Structure-, stereochemistry-, and metal-regulated DNA binding/cleaving molecules

In the cell, the binding of proteins to specific sequences of double helical DNA is essential for controlling the processes of protein synthesis (at the level of DNA transcription) and cell proliferation (at the level of DNA replication). In the laboratory, the sequence-specific DNA binding/cleaving properties of restriction endonuclease enzymes (secreted by microorganisms to protect them from foreign DNA molecules) have helped to fuel a revolution in molecular biology. The strength and specificity of a protein:DNA interaction depend upon structural features inherent to the protein and DNA sequences, but it is now appreciated that these features (and therefore protein:DNA complexation) may be altered (regulated) by other protein:DNA complexes, or by environmental factors such as temperature or the presence of specific organic molecules or inorganic ions. It is also now appreciated that molecules much smaller than proteins (including antibiotics of molecular weight less than 2000 and oligonucleotides) can bind to double-helical DNA in sequence-specific fashion. Elucidation of structural motifs and microscopic interactions responsible for the specific molecular recognition of DNA leads to greater understanding of natural processes and provides a basis for the design of novel sequence-specific DNA binding molecules. This thesis describes the synthesis and DNA binding/cleaving characteristics of molecules designed to probe structural, stereochemical, and environmental factors that regulate sequence-specific DNA recognition.

Chapter One introduces the DNA minor groove binding antibiotics Netropsin and Distamycin A, which are di- and tri(N-methylpyrrolecarboxamide) peptides, respectively. The method of DNA affinity cleaving, which has been employed to determine DNA binding properties of designed synthetic molecules is described. The design and synthesis of a series of Netropsin dimers linked in tail-to-tail fashion (by oxalic, malonic, succinic, or fumaric acid), or in head-to-tail fashion (by glycine, β-alanine, and γ-aminobutanoic acid (Gaba)) are presented. These Bis(Netropsin)s were appended with the iron-chelating functionality EDTA in order to make use of the technique of DNA affinity cleaving. Bis(Netropsin)-EDTA compounds are analogs of penta(N-methylpyrrolecarboxamide)-EDTA (P5E), which may be considered a head-to-tail Netropsin dimer linked by Nmethylpyrrolecarboxamide. Low- and high-resolution analysis of pBR322 DNA affinity cleaving by the iron complexes of these molecules indicated that small changes in the length and nature of the linker had significant effects on DNA binding/cleaving efficiency (a measure of DNA binding affinity). DNA binding/cleaving efficiency was found to decrease with changes in the linker in the order β-alanine > succinamide > fumaramide > N-methylpyrrolecarboxamide > malonamide >glycine, γ-aminobutanamide > oxalamide. In general, the Bis(Netropsin)-EDTA:Fe compounds retained the specificity for seven contiguous A:T base pairs characteristic of P5E:Fe binding. However, Bis(Netropsin)Oxalamide- EDTA:Fe exhibited decreased specificity for A:T base pairs, and Bis(Netropsin)-Gaba-EDT A:Fe exhibited some DNA binding sites of less than seven base pairs. Bis(Netropsin)s linked with diacids have C₂-symmmetrical DNA binding subunits and exhibited little DNA binding orientation preference. Bis(Netropsin)s linked with amino acids lack C₂-symmetrical DNA binding subunits and exhibited higher orientation preferences. A model for the high DNA binding orientation preferences observed with head-to-tail DNA minor groove binding molecules is presented.

Chapter Two describes the design, synthesis, and DNA binding properties of a series of chiral molecules: Bis(Netropsin)-EDTA compounds with linkers derived from (R,R)-, (S,S)-, and (RS,SR)-tartaric acids, (R,R)-, (S,S)-, and (RS,SR)-tartaric acid acetonides, (R)- and (S)-malic acids, N ,N-dimethylaminoaspartic acid, and (R)- and (S)-alanine, as well as three constitutional isomers in which an N-methylpyrrolecarboxamide (P1) subunit and a tri(N-methylpyrrolecarboxamide)-EDTA (P3-EDTA) subunit were linked by succinic acid, (R ,R)-, and (S ,S)-tartaric acids. DNA binding/cleaving efficiencies among this series of molecules and the Bis(Netropsin)s described in Chapter One were found to decrease with changes in the linker in the order β-alanine > succinamide > P1-succinamide-P3 > fumaramide > (S)-malicamide > N-methylpyrrolecarboxamide > (R)-malicamide > malonamide > N ,N-dimethylaminoaspanamide > glycine = Gaba = (S,S)-tartaramide = P1-(S,S)-tanaramide-P3 > oxalamide > (RS,SR)-tartaramide = P1- (R,R)-tanaramide-P3 > (R,R)-tartaramide (no sequence-specific DNA binding was detected for Bis(Netropsin)s linked by (R)- or (S)-alanine or by tartaric acid acetonides). The chiral molecules retained DNA binding specificity for seven contiguous A:T base pairs. From the DNA affinity cleaving data it could be determined that: 1) Addition of one or two substituents to the linker of Bis(Netropsin)-Succinamide resulted in stepwise decreases in DNA binding affinity; 2) molecules with single hydroxyl substituents bound DNA more strongly than molecules with single dimethylamino substituents; 3) hydroxyl-substituted molecules of (S) configuration bound more strongly to DNA than molecules of (R) configuration. This stereochemical regulation of DNA binding is proposed to arise from the inherent right-handed twist of (S)-enantiomeric Bis(Netropsin)s versus the inherent lefthanded twist of (R)-enantiomeric Bis(Netropsin)s, which makes the (S)-enantiomers more complementary to the right-handed twist of B form DNA.

