Anti-inflammatory activity of the ethanol extract of Dictamnus dasycarpus leaf in lipopolysaccharide-activated macrophages

Background: Dictamnus dasycarpus is widely used as a traditional remedy for the treatment of eczema, rheumatism, and other inflammatory diseases in Asia. The current study investigates the molecular mechanism of anti-inflammatory action of the ethanol extract of Dictamnus dasycarpus leaf (DE) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells. Methods: Nitric oxide (NO) production was assessed by Griess reaction and the mRNA and protein expressions of pro inflammatory cytokines, transcription factor, and enzymes were determined by real-time RT-PCR and immunoblotting analysis. Results: DE (0.5 and 1 mg/mL) suppressed the NO production by 10 and 33%, respectively, compared to the untreated group in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. DE (0.5 and 1 mg/mL) reduced the mRNA expression of key transcription factor nuclear factor-kappa B by 7 and 24%, respectively compared to the untreated group in LPS activated macrophage. The pro inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor a and interleukin 1 beta were also decreased by DE treatment. Moreover, the protein expression of pro inflammatory enzymes, inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase 2 were also dramatically attenuated by DE in a dose dependent manner. Conclusions: These results suggest that Dictamnus dasycarpus leaf has a potent anti-inflammatory activity and can be used for the development of new anti-inflammatory agents.

Measuring Glutathione Redox Potential of HIV-1-infected Macrophages

Redox signaling plays a crucial role in the pathogenesis of human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1). The majority of HIV redox research relies on measuring redox stress using invasive technologies, which are unreliable and do not provide information about the contributions of subcellular compartments. A major technological leap emerges from the development of genetically encoded redox-sensitive green fluorescent proteins (roGFPs), which provide sensitive and compartment-specific insights into redox homeostasis. Here, we exploited a roGFP-based specific bioprobe of glutathione redox potential (E-GSH; Grx1-roGFP2) and measured subcellular changes in E-GSH during various phases of HIV-1 infection using U1 monocytic cells (latently infected U937 cells with HIV-1). We show that although U937 and U1 cells demonstrate significantly reduced cytosolic and mitochondrial E-GSH (approximately -310 mV), active viral replication induces substantial oxidative stress (E-GSH more than -240 mV). Furthermore, exposure to a physiologically relevant oxidant, hydrogen peroxide (H2O2), induces significant deviations in subcellular E-GSH between U937 and U1, which distinctly modulates susceptibility to apoptosis. Using Grx1-roGFP2, we demonstrate that a marginal increase of about similar to 25 mV in E-GSH is sufficient to switch HIV-1 from latency to reactivation, raising the possibility of purging HIV-1 by redox modulators without triggering detrimental changes in cellular physiology. Importantly, we show that bioactive lipids synthesized by clinical drug-resistant isolates of Mycobacterium tuberculosis reactivate HIV-1 through modulation of intracellular E-GSH. Finally, the expression analysis of U1 and patient peripheral blood mononuclear cells demonstrated a major recalibration of cellular redox homeostatic pathways during persistence and active replication of HIV.

A Mycobacterial Phosphoribosyltransferase Promotes Bacillary Survival by Inhibiting Oxidative Stress and Autophagy Pathways in Macrophages and Zebrafish

Mycobacterium tuberculosis employs various strategies to modulate host immune responses to facilitate its persistence in macrophages. The M. tuberculosis cell wall contains numerous glycoproteins with unknown roles in pathogenesis. Here, by using Concanavalin A and LC-MS analysis, we identified a novel mannosylated glycoprotein phosphoribosyltransferase, encoded by Rv3242c from M. tuberculosis cell walls. Homology modeling, bioinformatic analyses, and an assay of phosphoribosyltransferase activity in Mycobacterium smegmatis expressing recombinant Rv3242c (MsmRv3242c) confirmed the mass spectrometry data. Using Mycobacterium marinum-zebrafish and the surrogate MsmRv3242c infection models, we proved that phosphoribosyltransferase is involved in mycobacterial virulence. Histological and infection assays showed that the M. marinum mimG mutant, an Rv3242c orthologue in a pathogenic M. marinum strain, was strongly attenuated in adult zebrafish and also survived less in macrophages. In contrast, infection with wild type and the complemented Delta mimG: Rv3242c M. marinum strains showed prominent pathological features, such as severe emaciation, skin lesions, hemorrhaging, and more zebrafish death. Similarly, recombinant Msm Rv3242c bacteria showed increased invasion in non-phagocytic epithelial cells and longer intracellular survival in macrophages as compared with wild type and vector control M. smegmatis strains. Further mechanistic studies revealed that the Rv3242c- and mimG-mediated enhancement of intramacrophagic survival was due to inhibition of autophagy, reactive oxygen species, and reduced activities of superoxide dismutase and catalase enzymes. Infection with MsmRv3242c also activated the MAPK pathway, NF-kappa B, and inflammatory cytokines. In summary, we show that a novel mycobacterial mannosylated phosphoribosyltransferase acts as a virulence and immunomodulatory factor, suggesting that it may constitute a novel target for antimycobacterial drugs.

