Leishmaniose cutânea experimental: I - sobre a susceptibilidade do primata Cebus apella (Cebidae) a infecção pela Leishmania (Viannia) lainsoni Silveira, Shaw, Braga e Ishikawa, 1987

Foi investigada a susceptibilidade do primata Cebus apella (Cebidae) à infecção experimental pela Leishmaiua (Viannia) lainsoni, com o objetivo de estudara patogenia desse parasita, ainda pouco conhecido para o homem. Dessa forma, cinco espécimens jovens daquele primata, 2 machos e 3 fêmeas, foram inoculados, intraderme, em oito sítios diferentes da região dorsal da cauda com 3 x 10(6) de promastigotas do parasita (MHOMZBR/81/M6426, Benevides, Pará), obtidas de cultura da fase estacionária. Em seguida às inoculações, a infecção experimental nos animais foi comprovada, não só pela presença de amastigotas do parasita na pele dos animais inoculados, mas, também, pela concomitância desse achado associado ao desenvolvimento de lesão cutânea nos pontos da pele onde o parasita foi inoculado. Diante desses resultados, ficou demonstrada a susceptibilidade do primata Cebus apella à infecção experimental pela Leishmama lainsoni cujo período de infecção durou quase quatro meses, suficiente para testar drogas antileishmanióticas e estudar a patogênese da doença causada por este parasita.

Leishmaniose cutânea experimental: II - aspectos evolutivos da infecção no primata Cebus apella (Cebidae) pela Leishmania (V.) Braziliensis e L. (L.) Amazonensis

Objetivando avaliar o potencial do primata C. apella como modelo experimental da leishmaniose cutânea, produzida pela L. (V.) braziliensis e L. (L.) Amazonensis , inocularam-se, via intradérmica, 3 X 10(6) de promastigotas dessas leishmanias, em 8 sítios da cauda de 10 espécimens desse primata, 5 deles com a L. (V.) braziliensis e outros 5 com a L. (L.) Amazonensis . Posteriormente, às inoculações, o exame semanal dos animais e biópsias mensais, revelaram os seguintes resultados relativos a cada parasita: a) L. (V.) braziliensis : o período de incubação foi de 15-20 dias; aos 30 dias evidenciaram-se lesões pápulo-eritematosas, que evoluíram para nódulos ao fim de 60 dias; no 3.° mês, notou-se ulceração espontânea destas lesões e, no 4° mês, deu-se o início da reparação das lesões ulceradas, culminando com a cura em um dos animais após 5 meses, em dois após 6 meses, noutro após 7 meses e, no último, após 10 meses. Quanto ao parasitismo nas lesões, foi demonstrado nos 5 animais, até 90 dias; depois disto, somente em 2 até 120 dias e, por fim, até 180 dias apenas naquele que curou depois de 10 meses, b) L. (L.) Amazonensis : o período de incubação foi de 20 dias; aos 30 dias notou- se lesões pápulo-eritematosas, que também evoluíram para nódulos ao fim de 60 dias, porém, a partir do 3.° mês, estas lesões regrediram rapidamente ao fim de 90 dias, quando não mais detectou-se o parasita na pele dos animais. Em relação aos testes de Montenegro, somente 2 dos 5 animais infectados com a L. (V.) braziliensis reagiram ao teste, 60 e 90 dias após as inoculações. Os resultados observados permitiram confirmar a infectividade do C. apella a estas leishmanias e, também, reforçar a indicação desse primata como modelo experimental da leishmaniose cutânea causada por estes parasitas.

Avaliaçao do efeito do extrato de casca de cajueiro-branco (Anacardium occidentale L.) Sobre A infecção por Leishmania (Viannia) brasiliensis

Este trabalho apresenta uma avaliação do efeito terapêutico do extrato hidroalcólico da casca de Anacardium occidentale L sobre a Leishmania (Viannia) brasiliensis. No modelo in vitro o extrato vegetal mostrou-se ativo contra promastigotas do parasita, contrastando com o modelo in vivo, onde não se observou qualquer atividade curativa.

Intradermorreação de Montenegro em cães (Mammalia: Canidae) experimentalmente inoculados por Leishmaniaguyanensis e Leishmania braziliensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae), principais agentes causadores de Leishmaniose Tegumentar na Amazônia

O teste de intradermorreação de Montenegro é utilizado para detectar infecção por Leishmania em humanos. A técnica se baseia numa reação de hipersensibilidade tardia. Os antígenos de Montenegro utilizados no experimento são soluções de antígenos homólogos brutos de Leishmania (Viannia) braziliensis e L.(V)guyanensis. Este experimento demonstrou que os animais inoculados com as espécies de Leishmania inoculadas desenvolveram enduração no local do teste mais acentuada que os animais controle. Os resultados sugerem que o teste cutâneo pode vir a ser indicado como método auxiliar de diagnóstico em cães infectados por Leishmania sp.