Chapter Three describes the design and synthesis of molecules for the study of metalloregulated DNA binding phenomena. Among a series of Bis(Netropsin)-EDTA compounds linked by homologous tethers bearing four, five, or six oxygen atoms, the Bis(Netropsin) linked by a pentaether tether exhibited strongly enhanced DNA binding/cleaving in the presence of strontium or barium cations. The observed metallospecificity was consistent with the known affinities of metal cations for the cyclic hexaether 18-crown-6 in water. High-resolution DNA affinity cleaving analysis indicated that DNA binding by this molecule in the presence of strontium or barium was not only stronger but of different sequence-specificity than the (weak) binding observed in the absence of metal cations. The metalloregulated binding sites were consistent with A:T binding by the Netropsin subunits and G:C binding by a strontium or barium:pentaether complex. A model for the observed positive metalloregulation and novel sequence-specificity is presented. The effects of 44 different cations on DNA affinity cleaving by P5E:Fe were examined. A series of Bis(Netropsin)-EDTA compounds linked by tethers bearing two, three, four, or five amino groups was also synthesized. These molecules exhibited strong and specific binding to A:T rich regions of DNA. It was found that the iron complexes of these molecules bound and cleaved DNA most efficiently at pH 6.0-6.5, while P5E:Fe bound and cleaved most efficiently at pH 7.5-8.0. Incubating the Bis(Netropsin) Polyamine-EDTA:Fe molecules with K₂PdCl₄ abolished their DNA binding/cleaving activity. It is proposed that the observed negative metalloregulation arises from kinetically inert Bis(Netropsin) Polyamine:Pd(II) complexes or aggregates, which are sterically unsuitable for DNA complexation. Finally, attempts to produce a synthetic metalloregulated DNA binding protein are described. For this study, five derivatives of a synthetic 52 amino acid residue DNA binding/cleaving protein were produced. The synthetic mutant proteins carried a novel pentaether ionophoric amino acid residue at different positions within the primary sequence. The proteins did not exhibit significant DNA binding/cleaving activity, but they served to illustrate the potential for introducing novel amino acid residues within DNA binding protein sequences, and for the development of the tricyclohexyl ester of EDTA as a superior reagent for the introduction of EDT A into synthetic proteins.

Chapter Four describes the discovery and characterization of a new DNA binding/cleaving agent, [SalenMn(III)]OAc. This metal complex produces single- and double-strand cleavage of DNA, with specificity for A:T rich regions, in the presence of oxygen atom donors such as iodosyl benzene, hydrogen peroxide, or peracids. Maximal cleavage by [SalenMn(III)]OAc was produced at pH 6-7. A comparison of DNA singleand double-strand cleavage by [SalenMn(III)]⁺ and other small molecules (Methidiumpropyl-EDTA:Fe, Distamycin-EDTA:Fe, Neocarzinostatin, Bleomycin:Fe) is presented. It was found that DNA cleavage by [SalenMn(III)]⁺ did not require the presence of dioxygen, and that base treatment of DNA subsequent to cleavage by [SalenMn(III)]⁺ afforded greater cleavage and alterations in the cleavage patterns. Analysis of DNA products formed upon DNA cleavage by [SalenMn(III)] indicated that cleavage was due to oxidation of the sugar-phosphate backbone of DNA. Several mechanisms consistent with the observed products and reaction requirements are discussed.

Chapter Five describes progress on some additional studies. In one study, the DNA binding/cleaving specificities of Distamycin-EDTA derivatives bearing pyrrole N-isopropyl substituents were found to be the same as those of derivatives bearing pyrrole N-methyl substituents. In a second study, the design of and synthetic progress towards a series of nucleopeptide activators of transcription are presented. Five synthetic plasmids designed to test for activation of in vitro run-off transcription by DNA triple helix-forming oligonucleotides or nucleopeptides are described.

