Elevated CO2 affects embryonic development and larval phototaxis in a temperate marine fish

As an effect of anthropogenic CO2 emissions, the chemistry of the world's oceans is changing. Understanding how this will affect marine organisms and ecosystems are critical in predicting the impacts of this ongoing ocean acidification. Work on coral reef fishes has revealed dramatic effects of elevated oceanic CO2 on sensory responses and behavior. Such effects may be widespread but have almost exclusively been tested on tropical reef fishes. Here we test the effects elevated CO2 has on the reproduction and early life history stages of a temperate coastal goby with paternal care by allowing goby pairs to reproduce naturally in an aquarium with either elevated (ca 1400 µatm) CO2 or control seawater (ca 370 µatm CO2). Elevated CO2 did not affect the occurrence of spawning nor clutch size, but increased embryonic abnormalities and egg loss. Moreover, we found that elevated CO2 significantly affected the phototactic response of newly hatched larvae. Phototaxis is a vision-related fundamental behavior of many marine fishes, but has never before been tested in the context of ocean acidification. Our findings suggest that ocean acidification affects embryonic development and sensory responses in temperate fishes, with potentially important implications for fish recruitment.

Elevated pCO2 causes developmental delay in early larval Pacific oysters, Crassostrea gigas

Increasing atmospheric CO2 equilibrates with surface seawater, elevating the concentration of aqueous hydrogen ions. This process, ocean acidification, is a future and contemporary concern for aquatic organisms, causing failures in Pacific oyster (Crassostrea gigas) aquaculture. This experiment determines the effect of elevated pCO2 on the early development of C. gigas larvae from a wild Pacific Northwest population. Adults were collected from Friday Harbor, Washington, USA (48°31.7' N, 12°1.1' W) and spawned in July 2011. Larvae were exposed to Ambient (400 µatm CO2), MidCO2 (700 µatm), or HighCO2 (1,000 µatm). After 24 h, a greater proportion of larvae in the HighCO2 treatment were calcified as compared to Ambient. This unexpected observation is attributed to increased metabolic rate coupled with sufficient energy resources. Oyster larvae raised at HighCO2 showed evidence of a developmental delay by 3 days post-fertilization, which resulted in smaller larvae that were less calcified.

Spider crab Hyas araneus larval dry weight, C/N ratio and developmental time during experiments from different latitudes (54° vs 79°N), 2010

The combined impacts of future scenarios of ocean acidification and global warming on the larvae of a cold-eurythermal spider crab, Hyas araneus L., were investigated in one of its southernmost populations (living around Helgoland, southern North Sea, 54°N) and one of the northernmost populations (Svalbard, North Atlantic, 79°N). Larvae were exposed at temperatures of 3, 9 and 15°C to present day normocapnia (380 ppm CO2) and to CO2 conditions expected for the near or medium-term future (710 ppm by 2100 and 3000 ppm CO2 by 2300 and beyond). Larval development time and biochemical composition were studied in the larval stages Zoea I, II, and Megalopa. Permanent differences in instar duration between both populations were detected in all stages, likely as a result of evolutionary temperature adaptation. With the exception of Zoea II at 3°C and under all CO2 conditions, development in all instars from Svalbard was delayed compared to those from Helgoland, under all conditions. Most prominently, development was much longer and fewer specimens morphosed to the first crab instar in the Megalopa from Svalbard than from Helgoland. Enhanced CO2 levels (710 and particularly 3000 ppm), caused extended duration of larval development and reduced larval growth (measured as dry mass) and fitness (decreasing C/N ratio, a proxy of the lipid content). Such effects were strongest in the zoeal stages in Svalbard larvae, and during the Megalopa instar in Helgoland larvae.

Cloning and Characterization of peter pan, a Novel Drosophila Gene Required for Larval Growth

We identified a new Drosophila gene, peter pan (ppan), in a screen for larval growth–defective mutants. ppan mutant larvae do not grow and show minimal DNA replication but can survive until well after their heterozygotic siblings have pupariated. We cloned the ppan gene by P-element plasmid rescue. ppan belongs to a highly conserved gene family that includes Saccharomyces cerevisiae SSF1 and SSF2, as well as Schizosaccharomyces pombe, Arabidopsis, Caenorhabditis elegans, mouse, and human homologues. Deletion of both SSF1 and SSF2 in yeast is lethal, and depletion of the gene products causes cell division arrest. Mosaic analysis of ppan mutant clones in Drosophila imaginal disks and ovaries demonstrates that ppan is cell autonomous and required for normal mitotic growth but is not absolutely required for general biosynthesis or DNA replication. Overexpression of the wild-type gene causes cell death and disrupts the normal development of adult structures. The ppan gene family appears to have an essential and evolutionarily conserved role in cell growth.