Mycobacterium tuberculosis Inhibits RAB7 Recruitment to Selectively Modulate Autophagy Flux in Macrophages

Here we report a novel regulatory mechanism for autophagy-mediated degradation of Mycobacterium tuberculosis (Mtb) and specific strategy exploited by the virulent Mtb to evade it. We show while both avirulent (H37Ra) and virulent (H37Rv) mycobacteria could readily localize to autophagosomes, their maturation into autolysosomes (flux) was significantly inhibited by the latter strain. The inhibition of autophagy flux by the virulent strain was highly selective, as it did not perturb the basal autophagy flux in the macrophages. Selective inhibition of flux of Mtb-containing autophagosomes required virulence regulators PhoP and ESAT-6. We show that the maturation of Mtb-containing autophagosomes into autolysosomes required recruitment of the late endosome marker RAB7, forming the intermediate compartment amphisomes. Virulent Mtb selectively evaded their targeting to the amphisomes. Thus we report a crosstalk between autophagy and phagosome maturation pathway and highlight the adaptability of Mtb, manifested by selective regulation of autophagy flux.

Analysing the contribution of ATM/ATR pathway activation in establishing the premature senescence of E2F1/E2F2-/- bone-marrow-derived macrophages

E2F1 and E2F2 transcription factors have an important role during the regulation of cell cycle. In experiments done with E2F1/E2F2 knockout mice, it has been described that bone-marrow-derived macrophages (BMDM) undergo an early rapid proliferation event related to DNA hyper-replication. As a consequence, DNA damage response (DDR) pathway is triggered and E2F1/E2F2 knockout macrophages enter premature senescence related to G2/M phase arrest. The exact mechanism trough which DNA hyper-replication leads to DDR in absence of E2F1 and E2F2 remains undiscovered. To determine whether the ATR/ATM pathway, the master regulator of G2/M checkpoint, might be the surveillance mechanism in order to regulate uncontrolled proliferation in the DKO model, we monitored and analysis biochemical properties of BMDM cultures in the presence of caffeine, a potent inhibitor of ATM/ATR activity. Our results show that the addition of caffeine abolishes premature senescence in DKO BMDM, stimulates γ-H2AX accumulation and decreases Mcm2 expression.

Alveolar nitric oxide and its role in pediatric asthma control assessment

Resumen Background: Nitric oxide can be measured at multiple flow rates to determine proximal (maximum airway nitric oxide flux; Jaw(NO)) and distal inflammation (alveolar nitric oxide concentration; CA(NO)). The main aim was to study the association among symptoms, lung function, proximal (maximum airway nitric oxide flux) and distal (alveolar nitric oxide concentration) airway inflammation in asthmatic children treated and not treated with inhaled glucocorticoids. Methods: A cross-sectional study with prospective data collection was carried out in a consecutive sample of girls and boys aged between 6 and 16 years with a medical diagnosis of asthma. Maximum airway nitric oxide flux and alveolar nitric oxide concentration were calculated according to the two-compartment model. In asthmatic patients, the asthma control questionnaire (CAN) was completed and forced spirometry was performed. In controls, differences between the sexes in alveolar nitric oxide concentration and maximum airway nitric oxide flux and their correlation with height were studied. The correlation among the fraction of exhaled NO at 50 ml/s (FENO50), CA(NO), Jaw(NO), forced expiratory volume in 1 second (FEV1) and the CAN questionnaire was measured and the degree of agreement regarding asthma control assessment was studied using Cohen's kappa. Results: We studied 162 children; 49 healthy (group 1), 23 asthmatic participants without treatment (group 2) and 80 asthmatic patients treated with inhaled corticosteroids (group 3). CA(NO) (ppb) was 2.2 (0.1-4.5), 3 (0.2-9.2) and 2.45 (0.1-24), respectively. Jaw(NO) (pl/s) was 516 (98.3-1470), 2356.67 (120-6110) and 1426 (156-11805), respectively. There was a strong association (r = 0.97) between FENO50 and Jaw(NO) and the degree of agreement was very good in group 2 and was good in group 3. There was no agreement or only slight agreement between the measures used to monitor asthma control (FEV1, CAN questionnaire, CA(NO) and Jaw(NO)). Conclusions: The results for CA(NO) and Jaw(NO) in controls were similar to those found in other reports. There was no agreement or only slight agreement among the three measure instruments analyzed to assess asthma control. In our sample, no additional information was provided by CA(NO) and Jaw(NO).

