Étude des tachykinines et de leurs dérivés peptidiques associés à la douleur neuropathique grâce à l’utilisation de modèles animaux et de la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse

Thèse réalisée en co-tutelle avec l'Université Claude Bernard de Lyon 1, en France.

Régulation de l'expression de PPARγ dans l'arthrose

L’arthrose (OA) est une maladie dégénérative très répondue touchant les articulations. Elle est caractérisée par la destruction progressive du cartilage articulaire, l’inflammation de la membrane synoviale et le remodelage de l’os sous chondral. L’étiologie de cette maladie n’est pas encore bien définie. Plusieurs études ont été menées pour élucider les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans le développement de l’OA. Les effets protecteurs du récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes gamma (PPARγ) dans l'OA sont bien documentés. Il a été démontré que PPARγ possède des propriétés anti-inflammatoires et anti-cataboliques. Aussi, plusieurs stimuli ont été impliqués dans la régulation de l’expression de PPARγ dans différents types cellulaires. Cependant, les mécanismes exacts responsables de cette régulation ainsi que le profil de l’expression de ce récepteur au cours de la progression de l’OA ne sont pas bien connus. Dans la première partie de nos travaux, nous avons essayé d’élucider les mécanismes impliqués dans l’altération de l’expression de PPARγ dans cette maladie. Nos résultats ont confirmé l’implication de l’interleukine-1β (IL-1β), une cytokine pro-inflammatoire, dans la réduction de l’expression de PPARγ au niveau des chondrocytes du cartilage articulaire. Cet effet coïncide avec l'induction de l’expression du facteur de transcription à réponse précoce de type 1 (Egr-1). En plus, la diminution de l'expression de PPARγ a été associée au recrutement d'Egr-1 et la réduction concomitante de la liaison de Sp1 au niveau du promoteur de PPARγ. Dans la deuxième partie de nos travaux, nous avons évalué le profil d’expression de ce récepteur dans le cartilage au cours de la progression de cette maladie. Le cochon d’inde avec OA spontanée et le chien avec OA induite par rupture du ligament croisé antérieur (ACLT) deux modèles animaux d’OA ont été utilisés pour suivre l’expression des trois isoformes de PPARs : PPAR alpha (α), PPAR béta (β) et PPAR gamma (γ) ainsi que la prostaglandine D synthase hématopoïétique (H-PGDS) et la prostaglandine D synthase de type lipocaline (L-PGDS) deux enzymes impliquées dans la production de l’agoniste naturel de PPARγ, la 15-Deoxy-delta(12,14)-prostaglandine J(2) (15d-PGJ2). Nos résultats ont démontré des changements dans l’expression de PPARγ et la L-PGDS. En revanche, l’expression de PPARα, PPARβ et H-PGDS est restée stable au fil du temps. La diminution de l’expression de PPARγ dans le cartilage articulaire semble contribuer au développement de l’OA dans les deux modèles animaux. En effet, le traitement des chondrocytes par de siRNA dirigé contre PPARγ a favorisé la production des médiateurs arthrosiques tels que l'oxyde nitrique (NO) et la métalloprotéase matricielle de type 13 (MMP-13), confirmant ainsi le rôle anti-arthrosique de ce récepteur. Contrairement à ce dernier, le niveau d'expression de la L-PGDS a augmenté au cours de la progression de cette maladie. La surexpression de la L-PGDS au niveau des chondrocytes humains a été associée à la diminution de la production de ces médiateurs arthrosiques, suggérant son implication dans un processus de tentative de réparation. En conclusion, l’ensemble de nos résultats suggèrent que la modulation du niveau d’expression de PPARγ, de la L-PGDS et d’Egr-1 au niveau du cartilage articulaire pourrait constituer une voie thérapeutique potentielle dans le traitement de l’OA et probablement d’autres formes d'arthrite.

