Chicken as potential contamination source of Campylocacter lari in Iquitos, Peru

In order to know the importance of chicken as natural reservoir of Campylobacter lari in Iquitos, Peru; samples were obtained by cloacal swabs from 200 chickens and immediately placed into a semisolid enrichment medium; these were streaked on modified Skirrow Agar. The organism was isolated from 21 (10.5%) samples, corresponding 58.8% to biovar I and 41.2% to biovar II (Lior scheme). The results provide evidence that chicken appear to be prominent reservoirs of Campylobacter lari in Iquitos.

Freshwater arsenic detoxification through selenium-enriched food supplements. A proteomic approach

Disserta����o apresentada para a obten����o do grau de doutor em Bioqu��mica pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia

A proteomic approach toward the selection of proteins with enhanced intrinsic conformational stability

Journal of Proteome Research (2006)5: 2720-2726

Vibrio metschnikovii among diarrheal patients during cholera epidemic in Recife Brazil

Although known since the last century, Vibrio metschnikovii was only appropriately described and recognized as a new species within the genus Vibrio in 1978. Rarely is the organism linked to human disease. Only once has V. metschnikovii been incriminated as responsible for human diarrhea, and affecting an old woman who suffered from diabetes and had a hepatoma. During the first two years of the present cholera epidemic, which reached Recife in March, 1992, we screened for vibrio nearly 4000 diarrheal fecal specimens submitted to a private clinical laboratory for detection of enteropathogenic microorganisms. Now, we report six cases of diarrhea associated with V. metschnikovii affecting individuals not suffering of any apparent underlying systemic illness.

Transglutaminases do mosquito Anopheles gambiae: Caracteriza����o gen��tica, bioqu��mica e funcional durante a infec����o por Plasmodium berghei

A mal��ria constitui um problema de sa��de p��blica, que tem vindo a agravar-se, sendo crescente a necessidade de estrat��gias renovadas para o seu controlo, como a interrup����o do ciclo esporog��nico. Deste modo, �� essencial compreender as respostas imunol��gicas de Anopheles anti-Plasmodium. Demonstrou-se anteriormente, que a inibi����o de transglutaminases, enzimas que participam em v��rios processos biol��gicos ao catalisarem a forma����o de liga����es covalentes entre p��ptidos, agrava a infec����o em mosquitos pelo parasita. O presente trabalho tem por objectivo caracterizar as transglutaminases AGAP009098 e AGAP009100 de Anopheles gambiae. Os m��todos utilizados para este efeito foram: a sequencia����o de regi��es dos genes AGAP009098 e AGAP009100; a clonagem molecular de fragmentos da regi��o codificante do gene AGAP009098, usando o vector plasm��dico pET���28a(+) e Escherichia coli como sistema de express��o; e PCR em Tempo Real para analisar a express��o relativa dos genes AGAP009098 e AGAP009100 nos diferentes os est��dios de desenvolvimento. AGAP009098 �� expressa ubiquamente e AGAP009100 a partir do est��dio pupa. Estes resultados apontam para a conclus��o de que AGAP009098 e AGAP009100 poder��o desempenhar fun����es em processos biol��gicos relevantes, por exemplo na defesa imunit��ria, ou no desenvolvimento. Os p��ptidos recombinantes, obtidos a partir da clonagem com sucesso de fragmentos da regi��o codificante do gene AGAP009098, constituem uma ferramenta importante para averiguar a fun����o destas TGases, no futuro.