Development of Colombian isolates of Leishmania (Viannia) panamensis, Le. (V.) guyanensis and Le. (V.) braziliensis in the sandfly Lutzomyia intermedia (Lutz & Neiva, 1912) under experimental conditions

The development of Colombian Leishmania species of the subgenus Viannia in Lutzomyia intermedia was similar to that observed with Brazilian Le. (V.) braziliensis: colonization of the pylorus by paramastigotes; promastigotes in the midgut and massive infection of stomodeal valve. Difference was observed in the number of paramastigotes colonizing the pylorus, which was smaller in Colombian Leishmania species than Brazilian Le. braziliensis.

In vitro and in vivo activity of meglumine antimoniate produced at Farmanguinhos-Fiocruz, Brazil, against Leishmania (Leishmania) amazonensis, L (L.) chagasi and L (Viannia) braziliensis

The leishmanicidal activity of four batches of meglumine antimoniate, produced in Farmanguinhos-Fiocruz, Brazil (TAMs), was assessed and compared to Glucantime®-Aventis Pharma Ltda. Using the amastigote-like in vitro model, the active concentrations of Sb v varied from 10µg/ml to 300 µg/ml for L. (L.) chagasi and from 50µg/ml to 300µg/ml for L. (L.) amazonensis, with no statistically significant differences among the four batches of TAMs and Glucantime®. The inhibitory concentrations (IC50) determined by the amastigote-infected macrophage model for TAM01/03 and Glucantime® were, respectively: 26.3µg/ml and 127.6µg/ml for L. chagasi, 15.4µg /ml and 22.9µg/ml for L. amazonensis, and 12.1µg/ml and 24.2µg/ml for L. (V.) braziliensis. The activities of the four batches of TAMs were confirmed in an in vivo model by assessing, during eight weeks skin lesions caused by L. braziliensis in hamster that were treated with 20mg Sb v/Kg/day for 30 consecutive days. The meglumine antimoniate produced by Farmanguinhos was as effective as the reference drug, Glucantime®-Aventis, against three species of Leishmania that are of medical importance in Brazil.

Avaliação da susceptibilidade de camundongos BALB/c e Swiss, hamster e Proechimys roberti à infecção por Leishmania (Viannia) Naiffi e Leishmania (Viannia) Lindenbergi

Leishmania (Viannia) naiffi e Leishmania (Viannia) lindenbergi são espécies causadoras da leishmaniose cutânea na Amazônia e apresentam grande similaridade no seu perfil isoenzimático, anticorpos monoclonais e produção de infecção inaparente em hamsters. O fato de não se ter um modelo experimental altamente suscetível à infecção por L. (V.) naiffi e L. (V.) lindenbergi, o objetivo deste estudo foi avaliar a susceptibilidade de camundongos BALB/c e Swiss, hamster e Proechimys roberti à infecção por essas duas espécies. Foram preparados inóculos com glândulas salivares e sem glândulas, associados às formas promastigotas das duas espécies de Leishmania. Doze animais de cada espécie foram divididos em quatro grupos (machos e fêmeas inoculados com glândulas salivares e machos e fêmeas sem glândulas salivares). Todos foram inoculados intradermicamente na face dorsal das duas patas traseiras e foram observados durante 90 dias. No período de 30, 60 e 90 dias pós-inoculação, os animais foram sacrificados e diferentes fragmentos de pele do local de inoculação foram divididos e utilizados na cultura in vitro, exame microscópico direto e reação em cadeia da polimerase (PCR). Não foi possível observar lesões nos animais inoculados com L. (V.) naiffi e L. (V.) lindenbergi tanto na presença ou ausência de glândulas salivares. Assim como, formas amastigotas durante 30, 60 e 90 dias após a inoculação. Na cultura, todos os animais inoculados com L. (V.) lindenbergi não desenvolveram formas promastigotas. Por outro lado, todos os grupos de camundongos BALB/c inoculados com L. (V.) naiffi apresentaram positividade quando sacrificados com 30 dias após inoculação e até 90 dias nos machos inoculados com glândulas salivares e fêmeas inoculadas sem glândulas salivares. A PCR apresentou baixa sensibilidade comparada à cultura. Desse modo, concluímos que L. (V.) naiffi e L.(V.) lindenbergi são espécies que apresentam baixa infectividade e nenhum dos animais utilizados no estudo podem ser considerados modelo experimental altamente susceptíveis à infecção por essas duas espécies.

