杉木连栽致害真菌拮抗菌Bacillus subtilis3728的研究

杉木是我国重要的速生丰产树种，分布在北纬21°41′到33°41′，东经102°到122°的广大地区，杉木人工林面积约占我国人工林总面积的1/4，随着连栽代数的增加，土壤中毒和生产力下降程度日趋严重。 本论文以分离自与红树林、珍珠贝、海兔子、海绵、软珊瑚等与海洋动、植物共栖或共生存的106株海洋微生物(54株放线菌，52株细菌)为资源，以杉木连栽致害真菌尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)菌株SF2为靶菌，通过平板对峙试验和土壤原位定殖试验，筛选到一株分离自红树林木榄(Bruguiera gymnorrhizo)根际土壤的海洋细菌3728菌株；该菌对SF2具有很强抑菌活性，能够高密度在杉木根际土壤中定殖，对杉木幼苗的生长有一定的促进作用。采用传统的细菌学和分子生物学的鉴定方法对其进行了菌种鉴定，为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 通过对抗菌谱的研究，发现海洋细菌3728除了对杉木连栽主要致害真菌尖孢镰刀菌萎蔫专化型菌株SF2有很强的抑菌活性外，对大豆连作致害菌 (Penicillium purpurogenum)，棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)，棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)，大豆根腐病菌(Fusarium solani)以及小麦赤霉病菌(Fusarium graminerum)等也有较强的抑制作用。室内模拟试验还表明，在土壤中接种海洋细菌3728后，能够明显增加土壤中氨化细菌和氨化真菌的数量，能够增加土壤中功能性微生物——纤维素分解细菌和纤维素分解真菌的数量和种类，增强了纤维素分解能力。再添加C/N比较低的白三叶草凋落物，土壤中氨化细菌、氨化真菌的数量继续增加，土壤纤维素分解能力更显著提高。这为进一步开展对杉木连栽障碍的生物调控试验，提供了一定的科学依据。

Electrospray ionization multiple-stage tandem mass spectrometric analysis of diglycosyldiacylglycerol glycolipids from the bacteria Bacillus pumilus

Electrospray ionization (ESI) combined with multiple-stage tandem mass spectrometry (MSn) was used to directly analyze the glycolipid mixture from bacteria Bacillus pumilus without preliminary separation. Full scan ESI-MS revealed the composition of picomole quantities of glycerolglycolipid species containing C-14-C-19 fatty acids, some of which were monounsaturated, Two main components were identified from their molecular masses and fragmentation pathways. The fragmentation pathway of the known compound compared with the investigated compound verified the proposed structure as 1(3)-acyl-2-pentadecanoyl-3(1)-O-[beta-D-glucopyranosyl-(1-->6)-O-beta-D-glucopyranosyl]-sn-glycerols. A comparison of the multiple tandem mass spectra of the different alkali-metal cation adducts indicates that the intensity of fragments and the dissociation pathways are dependent on the alkali-metal type, The basic structures of glycerolglycolipids were reflected clearly from the fragmentation patterns of the sodium cations, The intense fragments of the sugar residue from the precursor ions were obtained from the lithiated adduct ions. ESI-MSn spectra of [M + K](+) ions did not provide as much fragmentation as [M + Na](+) and [M + Li](+) adducts, but their spectra allow the position of glycerol acylation to be determined. On the basis of MS2 spectra of[M + K](+) ions, it was established that all components have a C-15:0 fatty acid at the sn-2 position of the glycerol backbone and C-14-C-19 acids at the sn-1 position of the glycerol backbone. Copyright (C) 1999 John Wiley & Sons, Ltd.

PCR-DGGE analysis of intestinal bacteria and effect of Bacillus spp. on intestinal microbial diversity in kuruma shrimp (Marsupenaeus japonicus)

In this study, the intestinal microbiota of kuruma shrimp (Marsupenaeus japonicus) was examined by molecular analysis of the 16S rDNA to identify the dominant intestinal bacteria and to investigate the effects of Bacillus spp. on intestinal microbial diversity. Samples of the intestines of kuruma shrimp fed normal feed and Bacillus spp. amended feed. PCR and denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) analyses were then performed on DNA extracted directly from the guts. Population fingerprints of the predominant organisms were generated by DGGE analysis of the universal V3 16S rDNA amplicons, and distinct bands in the gels were sequenced. The results suggested that the gut of kuruma shrimp was dominated by Vibrio sp. and uncultured gamma proteobacterium. Overall, the results of this study suggest that PCR-DGGE is a possible method of studying the intestinal microbial diversity of shrimp.

Influência de Bacillus subtilis na promoção de crescimento de plantas e nodulação de raízes de feijoeiro.

