A yeast gene, MGS1, encoding a DNA-dependent AAA+ ATPase is required to maintain genome stability

Changes in DNA superhelicity during DNA replication are mediated primarily by the activities of DNA helicases and topoisomerases. If these activities are defective, the progression of the replication fork can be hindered or blocked, which can lead to double-strand breaks, elevated recombination in regions of repeated DNA, and genome instability. Hereditary diseases like Werner's and Bloom's Syndromes are caused by defects in DNA helicases, and these diseases are associated with genome instability and carcinogenesis in humans. Here we report a Saccharomyces cerevisiae gene, MGS1 (Maintenance of Genome Stability 1), which encodes a protein belonging to the AAA+ class of ATPases, and whose central region is similar to Escherichia coli RuvB, a Holliday junction branch migration motor protein. The Mgs1 orthologues are highly conserved in prokaryotes and eukaryotes. The Mgs1 protein possesses DNA-dependent ATPase and single-strand DNA annealing activities. An mgs1 deletion mutant has an elevated rate of mitotic recombination, which causes genome instability. The mgs1 mutation is synergistic with a mutation in top3 (encoding topoisomerase III), and the double mutant exhibits severe growth defects and markedly increased genome instability. In contrast to the mgs1 mutation, a mutation in the sgs1 gene encoding a DNA helicase homologous to the Werner and Bloom helicases suppresses both the growth defect and the increased genome instability of the top3 mutant. Therefore, evolutionarily conserved Mgs1 may play a role together with RecQ family helicases and DNA topoisomerases in maintaining proper DNA topology, which is essential for genome stability.

Lack of hepcidin gene expression and severe tissue iron overload in upstream stimulatory factor 2 (USF2) knockout mice

We previously reported the disruption of the murine gene encoding the transcription factor USF2 and its consequences on glucose-dependent gene regulation in the liver. We report here a peculiar phenotype of Usf2−/− mice that progressively develop multivisceral iron overload; plasma iron overcomes transferrin binding capacity, and nontransferrin-bound iron accumulates in various tissues including pancreas and heart. In contrast, the splenic iron content is strikingly lower in knockout animals than in controls. To identify genes that may account for the abnormalities of iron homeostasis in Usf2−/− mice, we used suppressive subtractive hybridization between livers from Usf2−/− and wild-type mice. We isolated a cDNA encoding a peptide, hepcidin (also referred to as LEAP-1, for liver-expressed antimicrobial peptide), that was very recently purified from human blood ultrafiltrate and from urine as a disulfide-bonded peptide exhibiting antimicrobial activity. Accumulation of iron in the liver has been recently reported to up-regulate hepcidin expression, whereas our data clearly show that a complete defect in hepcidin expression is responsible for progressive tissue iron overload. The striking similarity of the alterations in iron metabolism between HFE knockout mice, a murine model of hereditary hemochromatosis, and the Usf2−/− hepcidin-deficient mice suggests that hepcidin may function in the same regulatory pathway as HFE. We propose that hepcidin acts as a signaling molecule that is required in conjunction with HFE to regulate both intestinal iron absorption and iron storage in macrophages.

Suppression of tumorigenicity by the wild-type tuberous sclerosis 2 (Tsc2) gene and its C-terminal region.

The Tsc2 gene, which is mutationally inactivated in the germ line of some families with tuberous sclerosis, encodes a large, membrane-associated GTPase activating protein (GAP) designated tuberin. Studies of the Eker rat model of hereditary cancer strongly support the role of Tsc2 as a tumor suppressor gene. In this study, the biological activity of tuberin was assessed by expressing the wild-type Tsc2 gene in tumor cell lines lacking functional tuberin and also in rat fibroblasts with normal levels of endogenous tuberin. The colony forming efficiency of Eker rat-derived renal carcinoma cells was significantly reduced following reintroduction of wild-type Tsc2. Tumor cells expressing the transfected Tsc2 gene became more anchorage-dependent and lost their ability to form tumors in severe combined immunodeficient mice. At the cellular level, restoration of tuberin expression caused morphological changes characterized by enlargement of the cells and increased contact inhibition. As with the full-length Tsc2 gene, a clone encoding only the C terminus of tuberin (amino acids 1049-1809, including the GAP domain) was capable of reducing both colony formation and in vivo tumorigenicity when transfected into the Eker rat tumor cells. In normal Rat1 fibroblasts, conditional overexpression of tuberin also suppressed colony formation and cell growth in vitro. These results provide direct experimental evidence for the tumor suppressor function of Tsc2 and suggest that the tuberin C terminus plays an important role in this activity.

