999 resultados para Citotoxidade de mediação celular Teses
Resumo:
A Echinodorus macrophyllus (Alismataceae), conhecida como chapu de couro no Brasil, usada popularmente para tratar doenas reumticas e inflamatrias. Neste trabalho, foram avaliados os efeitos antiinflamatrios do extrato aquoso de E. macrophyllus (EAEm) e suas fraes etanlicas no modelo murino de air pouch. Para a obteno das fraes, 7 g do EAEm foram aplicadas em uma coluna cromatogrfica aberta de slica gel eluda com diferentes concentraes de etanol. Os cromatogramas do EAEm/fraes foram obtidos usando um sistema de HPLC. Foram obtidas quatro fraes, duas delas com maior rendimento. Resumidamente, a bolha de ar foi induzida pela injeo de 5 mL de ar estril (s.c) no dorso de camundongos SW machos (25-35 g). Aps 3 dias, mas 3 mL de ar estril foram injetados para manter a bolha. No sexto dia, cada grupo (n = 4) foi tratado intraperitoneal (ip) ou oralmente (v.o) com EAEm (25 ou 250 mg/kg), Fr20 ou Fr40 (2,5, 25, 50 ou 100 mg/kg) e os controles com indometacina (10 mg/kg, v.o.) ou veculo (salina). Uma hora depois, 1 mL de salina ou de carragenina 1% estril foi injetada dentro da bolha. Aps 4 h, a cavidade foi lavada com NaCl 0,9%, EDTA 2 mM (1 mL), para a determinao do nmero de leuccitos, volume do exsudato e concentrao de protenas. Clulas do exsudato foram preparadas em citocentrfuga e coradas pelo mtodo do Pantico para a contagem diferencial dos leuccitos. Cortes histolgicos coletados dos diferentes grupos foram fixados com formol tamponado 10% (pH 7,4) por 7 dias, corados com HE e analisados em MO. A anlise da expresso da iNOS e da COX-2 foi realizada em clulas do exsudato por RT-PCR. O acmulo de nitrito (NO2−) no sobrenadante do cultivo de clulas RAW 264.7 foi determinado usando um ensaio colorimtrico baseado na reao de Griess. Os resultados foram expressos como mdia EP e comparados usando ANOVA seguido de teste de Dunnet. Os experimentos foram realizados em triplicata. No modelo air pouch, a injeo de carragenina 1% aumentou tanto a migrao celular quanto a concentrao de protena no exsudato. Contudo, enquanto o pr-tratamento com a Fr40 aumentou a resposta inflamatria, o pr-tratamento com o EAEm e a Fr20, sobretudo por via i.p., inibiu esta resposta quando comparado ao grupo controle tratado apenas com o veculo. Assim, foram observadas as seguintes razes de inibio da migrao de clulas: EAEm, i.p. a 25 mg/kg (66,44%) e a 250 mg/kg (87,27%) e Fr20 a 2,5 mg/kg (26,89%), 25 mg/kg (60,06%), 50 mg/kg (63,13%) e a 100 mg/kg (77,47%). Em relao contagem diferencial, o EAEm e a Fr20 afetaram principalmente o nmero de neutrfilos, inibindo sua migrao no exsudato. O EAEm e a Fr20 tambm reduziram a concentrao total de protenas no exsudato principalmente no tratamento i.p.; EAEm a 25 e 250 mg/kg mostrou 3,33 0,55 e 2,05 0,51 mg/mL, respectivamente, quando comparado aos grupos controles (Indometacina 2.88 0.64 mg/mL; Veculo 5.48 0.88 mg/mL). A Fr20 a 2,5, 25, 50 e 100 mg/kg mostrou 4,788 0,444, 1,417 0,519, 2,474 0,529 e 2,215 0, 361 mg/mL. A anlise histolgica mostrou infiltrado celular, principalmente composto de leuccitos polimorfonucleares ao longo da derme inflamada de animais tratados com veculo. O tratamento com o EAEm ou Fr20 reduziu a infiltrao de leuccitos no tecido inflamado. Alm disso, o tratamento com o EAEm e a Fr20 mostrou atividade supressora sobre a expresso de iNOS e COX-2, e mostrou efeitos inibitrios na produo de NO induzida por LPS. Concluindo, todos estes resultados confirmam o potencial antiinflamatrio sugerido para esta planta e fornecem uma base para a compreenso de seus mecanismos moleculares de ao. Contudo, outros estudos devem ser realizados para melhor elucidar as vias pelas quais o EAEm e a Fr20 exercem seus efeitos antiinflamatrios. Alm disso, estudos fitoqumicos devem ser realizados para identificar os compostos ativos no EAEm e na Fr20.