A influência da espessura óssea na medição da altura da borda alveolar em imagens de tomografia computadorizada de feixe cônico e espiral

Imagens de tomografia computadorizada (TC) permitem a visualização, sem distorções ou sobreposições, do complexo maxilo-facial, principalmente do osso alveolar. Estudos demonstraram boa reprodutibilidade e precisão da mensuração da altura da borda alveolar, todavia a influência da espessura óssea ainda é pouco descrita. Através da comparação com a mensuração direta, o objetivo deste estudo foi avaliar a precisão, reprodutibilidade e a influência da espessura óssea, na mensuração da altura da borda alveolar em imagens volumétricas e imagens bidimensionais multiplanares em TC de feixe cônico (TCFC) e em TC espiral (TCE). Utilizando 10 mandíbulas secas de humanos, 57 dentes anteriores foram tomografados em equipamentos iCAT (Imaging Science International, Hatfield, PA, EUA) e Brilliance 64 canais (Philips Eletronics, Eindhoven, Holanda), ambos utilizando voxels de 0,25 mm. Através de imagens volumétricas (3D) e imagens bidimensionais (2D) de cortes multiplanares, foi comparada a mensuração da altura da borda alveolar dessas imagens com a mensuração direta nas mandíbulas, feita por vestibular e lingual, por três avaliadores, com o auxílio de um paquímetro, totalizando 114 bordas alveolares medidas. Alta reprodutibilidade intra-avaliador (0,999 a 0,902) e interavaliador (0,998 e 0,868) foi observada através do índice de correlação intraclasse (ICC). Observou-se alta correlação entre a mensuração direta e indireta da altura da borda alveolar em imagens 2D, sendo r=0,923** e 0,916**, e em imagens 3D, com r=0,929** e 0,954*, em TCFC e TCE, respectivamente. Imagens 2D superestimam a altura da borda alveolar em 0,32 e 0,49 mm e imagens 3D em 0,34 e 0,30 mm, em TCFC e TCE respectivamente. Quando o osso alveolar apresenta espessura de no mínimo 0,6 mm a média da diferença entre medidas diretas e indiretas é de 0,16 e 0,28 mm em imagens 2D e de 0,12 e 0,03 mm em imagens 3D para TCFC e TCE respectivamente, sendo que 95% do limite de concordância varia de -0,46 a 0,79 mm e -0,32 a 0,88 mm em imagens 2D, e de -0,64 a 0,67 mm e -0,57 a 0,62 mm em imagens 3D, para TCFC e TCE respectivamente. Quando o osso alveolar é mais fino do que 0,6 mm a TC é imprecisa, pois 95% do limite de concordância variou de -1,74 a 5,42 mm e -1,64 a 5,42 mm em imagens 2D, e de -3,70 a 4,28 mm e -3,49 a 4,25 mm em imagens 3D, para TCFC e TCE respectivamente. Conclui-se que a mensuração da altura da borda alveolar através de imagens tomográficas apresenta alta reprodutibilidade, sendo que quando a borda alveolar apresenta pelo menos 0,6 mm, a precisão da mensuração é alta, todavia quando esta espessura é menor do que 0,6 mm a técnica é imprecisa.