Insulin-like growth factor-I induced and constitutive arginase activity differs among isolates of Leishmania derived from patients with diverse clinical forms of Leishmania braziliensis infection

Arginase activity has been related to leishmaniasis development, thus we studied the constitutive and insulin-like growth factor (IGF) I-induced arginase activity of Leishmania (Viannia) braziliensis isolates from patients with different clinical forms of American tegumentary leishmaniasis (ATL). Isolates from mucosal leishmaniasis presented higher basal levels of arginase activity than isolates from other clinical forms of ATL. Isolates from disseminated leishmaniasis that present mucosal lesion in some cases reached the arginase activity similar to that of isolates from mucosal leishmaniasis upon IGF-I stimulation. Differences in arginase activity may influence disease outcomes such as evolution to mucosal lesion in patients with L (V.) braziliensis infection. (C) 2010 Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.

In vitro infectivity of species of Leishmania (Viannia) responsible for American cutaneous leishmaniasis

There is little available information regarding the infectivity of New World Leishmania species, particularly those from the Amazonian Brazil, where there are six species of the subgenus Viannia causing American cutaneous leishmaniasis (ACL). The aim of this study was to compare, in vitro, the potential infectivity of the following Leishmania (Viannia) spp.: L. (V.) braziliensis from localized cutaneous leishmaniasis (LCL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL) patients, L. (V.) guyanensis, L. (V.) shawi, L. (V.) lainsoni and L. (V.) naiffi from LCL patients only, in cultured BALB/c mice peritoneal macrophage, as well as the production of NO by the infected cells. The infectivity of parasites was expressed by the infection index and, the nitric oxide (NO) production in the macrophage culture supernatant was measured by the Griess method. It was found that L. (V.) braziliensis from MCL, the more severe form of disease, showed the highest (p <= 0.05) infection index (397), as well as the lowest NO production (2.15 mu M) compared with those of other species. In contrast, L. (V.) naiffi which is less pathogenic for the human showed the lowest infection index (301) and the highest NO production (4.11 mu M). These results demonstrated a negative correlation between the infectivity and the ability of these parasites to escape from the microbicidal activity of the host cell.

Histopathology, humoral and cellular immune response in the murine model of Leishmania (Viannia) shawi

Leishmania (Viannia) shawl was recently characterized and few studies concerning modifications in cellular and humoral immune responses in experimental leishmaniasis have been conducted. In this work, immunopathological changes induced by L. shawl in chronically infected BALB/c mice were investigated. Infected BALB/c mice developed increased lesion size associated with strong inflammatory infiltrate diffusely distributed in the dermis, with highly infected macrophages. The humoral immune response was predominantly directed toward the IgG1 isotype. The functional activity of CD4(+) and CD8(+) T cells showed significantly increased TNF-alpha mRNA levels associated with reduced IFN-gamma expression by CD4(+) T cells and the double negative (dn) CD4CD8 cell subset. High IL-4 levels expressed by CD8(+) T cells and dnCD4CD8 and TGF-beta by CD4(+) and CD8(+) T cells were detected, while IL-10 was highly expressed by all three cell subpopulations. Taken together, these results show an evident imbalance between TNF-alpha and IFN-gamma that is unfavorable to amastigote replication control. Furthermore, L. shawi seems to regulate different cell populations to express deactivating cytokines to avoid its own destruction. This study indicates BALB/c mice as a potentially good experimental model for further studies on American cutaneous leishmaniosis caused by L. shawi. (C) 2010 Elsevier Ireland Ltd. All rights reserved.

Leishmaniose cutânea na Amazônia: isolamento de Leishmania (Viannia) lainsoni do roedor Agouti paca (Rodentia: Dasyproctidae), no estado do Pará, Brasil

Fez-se o registro, pela primeira vez, do isolamento de Leishmania (V.) lainsoni de um mamífero silvestre, o roedor Agouti paca (Rodentia: Dasyproctidae), no Estado do Pará, Brasil. As amostras do parasita foram isoladas da pele, aparentemente íntegra, de 3 espécimes desse roedor, capturados no município de Tucuruí (ilha de Tocantins), em área que seria inundada pela formação do lago da hidrelétrica construída naquele município. Nenhum isolamento foi obtido de vísceras de qualquer dos animais. A identificação das amostras de L. (V.) lainsoni baseou-se na morfologia de amastigotas e promastigotas, no comportamento da infecção em "hamsters", na análise bioquímica de isoenzimas e, ainda, através de testes com anticorpos monoclonais. A natureza inaparente da infecção nos animais faz supor que o mamífero em questão possa representar um hospedeiro definitivo do parasita na região Amazônica.