Microsatellite instability in childhood rhabdomyosarcoma is locus specific and correlates with fractional allelic loss.

Replication errors (RERs) were initially identified in hereditary nonpolyposis colon cancer and other tumors of Lynch syndrome II. Mutations in genes involved in mismatch repair give rise to a mutator phenotype, resulting in RERs. The mutator phenotype is thought to predispose to malignant transformation. Here we show that in the embryonal form of childhood rhabdomyosarcoma, RERs also occur, but in contrast to hereditary nonpolyposis colon cancer, only a subset of the microsatellite loci analyzed show RERs. The occurrence of RERs is strongly correlated with increased fractional allelic loss (P < 0.001), suggesting that the occurrence of RERs is a secondary phenomenon in rhabdomyosarcoma. Coincidental loss of genes involved in mismatch repair, possibly due to their proximity to tumor suppressor genes involved in tumor progression of embryonal form of childhood rhabdomyosarcoma, could explain the observed phenomenon.

Thymus transplantation, a critical factor for correction of autoimmune disease in aging MRL/+mice.

MRL/MP-+/+ (MRL/+) mice develop pancreatitis and sialoadenitis after they reach 7 months of age. Conventional bone marrow transplantation has been found to be ineffective in the treatment of these forms of apparent autoimmune disease. Old MRL/+ mice show a dramatic thymic involution with age. Hematolymphoid reconstitution is incomplete when fetal liver cells (as a source of hemopoietic stem cells) plus fetal bone (FB; which is used to recruit stromal cells) are transplanted from immunologically normal C57BL/6 donor mice to MRL/+ female recipients. Embryonic thymus from allogeneic C57BL/6 donors was therefore engrafted along with either bone marrow or fetal hematopoietic cells (FHCs) plus fragments of adult or fetal bone. More than seventy percent of old MRL/+ mice (> 7 months) that had been given a fetal thymus (FT) transplant plus either bone marrow or FHCs and also bone fragments survived more than 100 days after treatment. The mice that received FHCs, FB, plus FT from allogeneic donors developed normal T cell and B cell functions. Serum amylase levels decreased in these mice whereas they increased in the mice that received FHCs and FB but not FT. The pancreatitis and sialoadenitis already present at the time of transplantations were fully corrected according to histological analysis by transplants of allogeneic FHCs, FB and FT in the MRL/+ mice. These findings are taken as an experimental indication that perhaps stem cell transplants along with FT grafts might represent a useful strategy for treatment of autoimmune diseases in aged humans.

Adenine phosphoribosyltransferase-deficient mice develop 2,8-dihydroxyadenine nephrolithiasis.

Adenine phosphoribosyltransferase (APRT) deficiency in humans is an autosomal recessive syndrome characterized by the urinary excretion of adenine and the highly insoluble compound 2,8-dihydroxyadenine (DHA) that can produce kidney stones or renal failure. Targeted homologous recombination in embryonic stem cells was used to produce mice that lack APRT. Mice homozygous for a null Aprt allele excrete adenine and DHA crystals in the urine. Renal histopathology showed extensive tubular dilation, inflammation, necrosis, and fibrosis that varied in severity between different mouse backgrounds. Thus, biochemical and histological changes in these mice mimic the human disease and provide a suitable model of human hereditary nephrolithiasis.

Enhanced pathologic properties of Dutch-type mutant amyloid beta-protein.

