Going mobile: microtubule motors and chromosome segregation.

Proper chromosome segregation in eukaryotes depends upon the mitotic and meiotic spindles, which assemble at the time of cell division and then disassemble upon its completion. These spindles are composed in large part of microtubules, which either generate force by controlled polymerization and depolymerization or transduce force generated by molecular microtubule motors. In this review, we discuss recent insights into chromosome segregation mechanisms gained from the analyses of force generation during meiosis and mitosis. These analyses have demonstrated that members of the kinesin superfamily and the dynein family are essential in all organisms for proper chromosome and spindle behavior. It is also apparent that forces generated by microtubule polymerization and depolymerization are capable of generating forces sufficient for chromosome movement in vitro; whether they do so in vivo is as yet unclear. An important realization that has emerged is that some spindle activities can be accomplished by more than one motor so that functional redundancy is evident. In addition, some meiotic or mitotic movements apparently occur through the cooperative action of independent semiredundant processes. Finally, the molecular characterization of kinesin-related proteins has revealed that variations both in primary sequence and in associations with other proteins can produce motor complexes that may use a variety of mechanisms to transduce force in association with microtubules. Much remains to be learned about the regulation of these activities and the coordination of opposing and cooperative events involved in chromosome segregation; this set of problems represents one of the most important future frontiers of research.

Caracterização e aplicação analítica de eletrodos modificados com sistemas porfirínicos supramoleculares

Estudos com eletrodos modificados foram conduzidos utilizando dois sistemas porfirínicos supramoleculares diferentes. O primeiro foi baseado na modificação de eletrodo de carbono vítreo com uma porfirina de níquel tetrarrutenada, [NiIITPyP{RuII(bipy)2Cl}4]4+. A modificação do eletrodo foi realizada por meio de sucessivos ciclos voltamétricos em meio alcalino (pH 13), gerando um eletrodo com característica similar a eletrodos modificados com α-Ni(OH)2. A caracterização química do filme formado foi realizada através das técnicas de voltametria cíclica, ressonância paramagnética eletrônica, espectroscopia eletrônica por reflectância e espectroscopia Raman com ensaio espectro-eletroquímico. Os resultados sugerem a formação de um polímero de coordenação, [µ-O2-NiIITPyP{RuII(bipy)2Cl}4]n, composto por subunidades porfirínicas ligadas entre si por pontes µ-peroxo axialmente coordenadas aos átomos de níquel (Ni-O-O-Ni). O crescimento do filme apresentou dependência da alcalinidade do meio pela formação do precursor octaédrico [Ni(OH)2TRPyP]2+ em solução, pela coordenação de OH- nas posições axiais do átomo de níquel. O processo de eletropolimerização indicou a participação de radical hidroxil, gerado por oxidação eletrocatalítica da água nos sítios periféricos da porfirina contendo o complexo de rutênio. O mesmo eletrodo foi aplicado como sensor eletroquímico para análise amperométrica de ácido fólico em comprimidos farmacêuticos. O sensor foi associado a um sistema de Batch Injection Analysis (BIA) alcançando considerável rapidez e baixo limite de detecção. Para as análises das amostras também foi proposto um método para a remoção da lactose, que agia como interferente. O segundo estudo envolveu a modificação de eletrodos de carbono vítreo com diferentes hemoglobinas, naturais (HbA0, HbA2 e HbS) e sintéticas (Hb-PEG5K2, αα-Hb-PEG5K2 e BT-PEG5K4), para a avaliação da eficiência na redução eletrocatalítica de nitrito mediada por FeI-heme. Os filmes foram produzidos pela mistura de soluções das hemoglobinas com brometo de didodecildimetiltrimetilamônio (DDAB), aplicados nas superfícies com consecutiva evaporação, formando filmes estáveis. Os valores de potencial redox para os processos do grupo heme e a sua associação com a disponibilidade do grupo na proteína foram avaliados por voltametria cíclica. Os valores das constantes de velocidade, k, para redução de nitrito foram obtidos por cronoamperometria em -1,1 V (vs Ag/AgCl(KCl 3M)) que foram utilizados para estudo comparativo entre as espécies sintéticas para eventual aplicação clínica.