Chapter Six contains the experimental documentation of the thesis work.

Análise de guias de ondas pelos métodos vetorial magnético e dos elementos-finitos

Neste trabalho, é apresentada uma formulação apropriada à análise de guias de ondas eletromagnéticos, cobrindo do espectro de microondas até o da óptica. Nas regiões a partir do ultravioleta, os comprimentos de onda são equivalentes às dimensões atômicas e a formulação necessita de uma abordagem quântica, que não é considerada neste estudo. A formulação é fundamentada nos métodos vetorial magnético e dos elementos finitos (MEF), em meios não homogêneos, anisotrópicos e não dissipativos, embora a dissipação possa ser facilmente introduzida na análise. Deu-se preferência à formulação com o campo magnético em vez do elétrico, pelo fato do campo magnético ignorar descontinuidades elétricas. Ele é contínuo em regiões de permeabilidade homogênea, propriedade dos meios dielétricos em geral ( = 0), independente da permissividade dos respectivos meios, conquanto os campos elétricos sejam descontínuos entre regiões de permissividades diferentes.

The Molecular Basis of Lysine Acetylation: Addition, Removal, and Recognition

Acetyltransferases and deacetylases catalyze the addition and removal, respectively, of acetyl groups to the epsilon-amino group of protein lysine residues. This modification can affect the function of a protein through several means, including the recruitment of specific binding partners called acetyl-lysine readers. Acetyltransferases, deacetylases, and acetyl-lysine readers have emerged as crucial regulators of biological processes and prominent targets for the treatment of human disease. This work describes a combination of structural, biochemical, biophysical, cell-biological, and organismal studies undertaken on a set of proteins that cumulatively include all steps of the acetylation process: the acetyltransferase MEC-17, the deacetylase SIRT1, and the acetyl-lysine reader DPF2. Tubulin acetylation by MEC-17 is associated with stable, long-lived microtubule structures. We determined the crystal structure of the catalytic domain of human MEC-17 in complex with the cofactor acetyl-CoA. The structure in combination with an extensive enzymatic analysis of MEC-17 mutants identified residues for cofactor and substrate recognition and activity. A large, evolutionarily conserved hydrophobic surface patch distal to the active site was shown to be necessary for catalysis, suggesting that specificity is achieved by interactions with the alpha-tubulin substrate that extend outside of the modified surface loop. Experiments in C. elegans showed that while MEC-17 is required for touch sensitivity, MEC-17 enzymatic activity is dispensible for this behavior. SIRT1 deacetylates a wide range of substrates, including p53, NF-kappaB, FOXO transcription factors, and PGC-1-alpha, with roles in cellular processes ranging from energy metabolism to cell survival. SIRT1 activity is uniquely controlled by a C-terminal regulatory segment (CTR). Here we present crystal structures of the catalytic domain of human SIRT1 in complex with the CTR in an apo form and in complex with a cofactor and a pseudo-substrate peptide. The catalytic domain adopts the canonical sirtuin fold. The CTR forms a beta-hairpin structure that complements the beta-sheet of the NAD^+-binding domain, covering an essentially invariant, hydrophobic surface. A comparison of the apo and cofactor bound structures revealed conformational changes throughout catalysis, including a rotation of a smaller subdomain with respect to the larger NAD^+-binding subdomain. A biochemical analysis identified key residues in the active site, an inhibitory role for the CTR, and distinct structural features of the CTR that mediate binding and inhibition of the SIRT1 catalytic domain. DPF2 represses myeloid differentiation in acute myelogenous leukemia. Finally, we solved the crystal structure of the tandem PHD domain of human DPF2. We showed that DPF2 preferentially binds H3 tail peptides acetylated at Lys14, and binds H4 tail peptides with no preference for acetylation state. Through a structural and mutational analysis we identify the molecular basis of histone recognition. We propose a model for the role of DPF2 in AML and identify the DPF2 tandem PHD finger domain as a promising novel target for anti-leukemia therapeutics.

