TRIAGEM METABÓLICA POR PKS E NRPS EM ACTINOBACTÉRIAS ENDOFÍTICAS DE Citrus reticulata

Polyketides and non-ribosomal peptides are natural products widely found in bacteria, fungi and plants. The biological activities associated with these metabolites have attracted special attention in biopharmaceutical studies. Polyketide synthases act similarly to fatty acids synthetases and the whole multi-enzymatic set coordinating precursor and extending unit selection and reduction levels during chain growth. Acting in a similarly orchestrated model, non-ribosomal peptide synthetases biosynthesize NRPs. PKSs-I and NRPSs enzymatic modules and domains are collinearly organized with the parent gene sequence. This arrangement allows the use of degenerated PCR primers to amplify targeted regions in the genes corresponding to specific enzymatic domains such as ketosynthases and acyltransferases in PKSs and adenilation domains in NRPSs. Careful analysis of these short regions allows the classifying of a set of organisms according to their potential to biosynthesize PKs and NRPs. In this work, the biosynthetic potential of a set of 13 endophytic actinobacteria from Citrus reticulata for producing PKs and NRP metabolites was evaluated. The biosynthetic profile was compared to antimicrobial activity. Based on the inhibition promoted, 4 strains were considered for cluster analysis. A PKS/NRPS phylogeny was generated in order to classify some of the representative sequences throughout comparison with homologous genes. Using this approach, a molecular fingerprint was generated to help guide future studies on the most promising strains.

Biometria de frutos e sementes e germinação de Plathymenia reticulata benth. e Plathymenia foliolosa benth. (Fabaceae - mimosoideae)

Este estudo objetivou comparar características biométricas de frutos e sementes e o efeito de diferentes escarificações, temperaturas e luz na germinação de Plathymenia reticulata Benth. e Plathymenia foliolosa Benth. Foram registrados comprimento, largura, espessura, massa da matéria seca e fresca de frutos (n = 100) e sementes (n = 100) de cada espécie. Os diferentes tratamentos foram escarificações mecânica e química e temperaturas (fotoperíodo/nictoperíodo) de 20, 30 e 35/15 °C (12/12 e 0/24) e 25 e 35 °C (12/12). Os frutos de P. foliolosa mostraram-se mais largos, espessos e pesados e as sementes, mais compridas e espessas do que as de P. reticulata. As sementes de ambas as espécies não apresentaram fotoblastismo. A escarificação ácida não aumentou significativamente a germinabilidade das sementes em relação ao grupo-controle, enquanto a escarificação mecânica incrementou significativamente a germinabilidade apenas de P. foliolosa. As germinabilidades a 25 °C das sementes de P. reticulata intactas, escarificadas com ácido e lixa foram, respectivamente, de 55%, 60% e 89%. Para as sementes de P. foliolosa esses valores foram 48%, 37,5% e 83%, respectivamente.Esses resultados apontam limitações na germinação de P. foliolosa impostas pelo tegumento, entretanto o efeito deste restringindo a germinação das sementes intactas decresceu com a elevação da temperatura.

EFEITO DE ALTAS TEMPERATURAS NA GERMINAÇÃO DE SEMENTES DE Plathymenia reticulata Benth. E Dalbergia miscolobium Benth.

RESUMOO fogo é comum no Cerrado e, geralmente, ocorre durante a seca, quando várias espécies frutificam ou dispersam as sementes. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos do fogo na germinação das espécies do Cerrado. Este trabalho investigou o efeito da exposição a altas temperaturas na germinação de sementes de Dalbergia miscolobium Benth. e Plathymenia reticulata Benth., comuns no Cerrado e com uso potencial para recuperação de áreas degradadas e na recomposição de áreas de preservação permanente. As sementes foram coletadas em agosto de 2011, pesadas, separadas em três classes de tamanho e expostas a três temperaturas: 80 ºC, 100 ºC e 150 ºC por 2 e 5 minutos. Após os tratamentos, as sementes foram colocadas para germinar. A exposição a altas temperaturas afetou, de forma diferenciada, a germinação das espécies. Independentemente da classe de tamanho, a exposição das sementes até 100 °C, por 2 e 5 minutos, não alterou a germinação de D. miscolobium (91%). Entretanto, apenas as sementes maiores germinaram após a exposição a 150 °C, porém com redução significativa na germinação (53%; p<0,01). Para P. reticulata, a exposição a 80 °C por 2 e 5 minutos e a 100 °C por 2 minutos não alterou a germinação (71%), e nenhuma semente germinou após a exposição a 150 °C. A baixa resistência das sementes às altas temperaturas pode afetar significativamente o recrutamento de novos indivíduos após a ocorrência de queimadas no Cerrado.