Impaired Vasodilator Activity in Deoxycorticosterone Acetate-Salt Hypertension Is Associated With Increased Protein O-GlcNAcylation

Hyperglycemia, which increases O-linked beta-N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) proteins, leads to changes in vascular reactivity. Because vascular dysfunction is a key feature of arterial hypertension, we hypothesized that vessels from deoxycorticosterone acetate and salt (DOCA-salt) rats exhibit increased O-GlcNAc proteins, which is associated with increased reactivity to constrictor stimuli. Aortas from DOCA rats exhibited increased contraction to phenylephrine (E(max) [mN] = 17.6 +/- 4 versus 10.7 +/- 2 control; n = 6) and decreased relaxation to acetylcholine (47.6 +/- 6% versus 73.2 +/- 10% control; n = 8) versus arteries from uninephrectomized rats. O- GlcNAc protein content was increased in aortas from DOCA rats (arbitrary units = 3.8 +/- 0.3 versus 2.3 +/- 0.3 control; n = 5). PugNAc (O- GlcNAcase inhibitor; 100 mu mol/L; 24 hours) increased vascular O- GlcNAc proteins, augmented phenylephrine vascular reactivity (18.2 +/- 2 versus 10.7 +/- 3 vehicle; n = 6), and decreased acetylcholine dilation in uninephrectomized (41.4 +/- 6 versus 73.2 +/- 3 vehicle; n = 6) but not in DOCA rats (phenylephrine, 16.5 +/- 3 versus 18.6 +/- 3 vehicle, n = 6; acetylcholine, 44.7 +/- 8 versus 47.6 +/- 7 vehicle, n = 6). PugNAc did not change total vascular endothelial nitric oxide synthase levels, but reduced endothelial nitric oxide synthase(Ser-1177) and Akt(Ser-473) phosphorylation (P < 0.05). Aortas from DOCA rats also exhibited decreased levels of endothelial nitric oxide synthase(Ser-1177) and Akt(Ser-473) (P < 0.05) but no changes in total endothelial nitric oxide synthase or Akt. Vascular O-GlcNAc-modified endothelial nitric oxide synthase was increased in DOCA rats. Blood glucose was similar in DOCA and uninephrectomized rats. Expression of O- GlcNAc transferase, glutamine: fructose-6-phosphate amidotransferase, and O- GlcNAcase, enzymes that directly modulate O-GlcNAcylation, was decreased in arteries from DOCA rats (P < 0.05). This is the first study showing that O-GlcNAcylation modulates vascular reactivity in normoglycemic conditions and that vascular O- GlcNAc proteins are increased in DOCA-salt hypertension. Modulation of increased vascular O-GlcNAcylation may represent a novel therapeutic approach in mineralocorticoid hypertension. (Hypertension. 2009; 53: 166-174.)

Transcriptional regulation of the Na(+)/H(+) exchanger NHE3 by chronic exposure to angiotensin II in renal epithelial cells

Angiotensin II (Ang II) exerts an acute bimodal effect on proximal tubule NHE3: while low doses stimulate the exchanger, high doses inhibit it. In the present study, we have investigated the chronic effects of Ang II on NHE3 expression and transcriptional regulation. Treatment of a tubular epithelial cell line, OKP, with Ang II 10(-11) M significantly increased NHE protein expression and mRNA levels, without evidence of bimodal effect. No change in mRNA half-life was detected, but transient transfection studies showed a significant increase in NHE3 promoter activity. Binding sites for Sp1/Egr-1 and AP2 transcription factors of the NHE3 proximal promoter were mutated and we observed that the Sp1/Egr-1 binding site integrity is necessary for Ang II stimulatory effects. Inhibition of cytochrome P450, PI3K, PKA and MAPK pathways prevented the Ang II stimulatory effect on the NHE3 promoter activity. Taking all the results together, our data reveal that chronic Ang II treatment exerts a stimulatory effect on NHE3 expression and promoter activity. The Ang II up-regulation of the NHE3 promoter activity appears to involve the Sp1/Egr-1 binding site and the interplay of several intracellular signaling pathways. (C) 2011 Elsevier Inc. All rights reserved.

Febre aftosa no Rio Grande do Sul no ano de 2000 : uma análise das transformações ocorridas nos sistemas de produção dos agricultores produtores de leite do município de Jóia/ RS