Investigação da atividade apoptótica na abertura luminal dos ductos das glândulas salivares: análise comparativa entre modelo animal e humano

As glândulas salivares são estruturas essenciais para a manutenção da homeostase da cavidade oral pela síntese e secreção do fluido salivar. A disfunção ou perda permanente das glândulas salivares causadas por radioterapia, doenças inflamatórias ou desordens congênitas elevam principalmente o risco de infecções da mucosa oral e de estruturas dentárias, além de potencialmente prejudicar funções fisiológicas como fala, mastigação e paladar, diretamente interferindo na qualidade de vida dos indivíduos afetados. Os tratamentos atualmente disponíveis são apenas paliativos, ressaltando a necessidade de se compreender melhor os processos embriogênicos a fim de desenvolver novas estratégias terapêuticas capazes de regenerar as glândulas salivares. O princípio da formação das glândulas salivares baseia-se na coordenação de diversos processos morfogenéticos, e este trabalho foca particularmente em investigar a formação do espaço luminal do sistema de ductos, uma vez que a adequada abertura dos lumens é um processo essencial para a secreção salivar. Relata-se que a remoção das células centrais dos cordões sólidos epiteliais por morte celular apoptótica é o principal mecanismo de abertura do espaço luminal dos futuros ductos glandulares em camundongos. Porém, pouco se sabe sobre o controle temporal da apoptose durante o desenvolvimento glandular e sobre seu comportamento em glândulas salivares humanas. Neste trabalho, o perfil de expressão de diversas proteínas envolvidas na cascata apoptótica em glândulas salivares fetais humanas foi analisado de acordo com cada estágio morfogenético por imunoistoquímica (Bax, Bak, Bad, Bid, Bcl-2, Bcl-x, Bcl-xL, caspase-3 clivada, caspases-6, -7 e -9, apaf-1, survivina e citocromo c). As análises semi-qualitativas resultaram em negatividade apenas para as proteínas Bcl-2, Bad, Bid e caspase-3 clivada em todas as fases de desenvolvimento. A expressão nuclear de Bax e Bak foi identificada em presumidos espaços luminais em estágios precoces, enquanto Bcl-xL foi o fator antiapoptótico da família Bcl-2 que exibiu expressão nuclear mais importante. Caspases-6, -7 e -9 foram positivas em todas as fases, e a ausência de caspase-3 clivada sugere caspase-7 como principal caspase efetora da apoptose em desenvolvimento de glândulas salivares humanas. Ambos os componentes do complexo apoptossomo foram positivos durante o desenvolvimento glandular, e o inibidor survivina demonstrou mais positividade nuclear em estágios mais avançados. Ao observar a expressão de reguladores apoptóticos durante o desenvolvimento glandular humano, foram realizados experimentos funcionais com culturas de tecido glandular de camundongos para avaliar o papel das caspases durante a formação desta estrutura. Inicialmente detectou-se a atividade apoptótica em glândulas salivares de camundongos albinos no centro dos cordões epiteliais primários a partir de estágios precoces de desenvolvimento através de TUNEL e caspase-3 clivada. A partir disso, foi realizada a inibição apoptótica funcional in vitro durante o mesmo período, que resultou em ductos significativamente mais amplos e em defeitos morfológicos importantes nas estruturas luminal e acinar. Este trabalho evidenciou portanto atividade apoptótica durante a formação de glândulas salivares humanas e de camundongo, expressando-se em fases mais precoces do que reportadas anteriormente. Além disso, a ausência de Bad e Bid indica que a via intrínseca está mais ativa que a extrínseca, e distintos perfis de expressão da maioria das moléculas sugere adicionais funções não-apoptóticas durante a morfogênese glandular.

Espécies polinucleares de cobre e ferro com catalisadores de oxidação e modelos de sítios ativos

Diferentes complexos de cobre(II), contendo ligantes do tipo base de Schiff e um grupamento imidazólico, com interesse bioinorgânico, catalítico e como novos materiais, foram preparados na forma de sais perclorato, nitrato ou cloreto e caracterizados através de diferentes técnicas espectroscópicas (UV/Vis, IR, EPR, Raman) e espectrometria de massa Tandem (ESI-MS/MS), além de análise elementar, condutividade molar e medidas de propriedades magnéticas. Alguns destes compostos, obtidos como cristais adequados, tiveram suas estruturas determinadas por cristalografia de raios-X. As espécies di- e polinucleares contendo pontes cloreto, mostraram desdobramentos das hiperfinas nos espectros de EPR, relacionados à presença do equilíbrio com a respectiva espécie mononuclear, devido à labilidade dos íons cloretos, dependendo do contra-íon e do tipo de solvente utilizado. Adicionalmente, em solução alcalina, estes compostos estão em equilíbrio com as correspondentes espécies polinucleares, onde os centros de cobre estão ligados através de um ligante imidazolato. Em meio alcalino, estes compostos polinucleares contendo ponte imidazolato foram também isolados e caracterizados por diferentes técnicas espectroscópicas e magnéticas. Através da variação estrutural e também do ligante-ponte foi possível modular o fenômeno da interação magnética entre os íons de cobre em estruturas correlatas di- e polinucleares. Os respectivos parâmetros magnéticos foram obtidos com ajuste das curvas experimentais de XM vs T, correlacionando-se muito bem com a geometria, ângulos e distâncias de ligação entre os íons, quando comparado com outros complexos similares descritos na literatura. Posteriormente, estudaram-se os fatores relacionados com a reatividade de todas essas espécies como catalisadores na oxidação de substratos de interesse (fenóis e aminas), através da variação do tamanho da cavidade nas estruturas cíclicas ou de variações no ligante coordenado ao redor do íon metálico. Vários deles se mostraram bons miméticos de tirosinases e catecol oxidases. Um novo complexo-modelo da citocromo c oxidase (CcO), utilizando a protoporfirina IX condensada ao quelato N,N,-bis[2-(1,2-metilbenzimidazolil)etil]amino e ao resíduo de glicil-L-histidina, foi sintetizado e caracterizado através de diferentes técnicas espectroscópicas, especialmente EPR. A adição de H2O2 ao sistema completamente oxidado, FeIII/CuII, a -55°C, ou o borbulhamento de oxigênio molecular a uma solução do complexo na sua forma reduzida, FeII/CuI, saturada de CO, resultou na formação de adutos com O2, de baixo spin, estáveis a baixas temperaturas.