Spontaneous heterosis in larval life-history traits of hemiclonal frog hybrids

European water frog hybrids Rana esculenta (Rana ridibunda × Rana lessonae) reproduce hemiclonally, transmitting only their ridibunda genome to gametes. We compared fitness-related larval life-history traits of natural R. esculenta from Poland with those of the two sympatric parental species and of newly generated F1 hybrids. Compared with either parental species, F1 hybrid offspring had higher survival, higher early growth rates, a more advanced developmental stage by day 49, and earlier metamorphosis, but similar mass at metamorphosis. R. esculenta from natural lineages had trait values intermediate between those of F1 offspring and of the two parental species. The data support earlier observations on natural R. esculenta that had faster larval growth, earlier metamorphosis, and higher resistance to hypoxic conditions compared with either parental species. Observing larval heterosis in F1 hybrids in survival, growth rate, and time to metamorphosis, however, at an even higher degree than in hybrids from natural lineages, demonstrates that heterosis is spontaneous and results from hybridity per se rather than from subsequent interclonal selection; in natural lineages the effects of hybridity and of clonal history are confounded. This is compelling evidence for spontaneous heterosis in hybrid clonals. Results on hemiclonal fish hybrids (Poeciliopsis) showed no spontaneous heterosis; thus, our frog data are not applicable to all hybrid clonals. Our data do show, however, that heterosis is an important potential source for the extensively observed ecological success of hybrid clonals. We suggest that heterosis and interclonal selection together shape fitness of natural R. esculenta lineages.

Nuclear hormone receptor CHR3 is a critical regulator of all four larval molts of the nematode Caenorhabditis elegans

CHR3 (nhr-23, NF1F4), the homologue of Drosophila DHR3 and mammalian ROR/RZR/RevErbA nuclear hormone receptors, is important for proper epidermal development and molting in the nematode Caenorhabditis elegans. Disruption of CHR3 (nhr-23) function leads to developmental changes, including incomplete molting and a short, fat (dumpy) phenotype. Here, we studied the role of CHR3 during larval development by using expression assays and RNA-mediated interference. We show that the levels of expression of CHR3 (nhr-23) cycle during larval development and reduction of CHR3 function during each intermolt period result in defects at all subsequent molts. Assaying candidate gene expression in populations of animals treated with CHR3 (nhr-23) RNA-mediated interference has identified dpy-7 as a potential gene acting downstream of CHR3. These results define CHR3 as a critical regulator of all C. elegans molts and begin to define the molecular pathway for its function.

An abundantly expressed mucin-like protein from Toxocara canis infective larvae: the precursor of the larval surface coat glycoproteins.

Evasion of host immunity by Toxocara canis infective larvae is mediated by the nematode surface coat, which is shed in response to binding by host antibody molecules or effector cells. The major constituent of the coat is the TES-120 glycoprotein series. We have isolated a 730-bp cDNA from the gene encoding the apoprotein precursor of TES-120. The mRNA is absent from T. canis adults but hyperabundant in larvae, making up approximately 10% of total mRNA, and is trans-spliced with the nematode 5' leader sequence SL1. It encodes a 15.8-kDa protein (after signal peptide removal) containing a typical mucin domain: 86 amino acid residues, 72.1% of which are Ser or Thr, organized into an array of heptameric repeats, interspersed with proline residues. At the C-terminal end of the putative protein are two 36-amino acid repeats containing six Cys residues, in a motif that can also be identified in several genes in Caenorhabditis elegans. Although TES-120 displays size and charge heterogeneity, there is a single copy gene and a homogeneous size of mRNA. The association of overexpression of some membrane-associated mucins with immunosuppression and tumor metastasis suggests a possible model for the role of the surface coat in immune evasion by parasitic nematodes.