Invertebrate communities in northern Lake Victoria, with reference to their potential for fishery production

The zooplankton and macrobenthic communities of Lake Victoria were sampled by lift net and Ponar grab, respectively. The zooplankton comprised copepods and cladocerans, rotifers and aquatic insect larvae. Most taxa exhibited wide distribution in the lake, with the exception of rotifers which were rare in deep offshore waters. The main components in the macro-benthos were chaoborid and chironomid larvae and molluscs. Caridina nilotica (Roux) and other groups were rare in the samples. Zooplankton density ranged from 100000 or more to 4 million ind. m2 and increased from the shallow inshore to deep offshore waters. Numerical dominance of cyclopoids and nauplius larvae was a common feature at all stations sampled. Most macrobenthic taxa were also widely distributed, although chaoborid and chironomid larvae were rare in the samples. Rastrineobola argentea (Pellegrin) and larval Lates niloticus (L.) ate mainly cyclopoid copepods, while cichlids showed a strong preference for adult insects. High ecological stability of the cyclopoids, and the zooplankton community in general, despite radical ecosystem changes in recent years, coupled with what appears to be high predation pressure, offers good prospects for the pelagic fishery in the lake.

Faunistic studies

An update on the work undertaken by the authors, Macan and Hynes, over the past year. Macan provides details of additional work undertaken since his publication of faunistic work on adult animals, including details on additional field data, further developments of the conclusions intially drawn and further comparisons with fauna of the highlands of Scotland. Two histograms are provided showing succession of Corixidae in two separate waterbodies. Habitat conditions are also discussed for this species and a number of locations are mentioned including, Blelham Tarn, Derwentwater and Rusland Moss. An update on stonefly work undertaken by Hynes is provided, specifically stomach contents of nymphs and habitat preference. Details are also given of aquatic insects being breed by the staff for research.

Prosa argumentativa em língua inglesa: um estudo contrastivo sobre advérbios em corpora digitais

Esta pesquisa tem como objetivo principal investigar como aprendizes brasileiros de língua inglesa usam advérbios com terminação em ly no inglês escrito, e comparar ao uso que deles fazem os falantes de inglês como língua materna. Para tanto, o trabalho encontra suporte teórico e metodológico na Linguística de Corpus e fundamenta-se na área chamada de pesquisa sobre corpora de aprendizes, que se ocupa da coleta e armazenagem de dados linguísticos de sujeitos aprendizes de uma língua estrangeira, para a formação de um corpus que possa ser utilizado para fins descritivos e pedagógicos. Esta área objetiva identificar em que aspectos os aprendizes diferem ou se assemelham aos falantes nativos. Os corpora empregados na pesquisa são o corpus de estudo (Br-ICLE), contendo inglês escrito por brasileiros, compilado de acordo com o projeto ICLE (International Corpus of Learner English) e dois corpora de referência (LOCNESS e BAWE), contendo inglês escrito por falantes de inglês como língua materna. Os resultados indicam que os alunos brasileiros usam, em demasia, as categorias de advérbios que indicam veracidade, realidade e intensidade, em relação ao uso que deles fazem os falantes nativos, além de usarem esses advérbios de forma distinta. Os resultados sugerem que, além das diferenças apresentadas em termos de frequência (seja pelo sobreuso ou subuso dos advérbios), os aprendizes apresentavam combinações errôneas, ou em termos de colocados ou em termos de prosódia semântica. E finalmente a pesquisa revela que a preferência dos aprendizes por advérbios que exprimem veracidade, realidade e intensidade cria a impressão de um discurso muito assertivo. Conclui-se que as diferenças encontradas podem estar ligadas a fatores como o tamanho dos corpora, a influência da língua materna dos aprendizes, a internalização dos elementos linguísticos necessários para a produção de um texto em língua estrangeira, a falta de fluência dos aprendizes e o contexto de sala de aula nas universidades

Structural Design under Seismic Risk Using Multiple Performance Objectives

Structural design is a decision-making process in which a wide spectrum of requirements, expectations, and concerns needs to be properly addressed. Engineering design criteria are considered together with societal and client preferences, and most of these design objectives are affected by the uncertainties surrounding a design. Therefore, realistic design frameworks must be able to handle multiple performance objectives and incorporate uncertainties from numerous sources into the process.

In this study, a multi-criteria based design framework for structural design under seismic risk is explored. The emphasis is on reliability-based performance objectives and their interaction with economic objectives. The framework has analysis, evaluation, and revision stages. In the probabilistic response analysis, seismic loading uncertainties as well as modeling uncertainties are incorporated. For evaluation, two approaches are suggested: one based on preference aggregation and the other based on socio-economics. Both implementations of the general framework are illustrated with simple but informative design examples to explore the basic features of the framework.

The first approach uses concepts similar to those found in multi-criteria decision theory, and directly combines reliability-based objectives with others. This approach is implemented in a single-stage design procedure. In the socio-economics based approach, a two-stage design procedure is recommended in which societal preferences are treated through reliability-based engineering performance measures, but emphasis is also given to economic objectives because these are especially important to the structural designer's client. A rational net asset value formulation including losses from uncertain future earthquakes is used to assess the economic performance of a design. A recently developed assembly-based vulnerability analysis is incorporated into the loss estimation.