Coordenação da entrega de ajuda a vítimas de desastre: uma abordagem multicritério com pensamento focado em valor.

Este trabalho trata da logística envolvida em operações de resposta a desastres, com foco na entrega final de suprimentos destinados a ajudar vítimas. Seu propósito é investigar os objetivos pertinentes ao planejamento do transporte da carga e encontrar uma metodologia para definir estratégia que sirva à tomada de decisão em campo. Para tanto, primeiramente identifica-se os objetivos adotados em modelos de Pesquisa Operacional para a tarefa em questão, através da análise de conteúdo das publicações pertinentes. Então, a abordagem do Pensamento Focado em Valores é utilizada para estruturar o problema. Finalmente, o método Simple Multi-Attribute Rating Technique Exploiting Ranks (SMARTER) é empregado na construção de um modelo de Análise da Decisão Multicritério (ADM), com consulta a um profissional experiente da área humanitária e aproveitando a análise da literatura previamente realizada. Neste processo, são elaboradas e avaliadas seis alternativas para a tomada de decisão condizentes com os valores da comunidade humanitária. Os resultados obtidos mostram que existe incompatibilidade entre os critérios de desempenho identificados nas publicações existentes e os objetivos perseguidos pelo Tomador da Decisão (TD) real. De acordo com o modelo construído, o atendimento de prioridades e a manutenção da sustentabilidade da operação são os objetivos que devem ser levados em conta para planejar a entrega de carga em pós-desastre, sendo que o custo e a equidade da distribuição não devem ser considerados. Conclui-se que o método adotado é útil à definição destes critérios e também ao desenvolvimento de estratégias que resultem em distribuições de ajuda melhores, aos olhos do próprio TD. Desta forma, ressalta-se que este trabalho contribui à área da Logística Humanitária com a investigação dos objetivos, assim como ao campo da ADM pela formalização dos processos de elaboração de alternativas, além da adição de mais uma aplicação possível ao repertório do método SMARTER.

El gobierno económico de la Unión Europea y los principios de justicia del gasto público en una hacienda plural

A partir de 2011 se ha reforzado el gobierno económico de la UE a través de seis instrumentos legislativos, el llamado Six Pack, que supone fundamentalmente una reforma de la supervisión de la política presupuestaria de los Estados miembros. Más recientemente el Tratado de estabilidad, coordinación y gobernanza de UE de marzo de 2012 (TECGUE) establece un conjunto de normas destinadas a promover la disciplina presupuestaria a través de un pacto presupuestario; a reforzar la coordinación de sus políticas económicas; y a mejorar la gobernanza de la zona del euro. En el presente trabajo se analiza si este modelo basado en una estricta disciplina presupuestaria es compatible con los postulados del Estado social, y más concretamente con los principios de justicia del gasto público. En efecto, a partir de la reforma del art. 135 de la Constitución Española, el principio de estabilidad presupuestaria debe ser interpretado coordinadamente con otros principios constitucionales que en el momento presente están plenamente vigentes y pueden adquirir una nueva función: la de actuar como límite y medida del objetivo de estabilidad presupuestaria. Del mismo modo se analizan los principios de coordinación entre las políticas presupuestarias y de endeudamiento de los Estados miembros en un Estado con una pluralidad de Haciendas, como es el caso español.

Armanents duplication in Europe: a quantitative assessment. CEPS Policy Brief No. 297, 16 July 2013 [is another Brief with no. 297]

Effectively addressing the issue of duplication in Europe’s defence systems will require a considerable amount of political will and, more importantly, a far-sighted vision of the way to go. Difficult choices will have to be made, and EU member states will have to invest in a complex exercise of coordination of defence and industrial policies and planning. However, the efficient management of EU defence budgets and the maintenance of a viable industrial base demand such efforts. After all, what is at stake is the EU’s ability to guarantee its own security. The author makes a series of proposals to address this issue ahead of the European Council of December 2013, which will be devoted to matters of security and defence.