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O gnero Pterodon pertence famlia das Papilonaceas e inclui cinco espcies nativas do Brasil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli e P. abruptus Benth., sendo a espcie objeto deste estudo a P. polygalaeflorus Benth.. Seus frutos so livremente comercializados em mercados da flora medicinal e utilizados pela medicina popular devido a propriedades anti-reumtica, analgsica, antiinflamatria, dentre outros efeitos associados a esses frutos. O principal uso popular est relacionado ao efeito antiartrtico que parece se encontrar na frao oleosa do fruto. O objetivo deste trabalho foi avaliar o extrato etanlico de Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) quanto ao seu potencial antiinflamatrio crnico atravs do modelo de artrite induzida por colgeno (CIA) e seu efeito sobre os linfcitos in vitro, bem como sobre a expanso de clulas MAC-1+ induzida por adjuvante completo de Freund (AFC). A caracterizao qumica do EEPpg foi realizada por cromatografia em camada delgada (TLC), cromatografia lquida de alta performance (HPLC) e cromatografia gasosa acoplada a espectrmetro de massa (GC-MS), atravs dos quais uma gama de compostos, incluindo terpenides de polaridades variadas e flavonides, foram observados. No modelo de CIA, o EEPpg reduziu significativamente parmetros associados ao desenvolvimento e progresso da doena e severidade da doena , inibindo em at 99% o seu desenvolvimento e levando a ausncia de sinais clnicos evidentes aps tratamento com as menores doses do extrato (0,01 mg/kg e 0,001 mg/kg). O tratamento com EEPpg tambm reduziu caractersticas histopatolgicas tpicas de articulaes de animais com CIA, que tambm so observadas na artrite reumatide. O EEPpg reduziu significativamente o peso dos linfonodos dos camundongos, bem como o nmero absoluto de segmentados, moncitos e linfcitos no sangue. In vitro, O EEPpg mostrou uma atividade anti-proliferativa dos esplencitos estimulados com concanavalina A (Con A) ou lipopolissacardeo (LPS) analisada atravs do ensaio de reduo do sal de tetrazlio MTT, corroborada pelo seu efeito sobre o ciclo celular de linfcitos estimulados com Con A, onde o EEPpg nas concentraes de 5, 10 e 20 μg/mL reduziu significativamente, de maneira concentrao-dependente, o nmero de clulas nas fases S+G2/M e aumentou na fase G0/G1 do ciclo celular. O efeito anti-proliferativo do EEPpg parece tambm estar associado ao aumento da apoptose dos linfcitos aps estimulao com Con A, com aumento estatisticamente significativo no percentual de clulas mortas por apoptose nas maiores concentraes . O EEPpg inibiu a expanso de clulas Mac-1+ induzida por AFC no bao, porm no no peritnio. Esse resultado sugere um efeito inibidor do EEPpg sobre a migrao celular para as articulaes artrticas. Esses resultados contribuem para a validao do uso popular de P. polygalaeflorus contra doenas relacionadas a processos inflamatrios e imunes, sobretudo na artrite reumatide, antes nunca demonstrado.
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Os estudos abordando a regenerao dos tecidos dentrios ganharam uma nova perspectiva com a utilizao das clulas-tronco. E novas perspectivas tm surgido com a bioengenharia tecidual e as terapias periodontais e pulpares regeneradoras. O objetivo deste trabalho foi desenvolver o modelo experimental de autotransplante em ratos visando compar-lo tcnica de reimplante e estudar a capacidade teraputica das clulas da medula ssea em diferentes biomateriais utilizados como matriz para a terapia de clulas-tronco no reparo dos tecidos dentais. Foram utilizados 23 ratos Wistar divididos em grupos de 1, 3, 15 e 60 dias para as tcnicas de reimplante e autotransplante. Os grupos com injeo de clulas-tronco (CT) foram: (1) grupo de 3 dias, combinado tcnica de reimplante; (2) grupo de 15 dias com ambas as tcnicas. Blocos contendo os trs dentes molares superiores de cada lado dos ratos foram removidos, feitas radiografias periapicais e as peas foram processadas para incluso em parafina. Foram avaliadas a espessura do ligamento periodontal (LPD) comparada entre os diferentes grupos e a morfologia celular e matriz extracelular relacionadas superfcie radicular, ao osso alveolar e poro mdia do LPD, alm das clulas da polpa dental de cada grupo. As clulas isoladas a partir da medula-ssea foram incubadas por 24h, 48h, e 72h em placas de cultura contendo membranas de colgeno bovino tipo I - CollaTape (Integra LifeSciences Corporation, Plainsboro, NJ, USA), enxerto sseo - Extra Graft XG-13 (Silvestre Labs Quimica e Farmaceutica LTDA, RJ, Brazil) ou um dente molar de rato. Os espcimes foram observados em um microscpio invertido para contagem de clulas e processadas para observao no microscpio eletrnico de varredura (MEV). Os grupos de 1 e 3 dias apresentaram medidas de LPD significativamente maiores para a tcnica de autotransplante quando comparadas ao reimplante. O grupo de 3 dias com CT no apresentou alteraes pulpares significativas, diferente do controle (sem CT) O grupo de 15 dias com CT apresentou as mesmas caractersticas histolgicas do grupo sem injeo de CT. A observao ao MEV dos biomateriais revelou que as clulas apresentaram pouca adeso e proliferao no enxerto sseo e no cemento dentrio quando comparados membrana colgena. A tcnica de reimplante associada injeo de clulas-tronco sugere alguma influncia da terapia com as clulas-tronco sobre a polpa. As distncias aumentadas no LPD com a tcnica de autotransplante podem no influenciar tanto o sucesso da tcnica. As clulas mesenquimais da medula ssea possuem grande potencial para colonizarem a membrana colgena CollaTape que mostrou vantagens sobre o enxerto sseo Extra Graft XG-13 como biomaterial para a aderncia e a proliferao de clulas mononucleares da medula ssea, permitindo a diferenciao destas clulas.
