Tipagem molecular, perfis de sensibilidade e caracterização de transcritos diferencialmente expressos durante a infecção de Cryptococcus neoformans

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Variability in UVB Tolerances of Melanized and Nonmelanized Cells of Cryptococcus neoformans and C-laurentii

Solar radiation is one of the major factors responsible for the control of fungus populations in the environment. Inactivation by UVA and UVB radiation is especially important for the control of fungi that disperse infective units through the air, including fungi such as Cryptococcus spp. that infect their vertebrate hosts by inhalation. Cryptococcus neoformans produces melanin in the presence of certain exogenous substrates such as l-3,4 dihydroxyphenylalanine and melanization may protect the fungus against biotic and abiotic environmental factors. In the present study, we investigated the effect of exposure to an UVB irradiance of 1000 mW m(-2) (biologically effective weighted irradiance) on the survival of melanized and nonmelanized cells of four strains of C. neoformans and four strains of C. laurentii. The relative survival (survival of cells exposed to radiation in relation to cells not exposed) of cells grown 2, 4, 6 or 8 days on medium with or without L-dopa was determined after exposure to UVB doses of 1.8 and 3.6 kJ m(-2). Both the irradiance spectrum and the intensities of those doses are environmentally realistic, and, in fact, occur routinely during summer months in temperate regions. Differences in tolerance to UVB radiation were observed between the C. neoformans and C. laurentii strains. The C. neoformans strains were more susceptible to UVB radiation than the C. laurentii strains. In C. neoformans, differences in tolerance to radiation were observed during development of both melanized and nonmelanized cells. For most treatments (strain, time of growth and UVB dose), there were virtually no differences in tolerances between melanized and nonmelanized cells, but when differences occurred they were smaller than those previously observed with UVC. In tests with two strains of C. laurentii, there was no difference in tolerance to UVB radiation between melanized and nonmelanized cells during 8 days of culture; and in tests with four strains for less culture time (4 days) there were no significant differences in tolerance between melanized and nonmelanized cells of any strain of this species.

Cryptococcus nyarrowii sp nov., a basidiomycetous yeast from Antarctica

in December 1997,196 soil and snow samples were collected from Vestvold Hills, Davis Base, Antarctica. Two isolates, CBS 8804 T (pink colonies) and CBS 8805 (yellow colonies), were shown by proteome analysis and DNA sequencing to represent the same species. Results from the sequencing of the D1/D2 region of the large rDNA subunit placed this species in the hymenomycetous tree in a unique sister clade to the Trichosporonalles and the Tremellalles. The clade consists of Holtermannia corniformis CBS 6979 and CBS strains 8804(T) 8805, 8016, 7712, 7713 and 7743. Morphological and physiological characteristics placed this species in the genus Cryptococcus, with characteristics including the assimilation Of D-glucuronate and myo-inositol, no fermentation, positive Diazonium blue B and urease reactions, absence of sexual reproduction and production of starch-like compounds. Fatty acid analysis identified large proportions of polyunsaturated lipids, mainly linolleic (C-18.2) and, to a lesser extent, linolenic (C-18.3) acids. On the basis of the physiological and phylogenetic data, isolates CBS 8804(T) and CBS 8805 are described as Cryptococcus nyarrowii sp. nov.

Cryptococcus statzelliae sp nov and three novel strains of Cryptococcus victoriae, yeasts isolated from Antarctic soils

A morphological and physiological characterization of yeast strains CBS 8908, CBS 8915, CBS 8920, CBS 8925(T) and CBS 8926, isolated from Antarctic soils, was performed. Phylogenetic analyses of the sequences of the D1/D2 regions and the adjacent internal transcribed spacer (ITS) regions of the large-subunit rDNA of these strains placed them into the Tremellales clade of the Hymenomycetes. The sequence data identified strains CBS 8908, CBS 8915 and CBS 8920 as belonging to the species Cryptococcus victoriae. Strains CBS 8925(T) and CBS 8926 were found to represent an unique clade within the Hymenomycetes, with Dioszegia crocea CBS 6714(T) being their closest phylogenetic relative. Fatty acid composition and proteome fingerprint data for these novel strains were also obtained. No sexual state was observed. A novel basidiomycetous species, Cryptococcus statzelliae, is proposed for strains CBS 8925(T) and CBS 8926.

A novel psychrotolerant member of the hymenomycetous yeasts from Antarctica: Cryptococcus watticus sp nov.