Cerebrovascular amyloid beta-protein (Abeta) deposition is a pathological feature of several related disorders including Alzheimer disease and hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis Dutch-type (HCHWA-D). HCHWA-D is caused by a point mutation in the gene that encodes the Abeta precursor and results in a Glu --> Gln substitution at position 22 of Abeta. In comparison to Alzheimer disease, the cerebrovascular Abeta deposition in HCHWA-D is generally more severe, often resulting in intracerebral hemorrhage when patients reach 50 years of age. We recently reported that Abeta(1-42), but not the shorter Abeta(1-40) induces pathologic responses in cultured human leptomeningeal smooth muscle cells including cellular degeneration that is accompanied by a marked increase in the levels of cellular Abeta precursor and soluble Abeta peptide. In the present study, we show that the HCHWA-D mutation converts the normally nonpathologic Abeta(1-40) into a highly pathologic form of the peptide for cultured human leptomeningeal smooth muscle cells. These findings suggest that these altered functional properties of HCHWA-D mutated Abeta may contribute to the early and often severe cerebrovascular pathology that is the hallmark of this disorder.

Adaptive mutation sequences reproduced by mismatch repair deficiency.

Adaptive reversions of a lac frameshift mutation in Escherichia coli are -1 deletions in small mononucleotide repeats, whereas growth-dependent reversions are heterogeneous. The adaptive mutations resemble instability of simple repeats, which, in hereditary colon cancer, in yeast, and in E. coli occurs in the absence of mismatch repair. The postulate that mismatch repair is disabled transiently during adaptive mutation in E. coli is supported here by the demonstration that the growth-dependent mutation spectrum can be made indistinguishable from adaptive mutations by disallowing mismatch repair during growth. Physiologically induced mismatch repair deficiency could be an important mutagenic mechanism in cancers and in evolution.

X-ray structure of clotting factor IXa: active site and module structure related to Xase activity and hemophilia B.

Hereditary deficiency of factor IXa (fIXa), a key enzyme in blood coagulation, causes hemophilia B, a severe X chromosome-linked bleeding disorder afflicting 1 in 30,000 males; clinical studies have identified nearly 500 deleterious variants. The x-ray structure of porcine fIXa described here shows the atomic origins of the disease, while the spatial distribution of mutation sites suggests a structural model for factor X activation by phospholipid-bound fIXa and cofactor VIIIa. The 3.0-A-resolution diffraction data clearly show the structures of the serine proteinase module and the two preceding epidermal growth factor (EGF)-like modules; the N-terminal Gla module is partially disordered. The catalytic module, with covalent inhibitor D-Phe-1I-Pro-2I-Arg-3I chloromethyl ketone, most closely resembles fXa but differs significantly at several positions. Particularly noteworthy is the strained conformation of Glu-388, a residue strictly conserved in known fIXa sequences but conserved as Gly among other trypsin-like serine proteinases. Flexibility apparent in electron density together with modeling studies suggests that this may cause incomplete active site formation, even after zymogen, and hence the low catalytic activity of fIXa. The principal axes of the oblong EGF-like domains define an angle of 110 degrees, stabilized by a strictly conserved and fIX-specific interdomain salt bridge. The disorder of the Gla module, whose hydrophobic helix is apparent in electron density, can be attributed to the absence of calcium in the crystals; we have modeled the Gla module in its calcium form by using prothrombin fragment 1. The arched module arrangement agrees with fluorescence energy transfer experiments. Most hemophilic mutation sites of surface fIX residues occur on the concave surface of the bent molecule and suggest a plausible model for the membrane-bound ternary fIXa-FVIIIa-fX complex structure: fIXa and an equivalently arranged fX arch across an underlying fVIIIa subdomain from opposite sides; the stabilizing fVIIIa interactions force the catalytic modules together, completing fIXa active site formation and catalytic enhancement.

Use of yeast artificial chromosomes (YACs) in studies of mammalian development: production of beta-globin locus YAC mice carrying human globin developmental mutants.