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A ipseidade na tica argumentativa de Paul Ricoeur a referncia bsica da hermenutica do si ao qual sempre retorna. Ela estabelece a constante mediação reflexiva em oposio pretensa posio imediata do sujeito. A mesmidade do si tem como contrapartida o outro. Na comparao, a mesmidade sinnimo de identidade-idem em oposio ipseidade-ipse que inclui a alteridade. Esta incluso questiona a capacidade do si construtivo da tica e, portanto, responsvel jurdica e moralmente nas vrias injunes do outro. O projeto tico de Ricoeur compreensvel a partir e dentro de sua peculiar metodologia que ele denomina de dialtica entre a tica teleolgica e a moral deontolgica. Esta dialtica se fundamenta na trade do desejo, do dever e da sabedoria prtica em recproca atividade, privilegiando a dimenso teleolgica do desejo da vida boa com o outro e para o outro em instituies justas. A tica argumentativa tem a funo de dar contedo as duas dialticas pela incluso do outro no si mesmo sem o qual a reflexo sobre a ipseidade perderia o sentido. A sabedoria prtica da tica e do julgamento moral em situao inclui a discusso porque o conflito insupervel e determina o argumento para o consenso eventual. Nossa tese a afirmao da capacidade do si mesmo atuar aes construtivas. Alm da critica ideologia e utopia, Ricoeur fundamenta a dialtica entre o princpio-esperana e o princpio de responsabilidade mediante a via utpica do futuro e a via realista da preocupao com o presente diante dos casos inditos em que a vida e o ecossistema se associam. A imputao pessoal e coletiva desde o passado, no presente para o futuro devida responsabilidade. A ipseidade constri o futuro no presente atravs de decises ticas.
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A esporotricose uma doena mictica, infecciosa e crnica, que envolve o tecido cutneo e subcutneo, e que pode afetar seres humanos e animais. Esta micose sempre foi atribuda a um nico patgeno, o Sporothrix schenckii, um fungo termodimrfico, que cresce como levedura a 37 C e como miclio temperatura ambiente. No entanto, nos ltimos anos, foi demonstrado que isolados identificados como S. schenckii apresentavam grande variabilidade gentica, sugerindo que este txon consiste em um complexo de espcies. Esta doena causada pela implantao traumtica do patgeno fngico, porm, os mecanismos de invaso e disseminao deste microorganismo, bem como as molculas envolvidas nestes processos, ainda so pouco conhecidos. Com base nessas informaes, este trabalho visa identificar molculas de superfcie deste patgeno envolvidas na interao deste fungo com protenas matriciais, bem como analisar diferenas fenotpicas entre espcies do denominado complexo Sporothrix. Foram utilizados, neste estudo, cinco isolados de Sporothrix spp., sendo trs isolados clnicos, um isolado ambiental e um isolado de gato. A virulncia de cada isolado foi comparada capacidade adesiva protena matricial fibronectina. Foi observado que os isolados com maior capacidade infectiva eram os que apresentavam maior capacidade adesiva fibronectina. Verificamos ento a expresso de adesinas para fibronectina na superfcie de cada isolado, por Western blot, e observamos que os isolados mais virulentos e com maior capacidade adesiva expressavam mais adesinas para fibronectina. Bandas reativas com o anticorpo monoclonal contra adesina gp70 (mAb P6E7) foram reveladas nos extratos de parede celular dos isolados estudados. Anlises por microscopia confocal revelaram a co-localizao da gp70 com a adesina para fibronectina na superfcie dos isolados. Anlises filogenticas demonstraram que os isolados estudados possuam diferenas genotpicas capazes de agrup-los em duas espcies, S. schenckii e S. brasiliensis. Esta anlise revelou que o isolado avirulento era S. brasiliensis e no S. schenckii, como se pensava. Este dado novo nos levou a verificar se a virulncia e as caractersticas fenotpicas estariam relacionadas ao gentipo. A avaliao da virulncia mostrou que outro isolado de S. brasiliensis era to virulento quanto os isolados de S. schenckii. Alm disso, as caractersticas morfolgicas, como tamanho, forma e perfil de crescimento, das fases miceliana e leveduriforme, e caractersticas microscpicas da parede das leveduras tambm foram avaliadas. Porm, no foi possvel correlacionar, de forma clara, a morfologia celular com a especiao do gnero Sporothrix. A expresso da gp70 na superfcie das duas espcies foi verificada e foi observado que o isolado virulento de S. brasiliensis quase no expressa a gp70 na sua superfcie em contraste com o isolado avirulento de S. brasiliensis, que alm de expressar esta glicoprotena em grande quantidade ainda a libera para o meio extracelular. Este estudo mostra que h uma correlao direta entre virulncia e expresso de adesinas, porm, sem qualquer relao entre caractersticas fenotpicas e gentipo.