Soil, snow and organic material, collected in November 1997 from the Vestvold Hills, Davis Base, Antarctica, were screened for yeasts. Two isolates, which were shown to be indistinguishable by rDNA sequencing and protein analysis by SIDS-PAGE, are described in this communication as a novel species, Cryptococcus watticus sp. nov. (type culture, CBS 9496(T) = NRRL Y-27556(T)). Sequence analyses of the 26S rDNA D1/D2 region placed C. watticus in the hymenomycetous yeasts in a cluster with Holtermannia corniformis and Cryptococcus nyarrowii. This species has been allocated to the genus Cryptococcus on the basis of physiological and morphological characteristics.

O líquido cefalorraquiano inicial nas meningencefalites por Cryptococcus neoformans

A criptococose, conhecida desde 1905, é doença grave, causada pelo Cryptococcus neoformans. Nesta entidade o estudo do líquido cefalorraquiano é muito importante visto que o sistema nervoso está envolvido em 81% dos casos5. O propósito do presente trabalho é o de evidenciar as alterações do líquido cefalorraquiano inicial nas meningencefalites criptocócicas e demonstrar a importância de exame minucioso do líquido cefalorraquiano para o diagnóstico precoce desta doença. O material é constituído por 46 observações de pacientes com diagnóstico de meningencefalite criptocócica. O quadro inflamatório crônico, caracterizado por pleocitose predominantemente linfocitária, hiperproteinorraquia e glicose diminuída foi observado em 54% das amostras de líquido cefalorraquiano. Em 69% dos casos o líquido cefalorraquiano mostrava hipertensão. A glicose estava diminuída em 61% dos pacientes e a taxa de cloretos em 16%. Eosinófilos em baixa percentagem foram observados em 48% dos casos. O criptococo foi identificado no líquido cefalorraquiano de 98% dos pacientes; é salientada a importância da pesquisa a fresco do fungo pelo método da tinta da China, sempre que uma amostra de líquido cefalorraquiano revelar pleocitose. Esta é uma conduta básica para o diagnóstico precoce da criptococose do sistema nervoso.

Isolation of human fungi from soil and identification of two endemic areas of Cryptococcus neoformans and Coccidioides immitis

The present study was carried out in two different areas of Province of Cordoba, Argentina, where there was a suspicious of endemic mycosis. The previous data were the presence of a clinical case of pulmonary cryptococcosis in one area (Alta Gracia) and the previous findings of a high incidence of coccidioidin and cryptococcin reactors in the population of the second one (Villa Dolores). In both areas soil samples for fungi were studied and Cryptococcus neoformans was found in 2/25 samples from Alta Gracia. In Villa Dolores Coccidioides immitis was isolated in 2/40 samples, and C. neoformans in 1/40 samples. Delayed hypersensitivity test with cryptococcin was determined in the population from Alta Gracia and it was found to be 5.3%. Positive cutaneous tests with coccidioidin (33.8%) and cryptococcin (31.9%) in Villa Dolores were obtained. With these findings two endemic areas of systemic mycoses in Cordoba, Argentina were delimited.

Susceptibilidad "in vitro" de cepas de Cryptococcus a 5 drogas antifungicas

Se estudió la susceptibilidad "in vitro" de 24 cepas de 3 especies del género Cryptococcus a 5 drogas antifúngicas (anfotericina B, 5 fluorocitosina, ketoconazol, itraconazol y miconazol). Las mismas se agruparon según su especie, variedad y origen de aislamiento. Para determinar la concentración inhibitoria mínima (C.I.M.) de cada droga se empleó el método de dilución en agar con el medio básico nitrogenado para levaduras, adicionado de glucosa. Se obtuvo además la media geométrica de estos valores para cada grupo y se comparó cada uno de ellos. Los resultados obtenidos fueron homogéneos con la sola excepción de las cepas de Cryptococcus sp (no neoformans), en las cuales se detectaron elevados valores de C.I.M. para la 5 fluorocitosina.

Método fluorescente (diacetato de fluoresceína e brometo de etídeo) para o estudo da viabilidade de Cryptococcus neoformans em líquor

Padronizou-se método de fluorescência (solução de diacetato de fluoresceína DF e brometo de etídio BE) para análise de viabilidade de células fúngicas, em 40 amostras de liquor, provenientes de casos comprovados de neurocriptococose. A utilização de solução aquosa de saponina a 0,3% eliminou fluorescências interferentes emitidas por hemácias e leucócitos. Após o processamento dos materiais biológicos, foram retiradas alíquotas de 0,1 ml das supensões obtidas e misturadas a volumes iguais da solução DF-BE preparada pouco antes do uso. O tempo de coloração ideal foi de 30 minutos, resultando perfeita diferenciação entre microrganismos viáveis (fluorescência verde) e não viáveis (fluorescência vermelha).