Immune responses induced by a Leishmania (Leishmania) amazonensis recombinant antigen in mice and lymphocytes from vaccinated subjects

In the search for Leishmania recombinant antigens that can be used as a vaccine against American Cutaneous Leishmaniasis, we identified a Leishmania (Leishmania) amazonensis recombinant protein of 33 kD (Larp33) which is recognized by antibodies and peripheral blood leukocytes (PBL) from subjects vaccinated with Leishvacin ��, Larp33 was expressed in Escherichia coli after cloning of a 2,2 kb Sau3A digested genomic fragment of L. (L.) amazonensis into the pDS56-6 His vector. Immunoblotting analysis indicated that Larp33 corresponds to an approximately 40-kD native protein expressed in promastigotes of L.(L.) amazonensis and L. (Viannia) braziliensis. Northern blots of total RNA also demonstrated that the gene coding for this protein is expressed in promastigotes of the major lineages of Leishmania causing American Cutaneous Leishmaniasis. Larp33 induced partial protection in susceptible mouse strains (BALB/c and C57BL/10) against L. (L.) amazonensis after vaccination using Bacille Calmette-Guerin (BCG) as adjuvant. In vitro stimulation of splenocytes from BALB/c protected mice with Larp33 elicited the secretion of IL-2 and IFN-<FONT FACE="Symbol">g</font>, suggesting that a Th1 cell-mediated protective response is associated with the resistance observed in these mice. As revealed by its immunogenic and antigenic properties, this novel recombinant antigen is a suitable candidate to compose a vaccine against cutaneous leishmaniasis

Rapid Characterization of S. mansoni Expression Library Clones of Potential Interest

A S. mansoni adult worm cDNA expression library was screened with sera from baboons in a early phase after infection. The clones that were positive with the early infection sera were examined for reactivity with pre-infection sera and heterologous infection sera. In order to discriminate a positive antibody reaction from the reactivity due to residual anti-E. coli antibodies, an unrelated cDNA clone was plated with the positive clone. The unrelated clone provided the negative background and the contrast necessary to discern a positive antibody reaction. In this way, we were able to eliminate selected clones that were positive with the pre-infection sera or heterologous infection sera. This characterization of the expression library clones enabled us to quickly target only clones with the desired pattern of antibody reactivity for sequencing, subcloning, and expressing

Development of CO-releasing molecular for the treatment of inflammatory diseases

Dissertation presented to obtain a Ph.D. degree (Doutoramento) in Chemistry at the Instituto de Tecnologia Quimica e Biol6gica da Universidade Nova de Lisboa