Prevalência da infecção canina em áreas endêmicas de leishmaniose tegumentar americana, do município de Paracambi, Estado do Rio de Janeiro, no período entre 1992 e 1993

No município de Paracambi, Estado do Rio de Janeiro, foi realizado um inquérito epidemiológico sobre a leishmaniose tegumentar americana na população canina residente em áreas endêmicas rural e semiurbana. Foram cadastrados 179 cães e 138 (77,1%) foram examinados, segundo seus aspectos clínicos e desenvolvimento de hipersensibilidade tardia ao antígeno Imunoleish® e respostas sorológicas à reação de imunofluorescência indireta e ao ensaio imunoenzimático. Dos 9 (6,5.%) animais portadores de lesões/cicatrizes suspeitas, 66,7% foram causadas por Leishmania sp; 44,4% produziram infecção em hamsters e apresentaram crescimento em meio de cultura, compatíveis com o comportamento de Leishmania do complexo braziliensis. A caracterização molecular (análises isoenzimáticas e do perfil de restrição do KDNA) identificou 2 amostras como similares à Leishmania (Viannia) braziliensis. A prevalência da infecção canina observada através do teste cutâneo, RIFI e ELISA foi, respectivamente, 10,1%, 16,7% e 27,8%. A presença das formas clínica/subclínica da LTA na população canina associada à infecção humana sugere que o cão pode atuar como possível fonte de infecção, assim como na disseminação da doença.

An oligonucleotide probe derived from kDNA minirepeats is specific for Leishmania (Viannia)

Sequence analysis of Leishmania (Viannia) kDNA minicircles and analysis of multiple sequence alignments of the conserved region (minirepeats) of five distinct minicircles from L. (V.) braziliensis species with corresponding sequences derived from other dermotropic leishmanias indicated the presence of a sub-genus specific sequence. An oligonucleotide bearing this sequence was designed and used as a molecular probe, being able to recognize solely the sub-genus Viannia species in hybridization experiments. A dendrogram reflecting the homologies among the minirepeat sequences was constructed. Sequence clustering was obtained corresponding to the traditional classification based on similarity of biochemical, biological and parasitological characteristics of these Leishmania species, distinguishing the Old World dermotropic leishmanias, the New World dermotropic leishmanias of the sub-genus Leishmania and of the sub-genus Viannia.

Contribution to the sand fly fauna (Diptera: Phlebotominae) of Rio Grande do Sul, Brazil and Leishmania (Viannia) infections

American cutaneous leishmaniasis (ACL) is endemic in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. As reports of nearby hospitals suggest, the Parque Estadual do Turvo seems to serve as a source for the disease. During three months from November 1996 to February 1997 we collected, in this park, 2,228 sandflies (10 Lutzomyia species and 2 6species). We applied the polymerase chain reaction to 920 females which belong to the following species: Lutzomyia migonei, Lu. pessoai, Lu. fischeri, Lu. misionensis, Lu. lanei, Lu. neivai, Lu. shannoni, and Lu. monticola, in an attempt to verify natural infection by Leishmania (Viannia), the causative agent of ACL. Le. (Viannia) infections were demonstrated by DNA amplification from two Lu. pessoai and one Lu. misionensis female. Lu. pessoai have been found with leptomonas in the gut believed to be Le. (V.) braziliensis in other endemic areas of northeastern and southeastern Brazil. However, Lu. misionensis has never been found carrying a natural infection of Le. (Viannia).

Cutaneous leishmaniasis caused by members of Leishmania braziliensis complex in Nayarit, State of Mexico

An epidemiological study was carried out in the northern Mexican state, Nayarit. Fourteen patients with possible cutaneous leishmaniasis skin lesions gave positive Montenegro skin tests. Biopsies were taken from the skin ulcer and analyzed by polymerase chain reaction (PCR) with specific primers for the Leishmania mexicana complex; however all biopsies were not amplified. PCR carried out with specific primers for the L. braziliensis complex resulted in the amplification of all patient DNA. DNA from 12 out of 14 biopsies gave positive amplification with primers species specific for L. (Viannia) braziliensis and hybridized with a species specific L. (V.) braziliensis probe. These results demonstrate the presence in Nayarit of at least two members of the L. braziliensis complex. Most of the cutaneous lesions were caused by L. (V.) braziliensis and two by another species belonging to the L. braziliensis complex. As far as we are aware, this is the first report of L. (V.) braziliensis in Nayarit. The main risk factor associated with the contraction of this disease in Nayarit is attributed to working on coffee plantations.