Pesquisa do antígeno circulante de Cryptococcus neoformans em líquido cefalorraqueano pelo teste de coaglutinação

Foram utilizadas 82 LCR de transplantados renais (24 pacientes), 43 LCR de pacientes com críptococose comprovada (controles positivos), 35 LCR de pacientes com outras doenças (histoplasmose, paracoccidioidomicose e infecções bacterianas) como controles negativos. Os primeiros foram cultivados em ágar Sabouraud com sementes de girassol e juntamente com os demais examinado pelo teste de látex para pesquisa de antígeno circulante de C. neoformans, qualitativamente. O teste de Coaglutinação foi realizado qualitativamente e quantitativamente, encontrando-se títulos até a diluição 1:2048. Não foram detectadas reações falso-positivas ou falso-negativas entre os controles. Como prova de valor diagnóstico demonstrou: sensibilidade - 92,1%; especificidade - 92,6% e eficiência - 92,3%. Provou também ser um teste rápido, exato e econômico, embora sua escolha dependa do pré-tratamento de LCR (80ºC por 3 a 5 minutos) e soros (diluição ou álcali-precipitação) para evitar autoaglutinação e aumentar a sensibilidade da reação.

Deteccion de antigeno del polisacarido capsular de Cryptococcus neoformans en pacientes con SIDA y neurocriptococosis en São Paulo, Brasil

Antígeno del polisacárido capsular (Ag PC) de Cryptococcus neoformans fue detectado por la técnica de aglutinación de latex (AL) en LCR y suero de pacientes con Sindrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) y primer episodio de neurocriptococosis, usando como patrón el examen micológico (examen directo y cultivo) de LCR. Se obtuvo una sensibilidad del 100% de AL para detectar AgPC de C. neoformans, el cual por su rápidez permite tratamiento específico precoz. Títulos iniciales de AgPC de la levadura en esos pacientes pueden ser > 1.000.000, pareciendo que cuando esos títulos están presentes en suero, se relacionan con mortalidad durante el tratamiento. En los pacientes que sobrevivieron se observó que el examen micológico directo y AgPC de C. neoformans, en LCR y suero, permanecen positivos aún después de tratamiento y mejoría clínica del paciente.

Caracteristicas epidemiologicas de 105 casos de criptococosis diagnosticados en la república Argentina entre 1981-1990

Se presentan 105 casos de criptococosis diagnosticados en la República Argentina, entre 1981 y 1990. El número anual de casos fue hasta 1987, de 4 a 8, aumentó desde 1988 por influencia del SIDA y llegó a 35 casos en 1990. La criptococosis no asociada al SIDA se mantuvo entre 3 y 7 casos anuales. Globalmente, el grupo etario más afectado fue el de 20-39 años y la distribución por edad fue diferente en las poblaciones con y sin SIDA. La mediana de la edad de las poblaciones total, asociada al SIDA y a otras causas predisponentes fue de 30, 30 y 45 años, respectivamente. El predominio del sexo masculino fue mucho más evidente entre los pacientes HIV+ que en los que no padecían esta última infección. La causa predisponente fue el SIDA en 57 pacientes, otra en 20 y era desconocida en 28 casos. Estimando indirectamente, el porcentaje de pacientes con SIDA que padecieron criptococosis en este período fue 6,19% (57 casos en 920 HIV+). Cryptococcus neoformans variedad neoformans fue aislado de 101 pacientes y la variedad gattii (serotipo B) de los 4 restantes. Los datos obtenidos son similares a los observados en Europa y Estados Unidos.

Possibility of in-hospital infection by Cryptococcus neoformans in patients with AIDS

The objective of the present work was to carry out a survey of soil samples taken from different areas of a hospital of infectious disease located in the city of Cordoba, where three AIDS patients were hospitalized during different periods in the same ward. The three of them returned with meningeal cryptococcosis between three or five months after having been discharged. Cryptococcus neoformans was isolated in 8/10 samples collected outside the hospital, near the pigeon house. The samples collected from the AIDS patients ward and its surroundings were negative. These findings suggest that the patients may have been infected by the fungus during their first stay in hospital.

Cryptococcus neoformans var. neoformans isolado do solo

Na tentativa de identificar a possível fonte de infecção, inquiriu-se, na história epidemiológica de 42 pacientes portadores de criptococose, o contato com pombos. Informações compatíveis com nicho ecológico do Cryptococcus neoformans foram positivas em 16. Foram colhidas 59 amostras de solo contendo fezes de pombos, penas e material orgânico. O C. neoformans foi detectado em 4. Uma das amostras era originada da capital e três do interior do estado. O sorotipo A do C. neoformans isolado de um liquor coincidiu com o sorotipo da amostra isolada do centro de Porto Alegre, local apontado pelo paciente como possível fonte de infecção, caracterizando caso de Cryptococcus neoformans var. neoformans.