To test whether yeast artificial chromosomes (YACs) can be used in the investigation of mammalian development, we analyzed the phenotypes of transgenic mice carrying two types of beta-globin locus YAC developmental mutants: (i) mice carrying a G-->A transition at position -117 of the A gamma gene, which is responsible for the Greek A gamma form of hereditary persistence of fetal hemoglobin (HPFH), and (ii) beta-globin locus YAC transgenic lines carrying delta- and beta-globin gene deletions with 5' breakpoints similar to those of deletional HPFH and delta beta-thalassemia syndromes. The mice carrying the -117 A gamma G-->A mutation displayed a delayed gamma- to beta-globin gene switch and continued to express A gamma-globin chains in the adult stage of development as expected for carriers of Greek HPFH, indicating that the YAC/transgenic mouse system allows the analysis of the developmental role of cis-acting motifs. The analysis of mice carrying 3' deletions first provided evidence in support of the hypothesis that imported enhancers are responsible for the phenotypes of deletional HPFH and second indicated that autonomous silencing is the primary mechanism for turning off the gamma-globin genes in the adult. Collectively, our results suggest that transgenic mice carrying YAC mutations provide a useful model for the analysis of the control of gene expression during development.

Estresse oxidativo em porfiria hepática experimental disparada por succinilacetona - um inibidor da ácido 5-aminolevulínico desidratase

Para otimizar um modelo experimental para o estudo do desbalanço redox em porfirias relacionadas ao acúmulo de ácido 5-aminolevulínico-(ALA), via inibição da ALA desidratase-(ALA-D), ratos foram tratados com o éster metílico de succinilacetona-(SAME), um catabólito da tirosina que inibe fortemente a ALA-O, mimetízando o estado metabólico observado nos portadores de portirias e tirosinemias. Estabeleceram-se modelos de tratamento agudo por 36 e 18 h. No primeiro, os animais receberam 3 injeções de SAME (10, 40 ou 80 mg/kg, grupos Ali-IV). No segundo, os animais receberam 3 injeções de 40 mg/kg de SAME, ALA ou éster metílico de ALA (grupos BII-IV), ALA:SAME (30: 10 mg/kg, grupo BV), ou 10 mg/kg SAME (grupo BVI). Paralelamente, avaliou-se se os sintomas neurológicos característicos das portirias decorriam de danos oxidativos mitocondriais. Para isso, aplicou-se uma tecnologia óptica para medidas da difusão da depressão cortical que determinou a oxigenação e o estado redox do cit c em mitocôndrias do córtex cerebral de ratos submetidos ao tratamento crônico com ALA (40 mg/kg), SAME (10 e 40 mg/kg) e ALA:SAME (30: 1O mg/kg), a cada 48 h, durante 30 dias. Tratamento agudo/36 h: Os níveis de ALA no plasma, fígado, cérebro e urina e o clearance renal do ALA aumentaram nos grupos tratados. A atividade de ALA-D e a coproporfirina urinária reduziram. A marcação para proteínas carboniladas, ferro e ferritina aumentou no fígado e cérebro dos grupos tratados, especialmente no All. Os níveis de malondialdeído hepático aumentaram no grupo AIV. A razão GSH/GSH+GSSG e a atividade de GPx cerebrais aumentaram nos grupos AIV e AIII, respectivamente. Consistentemente com estes dados indicando um desbalanço oxidativo induzido pelo SAME, alterações mitocondriais e citosólicas ultraestruturais foram reveladas, especialmente no fígado. Tratamento agudo/18 h: Os níveis de ALA plasmáticos aumentaram nos grupos tratados, exceto em BIV. O grupo BII mostrou aumento dos níveis hepáticos de ALA. Interessantemente, a inibição da atividade de ALA-D não foi evidenciada. O conteúdo de ferro plasmático aumentou no grupo BII. Para os grupos tratados com 10 e 40 mg SAME/kg, a atividade de SOD hepática reduziu ~50% com a extensão do tratamento de 18 para 36 h, sugerindo que este último é mais efetivo em promover danos oxidativos induzidos pelo ALA. Tratamento crônico/30 dias: Embora nenhuma alteração tenha sido evidenciada no estado redox dos animais tratados, o tratamento com ALA reduziu o fluxo sanguíneo cerebral (CBF) e o consumo de oxigênio-(CMRO2), sugerindo uma vasoconstrição mediada pelo ALA, efeito este confirmado por ensaios de reatividade vascular conduzidos em anéis de aorta de ratos incubados com ALA. O tratamento com ALA:SAME restaurou os níveis de CBF e CMRO2. Interessantemente, a disponibilidade do radical superóxido-(O2•-) estava reduzida nos anéis de aorta incubados com ALA. Juntos, estes dados: a)validam o modelo de tratamento agudo/36 h para o estudo bioquímico e dos possíveis efeitos fisiológicos induzidos pelo ALA, e b)sugerem que as alterações mediadas pelo ALA exógeno levam à vasoconstrição.