Programming EU External Action Post-Lisbon: New Opportunities or Business as Usual?

Over 90% of the external relations budget of the EU is processed through its external financial instruments. With the Lisbon Treaty and the creation of the new European External Action Service (EEAS), the institutional architecture of these instruments was significantly reformed. This contribution analyses strategic programming both pre- and post-Lisbon, identifies ‘winners’ and ‘losers’, and examines the potential of the new provisions to increase the coherence of EU external action. The examination shows that the instruments can be categorised into three groupings: ‘the big three’ comprising the bulk of funding characterised by joint programming and responsibilities; the ‘Commission-only’ instruments where all powers remain with the Commission; and the ‘EEAS-led rest’ in which the High Representative and the EEAS play a strong role but only have limited financial resources available. The new system calls for strong coordination of all involved actors in order to make it work. Findings of a case study on the Instrument for Stability reveal, however, that so far the establishment of the EEAS has not made a substantial impact on strategic programming in its first two years.

Europe's social problem and its implications for economic growth. Bruegel Policy Brief 2014/03, 1 April 2014

The European Union faces major social problems. More than six million jobs were lost from 2008-13 and poverty has increased. Fiscal consolidation has generally attempted to spare social protection from spending cuts, but the distribution of adjustment costs between the young and old has been uneven; a growing generational divide is evident, disadvantaging the young. The efficiency of the social security systems of EU countries varies widely. Countries with greater inequality tended to have higher household borrowing prior to the crisis resulting in more subdued consumption growth during the crisis. The resulting high private debt, high unemployment, poverty and more limited access to education undermine long-term growth and social and political stability. Policymakers face three main challenges. First, addressing unemployment and poverty should remain a high priority not only for its own sake, but because these problems undermine public debt sustainability and growth. Second, bold policies in various areas are required. Most labour, social and fiscal policies are the responsibility of member states, requiring national reforms. But better coordination of demand management at European level is also necessary in order to create jobs. Third, tax/benefit systems should be reviewed for improved efficiency, inter- generational equity and fair burden sharing between the wealthy and poor.

The EU and Azerbaijan: Game on for a more normative policy? CEPS Policy Brief No. 329, March 2015

The contradictory interests of the EU and Azerbaijan have brought negotiations on their contractual relations to a halt. The EU’s dependence on Azerbaijan’s rich energy resources has weakened the normative dimension of its policy towards Azerbaijan, rendering it incapable of countering rejection of democratic reform by Azerbaijan’s authorities. While the EU’s current approach seems to favour a more pragmatic focus on energy cooperation, this policy brief argues that a combination of normative obligations and pragmatic interests is required − implemented through leverage over Azerbaijan and a better coordination of this policy across the EU member states and institutions.

Economic Policy Committee Annual Report on Structural Reforms 2000. Report addressed to the Council and the Commission. 13 March 2000

2nd annual report. The Economic Policy Committee (EPC) is made up of representatives of the Member States and contributes to the work of the Economic and Monetary Affairs Council as regards the coordination of Member State and Community economic policies. The EPC also provides the Commission and the Council with advice in this area, focusing particularly on structural reforms.

Synthesis Report on Structural Reforms in Member States. Report addressed to the Council and the Commission. 8 March 1999.

The Economic Policy Committee (EPC) is made up of representatives of the Member States and contributes to the work of the Economic and Monetary Affairs Council as regards the coordination of Member State and Community economic policies. The EPC also provides the Commission and the Council with advice in this area, focusing particularly on structural reforms.

Annual Report on Structural Reforms 2001. Report addressed to the Council and the Commission. 6 March 2001.

3rd report. The Economic Policy Committee (EPC) is made up of representatives of the Member States and contributes to the work of the Economic and Monetary Affairs Council as regards the coordination of Member State and Community economic policies. The EPC also provides the Commission and the Council with advice in this area, focusing particularly on structural reforms.

Annual Report on Structural Reforms 2002. 5 March 2002.

4th report. The Economic Policy Committee (EPC) is made up of representatives of the Member States and contributes to the work of the Economic and Monetary Affairs Council as regards the coordination of Member State and Community economic policies. The EPC also provides the Commission and the Council with advice in this area, focusing particularly on structural reforms.

Annual Report on Structural Reforms 2003. “Shifting up a Gear. The Case for Speeding up Reform”. 28 February 2003.

The Economic Policy Committee (EPC) is made up of representatives of the Member States and contributes to the work of the Economic and Monetary Affairs Council as regards the coordination of Member State and Community economic policies. The EPC also provides the Commission and the Council with advice in this area, focusing particularly on structural reforms.