Este trabalho analisa as transformações ocorridas nos sistemas de produção dos agricultores produtores de leite do município de Jóia, que tiveram seus rebanhos sacrificados devido a ocorrência da febre aftosa, em 2000. Os dados para a composição, análise e comparação dos sistemas de produção foram coletados junto a 40 agricultores e contemplam informações agronômicas e sócio-econômicas do período anterior e posterior a ocorrência da doença. Como ponto de partida tomou-se unidades de produção que implementavam a produção de leite e derivados para a comercialização, antes da ocorrência da doença. A partir de uma metodologia fundamentada na Abordagem Sistêmica, o presente estudo consistiu basicamente numa análise histórica do município a partir da evolução e diferenciação dos Sistemas Agrários e, na descrição, comparação e análise dos sistemas de produção da região diretamente impactada pela febre aftosa no município. Como resultados, constatou-se que o município de Jóia, por razões geográficas, históricas, mas, principalmente, em função da ocupação do meio, evoluiu, ao longo do tempo, sob a égide de dois Sistemas Agrários (Sistema Agrário de Campos e Sistema Agrário de Florestas), cada qual com suas respectivas fases e diferenciações. Quanto aos Sistemas de Produção identificou-se, antes da ocorrência da febre aftosa, três sistemas de criação que envolviam animais para a produção de leite e derivados e seis sistemas de produção que implementavam a produção de leite para fins comerciais, juntamente com o cultivo de grãos seja em pequena, média ou grande escala Após a ocorrência da febre aftosa, identificou-se mais uma vez, três sistemas de criação que envolvem animais leiteiros, cinco sistemas de produção que voltaram a reimplementar a produção de leite para comercialização e três sistemas de produção em que os agricultores não reimplementaram a pecuária de leite em suas respectivas unidades de produção. Passados mais de dois anos da ocorrência da febre aftosa em Jóia, entre os oito sistemas de produção do período posterior à ocorrência febre aftosa, somente dois (SP8 e SP6’) registraram evolução positiva nos indicadores de renda relacionados às atividades agropecuárias, sendo que um deles não mais contempla a produção de leite em escala comercial. Considerando somente o rebanho bovino leiteiro, ocorreram, sistematicamente, a redução dos animais leiteiros e da produção anual em todos os sistemas, um sistema de produção apresentou evolução positiva no efetivo de animais em lactação (SP6’), e um sistema registrou o aumento da produtividade (SP1’). Constatou-se ainda, que na região estudada, apesar da reconhecida importância da pecuária leiteira, a mesma perdeu espaço para a cultura da soja.

Caracterização de unidades de manejo (biótopos) na futura unidade de conservação ambiental da UFRGS, Porto Alegre, RS : uma contribuição com bases na ecologia de paisagem

Para a caracterização dos biótopos naturais da futura Unidade de Conservação (UC) do Morro Santana (Porto Alegre, RS) foi realizado o macrozoneamento da área de estudo utilizando-se a cobertura com fitofisionomias campestres e florestais nativas e as variáveis do meio físico: declividade, altitude e exposição solar. Em quatro macrozonas campestres e em nove florestais, foram realizados estudos fitossociológicos e estatísticos para definir as unidades e sub-unidades vegetais presentes e a relação destas com a variável distância aos cursos d’água, caracterizando assim os onze biótopos naturais da área de estudo. Os tipos naturais de uso e cobertura do solo ocupam 51,6% da área do morro e as categorias de uso antrópico cobrem 48,4%. As formações de campo nativo do Morro Santana foram caracterizadas a partir da estrutura da vegetação dominante fisionomicamente, por duas unidades e quatro sub-unidades de vegetação, sendo que a unidade Aristida filifolia - Axonopus sp1 obteve a maior freqüência e densidade, não ocorrendo em apenas uma macrozona. A unidade de vegetação Guapira opposita - Casearia sylvestris ocorreu em todas as macrozonas arbóreas amostradas e caracteriza a estrutura da vegetação dominante fisionomicamente, nestas formações O método seguiu o cruzamento de informações espacializadas utilizando o sistema de informação geográfica (SIG) Idrisi, versão 14.02 (Kilimanjaro). Uma nova análise conferiu valores ecológicos às áreas com cobertura campestre e florestal nativas do morro a partir dos parâmetros relativos à: climacidade das espécies presentes nas unidades e sub-unidades de vegetação, naturalidade das comunidades vegetais presentes e índices da configuração estrutural da paisagem (tamanho e forma das manchas e distância de áreas urbanas). Foram então somados os valores ecológicos de cada parâmetro e estabelecidas as quatro zonas de caracterização ecológica, que são: núcleo, extensão do núcleo, tamponamento e ligação, em ordem decrescente de valor ecológico. Os biótopos de formações campestres encontram-se com melhor grau de conservação em relação aos florestais, por comporem a maior parte da zona núcleo. As zonas de caracterização ecológica servem como importante ferramenta para a realização do plano de manejo da unidade de conservação.