Student notes from medical lectures by Benjamin Rush, undated

The volumes contain student notes on a course of medical lectures given by Dr. Benjamin Rush (1746-1813) while he was Professor of the Institutes of Medicine and Clinical Practice at the University of Pennsylvania Medical School, likely in circa 1800-1813. The notes indicate Rush often referenced the works or teachings of contemporaries such as Scottish physicians William Cullen, John Brown, John Gregory, and Robert Whytt, and Dutch physician Herman Boerhaave. He frequently included anecdotes and case histories of his own patients, as well as those of other doctors, to illustrate his lecture topics. He also advised students to take notes on the lectures after they ended to allow them to focus on what they were hearing. Volume 1 includes notes on: physician conduct during visits to patients; human and animal physiology; voice and speech; the nervous system; the five senses; and faculties of the mind. Volume 2 includes notes on: food, the sources of appetite and thirst, and digestion; the lymphatic system; secretions; excretions; theories of nutrition; differences in the minds and bodies of women and men; reproduction; pathology; a table outlining the stages of disease production; “disease and the origin of moral and natural evil”; contagions; the role of food, drink, and clothing in producing disease; worms; hereditary diseases; predisposition to diseases; proximate causes of diseases; and pulmonary conditions. Volume 3 includes notes on: the pulse; therapeutics, such as emetics, sedatives, and digitalis, and treatment of various illnesses like pulmonary consumption, kidney disease, palsy, and rheumatism; diagnosis and prognosis of fever; treatment of intermitting fever; and epidemics including plague, smallpox, and yellow fever, with an emphasis on the yellow fever outbreaks in Philadelphia in 1793 and 1797.

Hukum Mŭm-bhagi pusaka : manuscript, 1832

According to the colophons (ff. 15r and 25r), copy completed on 22 Dhū al-Qaʻdah 1247 AH [April 22, 1832 AD] or on 25 Dhū al-Qaʻdah 1247 AH [April 25, 1832 AD].

Lost in Translation? Russian Media Portrayals and Laypersons’ Interpretations of Angelina Jolie’s Breast Cancer Discourse

In May 2013, Angelina Jolie revealed that because she had a family history of breast and ovarian cancer and carried a rare BRCA gene mutation, she had undergone a preventive double mastectomy. Media coverage has been extensive around the world, including in Russia, not an English-language country, where all global news is inevitably filtered by translation. After examining the reactions of Russian mass media and members of the public to Jolie’s disclosure, I consider what transformations have occurred with Jolie’s message in the process of cross-cultural transfer. I explore the mass media portrayal of Jolie’s announcement, laypersons’ immediate and prolonged reactions, and the reflections of patients involved directly in the field of hereditary breast cancer. To my knowledge, this multifaceted and bilingual project is the first conceptualization of Jolie’s story as it has been translated in a different sociocultural environment. I start with examination of offline and online publications that appeared in Russia within two months after Jolie’s announcement. In this part of my analysis, I conceptualize the representation of Jolie’s case in Russian mass media and grasp what sociocultural waves were generated by this case among general lay audiences. Another part of my study contains the results of qualitative in-depth interviews. Eight women with a family history of hereditary breast cancer were recruited to participate in the research. The findings represent Jolie’s case through the eyes of Russian women with the same gene mutation as Jolie. Consolidating my findings, I argue that Jolie’s announcement was misinterpreted and misrepresented by Russian mass media, as well as misunderstood by a considerable part of the media audience. Jolie’s perspective on hereditary breast cancer mostly remained unheard among members of the Russian public. I make suggestions about the reasons for such a phenomenon, and demonstrate how Jolie’s case is implicated in politics, economics, and the culture of contemporary Russia.