Avalia����o do efeito da microfauna do tanque de arejamento no efluente final

O presente trabalho, efetuado na Esta����o de Tratamento de ��guas Residuais do Freixo (ETAR do Freixo), decorreu durante um per��odo de nove meses, (entre Dezembro de 2012 e Agosto de 2013), e teve como principais objetivos: - a observa����o microsc��pica e respetiva identifica����o dos organismos presentes nas lamas ativadas dos reatores biol��gicos da ETAR (incidindo nos protozo��rios, metazo��rios e bact��rias filamentosas); - estabelecer a rela����o entre os organismos identificados/quantidade respetiva e a sedimentabilidade das lamas ativadas e sua influ��ncia no processo de depura����o; - avaliar a varia����o das esp��cies identificadas com as altera����es processuais. Para o efeito, a metodologia utilizada foi: - a colheita di��ria de amostras em v��rios pontos da ETAR; - a determina����o dos par��metros operacionais e caracteriza����o das amostras recolhidas, tendo sido efetuadas 6039 an��lises f��sico-qu��micas, incluindo ao afluente �� ETAR, ao afluente e ao conte��do dos dois reatores biol��gicos, �� corrente de recircula����o de lamas e ao efluente; - a visualiza����o di��ria microsc��pica ��tica sem contraste de fase dos microrganismos presentes nos reatores biol��gicos; - a visualiza����o microsc��pica ��tica com contraste de fase da microfauna presente nos reatores biol��gicos, sendo efetuadas 16 identifica����es e quantifica����es dos protozo��rios presentes nas lamas ativadas dos dois reatores e 10 identifica����es e quantifica����es das bact��rias filamentosas presentes nos dois reatores biol��gicos. O in��cio do estudo ocorreu num per��odo em que se come��ou a verificar um aumento excessivo de espumas nos decantadores secund��rios, resultando numa fraca sedimentabilidade das lamas e numa menor qualidade do efluente final. Na tentativa de reduzir a excessiva ascens��o do manto de lamas que se verificou, foram efectuadas altera����es operacionais, consistindo: - na altera����o da raz��o de recircula����o da decanta����o secund��ria para os reatores biol��gicos; - na introdu����o de um composto altamente concentrado em mat��ria org��nica na corrente de recircula����o de lamas; - na altera����o da extra����o de lamas biol��gicas. Verificou-se que as altera����es processuais efetuadas foram muito eficazes na diminui����o do manto de lamas da decanta����o secund��ria, bem como muito eficazes na qualidade do efluente final. Durante os meses de Fevereiro a Agosto fez-se o acompanhamento di��rio de todas as condi����es de opera����o de modo a manter e validar o procedimento de opera����o, o qual se considerou muito eficaz em termos de obten����o de uma ��gua tratada de excelente qualidade. Durante o estudo efetuado, verificou-se que a popula����o microbiol��gica existente nos dois reatores biol��gicos se manteve praticamente inalterada durante todo o per��odo, sendo os m��veis de fundo e os s��sseis os grupos dominantes. Esta domin��ncia traduziu-se na elevada qualidade do efluente final que se observou a partir do m��s de Fevereiro, tendo dificultado o estudo de novas condi����es de opera����o, mas facilitando a valida����o do procedimento adotado. No que se refere ��s bact��rias filamentosas, verificou-se que s��o diversas as esp��cies presentes nos reatores biol��gicos e que existem em grande abund��ncia, sendo que o Tipo 0092 �� claramente dominante. O excessivo crescimento deste tipo de bact��rias mostrou ser o maior problema a n��vel microbiol��gico no processo de tratamento da instala����o, tornando-se cr��tico no per��odo de inverno em que a temperatura e os picos de pluviosidade se mostraram condi����es favor��veis ao seu desenvolvimento. Para al��m da temperatura outros fatores mostraram-se respons��veis pelo seu crescimento tais como a raz��o Alimento/Microrganismo (A/M), a idade das lamas, a carga m��ssica afluente e o teor de oxig��nio dissolvido nos reatores biol��gicos. Pode-se concluir que apesar de n��o se trabalhar com os valores te��ricos dos par��metros microbiol��gicos e operacionais considerados ideais, a ETAR do Freixo, possui um tratamento bastante eficaz na remo����o da carga org��nica, na remo����o de nutrientes e na remo����o de s��lidos suspensos totais, apesar da n��o exist��ncia de uma etapa de afina����o final como a filtra����o.

Desenvolvimento de um m��todo potenciom��trico para dete����o de salmonella typhimurium