Analyses of the development and glycoproteins present in the ovarian follicles of Poecilia vivipara (Cyprinodontiformes, Poeciliidae)

The morphofunctional aspects of oogenesis of Poecilia vivipara were studied aiming to understand the reproductive biology and development of species with internal fertilization, particularly those belonging to the family Poeciliidae. The stages of gonadal maturation and follicular development were characterized using mesoscopic, histological, histochemical, and lectin cytochemical analyses. Through mesoscopic evaluation the ovarian development was classified in six phases of development: immature, in maturation I, in maturation II, mature I, mature II, and post-spawn. Based on microscopic examination of the ovaries, we identified the presence of oocytes types I and II during the previtellogenic phase and types III, IV, and V during the vitellogenic phase. As oogenesis proceeded the oocyte cytosol increased in volume and presented increased cytoplasmic granule accumulation, characterizing vitellogenesis. The zona radiata (ZR) increased in thickness and complexity, and the follicular epithelium, which was initially thin and consisting of pavimentous cells, in type III oocytes exhibited cubic simple cells. The histochemical and cytochemical analyses revealed alterations in the composition of the molecular structures that form the ovarian follicle throughout the gonadal development. Our study demonstrated differences in the female reproductive system among fish species with internal and external fertilization and we suggest P. vivipara can be used as experimental model to test environmental toxicity.

Atividade antimicrobiana do oleorresina de copaíba (Copaifera reticulata) frente a Staphylococcus coagulase positiva isolados de casos de otite em cães

O objetivo do presente trabalho foi investigar o potencial antimicrobiano do oleorresina de Copaifera reticulata Ducke em isolados de Staphylococcus coagulase positiva (SCP) provenientes de casos de otite externa em cães. O método de microdiluição em caldo foi utilizado para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de oleorresina de copaíba. Em adição, foi determinado o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de SCP pelo método de difusão em ágar. Oito classes de antimicrobianos foram usadas para o cálculo de multirresistência antimicrobiana. A determinação da composição química do oleorresina de copaíba foi realizada por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC/MS), sendo que β-cariofileno, β-bisaboleno e (E)-α-bergamoteno foram os compostos majoritários. O oleorresina de copaíba demonstrou CIM90 de 0,164mg/mL e CBM90 de 1,31mg/mL. A multirresistência foi verificada em 27% das cepas testadas. Os resultados sugerem que o oleorresina de copaíba exerceu atividade bacteriostática e bactericida mesmo em cepas multirresistentes de Staphylococcus coagulase-positiva.

Effects of the 2,4-D herbicide on gills epithelia and liver of the fish Poecilia vivipara

The 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, usually named 2,4-D is one of the most widely used herbicides in the world. Acute toxicity of 2,4-D herbicide was investigated through its effects on guppies (Poecilia vivipara Bloch et Schneider 1801). Fish were exposed to the herbicide at concentrations of 10, 20 and 40µl per liter of water for 24 hours to determine its effects on gills and liver epithelia. The estimated LC50 was 34.64µl of 2,4-D per liter of water. Histochemical analyses and Feulgen's reaction were conducted to detect glycoconjugates and DNA, respectively, in gills and liver epithelia. Histochemistry revealed qualitative variations of glycoconjugates present on mucous cells and granules. The four types of mucous cells contained neutral granules, acids, or both. Increasing amounts of syalomucins were observed from the control group to the group exposed to the highest concentration of 2,4-D, suggesting increased mucous viscosity and the formation of plaques that could inhibit gas exchange and osmoregulation. Lamellar fusion observed in the group exposed to 40µl of 2,4-D suggests a defense mechanism. Hepatocytes showed vacuolization in the 10 and 20µl/L groups. The 40 µl/L group showed normal hepatocytes as well as changed ones, many Ito cells, micronuclei, and nuclear swelling. These effects may be associated with toxicity or adaptative processes to cellular stress. The data from this study indicates the importance of assessing similar risks to aquatic species and suggests that Poecilia vivipara is an adequate biological model for analysis of environmental contamination.