A prova ilícita na investigação de paternidade

A presente dissertação versa sobre a prova ilícita na investigação de paternidade, com a percepção que inexistem direitos e garantias absolutos. Sob esse ponto de vista, propõe-se a demonstrar que tanto o direito à prova quanto a garantia constitucional da inadmissibilidade da prova obtida por meios ilícitos são passíveis de sofrer restrições. Essas restrições, entretanto, não podem implicar na supressão de direitos e garantias fundamentais. Elas devem limitar-se ao estritamente necessário para a salvaguarda de outros direitos constitucionalmente protegidos, à luz de um juízo de ponderação entre os valores conflitantes. Os valores colidentes a serem analisados no presente trabalho são, por um lado, a proteção constitucional dispensada à intimidade, à vida privada, à imagem, à honra, ao sigilo da correspondência, às comunicações telegráficas, aos dados, às comunicações telefônicas e ao domicílio do suposto pai e, por outro, o direito do filho conhecer a sua origem genética e receber do genitor assistência material, educacional e psicológica, além da herança no caso de morte deste. Avultam-se, ainda, os comandos constitucionais da paternidade responsável (CF, o art. 226, § 7º) e da prioridade absoluta que a Constituição Federal confere às questões afetas à criança e ao adolescente. Nessa linha de perspectiva, procura conciliar o direito fundamental ao conhecimento da origem genética com a garantia constitucional que veda a obtenção da prova por meios ilícitos, reduzindo, quando necessário, o alcance de um desses valores contrastantes para que haja a preservação do outro e o restabelecimento do equilíbrio entre eles. Com o intuito de facilitar a compreensão do assunto, o estudo sobre a prova ilícita na investigação de paternidade encontra-se dividido em três capítulos. No primeiro capítulo são estudados o objeto da prova na investigação de paternidade, os fatos a provar, as teorias sobre o objeto da prova, o ônus da prova, a distribuição e a inversão do ônus da prova na investigação de paternidade, o momento da inversão do ônus da prova, o dever de colaboração e a realização do exame de DNA sem o consentimento das partes. Partindo da compreensão da prova como instrumento capaz de propiciar ao juiz o convencimento dos fatos pertinentes, relevantes e controvertidos deduzidos pelas partes como fundamento da ação ou da defesa, sustenta-se que os fatos a provar não são apenas os principais, mas, também, os acessórios que se situem na mesma cadeia deles. Desenvolve-se, outrossim, estudo sobre as teorias utilizadas pela doutrina para explicar o objeto da prova, a saber: a) a teoria clássica; b) a teoria da afirmação; c) a teoria mista. Nesse tópico, merece ênfase o fato das legislações brasileira e portuguesa estarem alicerçadas sob as bases da teoria clássica, em que pesem as divergências doutrinárias sobre o assunto. No item reservado ao ônus da prova, este é concebido como uma atividade e não como uma obrigação, diante da autonomia de vontade que a parte tem para comportar-se da maneira que melhor lhe aprouver para alcançar o resultado pretendido. Embora não traduza um dever jurídico demonstrar a veracidade dos fatos que ensejam a constituição do direito alegado, quem não consegue reunir a prova dos fatos que alega corre o risco de perder a demanda. No que tange à regra de distribuição do ônus da prova, recomenda-se a observação das disposições do art. 333 do CPC, segundo as quais incumbe ao autor comprovar o fato constitutivo do seu direito e ao réu a existência de fato impeditivo, modificativo ou extintivo do direito do autor. Argumenta-se que o CPC brasileiro adota o modelo estático de distribuição do ônus da prova, pois não leva em conta a menor ou maior dificuldade que cada parte tem para produzir a prova que lhe incumbe. Porém, ressalta-se o novo horizonte que se descortina no anteprojeto do novo CPC brasileiro que se encontra no Congresso Nacional, o qual sinaliza no sentido de acolher a distribuição dinâmica do ônus da prova. Esse novo modelo, contudo, não afasta aquele previsto no art. 333 do CPC, mas, sim, o aperfeiçoa ao atribuir o ônus a quem esteja em melhores condições de produzir a prova. Ao tratar do dever de colaboração, idealiza-se a busca descoberta da verdade como finalidade precípua do ordenamento jurídico. E, para se alcançar a justa composição da lide, compreende-se