Efeitos do tratamento periodontal não cirúrgico sobre a densidade e altura óssea alveolar

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento periodontal não cirúrgico (TPNC), na densidade e na altura óssea alveolar, em pacientes com periodontite, utilizando radiografias digitais diretas. Cento e um sítios, em dezenove pacientes (idade média 36 7.3 anos) foram acompanhados no dia 0, e 90 e 180 dias após TPNC. Os índices clínicos de profundidade de bolsa a sondagem (PBS), nível de inserção clínica, sangramento à sondagem e índice de placa foram registrados e radiografias digitais foram feitas. A densidade foi analisada através de regiões ósseas de interesse colocadas sobre a crista óssea alveolar (ROI I) e sobre o osso medular (ROI II). A altura óssea alveolar foi medida através da distância da crista óssea alveolar até a junção cemento esmalte. Os sítios profundos (PBS ≥ 5mm) apresentaram uma melhora clínica significante (p <0.01), acompanhada de um aumento na densidade da ROI I (p <0.01). A ROI II mostrou um aumento na densidade dos sítios com PBS ≤ 3mm em pacientes com periodontite agressiva (p <0.05). No entanto, houve diminuição nos sítios com PBS ≥ 5mm nesses mesmos pacientes (p <0.03). A altura óssea alveolar não sofreu alteração após TPNC. Após o tratamento periodontal não cirúrgico, observou-se que as radiografias obtidas através da técnica digital direta parecem mostrar um aumento na densidade da crista óssea, nos sítios profundos dos pacientes com periodontite. No entanto, a redução da profundidade de bolsa e do ganho no nível de inserção clínica não foi acompanhada por alterações significantes na altura óssea alveolar nestes sítios.

Remodelação alveolar e perfil bacteriano em implantes instalados em diferentes níveis relacionados à crista óssea

A substituição clínica de dentes naturais perdidos por implantes osteointegrados tem representado uma das primeiras opções terapêuticas para a reabilitação de pacientes total ou parcialmente edêntulos. Apesar dos excelentes índices de sucesso demonstrados pelas restaurações implanto-suportadas, alguns fatores permanecem não esclarecidos, principalmente no que diz respeito à remodelação óssea ao redor dos implantes osteointegrados. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a relação do nível de instalação dos implantes dentários com os parâmetros clínicos, com a remodelação óssea peri-implantar e com a colonização bacteriana, em implantes de plataforma regular, submetidos à carga imediata. Implantes de plataforma regular foram instalados em dois diferentes níveis em relação à crista óssea ao nível ósseo e supra ósseo (1 mm). No total, trinta e cinco implantes em 9 pacientes (idade média de 62,4 11,2 anos) foram avaliados radiograficamente no momento da instalação dos implantes (T1) e 6 meses após (T2), momento no qual também foram feitas análises clínicas e coleta de amostras para o teste microbiológico. Nos exames radiográficos foram analisadas a perda óssea, a partir de mensurações lineares da distância entre um ponto fixo do componente protético e o ponto mais coronário do contato osso-implante, e a densidade óptica alveolar obtida a partir de regiões ósseas de interesse (ROIs). As análises clínicas consistiram na avaliação da profundidade de sondagem e na mensuração do volume do fluido gengival peri-implantar. O perfil bacteriano dos sítios avaliados foi caracterizado por meio do método de análise de checkerboard DNA-DNA hybridization. Os testes estatísticos realizados mostraram não haver relação entre o nível de instalação dos implantes em relação à crista óssea e a remodelação óssea alveolar, tanto com relação à perda óssea (p = 0,725), como com relação à densidade óptica alveolar (p = 0,975). Também não foi possível estabelecer uma correlação entre a remodelação óssea e parâmetros clínicos como profundidade de sondagem e volume do fluido gengival peri-implantar. Com relação ao perfil bacteriano, não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos avaliados para nenhuma das 40 bactérias analisadas.