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Camundongos C57BL/6 machos com oito semanas de idade alimentados com diferentes dietas durante 16 semanas: de alta densidade energtica (ADE, 26% das calorias de carboidrato, 60% de gordura e 14% de protena) ou dieta padro (CO, 76% das calorias de carboidrato, 10% de gordura e 14% de protena). Comparado ao grupo CO, o grupo ADE apresentou maior ganho de massa e maior depsito de tecido adiposo, bem como maiores nveis plasmticos de triglicerdeos, LDL-c, ALT, AST e fosfatase alcalina e com maiores nveis de corticosterona plasmtica, glicose de jejum e insulina com uma consequente resistncia insulina (avaliado pelo HOMA-IR). No TOTG, a glicose plasmtica aumentou ao mximo aps 15 min. da administrao de glicose oral em ambos os grupos. Entretanto os nveis de glicose foram maiores no grupo ADE que no grupo CO (P<0.0001). O clearance de glicose no grupo ADE foi reduzido, permanecendo aumentado aps 120 min. (P<0.001), caracterizando intolerncia a glicose no grupo ADE. O teste intraperitoneal de tolerncia insulina mostrou uma rpida reduo na glicose plasmtica aps 15 minutos da administrao de insulina em ambos os grupos, mas significativamente aumentada no grupo ADE (P<0.0001), permanecendo desta forma at os 120 min. aps a administrao. Concluindo, camundongos C57BL/6 respondem a dieta ADE desenvolvimento os sinais e sintomas associados sndrome metablica observada em humanos. Por conseguinte, este modelo animal poder ajudar-nos a compreender melhor as alteraes em rgos alvos associadas com a sndrome metablica, assim como a possibilidade de tratamentos diferentes.
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Desde la perspectiva de este ao 2010, el presente libro podra ser considerado como una segunda etapa del camino emprendido por los editores en el bienio 1999-2000. Por aquel entonces propusimos a los alumnos de nuestro curso de doctorado Bases y mecanismos de la diferenciacin, un enfoque por aquel entonces novedoso a la hora de desarrollar la docencia de tercer ciclo. La novedad propuesta a los alumnos consisti en la adaptacin de los tradicionales trabajos de los cursos de doctorado a la redaccin de un captulo de libro, destinado a cubrir el vaco que exista en el mercado editorial por aquella poca en cuanto a libros de diferenciacin se refera. Pero con este enfoque de la docencia tenamos previsto algo ms complejo. No pretendamos tan solo implicar a los alumnos en profundizar en un tema de su inters relacionado con la diferenciacin, sino tambin ayudarles y guiarles en la redaccin de un documento cientfico con los conocimientos adquiridos, inicindoles en las bsquedas bibliogrficas, la seleccin de textos, la correccin de estilo, etc. En definitiva, implicarles de alguna manera ms activa en su docencia, y que su papel no fuese meramente pasivo de oyentes de conferencias. En aquellos momentos se empezaba a hablar del espritu reformador de Bolonia, y quisimos experimentar algunos de los aspectos que en l se propugnaban con un nmero reducido de alumnos muy bien preparados.
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Petiveria alliacea L. pertence famlia Phytolaccacceae e conhecida popularmente como guin ou amansa-senhor, entre outros nomes. Tem sido muito utilizada na medicina popular como agente teraputico, devido diversas propriedades farmacolgicas. Estudos fitoqumicos tm contribudo para a descoberta de grande variedade de substncias biologicamente ativas produzidas em diferentes partes da planta (saponinas, alcalides, flavonides, sulfetos, taninos, cumarinas, entre outros). A anlise qumica da raiz tem revelado grande quantidade de derivados sulfurados, principalmente o dibenzil trissulfeto (DTS), com atividade antifngica, antibacteriana, antioxidante e anticancergena. Visando avaliar a produo biotecnolgica do DTS, o presente trabalho teve como objetivo, otimizar a cultura de novas linhagens de calos, clulas em suspenso e embries somticos, a partir de plantas de P. alliacea L. mantidas in vitro, com o monitoramento da capacidade biossinttica das culturas. Os resultados mostraram que a produo de calos friveis foi possvel em explantes foliares inoculados em meio MS suplementado com PIC ou 2,4-D. Alm da resposta calognica, foi observada a produo de estruturas globulares caracterizadas como embries somticos. A ocorrncia de embriognese somtica direta foi confirmada atravs da anlise histolgica do processo regenerativo. A induo de embries somticos gerou um processo de embriognese secundria altamente repetitivo at 150 dias de cultura e converso a plantas em freqncia de 5%. Em relao cultura de clulas em suspenso a partir dos calos friveis, observou-se uma diminuio do crescimento celular ao longo das subculturas. As culturas em suspenso originadas de tecido embriognico secundrio continuaram o processo repetitivo em meio lquido e apresentaram converso a plantas em taxas mais baixas que as obtidas em meio slido. A obteno de plantas completas a partir dos embries somticos demonstrou a possibilidade de utilizao desse sistema para a micropropagao dessa espcie. O monitoramento fitoqumico dos sistemas de cultura in vitro e plantas de campo mantidas em casa de vegetao durante 02 anos apresentou diferenas significativas, confirmando que a cultura de tecidos pode alterar as rotas metablicas. A cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas realizada com extrato em diclorometano de embries secos e hexnico de embries frescos e razes secas de plantas provenientes de embries somticos, demonstrou a presena do DTS, constituindo, portanto, sistemas in vitro importantes para a modulao desta substncia.