Aspectos facilitadores e dificultadores do trabalho em equipe em Unidade de Alta Densidade Tecnológica

O trabalho em equipe representa estratégia para superação da frágil articulação entre profissionais, sendo potencializado pela prática colaborativa entre agentes e gestão participativa. Entretanto, os arranjos organizacionais não favorecem a interação entre os profissionais e dificultam o trabalho em equipe. A magnitude dos agravos cardiovasculares por serviços regulados e estruturados, pautados num enfoque multiprofissional em saúde, a carência de publicações científicas sobre trabalho em equipe na atenção hospitalar, a potência do trabalho em equipe para responder às demandas reais de saúde justificam investigações a respeito do trabalho em equipe de saúde em Unidade Coronariana, particularizando a compreensão de aspectos que dificultam e facilitam esse trabalho. Assim, esta pesquisa teve como objetivo analisar o trabalho em equipe, desenvolvido em unidade hospitalar de alta densidade tecnológica, segundo a perspectiva da equipe de saúde. É um estudo descritivo, utilizando dados qualitativos e quantitativos, realizado em Unidade Coronariana de um Hospital público, de ensino, de nível terciário, referência para atendimento de alta densidade tecnológica. A população constituiu-se de profissionais da equipe multiprofissional que atuavam na referida unidade há, pelo menos, um ano, sendo excluídos aqueles que se encontravam afastados do trabalho à época da coleta dos dados e os não localizados após três tentativas para agendamento da entrevista. Utilizou-se a Técnica do Incidente Crítico, e os dados primários foram coletados por meio de entrevista semiestruturada. A análise dos dados fundamentou-se em análise de conteúdo. Participaram do estudo 45 profissionais da equipe de saúde, sendo 20 técnicos/auxiliares de enfermagem; 11 médicos; nove enfermeiros; quatro fisioterapeutas e um psicólogo. Das entrevistas, emergiram 49 situações, das quais 38 (77,6%) receberam referências negativas e 11 (22,4%), positivas; 385 comportamentos, sendo 209 (54,2%) positivos e 176 (45,8%) negativos; além de 182 consequências que receberam 131 (71,9%) referências negativas e 51 (28,1%) positivas. As referências positivas indicam aspectos que facilitam o trabalho em equipe e as negativas, aqueles que dificultam. Foram considerados facilitadores do trabalho em equipe colaborar/relacionar-se com os outros profissionais, desenvolver assistência ao paciente conforme a competência profissional, relacionamento entre agentes pautado na prática colaborativa e comunicação. Aspectos como baixa colaboração entre profissionais, gerenciamento inadequado de agentes, despreparo profissional no atendimento à parada cardiorrespiratória/emergência, divergências nas condutas terapêuticas, limitação de recursos materiais e agir de maneira descomprometida com o trabalho dificultam o trabalho em equipe. Conclui-se que, apesar do predomínio de situações e consequências negativas relativas à dinâmica do trabalho em equipe nessa Unidade Coronariana, a ênfase em comportamentos positivos, favoráveis ao trabalho em equipe, evidencia investimento e esforço para superar dificuldades, na perspectiva da potência do trabalho em equipe para atingir a finalidade do trabalho em saúde. A partir dos resultados, acredita-se que aspectos relativos à formação/capacitação profissional e à organização do serviço precisam favorecer o trabalho em equipe, estando a centralidade do processo de trabalho dessa equipe nas relações entre agentes

Modelo numérico mecanobiológico para a obtenção da matriz de rigidez estrutural e da densidade mineral na remodelagem óssea

Neste trabalho é proposto um modelo mecanobiológico de remodelagem óssea para a estimativa de variações, provocadas por perturbações mecânicas ou biológicas, na matriz de rigidez estrutural da escala macroscópica e na densidade mineral em uma região do osso. Na cooperação entre as áreas da saúde e da engenharia, como nos estudos estruturais de biomecânica no sistema esquelético, as propriedades mecânicas dos materiais devem ser conhecidas, entretanto os ossos possuem uma constituição material altamente complexa, dinâmica e variante entre indivíduos. Sua dinâmica decorre dos ciclos de absorção e deposição de matriz óssea na remodelagem óssea, a qual ocorre para manter a integridade estrutural do esqueleto e adaptá-lo aos estímulos do ambiente, sejam eles biológicos, químicos ou mecânicos. Como a remodelagem óssea pode provocar alterações no material do osso, espera-se que suas propriedades mecânicas também sejam alteradas. Na literatura científica há modelos matemáticos que preveem a variação da matriz de rigidez estrutural a partir do estímulo mecânico, porém somente os modelos mais recentes incluíram explicitamente processos biológicos e químicos da remodelagem óssea. A densidade mineral óssea é um importante parâmetro utilizado no diagnóstico de doenças ósseas na área médica. Desse modo, para a obtenção da variação da rigidez estrutural e da densidade mineral óssea, propõe-se um modelo numérico mecanobiológico composto por cinco submodelos: da dinâmica da população de células ósseas, da resposta das células ao estímulo mecânico, da porosidade óssea, da densidade mineral óssea e, baseado na Lei de Voigt para materiais compósitos, da rigidez estrutural. Os valores das constantes das equações dos submodelos foram obtidos de literatura. Para a solução das equações do modelo, propõe-se uma implementação numérica e computacional escrita em linguagem C. O método de Runge-Kutta-Dorman-Prince, cuja vantagem consiste no uso de um passo de solução variável, é utilizado no modelo para controlar o erro numérico do resultado do sistema de equações diferenciais. Foi realizada uma avaliação comparativa entre os resultados obtidos com o modelo proposto e os da literatura dos modelos de remodelagem óssea recentes. Conclui-se que o modelo e a implementação propostos são capazes de obter variações da matriz de rigidez estrutural macroscópica e da densidade mineral óssea decorrentes da perturbação nos parâmetros mecânicos ou biológicos do processo de remodelagem óssea.