The presented performance-based design framework allows investigation of various design issues and their impact on a structural design. It is a flexible one that readily allows incorporation of new methods and concepts in seismic hazard specification, structural analysis, and loss estimation.

Análise comparativa dos modelos de cálculo dos retornos anormais utilizando o evento recompra de ações na Bovespa

Este trabalho tem por objetivo verificar se há diferença quanto ao nível de significância estatística no cálculo do retorno anormal realizado através de quatro modelos estatísticos utilizados em estudos de eventos, tendo como objeto de estudo empresas no mercado de ações no Brasil durante o período de março de 2003 até julho de 2010 na Bovespa. Considerando a importância do cálculo do retorno anormal nos estudos de eventos, bem como possíveis variações de resultados decorrentes da escolha do modelo de cálculo, este estudo utiliza um tema bastante conhecido, qual seja, o anúncio de recompra de ações feito pela própria companhia emissora dos títulos. A metodologia utilizada nesta pesquisa foi quantitativa, utilizando o estudo de corte transversal. Os resultados apontam que há diferença entre os níveis de significância encontrados. Ao analisar o gráfico dos modelos calculados no período da janela do evento, verificou-se que as empresas que recompraram ações a fizeram quando os papéis estavam com retorno anormal acumulado negativo e, após a recompra, os papéis tiveram retornos anormais acumulados positivos. Recalculou-se os dois modelos que utilizam o Ibovespa em sua fórmula de cálculo, através de um Ibovespa sem ponderação e conclui-se que os resultados apontam na direção de se evitar o uso de índices ponderados de mercado, preferindo a utilização de carteiras compostas apenas com uma ação para cada empresa componente da carteira de controle. Após este recálculo, verificou-se que o modelo que era menos próximo dos demais graficamente era o modelo de retorno ajustado ao mercado ponderado. Por fim, as evidências empíricas indicam que o mercado de capitais brasileiro ajusta tempestivamente os papéis das empresas que realizaram recompra de ações, em linha com o que prescreve a hipótese do mercado eficiente na sua forma semiforte.

Scale-Dependent Habitat Selection of Nesting Great Egrets and Snowy Egrets

Foraging habitat selection of nesting Great Egrets ( Ardea alba ) and Snowy Egrets ( Egretta thula ) was investigated within an estuary with extensive impounded salt marsh habitat. Using a geographic information system, available habitat was partitioned into concentric bands at five, ten, and 15 km radius from nesting colonies to assess the relative effects of habitat composition and distance on habitat selection. Snowy Egrets were more likely than Great Egrets to depart colonies and travel to foraging sites in groups, but both species usually arrived at sites that were occupied by other wading birds. Mean flight distances were 6.2 km (SE = 0.4, N = 28, range 1.8-10.7 km) for Great Egrets and 4.7 km (SE = 0.48, N = 31, range 0.7-12.5 km) for Snowy Egrets. At the broadest spatial scale both species used impounded (mostly salt marsh) and estuarine edge habitat more than expected based on availability while avoiding unimpounded (mostly fresh water wetland) habitat. At more local scales habitat use matched availability. Interpretation of habitat preference differed with the types of habitat that were included and the maximum distance that habitat was considered available. These results illustrate that caution is needed when interpreting the results of habitat preference studies when individuals are constrained in their choice of habitats, such as for central place foragers.