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O objetivo desta tese analisar os modos de vida na cidade de Belterra. Foram analisados dois perodos de tempo (1934-1945 / 1995-2011) da vida social do lugar, para identificar como a ao do capital, com base no apoio estatal, se deslocou para a Amaznia Brasileira, se apropriou de grandes pores do territrio, destruiu ou desorganizou os modos de vida preexistentes em nome das exigncias do mercado internacional. No primeiro perodo, buscou-se identificar como ocorreu o processo de ressocializao do migrante em uma cidade-empresa da Companhia Ford Industrial do Brasil, baseada na criao de uma hierarquia sociofuncional do sistema fordista de produo e uma restrio da convivncia dos americanos em relao aos brasileiros. No segundo perodo, analisamos a presena da soja na cidade e em seu entorno. O rural e o urbano esto contidos na cidade, simultaneamente, como prticas socioculturais que no se fazem pela oposio. A ligao entre os dois perodos encontra-se nas mudanas dos modos de vida preexistentes, no uso predatrio da natureza e na enunciao de esteretipos pelos de fora contra a populao do lugar sob o abrigo da fala do desenvolvimento. As tcnicas usadas foram a observao de campo, as entrevistas, as conversas informais, o levantamento bibliogrfico, documental e fotogrfico. Permitindo a construo de mapas que resumem estes movimentos. Pudemos realizar entrevistas com perguntas semi-estruturadas para tratar dos dois perodos de tempo considerados em nossa pesquisa. Desse modo, observamos que na cidade praticada, onde se realiza a mediação entre o lugar e a totalidade-mundo, os hbridos presentes na vida cotidiana e o contexto de sua realizao nos informam sobre a Amaznia e, em particular, da presena tnica (quilombola e indgena), do rural e do urbano na cidade, uma vez que a vida naquele espao subnacional no se realiza pelas oposies criadas pelo pensamento abstrato.
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A doena Inflamatria Intestinal (DII) uma desordem caracterizada pela inflamao crnica do trato gastrointestinal. Os dois principais tipos de DII so a Retocolite Ulcerativa (RCU) e a Doena de Crohn (DC) e ambas cursam com importantes alteraes no estado nutricional (EN). O objetivo deste estudo foi identificar as diferenas na composio corporal entre pacientes com DC, RCU e indivduos saudveis, alm de comparar o estado nutricional dos trs grupos de pacientes, ajustando para fatores que podem interferir no EN, como o uso atual de corticosterides, a atividade fsica, a atividade de doena, a idade e o sexo. Foi realizado um estudo transversal que incluiu 101 pacientes com DII (50 com DC e 51 com RCU) e 35 indivduos saudveis, selecionados no Ambulatrio do Hospital Universitrio Pedro Ernesto (HUPE) da Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ). Foram colhidas informaes scio-demogrficas e pessoais, tais como: prtica de atividade fsica, tabagismo, doenas pregressas e procedimentos cirrgicos prvios. Outras informaes necessrias pesquisa foram coletadas em pronturio mdico. A avaliao antropomtrica foi realizada por meio das seguintes medidas: peso corporal; altura; circunferncias do brao, da cintura (CC) e do quadril; dobras cutneas do trceps, subescpula, supra-ilaca e da coxa; e circunferncia muscular do brao (CMB). A anlise da composio corporal foi realizada por meio da bioimpedncia eltrica (BIA), utilizando-se o aparelho Biodynamics modelo 450. As variveis laboratoriais analisadas foram: glicose, hemograma completo, perfil lipdico, protenas totais, albumina, globulina, velocidade de hemossedimentao e protena C reativa. O peso, o ndice de massa corporal, a CC e o percentual de gordura corporal calculado a partir da aferio das dobras cutneas, foram menores nos pacientes com DC, quando comparados aos indivduos saudveis e/ou aos pacientes com RCU. A CMB foi menor nos pacientes com DC e RCU quando comparados aos indivduos saudveis, porm sem apresentar diferenas entre os dois grupos de pacientes. Por BIA, verificou-se que os pacientes com DC apresentaram valores de massa magra, massa celular corprea, massa extracelular, gua corporal total e gua extracelular menores quando comparados aos indivduos saudveis. Os nveis sricos de colesterol total, protenas totais e albumina, e a contagem total de hemcias foram menores nos indivduos com DC quando comparados aos indivduos do grupo controle e/ou aos indivduos do grupo da RCU. Os pacientes com RCU exibem composio corporal semelhante da populao saudvel. Em contraposio, os pacientes com DC apresentam EN amplamente comprometido com depleo de gordura corporal e massa magra em relao aos demais indivduos