A Salmonella �� um microrganismo respons��vel por grande parte das doen��as alimentares, podendo por em causa a sa��de p��blica da ��rea contaminada. Uma dete����o r��pida, eficiente e altamente sens��vel e extremamente importante, sendo um campo em franco desenvolvimento e alvo de variados e m��ltiplos estudos na comunidade cientifica atual. Foi desenvolvido um m��todo potenciom��trico para a dete����o de Salmonellas, com el��trodos seletivos de i��es, constru��dos em laborat��rio com pontas de micropipetas, fios de prata e sensores com composi����o otimizada. O el��trodo indicador escolhido foi um ESI seletivo a cadmio, para redu����o da probabilidade de interfer��ncias no m��todo, devido a pouca abundancia do cadmio em amostras alimentares. El��trodos seletivos a s��dio, el��trodos de Ag/AgCl de simples e de dupla junc��o foram tamb��m constru��dos e caracterizados para serem aplicados como el��trodos de refer��ncia. Adicionalmente otimizaram-se as condi����es operacionais para a analise potenciom��trica, nomeadamente o el��trodo de referencia utilizado, condicionamento dos el��trodos, efeito do pH e volume da solu����o amostra. A capacidade de realizar leituras em volumes muito pequenos com limites de dete����o na ordem dos micromolares por parte dos ESI de membrana polim��rica, foi integrada num ensaio com um formato nao competitivo ELISA tipo sanduiche, utilizando um anticorpo prim��rio ligado a nanopart��culas de Fe@Au, permitindo a separa����o dos complexos anticorpo-antig��nio formados dos restantes componentes em cada etapa do ensaio, pela simples aplica����o de um campo magn��tico. O anticorpo secund��rio foi marcado com nanocristais de CdS, que s��o bastante est��veis e �� f��cil a transforma����o em Cd2+ livre, permitindo a leitura potenciom��trica. Foram testadas v��rias concentra����es de peroxido de hidrog��nio e o efeito da luz para otimizar a dissolu����o de CdS. O m��todo desenvolvido permitiu tra��ar curvas de calibra����o com solu����es de Salmonellas incubadas em PBS (pH 4,4) em que o limite de dete����o foi de 1100 CFU/mL e de 20 CFU/mL, utilizando volumes de amostra de 10 ����L e 100 ����L, respetivamente para o intervalo de linearidade de 10 a 108 CFU/mL. O m��todo foi aplicado a uma amostra de leite bovino. A taxa de recupera����o media obtida foi de 93,7% } 2,8 (media } desvio padr��o), tendo em conta dois ensaios de recupera����o efetuados (com duas replicas cada), utilizando um volume de amostra de 100 ����L e concentra����es de 100 e 1000 CFU/mL de Salmonella incubada.

Effect of active components from Garlic on AGEs formation

Advanced glycation end-products are Maillard reaction products that are found in thermal processed food. This compounds are often referred as unhealthy for human diet, namely because of their capacity to form amino-acid dimers. There is a broad range of answers to get about how these products are formed, how they interact with the organism and how these reactions can be inhibited to prevent the referred effects. Some compounds from garlic are thought to be able to inhibit these reactions. This study using spectrophotometric, High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (HPLC-MS/MS) and Fourier transformed infrared spectroscopy (FTIR) analysis, helps to understand better not only not only the effect of some compounds obtained from garlic, diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DADS) and diallyl trisulfide (DATS), on these AGEs production reaction, but also helped to understand better the reaction itself.

Enterococcus and biocides: mechanisms of tolerance and selection for vancomycin resistance

Dissertation presented to obtain a Doctoral degree in Biology, Instituto de Tecnologia Qu��mica e Biol��gica, Universidade Nova de Lisboa.

mRNA genotyping by gold nanoprobes

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Biotecnologia

Plasmid profile in oral Fusobacterium nucleatum from humans and Cebus apella monkeys

Fusobacterium nucleatum is a strict anaerobe and is indigenous of the human oral cavity. This organism is commonly recovered from different monomicrobial and mixed infections in humans and animals. In this study, the plasmid profile, the plasmid stability and the penicillin-resistance association in oral F. nucleatum isolated from periodontal patients, healthy subjects and Cebus apella monkeys were evaluated. Forty-five F. nucleatum strains from patients, 38 from healthy subjects and seven from C. apella were identified and analyzed. Plasmid extraction was performed in all the isolated strains. These elements were found in 26.7% strains from patients and one strain from C. apella. Strains from healthy subjects did not show any plasmid. Most of strains showed two plasmid bands ranging from 4 to 16 Kb, but digestions with endonucleases showed that they belonged to a single plasmid. The plasmid profile was similar and stable in human and monkey strains. Also, plasmids were classified into three groups according to size. Two strains were positive to beta-lactamase production and no plasmid DNA-hybridization with a beta-lactamase gene probe was observed, suggesting a chromosomal resistance.

Measurement of lead concentration in biological tissues by atomic spectroscopy techniques

Dissertation for the degree of Doctor of Philosophy in Physics