Análise da correlação entre índices radiomorfométricos de densidade óssea, perfil de qualidade óssea em software de implante, quociente de estabilidade e torque de inserção em implantes

A qualidade óssea, bem como a estabilidade inicial dos implantes, está diretamente relacionada com o sucesso das reabilitações na implantodontia. O presente estudo teve como objetivo analisar a correlação entre índices radiomorfométricos de densidade óssea por meio de radiografias panorâmicas, perfil de qualidade óssea com o auxílio de Tomografia Computadorizada de Feixe Cônico (TCFC) com o uso do software de imagens OsiriX, Análise da Frequência de Ressonância (RFA) e Torque de Inserção do implante. Foram avaliados 160 implantes de 72 indivíduos, com média etária de 55,5 (±10,5) anos. Nas radiografias panorâmicas foram obtidos os índices IM, IPM e ICM, e nas tomografias computadorizadas de feixe cônico, os valores de pixels e a espessura da cortical da crista óssea alveolar, além da estabilidade primária por meio do torque de inserção e análise da frequência de ressonância. Os resultados foram analisados pelo coeficiente de correlação de Spearman, para p<= 0,01 foi obtido entre o torque de inserção e valores de pixels (0.330), o torque de inserção e a espessura da cortical da crista alveolar (0.339), o torque de inserção e o ISQ vestibulo-lingual (0.193), os valores de pixels e espessura da cortical da crista alveolar (0.377), as duas direções vestíbulo-lingual e mesio-distal do ISQ (0.674), o ISQ vestíbulo-lingual e a espessura da cortical da crista alveolar (0.270); os índices radiomorfométricos foram correlacionados entre eles e para p<= 0,05 foi obtido entre torque de inserção e ISQ mesio-distal (0.131), entre o ISQ vestibulo-lingual e os valores de pixels (0.156) e ISQ mesio-distal e IPMI esquerdo (0.149) e ISQ mesio-distal e IPMS esquerdo (0.145). Existe correlação entre a TCFC, o torque de inserção e a RFA na avaliação da qualidade óssea. É possível utilizar, pré-cirurgicamente, os exames de TCFC para avaliar a qualidade e quantidade óssea, tendo em vista as correlações obtidas neste estudo.

Influência da densidade tubular em diferentes profundidades dentinárias na estabilidade de união de cimentos de iônomero de vidro

O objetivo do estudo foi avaliar a influência da densidade tubular em diferentes profundidades dentinárias na estabilidade de união de dois cimentos de ionômero de vidro (CIV) de alta viscosidade. Vinte terceiros molares foram alocados em 6 grupos experimentais, de acordo com a profundidade da dentina - proximal, oclusal superficial ou oclusal profunda, e os CIVs - Fuji IX (GC Corp.) e Ketac(TM) Molar Easy Mix (3M/ESPE). Inicialmente os dentes foram cortados a fim de se obter fatias de aproximadamente 1 mm de espessura de dentina proximal, oclusal superficial e profunda. Em seguida, foi realizado uma análise topográfica das secções das diferentes superfícies e profundidades em microscopia confocal a laser (100X) para obtenção das médias da densidade tubular em cada profundidade. Cânulas de polietileno foram então posicionadas sobre as secções de dentina pré-tratadas e preenchidas pelos CIVs. Os espécimes foram armazenados em água destilada por 24 h e 12 meses a 37°C, em seguida foram submetidos ao ensaio de microcisalhamento (0,5 mm/min). Após o ensaio, foi realizada a análise do padrão de fratura em estereomicroscópio (400X). Os dados obtidos foram submetidos à Análise de Variância para dados repetidos, seguido do teste de Tukey (?=5%). Verificamos que a densidade dos túbulos dentinários, em diferentes profundidades de molares permanentes, é inversamente proporcional a resistência de união de cimentos de ionômero de vidro de alta viscosidade. Foi ainda observado em todos os grupos que a resistência de união após 24 horas é maior do que em 12 meses, indicando degradação da interface adesiva ao longo do tempo.