Estrutura genética de populações de Amphobotrys ricini, agente causal do mofo cinzento da mamoneira

The gray mold, causal organism Amphobotrys ricini, is one of the major diseases of castor bean. Difficulties in managing plant disease arises form the limited understanding of the genetic structure of A. ricini, their complexity and variability make it difficult to control. Genetic structure can be used to infer the relative impact of different forces that influence the evolution of pathogen populations, that allow to predict the potencial for pathogen populations to envolve in agricultural ecosystems. Growers protect their crop by applying fungicides, but there aren t fungicides to provide significant control of gray mold of castor bean. The objectives of this work were use RAPD to determine the genetic structure of A. ricini subpopulations in Paraíba and assay the sensitivity of A. ricini isolates to azoxystrobin and carbendazim. To determine the genetic structure of A. ricini subpopulations in Paraíba, 23 isolates were colleted from two different geographic location (subpopulation). These isolates were analysed by RAPD using 22 random decamer primers, purchased from OPERON, produced a total of 80 markers polimorphics. The resulting matrixes were analysed using PopGene version 1.32. Sensitivity to azoxystrobin and carbendazim of 30 isolates, colleted form Paraíba and Alagoas, was estimated based on spore germination and colony growth inhibition. The stock solutions were added toV8 medium after sterilization to produce final concentrations of 0, 0.01, 0.1, 1, 10, and 100 µg/ml of carbendazim and 0, 0.001, 0.01, 0.1, 1, and 10 µg/ml of azoxystrobin. All statistical analyses were performed using SAS to estimate the dose that inhibited fungal growth by 50% (ED50 values). The genetic diversity within subpopulations (Hs=0,271) accounted for 92% of the total genetic diversity (Ht=0,293), while genetic diversity between subpopulations (Gst = 0,075) represented only 7,5%. The estimated number of migrants per generation (NM ) was 6,15. Nei s average gene identity across 80 RAPD loci was 0,9468. Individual ED50 values, for the 30 isolates screened for their sensitivity to azoxystrobin, ranged From a maximum of 0,168 µg/ml to a minimum of 0,0036 µg/ml. The ED50 values for carbendazim varied within the range of 0,026 to 0,316 µg/ml

Ceras para conservação pós-colheita de frutos de abacateiro cultivar fuerte, armazenados em temperatura ambiente

Frutos de abacateiro foram colhidos dia 20/03/97. Selecionou-se 100 frutos uniformes, sendo mantidos 25 frutos para grupo controle - análise de perda de peso e 75 frutos para análises destrutivas - textura, sólidos solúveis totais e pH realizadas a cada 4 dias. Os frutos receberam os tratamentos, com objetivo de aumentar a vida pós-colheita: Cera Fruit Wax 1:1 (FW1) e 1:3 (FW2); Sparcitrus 1 (SP1) e 1:1 (SP2); Testemunha. Até o 4º dia de armazenamento não houve diferença significativa entre os valores de perda de peso dos tratamentos, sendo que ao final do armazenamento (12º dia) o tratamento SP1 foi superior aos demais, acarretando menor perda de peso dos frutos. Não houve diferença significativa entre os valores de textura analisados dentro de cada dia de armazenamento, mas os valores decresceram durante o armazenamento. Para sólidos solúveis totais não observou-se aumento significativos dos teores durante o armazenamento, sendo que em relação aos tratamentos, apenas no 12º dia para o tratamento FW2 obtiveram-se valores mais elevados do que o SP1. Para o pH não houve diferença significativa entre os valores dentro dos dias de armazenamento, entretanto do ponto de colheita para o 4ºdia de armazenamento, houve diminuição significativa, com exceção do tratamento SP1.

Mirmecofauna em um fragmento de floresta atlântica urbana no município de Marília, Brasil