Estudo clínico prospectivo das modificações da borda alveolar inferior após projeção ortodôntica em tomografia computadorizada de feixe cônico

A projeção de incisivos e expansão dos arcos dentários são uma alternativa valiosa à extração dentária, especialmente quando se considera a estética facial em pacientes adultos. O efeito da projeção ortodôntica dos incisivos inferiores sobre o periodonto é controverso devido às avaliações em exames bidimensionais e os aspectos multi-fatoriais que envolvem as recessões gengivais. O objetivo deste estudo foi comparar as modificações na altura da borda alveolar dos dentes ântero-inferiores de pacientes, que foram submetidos à projeção ortodôntica, com pacientes tratados sem projeção; e correlacionar estas modificações com o grau de inclinação dentária, com as alterações da distância bicanina e com o biotipo gengival. Pacientes adultos com mais de 3 mm de falta de espaço no arco inferior e curva de Spee moderada ou acentuada compuseram o grupo experimental (n=15). O grupo controle (n=7) consistiu de pacientes com bons arcos inferiores, que não necessitavam de grandes movimentos dentários. Estes pacientes foram submetidos a alinhamento e nivelamento dentário até o fio de aço .020". Tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC) foram obtidas antes do tratamento e ao final da fase de alinhamento e nivelamento. As alturas das bordas alveolares (BA) de incisivos e caninos inferiores foram medidas nas TCFC em reconstruções 3D e comparadas entre os grupos e entre os tempos pelos testes-t de Student não pareado e pareado, respectivamente. As BA foram correlacionadas com o grau de inclinação dentária (IMPA), com a distância intercaninos (DIC) e com o biotipo gengival (BG) pelo teste de correlação de Pearson. Os resultados demonstraram que os caninos inferiores do grupo experimental apresentaram perda óssea significativa (p<0,005), quando comparados com o grupo controle, em média 2,5 mm. As BA dos dentes 43, 33 e 32 ao final do alinhamento e nivelamento eram significativamente maiores do que ao início do tratamento no grupo experimental (p<0,001). Não foram encontradas diferenças significativas entre as medidas iniciais e finais das BA de todos os dentes do grupo controle. Apesar destes resultados, não foram encontradas correlações entre a remodelação da BA e o IMPA, a DIC e o BG. Pode-se concluir que o aumento no comprimento do arco inferior com arcos ortodônticos contínuos aumenta a inclinação dos incisivos inferiores e a DIC. O aumento da DIC parece exercer maior efeito sobre a BA dos caninos inferiores do que a inclinação de incisivos sobre a BA dos incisivos inferiores. No entanto, as modificações da BA não estão associadas ao grau de inclinação dos incisivos, a quantidade de expansão do arco inferior e ao biotipo gengival.

Avaliação longitudinal da densidade radiográfica da crista óssea alveolar em pacientes com periodontite crônica e em pacientes saudáveis

A periodontite é um grupo dentro das doenças periodontais onde o tecido de suporte é acometido como resultado de um desequilíbrio entre uma agressão bacteriana e a resposta imunológica do hospedeiro. O exame radiográfico é um método não invasivo que quando usado de forma adequada pode prover imagens que demonstram perdas ósseas iniciais. A avaliação da densidade óssea já foi previamente descrita. Este estudo teve como objetivo avaliar as alterações de densidade óssea da crista alveolar no período de 4 meses, tanto em pacientes com periodontite crônica antes e depois da terapia básica, quanto em pacientes periodontalmente saudáveis. Os pacientes dos dois grupos foram submetidos a exame periodontal com Florida Probe. Foram realizadas 6 radiografias por paciente em cada momento da avaliação, à partir dessas imagens realizamos a avaliação da densidade óssea da crista alveolar através de áreas de interesse (ROI), utilizando o Kodak Dental Imaging Software 6.7. As comparações entre as medidas radiográficas do baseline e as da reavaliação, não apresentaram diferenças significantes para ROI 1, ROI 2, JCE-CO nos dois grupos. Sendo assim, observamos que o grupo de pacientes com periodontite crônica não apresentou diferença significante para densidade óssea da crista alveolar 4 meses após o tratamento, mesmo apresentando melhora dos parâmetros clínicos periodontais. O grupo de pacientes periodontalmente saudáveis também não apresentou alterações de densidade no mesmo período de tempo.