Morfo-anatomia comparada das folhas do par vicariante Plathymenia foliolosa Benth. e Plathymenia reticulata Benth. (Leguminosae - Mimosoideae)

(Morfo-anatomia comparada das folhas do par vicariante Plathymenia foliolosa Benth. e Plathymenia reticulata Benth. (Leguminosae-Mimosoideae)). Folhas bipinadas adultas de P. foliolosa e P. reticulata da mata (Minas Gerais) e do cerrado (Distrito Federal) respectivamente, foram estudadas, sob o ponto de vista comparativo, quanto à morfologia externa e à anatomia. Todas as partes foliares foram examinadas sob microscopia óptica, em luz normal e em luz polarizada. Os folíolos de P. reticulata são maiores que os de P. foliolosa. A organização do sistema vascular é semelhante nas duas espécies. Em P. reticulata, os estômatos estão no mesmo nível ou levemente depressionados em relação às demais células epidérmicas e, em P. foliolosa, estas estruturas mostram posição ligeiramente elevada. A lâmina foliolar é mais espessa e o mesofilo é mais compacto em P. reticulata. As lâminas foliolares são hipoestomáticas e dorsiventrais com dois estratos de parênquima paliçádico em P. reticulata e um estrato em P. foliolosa. A cutinização é mais intensa nas paredes das células epidérmicas de P. reticulata. Cristais de oxalato de cálcio são mais abundantes em P. foliolosa embora a redissolução dos mesmos tenha sido observada, para ambas as espécies, sobretudo no pulvino primário. O escleromorfismo, encarado sob o ponto de vista anatômico, é mais acentuado em P. reticulata e, nesta espécie, a quantidade de taninos e de fibras gelatinosas também é maior. A semelhança constatada na organização estrutural como um todo é condizente com a proximidade taxonômica das duas espécies e os aspectos anatômicos diferenciais sugerem estar relacionados com o habitat de P. foliolosa e P. reticulata.

Adverse pregnancy outcome in rats following exposure to a Salacia reticulata (Celastraceae) root extract

The root extract of Salacia reticulata Wight (family: Celastraceae) is used in Sri Lanka by traditional practitioners as a herbal therapy for glycemic control even during pregnancy. It is recognized that some clinically used antidiabetic drugs have harmful effects on pregnancy but the effects of the S. reticulata root extract on reproductive outcome is unknown and deserves examination. We determined the effects of the S. reticulata root extract on the reproductive outcome of Wistar rats (250-260 g) when administered orally (10 g/kg) during early (days 1-7) and mid- (days 7-14) pregnancy. The root extract significantly (P<0.05) enhanced post-implantation losses (control vs treatment: early pregnancy, 4.7 ± 2.4 vs 49.3 ± 13%; mid-pregnancy, 4.7 ± 2.4 vs 41.7 ± 16.1%). Gestational length was unaltered but the pups born had a low birth weight (P<0.05) (early pregnancy, 6.8 ± 0.1 vs 5.3 ± 0.1 g; mid-pregnancy, 6.8 ± 0.1 vs 5.0 ± 0.1 g) and low birth index (P<0.05) (early pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 50.7 ± 12.9%; mid-pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 58.3 ± 16.1%), fetal survival ratio (P<0.05) (early pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 50.7 ± 12.9; mid-pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 58.3 ± 16.1), and viability index (P<0.05) (early pregnancy, 94.9 ± 2.6 vs 49.5 ± 12.5%; mid-pregnancy, 94.9 ± 2.6 vs 57.1 ± 16.1%). However, the root extract was non-teratogenic. We conclude that the S. reticulata root extract can be hazardous to successful pregnancy in women and should not be used in pregnancy complicated by diabetes.