Linhagens de B. subtilis têm sido bem estudadas como agentes de controle biológico, e também como produtoras de antibióticos. Uma linhagem de B. subtilis 0G isolada de solos supressivos a Fusarium solani foi avaliada quanto à utilização conjunta com Rhizobium phaseoli em feijoeiro, visando aumento de biomassa e nodulação de raízes. Em condições de casa de vegetação, a aplicação de B. subtilis, via sementes, promoveu um aumento na nodulação, em mais de 100%, em solo natural quando aplicado isoladamente ou em conjunto com R. phaseoli e em mais de 160% em solo esterilizado, quando comparado com o tratamento onde o Rhizobium foi aplicado isoladamente. Em solos esterilizados, a aplicação de B. subtilis, em conjunto com Rhizobium, promoveu um aumento significativo no peso da matéria seca das raízes (89%) e da parte aérea (83%). O tratamento de sementes com B. subtilis não afetou a emergência de plântulas em nenhum dos solos estudados. Pelos resultados obtidos pode-se concluir que a utilização de B. subtilis é bastante promissora para aumentar a nodulação de raízes e promover o crescimento de plantas de feijoeiro.

Desenvolvimento de marcador molecular para Bacillus subtilis utilizando proteomics.

2003

Uso de meios alternativos para a produção de bioinseticidas à base de Bacillus thuringiensis.

2005

Controle biológico da lagarta do cartucho, Spodoptera frugiperda, com Bacillus thuringiensis.

2008

Qualidade na extração plasmidial de Bacillus thuringiensis com diferentes meios de cultura.

2009

Controle Biológico de traça-da-cera com Bacillus thuringiensis para a conservação de favos na apicultura sustentável e agricultura familiar.

As abelhas melíferas efetuam numerosas e importantes atividades que favorecem a humanidade e, na agricultura familiar, contribuem para a sustentabilidade de sistemas de produção de base ecológica, favorecendo a polinização dos cultivos, a produção de mel, pólen e própolis para alimentação da família e a geração de novas fontes de renda. Na apicultura, a conservação dos favos contra o risco de ataque e destruição pelas traças-da-cera é assunto de interesse econômico e motivação de uma série de estratégias pelos apicultores. Com o objetivo de avaliar a possibilidade de uso de formulações comerciais de Bacillus thuringiensis como agente biológico de conservação natural de favos de cera de abelhas melíferas, foi testada a mortalidade de lagartas de Galleria mellonella a diferentes concentrações de B. thuringiensis e verificado o impacto destas concentrações sobre Apis mellifera africanizadas em fase larval. Testes foram conduzidos em laboratório com lagartas de G. mellonella e a campo com larvas de A. mellifera africanizadas, em delineamentos completamente casualizados, com seis tratamentos e quatro repetições, em concentrações próximas da dose de campo recomendada para o produto comercial à base de B. thuringiensis. Concluiu-se que a aplicação de B. thuringiensis nas maiores concentrações utilizadas apresenta efeito favorável ao controle de G. mellonella quando os favos são imersos no produto e que, porém, as mesmas concentrações apresentam efeito direto significativo sobre a mortalidade de larvas de A. mellifera.

Pesquisa computacional de inibidores de fatores de virulência de bacillus anthracifs

Projeto de Pós-Graduação/Dissertação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas

Electrostatic Energetics of Bacillus subtilis Ribonuclease P Protein Determined by Nuclear Magnetic Resonance-Based Histidine pKa Measurements.

The pKa values of ionizable groups in proteins report the free energy of site-specific proton binding and provide a direct means of studying pH-dependent stability. We measured histidine pKa values (H3, H22, and H105) in the unfolded (U), intermediate (I), and sulfate-bound folded (F) states of RNase P protein, using an efficient and accurate nuclear magnetic resonance-monitored titration approach that utilizes internal reference compounds and a parametric fitting method. The three histidines in the sulfate-bound folded protein have pKa values depressed by 0.21 ± 0.01, 0.49 ± 0.01, and 1.00 ± 0.01 units, respectively, relative to that of the model compound N-acetyl-l-histidine methylamide. In the unliganded and unfolded protein, the pKa values are depressed relative to that of the model compound by 0.73 ± 0.02, 0.45 ± 0.02, and 0.68 ± 0.02 units, respectively. Above pH 5.5, H22 displays a separate resonance, which we have assigned to I, whose apparent pKa value is depressed by 1.03 ± 0.25 units, which is ∼0.5 units more than in either U or F. The depressed pKa values we observe are consistent with repulsive interactions between protonated histidine side chains and the net positive charge of the protein. However, the pKa differences between F and U are small for all three histidines, and they have little ionic strength dependence in F. Taken together, these observations suggest that unfavorable electrostatics alone do not account for the fact that RNase P protein is intrinsically unfolded in the absence of ligand. Multiple factors encoded in the P protein sequence account for its IUP property, which may play an important role in its function.

Effect of Bacillus thuringiensis naturally colonising Brassica campestris var. chinensis leaves on neonate larvae of Pieris brassicae

The feeding of neonate larvae of Pieris brassicae (Order Lepidoptera) on leaves of brassica plants that had been colonised by Bacillus thuringiensis resulted in the death of 35% of the population within 72 h. The bacteria Multiplied in the cadavers, resulting in an increase of about 50-fold compared to the living insects. Surviving insects showed no ill effects during the time of the study. There was negligible multiplication of B. thuringiensis in the frass. (C) 2009 Elsevier Inc. All rights reserved.