Dinâmica de interações intraguilda em Chrysoperla externa (Neuroptera: Chrysopidae), Harmonia axyridis (Coleoptera: Coccinellidae) com Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae)

A necessidade por recursos alimentares move os insetos predadores na busca por presas, para garantir a sobrevivência. Existem vários fatores que podem influenciar o comportamento de busca e escolha por presas e, sob determinadas circunstâncias, o inseto pode escolher se alimentar de presas não alvo, como, por exemplo, inimigos naturais e assim prejudicar a população de organismos benéficos. Garantir a estabilidade do agroecossistema é uma forma de manter as populações de pragas em níveis compatíveis com a ação de inimigos naturais e, consequentemente obter o sucesso no controle biológico. Programas bem sucedidos de manejo de pragas requerem previamente a realização de estudos sobre comportamento de insetos. Com o intuito de compreender os fatores que governam o comportamento predatório e as interações ecológicas entre Harmonia axyridis e Chrysoperla externa, considerando a presença de Diaphorina citri como presa, objetivou-se estudar o efeito de interações intraguilda sobre a predação de D. citri, experimentalmente e utilizando modelos estatísticos para compreender a dinâmica de interações tróficas no contexto de potenciais guildas presentes em citros. Três experimentos distintos foram realizados para investigar o comportamento dos insetos predadores. Foram realizados testes com escolha entre larvas dos predadores C. externa e H. axyridis e testes com e sem escolha comparando machos e fêmeas do predador H. axyridis, a fim de investigar padrões de escolha de presas. O segundo experimento foi realizado para investigar o comportamento predatório entre larvas de segundo instar dos predadores sob diferentes densidades de D. citri como presa. As combinações foram: sem escolha de presas intraguilda, combinações com escolha de presas intraguilda e combinações com a presença de dois predadores da mesma espécie para possibilitar o canibalismo. As densidades de D. citri utilizadas foram 5, 10, 15, 30, 60, 80. No último experimento avaliou-se a interação entre larvas de C. externa e H. axyridis, ao longo do desenvolvimento, simulando a existência de apenas uma presa, como fonte de alimento. O desenvolvimento dos predadores foi avaliado e comparado utilizando-se duas presas diferentes, ninfas de D. citri e ovos de Ephestia kuehniella para cada larva de primeiro instar dos predadores C. externa e H. axyridis. As combinações de predadores foram as mesmas citadas no experimento anterior. Observou-se a duração do desenvolvimento larval nas diferentes combinações de predadores e presa, bem como o percentual de predações intraguilda e canibalismos ocorridos. Nem a densidade de presas, nem o tipo de presa ofertada influenciou o comportamento das larvas dos predadores para a realização de predação intraguilda ou canibalismo. O principal fator foi a diferença de idade que reflete no tamanho dos predadores, podendo direcionar a predação intraguilda ou o canibalismo e até mesmo acelerar o ciclo de desenvolvimento do predador intraguilda envolvido. Predadores em estágio inicial de vida buscaram por qualquer tipo de presa para garantir sua sobrevivência, não demonstrando qualquer padrão em suas escolhas. No caso dos adultos de H. axyridis, há diferença de comportamento entre os sexos, dependendo da densidade de presas disponíveis, fêmeas poderão ser mais ágeis na busca e consumo de presas.