A vida após a alta

Esta tese discute a vida após a alta hospitalar através de uma etnografia da experiência de um grupo de famílias, ao cuidarem de um membro dependente de cuidados de saúde. Foi realizada entre agosto de 2001 e julho de 2005 em Juiz de Fora-MG. O foco da investigação foi a convivência cotidiana da família com um membro requerendo cuidados de saúde especializados após ter recebido assistência de alta complexidade. O objetivo foi compreender a questão: como a família cuida, em casa, de um familiar que necessita de cuidados de saúde após a alta hospitalar? Adotamos a etnografia orientada por Geertz (1989), que nos permitiu, através da análise interpretativa das teias de significados apreendidas pela observaçãoconvivência com os sujeitos, uma compreensão de como o fenômeno (cuidado) se evidencia e se transforma em experiência nas relações que se estabelecem dentro e fora da família. A identificação das famílias-sujeito iniciou com a observação das internações na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) do Hospital Universitário da Universidade Federal de Juiz de Fora, no segundo semestre de 2003, seguida da observação nas enfermarias e, posteriormente, nos seus domicílios. De 137 pacientes internados nesta UTI naquele semestre, 59 foram a óbito, 12 foram transferidos para outro hospital da cidade, por demandarem tecnologias não oferecidas pela instituição e 66 tiveram alta hospitalar na condição de melhorado. Destes, observamos 12 casos, residentes na cidade de Juiz de Fora, que compartilham de uma mesma cultura assistencial e que foram submetidas a um mesmo padrão de organização e de fluxo de atendimento no sistema de saúde local. Destas, uma família se destacou como principal sujeito, pela repetição de eventos significativos à questão principal da pesquisa e utilizamos dados de outras cinco dentre as observadas. Os dados foram arquivados em um banco de dados qualitativos LOGOS. A prioridade nos cuidados com o corpo; a dependência dos serviços de saúde especializados do SUS e as alterações na organização e no funcionamento da família, com redefinições de papéis, para se adaptar à realidade de convivência com um membro doente, estão dentre os achados. Dois fenômenos que se relacionam com o desenvolvimento da experiência de cuidar pelas famílias se destacaram: a individualização na família, que parece influenciar a forma de abordagem clínica (individualizada) pelos profissionais de saúde, e uma concepção de família como sujeito coletivo Bourdieu (1998) como possibilidade para o planejamento de ações coletivas. O sofrimento, observado pela contínua convivência dos sujeitos com sentimentos de angústia nas trajetórias de busca de cuidados no Sistema, nas instituições de saúde, evidenciou a desassistência a que esse grupo de cidadãos está exposto no modelo assistencial vigente. A lida das famílias com uma diversidade de cuidados, incluindo a prática de cuidados técnicos desencadeou uma rede extrafamiliar de aproximações, para o enfrentamento das necessidades. Apesar da dependência de tecnologias, de saberes técnicos e das restrições no acesso a esses, evidenciou-se um tipo de autonomia pelos sujeitos na prática de cuidados no espaço intrafamiliar e no entorno micro-sociológico de convivência. No Sistema de Saúde a preferência primeira das famílias para busca de ajuda é o hospital, depois, as unidades de referência secundária e, por último, as Equipes de Saúde da Família (ESF). A procura pelas ESF é por que estas representam parte obrigatória no fluxo inicial dos usuários do SUS local, garantem a aquisição de medicamentos, oferecem serviços de natureza cartorial, como atestados e pareceres para juiz e, ainda, encaminhamentos e solicitação de exames.

Ecologia alimentar e estratégias de germinação de sementes consumidas por marsupiais (Didelphimorphia: Didelphidae) em uma área de Cerrado no sudeste do Brasil

No Brasil, a Família Didelphidae é composta por 54 espécies com ampla distribuição por diferentes habitats e um padrão de consumo alimentar que pode variar desde espécies mais frugívoras até as mais insetívoras/carnívoras. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre a dieta de sete espécies de didelfídeos (Caluromys philander, Didelphis albiventris, Gracilinanus agilis, G. microtarsus, Marmosa (Micoureus) paraguayana, Marmosops incanus e Metachirus nudicaudatus) e a seleção de recursos alimentares (artrópodes e frutos) disponíveis. O estudo foi realizado entre novembro de 2009 e outubro de 2011, em uma área de mata ciliar de cerrado no Parque Estadual do Rio Preto, Minas Gerais, Brasil. Artrópodes, frutos, flores e vertebrados foram consumidos em diferentes proporções pelas espécies estudadas. Flores e vertebrados foram consumidos preferencialmente na estação seca e a diversidade da dieta de todas as espécies foi maior durante a estação chuvosa. Nem todos os recursos (artrópodes e frutos) foram consumidos de acordo com sua disponibilidade na área de estudo. Apesar de abundante, Hymenoptera (Formicidade) foi rejeitado por todas as espécies, sendo consumido abaixo de sua disponibilidade local. Os didelfídeos selecionaram frutos de Melastomataceae (Clidemia urceolata e Miconia spp.) e rejeitaram frutos de Rubiaceae, um recurso altamente abundante na área de estudo. Os resultados sugerem que o frequente consumo de um item alimentar pode estar associado tanto com a preferência (seleção) por parte do consumidor, bem como com a disponibilidade local do recurso. A maior parte das sementes, que permaneceram intactas após passagem pelo trato digestório dos animais, não apresentou diferenças significativas em suas taxas de germinação quando comparadas com as sementes do grupo controle e o tempo médio de dormência das sementes consumidas pelos marsupiais variou entre 30 (Cipocereus minensis) e 175 dias (Cordiera sessilis). Gracilinanus agilis e G. microtarsus, que ocorrem em simpatria na área de estudo, apesar de apresentarem uma alta sobreposição de nicho apresentaram diferenças no uso do habitat e na diversidade da dieta.