Alorreatividade dos enxertos ósseos homólogos na reconstrução alveolar em humanos

Enxerto ósseo homólogo é utilizado independentemente da compatibilidade HLA entre doador e receptor ou uso de drogas imunossupressoras. Considerando o volume de transplantes ósseos realizados no Brasil e o possível efeito deletério da sensibilização HLA para o transplante de órgãos sólidos, este estudo tem como objetivo avaliar a alorreatividade do enxerto ósseo homólogo fresco-congelado utilizado na reconstrução alveolar com finalidade de reabilitação oral com prótese sobre implantes. Anticorpos anti-HLA e anti-MICA foram monitorados através do teste Labscreen Mixed, nos intervalos 0, 7, 30, 90 e 180 pós transplante ósseo em 15 pacientes (6 homens e 9 mulheres, idade média 58,1, DP=10,1) que estavam em tratamento no Instituto de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Rio de Janeiro. Caso resultado do teste Mixed fosse positivo (Razão de fundo normatizado, NBG>4,5) o teste Labscreen Single (tecnologia antígeno único por pérola, SABA) era realizado para verificar se os anticorpos anti-HLA eram específicos ao doador. Nenhum paciente relatou transplante prévio, 4 relataram transfusão prévia e todas as mulheres relataram gravidez. Dez pacientes não apresentaram reação positiva no dia 0 sendo considerados não sensibilizados previamente (NSP); destes, 6 pacientes permaneceram sem nenhuma evidência de sensibilização, 2 pacientes apresentaram reação positiva para Classe I e II; 2 para Classe I apenas; e 2 para MICA, sendo considerados sensibilizados pelo enxerto ósseo oral. Dois pacientes apresentaram aumento de Intensidade Média de Fluorescência (ΔMFI>1000) de anticorpos específicos ao doador para Classe I e Classe II, e 2 somente para Classe II, demonstrando uma reação específica ao doador. Os resultados sugerem uma alorreatividade HLA oscilatória ao enxerto ósseo homólogo em reconstruções alveolares, confirmada pela formação de anticorpos anti-HLA específicos ao doador em 4 pacientes (27%) da amostra.

Incorporação e remodelação de enxertos homólogos na reconstrução alveolar em humanos: análise tomográfica, histológica e histomorfométrica

Enxertos ósseos homólogos congelados têm sido documentados apresentando bons resultados clínicos como substituto ao material autógeno nas reconstruções alveolares. Entretanto, dados referentes à incorporação e remodelação destes enxertos não estão disponíveis na literatura. Este estudo tem por objetivo determinar um período ótimo de espera para instalação de implantes em rebordos reconstruídos com enxertos ósseos homólogos em bloco no que se refere à incorporação e reabsorção. 24 pacientes foram submetidos à reconstrução alveolar óssea homóloga previamente à instalação de implantes. Os indivíduos foram alocados randomicamente em um de 3 grupos de acordo com o tempo de espera para o segundo estágio cirúrgico (4, 6 e 8 meses). Análises tomográficas, histológicas e histomorfométricas foram utilizadas a fim de determinar o grau de reabsorção e incorporação dos enxertos nos diferentes intervalos de tempo para cada grupo. Os dados de reabsorção sofrida pelos enxertos demonstraram diferenças estatisticamente significativas para os três intervalos de espera. Da mesma forma, parâmetros histomorfométricos como contagem de osteócitos e quantificação de remanescentes de osso homólogo nas biópsias apresentaram diferenças significativas entre os grupos. De acordo com os dados do presente trabalho, no que diz respeito à remodelação e incorporação, o período mais favorável à instalação dos implantes a curto prazo após recontruções com enxertos homólogos é de 4 meses.

In vitro phagocytic study of blood leucocytes and peritoneal macrophages of walking catfish Clarias batrachus ( Ham.) against Aeromonas hydrophila and Escherichia coli.

In observation of in vitro phagocytic activity against Aeromonas hydrophila isolate 34k (a virulent form) and Escherichia coli (an avirulent bacteria) of neutrophil- and monocyte-like cells of walking catfish Clarias batrachus showed phagocytosis. N eutrophils and monocytes phagocytized the avirulent form of bacterial isolate more than the virulent one. Other blood leucocytes did not show phagocytosis. Peritoneal macrophage of the fish were separated by glycogen elicitation and the macrophages were being adhered on plastic cover slips for studying their in vitro phagocytic activity. Most of the cells were alive after adherence and showed phagocytosis against the virulent and avirulent bacteria. The percent phagocytosis and phagocytic index were higher against the avirulent E. coli than the virulent A. hydrophila.