Physicochemical and microbiological characteristics of minimally processed 'Champagne' oranges (Citrus reticulata × Citrus sinensis) in different packgings

The objective of this study was to investigate the influence of the level of minimal processing and modified atmosphere on the quality of 'Champagne' orange stored under refrigeration. The fruits were subjected to the following processing: a) whole fruit without flavedo; b) whole fruit without flavedo and albedo; and c) segmented into wedges and packed as follows: uncoated packaging (control); polyethylene film; PVC film; gelatin-based edible films (3%); and polyesthyrene translucent plastic container with a lid. The minimally processed oranges were stored at 5 ± 1°C for 8 days and were subjected to physicochemical and microbiological analyses every two days. Greater weight loss occurred in fruits without flavedo and segmented, uncoated, and coated with the edible gelatin film During storage, there was a slight increase in Total Soluble Solids (TSS) for the treatments with greater weight loss and reduction in acidity and ascorbic acid, regardless of the packaging type. The microbial counts did not exceed the acceptable limits in the treatments; however, higher counts were observed at the end of storage. The minimally processed fruit packed in lidded polystyrene containers and polyethylene and PVC films kept their overall fresh visual appearance with a few physicochemical and microbiological changes up to the 8th day of storage.

Reproductive cycle of Ophionereis reticulata (Ophiuroidea, Echinodermata) on the southeast coast of Brazil

The reproductive cycle of Ophionereis reticulata, a common sediment-rocky shore-interface ophiuroid, was examined monthly from January 2002 to January 2003 at Praia Grande beach (Sao Sesbatiao, state of Sao Paulo, Brazil). Mature individuals were found from January 2002 to April 2002 and from November 2002 to January 2003. Spawning was regcorded from January 2002 to March 2002 and from November 2002 to January 2003. Mature sperm is still present in April which could be involved in the fertilization of the last oocytes spawned in March and April. November and December marked the final point in the maturation process, with a high concentration of yolk and lipid nutrients in the oocytes. Ophionereis reticulata showed, for the period analyzed, a single spawning period, during spring and summer.

Indução do florescimento e crescimento de tangerineira 'Poncã' (Citrus reticulata Blanco) em função da irrigação e da aplicação de paclobutrazol

O experimento foi conduzido na Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP/Câmpus de Botucatu (SP), com o objetivo de avaliar o florescimento fora de época e o crescimento vegetativo da tangerineira 'Poncã'. Nesse contexto, adotou-se o delineamento estatístico em blocos casualizados, em parcelas subdivididas, com duas repetições, na instalação do ensaio. Os dois tratamentos de -0,03 e -0,05 MPa, como potenciais mínimos da água no solo, constituíram as parcelas e as quatro doses de paclobutrazol: 0; 4; 8 e 12 g por planta, nas subparcelas. No segundo ano de pesquisa, foram mantidas as mesmas parcelas e foram aplicadas nas plantas das subparcelas as doses de 0; 500; 1000 e 2000 mg l-1 de paclobutrazol, via foliar. Cada parcela foi constituída de 16 plantas, sendo oito destinadas à avaliação. Utilizou-se, em ambas as combinações, de um tratamento sem irrigação (-0,07 MPa) e sem aplicação de paclobutrazol, como testemunha. Foram avaliados parâmetros, como a altura, diâmetro médio, volume e área de projeção da copa e condutância estomática para caracterizar a resposta das plantas aos tratamentos empregados. Concluiu-se que a aplicação do paclobutrazol e a variação do potencial da água no solo não proporcionaram a indução do florescimento fora de época das tangerineiras, e que os níveis de paclobutrazol influenciaram no desenvolvimento das plantas.

Mutagenicity induced by the hydroalcoholic extract of the medicinal plant Plathymenia reticulata Benth

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Efeito do bálsamo de copaíba (Copaitéra reticulata ducke) sobre a Germinação de esporos de Fusarium

The germinative capacity of spores of Fusarium was studied in the presence of copahiba balsam (5 to 100%). The culture was carried out in Erlenmeyer flasks with 50ml of ICI medium and 1 ml of the pre-inoculated fungus. In some specific cases, 1 ml of copahiba balsam was added to the medium. The development of spores was significantly reduced in the presence of copahiba balsam. Sensibility to copahiba balsam varied with the different strains of Fusarium.

Atividade antimicrobiana e imunológica in vitro dos extratos de Senna reticulata (Willd.) Irwin & Barneby (mata-pasto) E Vismia guianensis (Aubl.)(lacre)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Expressão diferencial de genes em laranja doce (Citrus sinensis L. Osb) em tangerina (Citrus reticulata blanco) em resposta à infecção por Xylella fastidiosa

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)