Direito de preferência.

A presente dissertação trata do direito de preferência para a celebração de negócios jurídicos, em geral translatícios de propriedade, que não encontra definição expressa no Código Civil, muito embora diversos dispositivos legais aludam ao referido direito. Na medida em que limita a liberdade contratual do vinculado à prelação, no tocante à escolha do outro contraente, a preferência, de origem legal ou negocial, atribui ao sujeito ativo da relação prelatícia o direito de ser preferido. Para tal, exige-se que o vinculado à preferência tenha decidido, de maneira livre e inequívoca, celebrar um contrato preferível, e que a sua intenção se tenha materializado, com a presença de um terceiro efetivamente interessado em com ele contratar. Constituído o direito do preferente, o que em geral chega a seu conhecimento por meio de notificação extrajudicial remetida pelo obrigado à prelação, pode aquele manifestar interesse em preferir, ou não. No primeiro caso, nasce na esfera jurídica do vinculado à prelação o dever de com ele contratar, nos mesmos termos e condições ajustados com terceiro. Dever este cuja violação, a depender da eficácia, real ou obrigacional, da preferência, possibilitará ao sujeito ativo perseguir não só as perdas e danos por ele eventualmente sofridas em decorrência do desrespeito a seu direito, como também, cumulativamente, lhe facultará exigir o cumprimento específico da obrigação. Neste último caso, o negócio jurídico celebrado entre o obrigado à preferência e terceiro será, perante o preferente, inoponível.

Pragmatemas e a música no ensino-aprendizagem de inglês como língua adicional em um colégio estadual do RJ: papel na retenção lexical

O presente estudo analisa as contribuições do uso da música e de pragmatemas na retenção lexical por parte de três turmas de inglês como língua adicional em uma escola estadual na cidade de São João de Meriti (RJ). Para tal, constituiu três condições de pesquisa das quais fizeram parte doze alunos na turma 1 (T1); doze alunos na turma 2 (T2); e nove alunos na turma 3 (T3). A turma 1 (T1) participou de práticas pedagógicas com foco na música e sem foco explícito nos pragmatemas presentes na letra; a turma 2 (T2) de práticas pedagógicas com foco na música e nos pragmatemas da letra; e a turma 3 (T3) de práticas pedagógicas voltadas somente para o ensino-aprendizagem dos pragmatemas presentes na letra, sem o suporte da música. Anteriormente à intervenção, foi aplicado um questionário sobre os hábitos sócio-culturais dos participantes visando conhecer suas preferências musicais e perfil de letramento. Para analisar a relação entre o uso da música e de pragmatemas na retenção lexical, foram aplicados um pré-teste antes da intervenção e dois pós-testes com intervalo de 1 mês entre eles. Além disso, o estudo contou com uma entrevista semi-estruturada com os participantes, visando entender a percepção dos mesmos sobre as práticas utilizadas na intervenção. Os achados apontam que houve uma retenção ligeiramente superior nas condições T2 (música e foco nos pragmatemas) e T3 (foco exclusivo nos pragmatemas), com ligeira superioridade para a condição 3. O pragmatema recuperado com maior frequência foi "What's up", fato que pode ser parcialmente explicado pelo fato de ser pronunciado como uma palavra só e pelo número de letras que o representa ortograficamente. Estudos futuros poderão esclarecer se há significância estatística entre as diferenças encontradas assim como melhor explorar como o ensino explícito de unidades lexicais complexas pode contribuir para a retenção desses itens lexicais e consequentemente para o ensino-aprendizagem de línguas adicionais. A intervenção permitiu que os aprendizes passassem a entender que as palavras não ocorrem de modo isolado, mas que sempre caminham junto a outras. Permitiu também que a rotina pedagógica contemplasse a coconstrução do conhecimento, levando os aprendizes a reagir positivamente às práticas utilizadas no ensino de inglês, conforme relatos durante as entrevistas semi-estruturadas. Isso per se já justifica a utilização de práticas semelhantes e ilustra a contribuição do presente estudo

