, Cyprinus carpio and also for using the cryopreserved sperm for fertilization of eggs. Nine extender solutions as Alsever's solution, kurokura-1, kurokura-2, urea egg-yolk, egg-yolk citrate, 0.6% glucose, 0.9% NaCl, Ma and Mb, and five cryoprotectants namely ethanol, methanol, dimethylsulfoxide (DMSO), dimethylamine (DMA) and glycerol were tested. The cryoprotectants were mixed at 10% concentration of the extenders (v/v) to make the cryodiluents. Milt and cryodiluents were mixed at a ratio of 1:9 for Alsever's solution, kurokura-1, kurokura-2, 0.6% glucose and 0.9% NaCl, 1:4 for urea egg-yolk, egg-yolk citrate, Ma and Mb. Among the cryodiluents Alsever's solution mixed with either ethanol or methanol was found to be suitable and it produced more than 90% and 80% spermatozoan motility at equilibrium and post-thaw periods, respectively. Kurokura-1 and kurokura-2 when mixed with the same cryoprotectants showed good spermatozoan motility at equilibrium period (80-90%) but the motility was reduced (30-55%) at post-thaw state. Other extenders did not produce acceptable sperm-motility and in some cases the frozen milt became clotted. Different dilution ratios (1:1, 1:2, 1:4, 1:5, 1:7, 1:9, 1:12, 1:15, 1:20) were formulated for obtaining a suitable milt dilution, the dilution ratio of 1: 9 (milt : cryodiluent) demonstrated the highest post-thaw spermatozoan motility (80%) in Alserver's solution. The optimum concentration of cryoprotectants in the cryodiluents was determined, 10% concentration level was found to be effective to produce the highest number of spermatozoan motility in comparison to the other concentrations (5%, 15%, 20% 30%). Sperm preserved with the cryodiluent Alsever's solution along with either methanol or ethanol was found to be effective to fertilize eggs and produce hatchlings. The hatching rates ranged between 1.48% and 14.76%, compare to control. The fish produced through use of cryopreserved sperm and normal sperm were found to grow well and no significant (P<0.05) growth difference was observed between them. In case of silver barb, Barbonymus gonionotus, sperm tested against six extenders such as egg-yolk citrate, urea-egg-yolk, kurokura-1, kurokura-2, 0.9% NaCl and modified fish ringer (MFR) solution. Cryoprotectants used were the same as those of C. carpio. Milt was diluted with the cryodiluent at a ratio of 1:4 for egg-yolk citrate and urea-egg-yolk, 1:5 for kurokura-1 and 1:9 for 0.9% NaCl, MFR and kurokura-2. The cryoprotectant concentration was maintained at 10% of the extender (v/v) in all the cases. Among the extenders, egg-yolk citrate and urea-egg-yolk mixed with 10% DMSO, methanol and ethanol produced 50% post-thaw spermatozoan motility, whereas DMA and glycerol provided only 10% motility. Trials on milt dilution ratio and cryoprotectant concentration are being conducted. Fertilization trials are also underway.

Sperm cryopreservation of Indian major carp, Labeo rohita: cryodiluents, sperm: cryodiluent dilution ratio and cryoprotectan t concentration

