Avaliação da técnica de aspiração ovocitária transvaginal (Ovum Pick Up) e produção in vitro de embriões da raça nelore (Bos taurus indicus) oriundos de doadoras com alterações da fertilidade

Este experimento teve como objetivo avaliar a possibilidade da utilização de fêmeas zebuínas de elevada qualidade genética, com problemas de fertilidade, adquiridos após um programa de transferência convencional de embriões, como doadoras de ovócitos em um programa de Ovum Pick Up e Produção In Vitro de embriões. Fêmeas da raça Nelore (n=16) (Bos taurus indicus), com idade média de 11 anos e 7 meses, foram submetidas às mesmas condições de ambiente, alimentação e manejo. Estes animais foram retirados do programa de T.E. por apresentarem problemas de fertilidade (cistos ovarianos, infecções genitais, mucometra e alguns casos de repetições de cio sem causa aparente). Os animais foram divididos em dois grupos conforme o tipo de patologia: GRUPO I (n=08) composto por animais que apresentaram patologias ovarianas (cistos) e GRUPO II (n=08) formado por animais com patologias extra ovarianas, ambos os grupos foram submetidos à aspiração folicular (OPU) utilizando dois tipos de agulhas (21G ; 19G ) e pressões (55 e 70mmHg) divididos em quatro tratamentos (T1 = 55/21G; T2 = 55/19G; T3 = 70/21G e T4 = 70/19G), posteriormente os ovócitos submeteramse a PIV. Foram realizadas 149 aspirações e colhidos 879 ovócitos (5,9 4,88) onde GRAU I = 16%; GRAU II = 43%; GRAU III = 21% e GRAU IV = 20%. As médias de ovócitos colhidos no GRUPO I foram (T1 = 7,06 5,10; T2= 7,00 3,64; T3 = 10,60 6,51 e T4 = 2,78 2,59) para os animais pertencentes ao GRUPO II obteve-se (T1= 4,90 4,47; T2= 2,93 3,05; T3 = 6,11 4,11 e T4 = 2,70 2,00). Para as médiasde ovócitos viáveis os resultados foram os seguintes: (T1 = 4,35 3,01; T2 = 4,88 2,96; T3 = 6,87 3,91 e T4 = 1,89 1,90) para o GRUPO I e (T1 = 2,70 2,22; T2 =1,92 1,98; T3 = 3,47 2,27 e T4 = 2,00 1,05) para o GRUPO II. Neste experimento foram levados à PIV 538 ovócitos dos quais 161 (32,85%) clivaram e 65 (13,26%) resultaram em Mórula ou Blastocistos. A análise estatística dos resultados não demonstrou diferença significativa entre os grupos quanto a colheita ovocitária. Quando analisada somente a pressão de sucção, foi observado que o tipo de agulha está diretamente relacionado a pressão da bomba de vácuo. Os melhores resultados foram obtidos com o tratamento T3 = 70/21G, além disso pode-se observar que as melhores médias de ovócitos colhidos foram as obtidas no grupo de animais que apresentaram cistos ovarianos (GRUPO I). Desta forma, concluímos neste experimento que a utilização da técnica de OPU/PIV é uma alternativa de grande utilidade no prolongamento da vida reprodutiva de animais zebuínos com alterações na fertilidade.

A influência do sistema nitrérgico no cultivo in vitro de embriões bovinos

O Óxido Nítrico (NO-) é uma molécula de sinalização celular que regula o desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Nós investigamos o papel do NO- no cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro, através do uso de N-Nitro-L-Arginina Metil Ester (L-NAME), um inibidor da produção de NO-, e L-arginina (ARG), um precursor de NO-, em diferentes períodos de cultivo (ativação do genoma embrionário e compactação). Foram avaliados seus efeitos sobre as taxas de desenvolvimento, cinética do desenvolvimento, qualidade embrionária, e expressão gênica. Os embriões foram produzidos por maturação e fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários provenientes de abatedouro frigorífico. No experimento 1, as taxas de desenvolvimento foram avaliadas em SOFaa na presença de L-NAME em diferentes períodos: do 1º ao 4º dia de cultivo (LN1-4), do 4º ao 8º (LN4-8) e do 1º ao 8º dia de cultivo (LN1-8). A inibição foi prejudicial a partir do 4º dia de cultivo (grupos LN4-8 e LN1-8), ao reduzir as taxas de eclosão (17,3%±13,44 e 13,7%± 14,51, respectivamente, p<0,05). Entretanto, o efeito mais negativo ocorreu do 1º ao 8º dia (LN1-8) em que a taxa de blastocisto foi significativamente menor comparada ao controle (29,4%±3,72 vs 47,8%±11,34, respectivamente, p<0,05). Por isso no experimento 2, a ARG (1, 10 e 50mM) foi adicionada desde o 1º dia de cultivo. As taxas de blastocisto usando 1 e 10mM de ARG foram similares ao controle (48%±13,03 e 34,2%±3,92 vs 49,4%±4,82, respectivamente, p>0,05), mas 50mM prejudicou a taxa de desenvolvimento embrionário (10,7%±7,24, p<0,001). No experimento 3, ARG a 1mM foi adicionada do 5º ao 8º dia de cultivo. Foram observadas taxas de desenvolvimento similares ao grupo GLN (somente com glutamina). Mas comparada ao controle (sem ambos os aminoácidos), rendeu melhores taxa de eclosão (54,8%±6,9 vs 41,4%±11,47, respectivamente, p<0,05) e qualidade embrionária (84,8%±2,63 vs 52%±8,62, respectivamente, p<0,05), mas não de taxa de blastocisto (49,4%±6,5 vs 49,4%±4,8, respectivamente, p>0,05). Neste período a produção de NO- foi positivamente correlacionada com a taxa de eclosão (R²=96,4%, p<0,001) e a qualidade embrionária (R²=75,5%, p<0,05). Adicionalmente, embriões foram cultivados na presença de L-NAME e ARG simultaneamente (grupo ARG/LN), do 5º ao 8º dia de cultivo, e os transcritos de OCT-4 e INT-t foram quantificados por PCR tempo real. Foi encontrada expressão similar de OCT-4 (p>0,05), mas redução de 1,8x e 1,5x de INT-t em relação aos grupos controles ARG e GLUT (p<0,05), respectivamente. Esses dados fornecem evidências da contribuição do NO-, principalmente no período entre os estágios de mórula e blastocisto, para a melhoria da eclosão e qualidade embrionária. A produção de NO- é requerida para o desenvolvimento pré-implantacional de embriões bovinos produzidos in vitro, e pode ser mediada pela suplementação do meio de cultivo com ARG.