O contraste como estratégia discursiva : uma análise de enunciados jurídicos

Esta tese tem como foco de seu estudo as estruturas contrastivas em Língua Portuguesa. Desenvolvem-se aqui, a partir de uma pesquisa bibliográfica, considerações sobre o contraste segundo visões diversas, como a da Gramática Tradicional, a da Semiolingüística do Discurso e a da Semântica Argumentativa. Para análise destas construções e observação dos aspectos apontados, foram utilizadas como corpus as iniciais, contestações e alegações finais de peças processuais da área jurídica, com o objetivo de observar em que momentos estas estruturas se manifestam e qual a sua função no discurso. O método empregado para o levantamento do corpus utilizado compreendeu a escolha aleatória de 69 peças processuais das áreas trabalhista, cível, tributária e penal, nas quais foi levantado um total de 475 enunciados contrastivos. Das peças, uma inicial e uma contestação foram escolhidas, sob o critério da quantidade e diversidade de ocorrências, para uma análise no último capítulo, a fim de observar se o emprego do contraste é relevante para este tipo de texto processual e em que medida ele interfere na recepção do argumento proposto. A partir da análise dos enunciados, percebeu-se que esta estrutura é bastante interessante para a argumentação, pois traz para o discurso outras vozes que entram em diálogo, seja por meio de uma das asserções, seja por meio de implícitos. Estas vozes trazidas para o discurso têm a função de adiantar o pensamento do receptor, para trazê-lo para o lado do emissor, ou a função de retomar o que o locutor da parte contrária disse, para afirmar o contrário. Ademais, percebeu-se que, quando utilizadas corretamente, estas estruturas conferem maior credibilidade ao discurso, porque, juntamente com outros aspectos discursivos, são marcas de um discurso bem elaborado. Observou-se também que elas não são utilizadas com muita freqüência pelos advogados no âmbito jurídico, em função de vários fatores, dentre os quais o excesso de objetividade, a ausência de conhecimento dos efeitos destas construções, a falta de argumentação e a má elaboração de algumas peças. As estruturas mais utilizadas são as adversativas, com a conjunção mas. Dentre as concessivas, é ostensiva a preferência pelo emprego de não obstante e suas variantes nada obstante e *inobstante (esta não dicionarizada), em detrimento da conjunção concessiva típica do discurso corrente embora.

A dinâmica da demanda por serviços de saúde no município de Piraí, RJ, do ponto de vista da medicalização

Apesar da definição da Estratégia de Saúde da Família (ESF) como porta de entrada preferencial do sistema de saúde e estratégia de reorganização da assistência, os usuários do SUS, vêm demonstrando historicamente preferência pelo serviço de urgência/emergência hospitalar. Neste contexto, o campo do presente estudo é a cidade de Piraí e seus habitantes, que desde 2002 contam com 100% de cobertura da ESF, modelo que dá ênfase: à lógica territorial na assistência, no cuidado continuado e transversal, no vínculo e no acesso facilitado pelo acolhimento humanizado e escuta qualificada; ocupando o centro da rede de serviços atuando como ordenador e coordenador do cuidado. Avaliando os dados de produtividade (com foco nas consultas médicas) hospitalar e da ESF notamos que a busca por assistência médica hospitalar, tem aumentado exponencialmente, e pode-se perceber que a grande maioria destes usuários se apresenta ao serviço com demandas de atenção básica, o que é considerado ilógico e contraditório na visão de gestores e profissionais. A prática profissional tem me levado a um processo de reflexão sobre as expectativas dos usuários ao procurarem o sistema de saúde (principalmente a ESF), sobre os caminhos que cada um deles constrói diante de uma questão de saúde e como se dá a tomada de decisão em busca da resolutividade da questão. Dessa forma, o objetivo deste trabalho é compreender como se constrói essa demanda; que critérios estão envolvidos na tomada de decisão desses usuários ao optarem pelo serviço de emergência como porta de entrada preferencial; mesmo em um município que oferece um serviço estruturado, pautado nas diretrizes da ESF e com uma cobertura que alcança toda a sua população. Acreditamos que o processo conhecido como medicalização da vida, que descreve o processo pelo qual problemas não médicos são definidos e tratados como problemas médicos, usualmente em termos de doenças e desordens (CONRAD, 2007); influencie na construção dessa demanda. Quanto a metodologia, foram realizadas entrevistas semiestruturadas, com usuários do SUS, residentes no município e que buscaram espontaneamente o serviço de urgência/emergência hospitalar. Verificou-se que a imagem que o usuário faz dos serviços de saúde se relaciona principalmente com o tempo de espera pelo atendimento, o acesso (interpretado principalmente como a certeza/incerteza do atendimento) e a acessibilidade. Os usuários frequentemente se referem à organização das unidades da ESF com o significado de barreiras ao acesso (principalmente pela necessidade de agendamento) e demonstram ter em relação às USF uma imagem de grande limitação de recursos humanos (quase exclusivamente em relação ao médico) e materiais. Por outro lado, prontos-socorros e hospitais se apresentam para eles, por várias razões, como espaços de acesso garantido. É importante ressaltar que o processo de medicalização da vida aparece como parte importante da engrenagem que move a construção dessa demanda.