Resumo:
Corynebacterium diphtheriae pode ser isolado tanto de quadros de difteria clssica, quanto de infeces sistmicas, como endocardite. O fibrinognio (Fbn) e a fibronectina (Fn) so glicoprotenas presentes na matriz extracelular de tecidos conjuntivos. A influncia destas protenas na patognese das infeces locais e invasivas causadas por C. diphtheriae objeto de estudo devido ao fato do bacilo diftrico poder ser encontrado em leses nas quais o Fbn e a Fn so predominantes, incluindo a pseudomembrana diftrica e vegetaes cardacas presentes na endocardite infecciosa. So crescentes as evidncias de que o C. diphtheriae pode, alm de aderir, ser internalizado por clulas em cultura. No presente estudo, investigou-se a participao de C. diphtheriae e das protenas de superfcie 67-72p na aderncia Fn e ao Fbn de plasma humano e a eritrcitos. A aderncia s clulas HEp-2 e internalizao tambm foram analisadas. A participao de 67-72p nos mecanismos de morte celular foi avaliada atravs das coloraes por Azul de Tripan e 46-diamidino-2-fenil indol (DAPI), pelo ensaio de reduo utilizando dimetil-tiazol-difenil tetrazlio (MTT) e por citometria de fluxo. As 67-72p foram extradas da superfcie da amostra toxignica C. diphtheriae subsp. mitis CDC-E8392 atravs de processos mecnicos e precipitao com sulfato de amnio saturado. Anlises por SDS-PAGE e immunoblotting detectaram a presena das bandas proticas de 67 e 72kDa nas amostras toxinognicas e atoxinognicas analisadas, as quais pertenciam aos biotipos fermentador e no fermentador de sacarose. C. diphtheriae foi capazes no s de formar agregados na presena de plasma de coelho, mas tambm de converter Fbn em fibrina independentemente da presena do gene tox. No entanto, a amostra atoxinognica ATCC 27010 (tox-) foi menos aderente ao Fbn do que a homloga ATCC 27012 (tox+). A interao bacteriana com eritrcitos foi inibida somente pela Fn. Ligaes entre Fn e/ou Fbn com 67-72p foram demonstradas por dot blotting, ELISA e/ou ensaios utilizando fluorescncia. As 67-72p foram capazes de inibir as interaes bacterianas com o Fbn, indicando que 67-72p podem participar do processo de aderncia do patgeno aos tecidos do hospedeiro. Atravs da microscopia ptica, demonstrou-se a ligao de 67-72p adsorvidas em microesferas de ltex com clulas HEp-2. Anticorpos de coelho do tipo IgG anti 67-72p interferiram somente com a expresso do padro de aderncia do tipo difuso, normalmente apresentado pela amostra CDC-E8392. A Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET) e a inibio da internalizao bacteriana pela IgG anti 67-72p ou por 67-72p indicaram o papel de 67-72p como invasina. Alteraes do citoesqueleto de clulas HEp-2 com acumulao de actina polimerizada, induzida por microesferas sensibilizadas com 67-72p, foi observada pelo fluorescent actin staining (FAS) test. Foi visualizado um aumento no nmero de bactrias viveis no compartimento intracelular aps tratamento de clulas HEp-2 ou dos microrganismos com Fn. A presena de partculas de ltex adsorvidas com 67-72p no interior de vacolos frouxos em clulas HEp-2 sugeriu que estas protenas podem causar efeito citotxico. A avaliao atravs das coloraes com Azul de Tripan, DAPI e os ensaios de reduo utilizando MTT demonstraram um decrscimo na viabilidade de clulas tratadas com 67-72p. As mudanas morfolgicas observadas 3 horas aps o incio do tratamento com 67-72p incluram vacuolizao, fragmentao nuclear e formao de corpsculos apoptticos. A citometria de fluxo revelou um decrscimo de 15,13% no volume/tamanho de clulas tratadas com 67-72p. Alm disso, o ensaio utilizando Iodeto de Propdio (IP) e Anexina V (AV)-FITIC demonstrou que havia 66,1% de clulas vivas (IP-/AV-), 16,6% de clulas em apoptose inicial (IP-/AV+) e 13,8% de clulas em apoptose tardia ou necrose secundria. Em concluso, as 67-72p esto diretamente envolvidas na interao com Fn e Fbn. As protenas no fimbriais 67-72p so hemaglutininas implicadas na aderncia a clulas respiratrias e na internalizao. Alm disso, estas protenas podem atuar como fatores de virulncia em potencial para induzir apoptose de clulas epiteliais nos estgios iniciais da difteria e nas infeces invasivas causadas pelo C. diphtheriae
Resumo:
O presente estudo trata da relao que se estabelece entre o atual modelo de sociedade e os objetivos para a formao dos alunos no ensino superior, com foco nos processo educacional na modalidade a distncia. Os impactos das transformaes causadas pela sociedade do Informacionismo foram estudados em reas como a cultura, a economia e a sociedade, mas ainda esto carecendo de estudos mais profundos sobre seus reflexos sobre a educao e a formao humana. Um novo tempo exige uma nova forma de compreender como esses processos se do e como podemos viabiliz-los, para alm da tcnica, com o olhar voltado para a educao, mas tambm para a formao humana, com objetivos que nos permitam conceber uma Universidade para o sculo XXI. Os cursos superiores na modalidade a distncia oferecem a possibilidade de um processo educacional com o uso das novas tecnologias digitais, em ambientes virtuais de aprendizagem, como novas forma de comunicao e interao que reconfiguram as relaes entre: espao e tempo; professor e aluno e, principalmente, ensino e formao. Por esse motivo, a tese central centra-se na necessidade dos tutores, docentes responsveis diretamente pela interao com os alunos na EAD, exercerem a sua autonomia para a escolha das estratgias de mediação que faam seus alunos aprenderem efetivamente e com liberdade para a tomada de decises sobre as suas prticas em sala de aula, para uma EAD formadora.
Resumo:
O Trypanosoma cruzi o agente etiolgico da doena de Chagas, transmitida atravs de insetos vetores triatomneos durante a alimentao no hospedeiro vertebrado. Os triatomneos ingerem numa nica alimentao cerca de 10 mM de heme ligado hemoglobina. O heme uma importante molcula no metabolismo dos organismos. Um mecanismo intracelular importante no controle de sua homeostase a degradao enzimtica pela Heme Oxigenase (HO) formando biliverdina (Bv), monxido de carbono e ferro. Como esta enzima no est presente no genoma de T. cruzi, esse trabalho tem por objetivo identificar uma atividade funcional de HO neste parasito, uma vez que dados do nosso laboratrio mostram a presena de biliverdina nas incubaes dessas clulas com heme. No presente trabalho testamos o efeito do SnPPIX (inibidor da HO-1), CoPPIX (indutor da HO-1) e Bv sobre a proliferao da forma epimastigota do parasito. A adio de SnPPIX diminuiu a proliferao do parasito na tanto na ausncia quanto na presena de heme. Quando a Bv foi adicionada cultura esse efeito foi revertido; a Bv aumenta a proliferao celular na presena de heme. Por outro lado, a adio de CoPPIX no interferiu na proliferao. Posteriormente, mostramos atravs da tcnica de immunoblotting, utilizando anticorpo monoclonal contra a HO-1, um aumento da expresso de uma protena em resposta ao heme. Diferentemente das HO-1 j descritas que possuem massa molecular de 32 kDa, a nica banda reconhecida pelo anticorpo apresenta 45 kDa. Analisamos tambm a expresso da HO-1 na presena de CoPPIX, SnPPIX e biliverdina, e somente o CoPPIX foi capaz de modular os nveis de expresso da HO-1. A anlise estrutural atravs da tcnica de imunocitoqumica mostrou uma maior expresso da enzima na presena de heme, e que a HO-1 de T. cruzi pode ter mais de uma localizao, apresentando marcao citoplasmtica e glicossomal. A fim de investigar a sequncia da HO-1 de T. cruzi, o DNA genmico foi extrado para amplificao por PCR do gene da HO-1 utilizando oligonucleotdeos desenhados no genoma de T. cruzi. Os dois pares de oligonucleotdeos utilizados nao foram capazes de amplificar uma sequncia equivalente a uma HO. Em seguida, utilizamos a tcnica de imunoprecipitao, seguida de immunoblotting, com anticorpo anti-HO-1, com objetivo de concentrar a protena alvo, e observamos um aumento significativo do imunocomplexo nas clulas tratadas com heme 300 mM, cerca de 2 vezes em relao ao controle. Dando seguimento tentativa de identificao da HO-1 de T. cruzi, utilizamos a tcnica de espectrometria de massa a partir de eletroforese unidimensional, que mostrou uma grande alterao do perfil protico na presena de heme, mas futuros experimentos so necessrios, como eletroforese 2D, para a identificao da protena alvo
Resumo:
Ruptura do tendo calcneo uma das leses tendneas mais frequentes. Embora a maioria dos trabalhos sugira que o exerccio seja benfico na cicatrizao tendnea, no h consenso sobre o efeito do antiinflamatrio neste contexto. Trabalhos experimentais tentam reproduzir leso aguda deste tendo, em diferentes espcies animais. Neste estudo, descrevemos uma tcnica de tenotomia completa do tendo calcneo direito em ratos e, em seguida, avaliamos os efeitos do uso do antiinflamatrio e do exerccio aerbico, isoladamente e em combinao, sobre a proliferao celular e o perfil biomecnico do tendo calcneo, durante o processo de cicatrizao aps tenotomia. Estudo experimental com 156 ratos machos adultos, da raa Wistar, com idade mdia de 3 meses e peso mdio de 300g. Aps anestesia com tiopental e com auxlio da microscopia de luz, foi realizada inciso longitudinal posterior de cinco milmetros, em direo proximal, a partir da tuberosidade posterior do calcneo da pata direita do rato. Foi feito corte transversal do tendo calcneo, a sete milmetros da tuberosidade do calcneo, com preservao do tendo plantar. Utilizamos as tcnicas de Hematoxilina e Eosina, Picrosirius-red e Resorcina-fucsina de Weigert para avaliao da cicatrizao tendnea e das fibras dos sistemas colgeno e elstico. Aps a tenotomia, metade dos animais receberam tenoxicam intramuscular por 7 dias e no 8o dia iniciou-se protocolo de exerccio em esteira na metade de cada grupo. Os ratos foram divididos aleatoriamente em 4 grupos de tratamento: A sem antiinflamatrio E sem exerccio (controle); B com antiinflamatrio E com exerccio; C sem antiinflamatrio E com exerccio; D com antiinflamatrio E sem exerccio. Os animais foram eutanasiados com 1, 2, 4 e 8 semanas aps a tenotomia, para avaliao histolgica pelo PCNA, e biomecnica atravs do teste de resistncia trao e da medida do ciclo locomotor. Foram realizados anlise de varincia, teste de Kruskal-Wallis e o mtodo de Bonferroni, no programa R Project, verso 2.11.1. O tempo cirrgico mdio foi de 1 minuto e 24 segundos, sem complicaes observadas at a 8a semana ps-operatria. Observamos proliferao celular e fibrilognese com duas semanas, e diminuio da celularidade e das fibras elsticas na 8a semana, alm de mudanas na organizao estrutural do sistema colgeno. Encontramos pico da imunomarcao com PCNA na 2a semana em todos os grupos, exceto no grupo A, cujo pico aconteceu com 1 semana da tenotomia. Evidenciamos resistncia trao significativamente maior (p=0,02) nos ratos submetidos ao exerccio, 8 semanas aps ruptura. Nos grupos com antiinflamatrio, observamos um ciclo locomotor mais estvel durante todo o tempo avaliado. Consideramos a tcnica cirrgica experimental de tenotomia completa do tendo calcneo, realizada com auxlio da microscopia de luz e preservao do tendo plantar, simples, rpida, com sinais de cicatrizao tendnea normal e de fcil reproduo em ratos. O exerccio aerbico, iniciado precocemente aps tenotomia completa do tendo calcneo, significativamente benfico na sua recuperao biomecnica e o uso combinado com antiinflamatrio confere maior estabilidade na marcha, o que pode proteger contra rerruptura tendnea em ratos
Resumo:
Os autores tm como objetivo, investigar a matriz extra celular, musculatura lisa e densidade vascular do prepcio de pacientes tabagistas. Espcimes de prepcio foram obtidas de 20 jovens adultos (mdia de idade= 27.2) submetidos a postectomia. Dentre os pacientes analisados, um grupo (n=10) possui histria prvia de tabagismo (3 to 13 maos/ano, mdia = 5.8 3.2), e outro grupo (n=10) formam o grupo controle, no fumantes. A colorao de Tricrmico Masson foi utilizada para quantificar tecido conectivo, musculatura lisa e vasos. A colorao Resorcina-fucsina de Weigert foi utilizada para estabelecer as fibras do sistema elstico e a colorao, Vermelho de Picrosirius para o estudo do colgeno. O estudo estereolgico foi realizado utilizando o software Image J, para determinar as densidades volumtricas. Para a anlise bioqumica o colgeno total foi determinado em μg de hidroxiprolina por MG de tecido seco. O estudo estatstico foi realizado lanando mo do t-teste (p<0,05). Fibras do sistema elstico de fumantes apresentaram-se aumentadas em 42.5% quando comparado ao grupo controle (p=0,002). Em contraste, musculatura lisa (p=0,42) e densidade vascular (p=0,16) no mostraram nenhuma diferena estatstica. Foi realizado uma anlise quantitativa utilizando Vermelho de Picrosirius sob luz polarizada, que evidenciou a presena de colgeno tipo I e III, sem diferena estatisticamente significativa. A concentrao total do colgeno no mostrou diferena entre tabagistas e o grupo controle. (73.1μg/mg 8.0 vs. 69.2μg/mg 5.9, respectivamente, p=0,23). Tabagismo est associado a um significante aumento de fibras do sistema elstico do tecido prepucial. Estes resultados podem, possivelmente, explicar os altos ndices de falha na uretroplastia peniana, com uso de flap de prepcio em fumantes