Acute Synaptic Activity Causes Differential miRNA Expression in The Drosophila melanogaster Larval Central Nervous System

The primary goal of this thesis was to determine if spaced synaptic stimulation induced the differential expression of microRNAs (miRNAs) in the Drosophila melanogaster central nervous system (CNS). Prior to attaining this goal, we needed to identify and validate a spaced stimulation paradigm that could induce the formation of new synaptic growth at a model synapse, the larval neuromuscular junction (NMJ). Both Channelrhodopsin- and high potassium-based stimulation paradigms adapted from (Ataman, et al. 2008) were tested. Once validation of these paradigms was complete, we sought to characterize the miRNA expression profile of the larval CNS by miRNA array. Following attainment of these data, we used quantitative real-time PCR (RT-qPCR) to determine if acute synaptic stimulation caused the differential expression of neuronal miRNAs. We found that upon high potassium spaced training in a wild type (Canton S) genotype, 5 miRNAs showed significant differential expression when normalized to a validated reference gene, the U1 snRNA. Moreover, absolute quantification of our RT-qPCR study implicated one miRNA: miR-958 as being significantly regulated by activity. Investigation into potential targets for miR-958 revealed it to be a potential regular of Dlar, a protein tyrosine phosphatase implicated in synapse development. This investigation provides the foundation to directly test our underlying hypothesis that, following spaced training, differential expression of miRNAs alters the translation of proteins required to induce and maintain these structural changes at the synapse.

Differences in larval nutritional requirements and female oviposition preference reflect the order of fruit colonization of Zaprionus indianus and Drosophila simulans

Species coexist using the same nutritional resource by partitioning it either in space or time, but few studies explore how species-specific nutritional requirements allow partitioning. Zaprionus indianus and Drosophila simulans co-exist in figs by invading the fruit at different stages; Z. indianus colonizes ripe figs, whereas D. simulans oviposits in decaying fruit. Larvae feed on yeast growing on the fruit, which serves as their primary protein source. Because yeast populations increase as fruit decays, we find that ripe fruit has lower protein content than rotting fruit. Therefore, we hypothesized that Z. indianus and D. simulans larvae differ in their dietary requirements for protein. We used nutritional geometry to assess the effects of protein and carbohydrate concentration in the larval diet on life history characters in both species. Survival, development time, and ovariole number respond differently to the composition of the larval diet, with Z. indianus generally performing better across a wider range of protein concentrations. Correspondingly, we found that Z. indianus females preferred to lay eggs on low protein foods, while D. simulans females chose higher protein foods for oviposition when competing with Z. indianus. We propose the different nutritional requirements and oviposition preference of these two species allows them to temporally partition their habitat.

Os efeitos do plasma não térmico à pressão atmosférica no desenvolvimento larval e anomalias morfológicas de Drosophila Melanogaster

O plasma não térmico nos cuidados de saúde é um campo emergente que tem as suas raízes na ciência de plasmas. Este tipo de investigação tem crescido rapidamente e é agora objeto de um amplo esforço de pesquisa interdisciplinar envolvendo a medicina, a biologia, a física, a química e a engenharia. Têm sido feitos vários trabalhos de modo a elucidar quais as interações das espécies produzidas pelo plasma com os sistemas vivos. É evidente que o mecanismo da interação do plasma com os sistemas vivos é complexo, em parte devido à complexidade do plasma mas principalmente devido à enorme complexidade da biologia. O principal objetivo desta dissertação foi observar os efeitos do plasma não térmico à pressão atmosférica (PNTPAs) no desenvolvimento larval e anomalias morfológicas de Drosophila melanogaster. Para o efeito, foram expostas e analisadas fenotipicamente 2.566 larvas após exposição, dos diferentes estádios (1.º, 2.º e 3.º) de desenvolvimento. Os testes foram realizados com aplicações de plasma com e sem ultra violeta, em duas linhas diferentes de Drosophila; uma linha selvagem preparada por nós e uma linha laboratorial. A análise fenotípica revelou que após exposição as larvas apresentavam alterações no fenótipo e no comportamento que não foram observadas no controlo, nomeadamente anomalias nas mudas, traqueias partidas, formação de massas melanóticas que podiam persistir até à fase adulta, excesso de gotículas lipídicas, atraso no desenvolvimento, comportamento de não alimentação e formação de pupa imatura que levava à formação de pupa precoce e morte pupal. Na fase pupal, as anomalias mais comuns estavam relacionadas com a forma do pupário (causadas pela pipação prematura), apresentando um desenvolvimento aberrante. Entre os vários fenótipos observados, o mais significativo foi o criptocefálico (alterações na eversão dos discos imaginais) levando à morte pupal. Nos adultos, as principais anomalias morfológicas foram registadas na formação e segmentação das patas, na forma e padrão das nervuras das asas e na formação do tórax. A similaridade destes resultados com trabalhos publicados relacionados com a hormona esteróide ecdisona indicam que provavelmente o PNTPA poderá ter influenciado a biossíntese e/ou a regulação da ecdisona, a principal hormona que regula o desenvolvimento e a metamorfose em Drosophila.