Obtenção de oócitos e produção in vitro de embriões em doadoras lactantes da raça Gir (Bos taurus indicus)

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Influência do sêmen homospérmico, heterospérmico e do plasma seminal heterólogo sobre os parâmetros espermáticos e produção de embriões bovinos in vitro

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Interação núcleo-citoplasmática em embriões e expressão de genes imprinted em fetos bovinos produzidos in vivo, in vitro e partenogenéticos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeito da utilização de antioxidante no diluidor para a criopreservação de sêmen bovino avaliado através de testes complementares, inseminação artificial e fecundação in vitro

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Produção in vitro de embriões bovinos cultivados em duas atmosferas gasosas utilizando diferentes sistemas de tamponamento

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Efeitos do fator de crescimento dos fibrobalstos 8 (FGF8) durante a maturação in vitro do complexo cumulus-oócito bovino

Pós-graduação em Ciências Biológicas (Farmacologia) - IBB

Embriões bovinos produzidos in vitro com espermatozoides sexados por citometria de fluxo: avaliação do desenvolvimento embrionário e da expressão de genes candidatos ao reconhecimento da gestação

Pós-graduação em Genética e Melhoramento Animal - FCAV

Efeito do estresse subletal com a utilização de LED no desenvolvimento e na qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Influência da adição de fator de crescimento fibroblástico 10 (FGF10), durante a maturação oocitária, na produção in vitro de embriões bovinos

The Brazilian livestock stands out for having the world largest commercial herd of cattle and leads meat exportation and production of bovine embryos. The in vitro production (IVP) of embryos is considered an effective option to overcome problems such as infertility in cows with high economic value and also for genetic improvement of cattle. The in vitro oocyte maturation is an essential step to the success of IVP, but is still considered poor when compared to in vivo maturation. Recent studies have suggeested an important role of Fibroblast Growth Factor 10 (FGF10) on the in vitro maturation of oocytes, which favored the expression of genes related to oocyte maturation and cumulus cell expansion. Aware that maturity stage influences the final production of blastocysts, we aimed study to verify if the addition of FGF10 into the maturation medium is able to affect positively the IVP of bovine embryos. Hence, FGF10 was added to maturation in five different concentrations: 0.5 ng/mL (group 0.5), 2.5 ng/mL (group 2.5), 5 ng/mL (group 5), 10 ng/mL (group 10) and 50 ng/mL (group 50). Additionally, two other maturation groups were used, group BSA (Bovine Serum Albumin, 4 mg/mL) and group FCS (Fetal Calf Serum, 10%). The rates of cleavage, morula and blastocyst were analyzed by Analysis of Variance (ANOVA), differences of P<0.05 were considered significant. Cleavage rates did not differ between the seven groups. On the other hand, morula rate on FCS group was higher than groups BSA, 0.5, 10 and 50 (P<0.05), but did not differ among groups treated with intermediate doses of FGF10 (2.5 and 5). FCS group presented higher blastocyst rate compared to all other groups that were well below the FCS group (P<0.0001). Therefore, the use of FGF10 during oocyte maturation did not affect positively embryo development on the IVP of bovine embryos

Avaliação da taxa de concepção de novilhas e vacas (Bos taurus x Bos indicus) com o uso de sêmen sexado na inseminação artificial ou embriões produzidos in vivo e in vitro

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Controle e estimulação de crescimento folicular em doadoras da raça holandesa para a produção in vitro de embriões

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Expressão gênica e potencial de desenvolvimento in vitro dos complexos cúmulos-oócitos ovinos tratados com roscovitina

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeitos da adição do IGF-1 ou IGF-LongR3 sobre aspectos celulares e moleculares de complexos cumulus-oócito durante a maturação oocitária in vitro em bovinos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)