The aim of this study was to verify the influence of the habitat fragmentation on the Ant Fauna in an urban fragment of Semideciduous Seasonal Atlantic Forest located in the municipality of Marilia, São Paulo, Brazil. The studied fragment was divided into three environments in relation to edge: "Edge" (2m), "Transition" (30m) and "Interior" (90m). By using pitfalls traps and attractive baits there were done nine samples between November 2007 and February 2008. There were collected 3.873 individuals distributed into five subfamilies, 19 genera and 33 species. Five species were abundant on three studied environments: Ectatomma sp1, Mycocepurus goeldii, Paratrechina sp1, Pheidole sp2, Trachymyrmex sp1, Wasmannia auropunctata. The edge and transition environments presented the lower Simpsons diversity index and higher species dominance. However, it was observed little variation between these parameters between environments. Faunistic similarity between environments, expressed by Jaccard's similarity index showed high similarity between all studied environments. Because the studied site is an urban fragment, the similarity found between these areas can be related to habitat fragmentation process, an historical of constant anthropic perturbation and low local colonization rates. However, we suggest that a posteriori evaluation should be done with other arthropods groups like spiders and beetles in due to understand the changes that occur in urban fragments and support the choice of conservation and management actions in favor of this important forest remnant localized in urban area of Marilia, São Paulo, Brazil.

Exploitation of floral resources on Sparattosperma leucanthum (Bignoniaceae): foraging activity of the pollinators and the nectar and pollen thieves

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

The condition factor of fishes from two river basins in São Paulo state, Southeast of Brazil

This work describes the relative condition factor of the Hypostomus strigaticeps, Astyanax altiparanae, Astyanax scabripinnis, Astyanax fasciatus, Astyanax sp1., Characidium aff. zebra, Piabina argentea, Hypostomus ancistroides, Hypostomus sp1., Parodon tortuosus, Serrapinus heterodon, and Bryconamericus sp., of the APA of São Pedro and Analândia (22°-23°S and 47°30'-48°30'W). The condition factor provides information about the physical state of the animal in the environment. In order to compare different species, the relative condition factor was used. Variations in this factor were correlated with variations through the year and with subsequent alterations in the physiological state of the fishes. The relative condition factor was shown to be efficient in indicating changes in fish condition throughout the year.

Identification of sperm head subpopulations with defined pleiomorphic characteristics in ejaculates of captive Goeldi's monkeys (Callimico goeldii)

The aim of this study was to evaluate the incidence of pleiomorphisms and its influence on the distribution of sperm morphometric subpopulations in ejaculates from the vulnerable Goeldi's monkey (Callimico goeldii) by using a combination of computerized analysis system and Principal Component Analysis (PCA) methods Each sperm head was measured for four primary spermatozoal head dimensional parameters (area [A (μm2)], perimeter [P (μm)], length [L (μm)] and width [W (μm)]) and three head shape derived parameters (ellipticity [(L/W)], elongation [(L-W)/(L+W)] and rugosity [(4πA/P2)]) Six separate subpopulations (SPs) were identified: SP1, constituted by very large, narrow and very elliptical spermatozoa (A=16.85±1.56μm2, W=2.75±0.42μm and ellipticity=2.16±0.24); SP2, characterized by average sized, short, wide and round spermatozoa (A=15.00±1.92μm2, L=5.06±0.49μm, W=3.51±0.31μm and ellipticity=1.44±0.15); SP3, represented by small, wide and slightly round spermatozoa (A=14.95±1.75μm2, W=3.47±0.29μm and ellipticity=1.48±0.14); SP4 included very small, short and very round spermatozoa (A=14.15±2.38μm2, L=4.90±0.57μm and elongation=0.18±0.05); SP5 consisted of average sized and slightly elliptical spermatozoa (A=15.14±1.72μm2 and ellipticity=1.49±0.14); and SP6 included large and round spermatozoa (A=16.30±1.62μm2 and elongation=0.19±0.04) There were differences in the sperm subpopulation distribution (P<0.001) among the five donors analyzed In conclusion, the results of the current study confirmed that the use of computer sperm analysis methods combined with PCA cluster analyses are useful methods to identify, classify, and characterize different sperm head morphometric subpopulations in neotropical primates Broadening our knowledge of C goeldii sperm morphometric abnormalities as well as developing reliable techniques for sperm evaluation may be essential for ex situ conservation of this threatened species © 2012 Elsevier B.V.

Taxonomia das populações de Hyphessobrycon boulengeri (Eigenmann, 1907) e Hyphessobrycon reticulatus Ellis, 1911 (Characiformes: Characidae)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Espécies de Ceraeochrysa Adams (Neuroptera: Crysopidae) presentes em pomares de Citrus SPP., na Venezuela

Pós-graduação em Agronomia (Entomologia Agrícola) - FCAV

Citogenética molecular e caracterização cromossômica no gênero Eigenmannia (Teleostei, Gymnotiformes, Sternopygidae)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)