Cryogenic preservation trials of spermatozoa of Labeo rohita were carried out. Twenty four cryodiluents (extender + cryoprotectant), with the combination of six extenders such as egg-yolk citrate, urea-egg-yolk, 0.9% NaCl, Kurokura-2, Ma and Mb and four cryoprotectants viz. DMSO, glycerol, methanol and ethanol, were used to screen out the suitable cryodiluents. Sperm was preserved in 0.25ml plastic straw in programmable freezer. Two step freezing method was followed. Sperm preserved with egg-yolk citrate and urea-egg-yolk containing 10% DMSO showed best post-thaw motility (80%) followed by 0.9% NaCl (60%) and Kurokura-2(30%) solutions. Sperm with the extenders M" and Mb clotted at the time of equilibration and also after few days of preservation. Egg-yolk citrate mixed with ethanol and methanol also showed good percentage of motility (80%) but egg-yolk citrate with glycerol showed less sperm motility (>60%). To determine suitable dilution ratio of milt and cryodiluent two best extender eggyolk citrate and urea-egg-yolk with four cryoprotectants such as DMSO, glycerol, methanol and ethanol at different ratio viz 1:2,1:4,1:7,1:10,1:15 and 1:20 were used. Highest post-thaw motility (>80%) was observed when milt was preserved with egg-yolk citrate containing 10% DMSO at 1:2, 1:4, 1:7 and 1:10 dilutions. Meanwhile using glycerol as cryoprotectants provided less post thaw motility at lower dilution ratio but with the increase of its dilution showed good sperm motility compared with other cryoprotectants. Finally, evaluation on the effect of cryoprotectant concentration on post-thaw sperm motility was conducted. Egg-yolk citrate and four cryoprotectant i.e. DMSO, glycerol, methanol and ethanol with six different concentrations namely 5%,7%, 10%, 15%, 20% and 30%.were evaluated. Among the cryoprotectants DMSO, methanol and ethanol showed highest post-thaw motility (about 80%) at 7% and 10% concentrations. Although glycerol was not suitable at low concentration but its 20% and 30% concentration levels provided best post-thaw motility. No post-thaw motility was obtained with DMSO at 30% concentration. The overall analysis on cryoprotectant concentration indicated that below 5% and above 20% cryoprotectant concentrations could not be suitable for effective cryopreservation of spermatozoa.

Cryopreservation of rhesus macaque (Macaca mulatta) spermatozoa and their functional assessment by in vitro fertilization

Although spermatozoa from several species of nonhuman primates have been cryopreserved, there has been no report of success with rhesus macaque spermatozoa as judged by functional assays. Two Tris-egg yolk freezing media. TEST and TTE. which have: been successfully used for cynomolgus macaque (Macaca fascicularis) spermatozoa, were compared for cryopreservation of spermatozoa From four rhesus macaques (Macaca mulatta). The postthaw motility (percentage and duration) of spermatozoa cryopreserved in TTE was much higher than that for spermatozoa cryopreserved in TEST. The function of sperm cryopreserved in TTE was evaluated by in vitro fertilization or oocytes collected from gonadotropin-stimulated prepubertal rhesus macaques. Of the inseminated oocytes. 82 +/- 13% were fertilized and 63 +/- 22 and 39 +/- 21% of the resulting zygotes developed into morulae and blastocysts. respectively. These results indicate that rhesus macaque spermatozoa can be effectively cryopreserved in TTE medium. This finding will facilitate the application of in vivo and in vitro assisted reproductive technologies in this species. (C) 2001 Academic Press.

Effect of glycerol and dimethyl sulfoxide on cryopreservation of rhesus monkey (Macaca mulatta) sperm

Glycerol and dimethyl sulfoxide (DMSO) are widely used as penetrating cryoprotectants in the freezing of sperm, and various concentrations are applied in different species and laboratories. The present study aimed to examine the effect of these two cryoprotectants at different concentrations (2%, 5%, 10%, and 15% glycerol or DMSO) on rhesus monkey sperm cryopreservation. The results showed that the highest recovery of post-thaw sperm motility, and plasma membrane and acrosome integrity was achieved when the sperm was frozen with 5% glycerol. Spermatozoa cryopreserved with 15% DMSO showed the lowest post-thaw sperm motility, and spermatozoa cryopreserved with 15% glycerol and 15% DMSO showed the lowest plasma membrane integrity among the eight groups. The results achieved with 5% glycerol were significantly better for all parameters than those obtained with 5% DMSO. The functional cryosurvival of sperm frozen with 5% glycerol was further assessed by in vitro fertilization (IVF). Overall, 85.7% of the oocytes were successfully fertilized, and 51.4% and 5.7% of the resulting zygotes developed into morulae and blastocysts, respectively. The results indicate that the type and concentration of the penetrating cryoprotectant used can greatly affect the survival of rhesus monkey sperm after it is frozen and thawed. The suitable glycerol level for rhesus monkey sperm freezing is 5%, and DMSO is not suitable for rhesus monkey sperm cryopreservation. (C) 2004 Wiley-Liss, Inc.