que as partes devem atuar de maneira escorreita, expondo os fatos conforme a verdade e cumprindo com exatidão os provimentos formais. Sob essa ótica, sustenta-se a possibilidade de inversão do ônus da prova, da aplicação da presunção legal de paternidade e até mesmo da condução coercitiva do suposto pai para a realização de exames, caso o mesmo a tanto se recuse ou crie, propositalmente, obstáculo capaz de tornar impossível a colheita da prova. Defende-se que a partir da concepção do nascituro, a autonomia de vontade dos pais fica restringida, de forma que a mãe não pode realizar o aborto e o pai não pode fazer pouco caso da existência do filho, recusando-se, injustificadamente, a submeter-se a exame de DNA e a dar-lhe assistência material, educacional e psicológica. É por essa razão que, em caráter excepcional, se enxerga a possibilidade de condução coercitiva do suposto pai para a coleta de material genético, a exemplo do que ocorre no ordenamento jurídico alemão (ZPO, § 372). Considera-se, outrossim, que a elucidação da paternidade, além de ajudar no diagnóstico, prevenção e tratamento de algumas doenças hereditárias, atende à exigência legal de impedir uniões incestuosas, constituídas entre parentes afins ou consanguíneos com a violação de impedimentos matrimoniais. Nesse contexto, a intangibilidade do corpo não é vista como óbice para a realização do exame de DNA, o qual pode ser feito mediante simples utilização de fios de cabelos com raiz, fragmentos de unhas, saliva e outros meios menos invasivos. O sacrifício a que se submete o suposto pai mostra-se, portanto, ínfimo se comparado com o interesse superior do investigante que se busca amparar. No segundo capítulo, estuda-se o direito fundamental à prova e suas limitações na investigação de paternidade, a prova vedada ou proibida, a distinção entre as provas ilegítima e ilícita, a manifestação e alcance da ilicitude, o tratamento dispensado à prova ilícita no Brasil, nos Estados Unidos da América e em alguns países do continente europeu, o efeito-à-distância das proibições de prova na investigação de paternidade e a ponderação de valores entre os interesses em conflito: prova ilícita x direito ao conhecimento da origem genética. Nesse contexto, o direito à prova é reconhecido como expressão do princípio geral de acesso ao Poder Judiciário e componente do devido processo legal, materializado por meio dos direitos de ação, de defesa e do contraditório. Compreende-se, entretanto, que o direito à prova não pode ser exercido a qualquer custo. Ele deve atender aos critérios de pertinência, relevância e idoneidade, podendo sofrer limitações nos casos expressamente previstos em lei. Constituem exemplos dessas restrições ao direito à prova a rejeição das provas consideradas supérfluas, irrelevantes, ilegítimas e ilícitas. A expressão “provas vedadas ou proibidas” é definida no trabalho como gênero das denominadas provas ilícita e ilegítima, servindo para designar as provas constituídas, obtidas, utilizadas ou valoradas com afronta a normas de direito material ou processual. A distinção que se faz entre a prova ilícita e a ilegítima leva em consideração a natureza da norma violada. Quando há violação a normas de caráter processual, sem afetar o núcleo essencial dos direitos fundamentais, considera-se a prova ilegítima; ao passo em que havendo infringência à norma de conteúdo material que afete o núcleo essencial do direito fundamental, a prova é tida como ilícita. Esta enseja o desentranhamento da prova dos autos, enquanto aquela demanda a declaração de nulidade do ato sem a observância da formalidade exigida. A vedação da prova ilícita, sob esse aspecto, funciona como garantia constitucional em favor do cidadão e contra arbítrios do poder público e dos particulares. Nessa ótica, o Direito brasileiro não apenas veda a prova obtida por meios ilícitos (CF, art. 5º, X, XI, XII e LVI; CPP, art. 157), como, também, prevê sanções penais e civis para aqueles que desobedeçam à proibição. A análise da prova ilícita é feita à luz de duas concepções doutrinárias, a saber: a) a restritiva - exige que a norma violada infrinja direito ou garantia fundamental; b) a ampla – compreende que a ilicitude afeta não apenas as normas que versem sobre os direitos e garantias fundamentais, mas todas as normas e princípios gerais do direito. A percepção que se tem à luz do art. 157 do CPP é que o ordenamento jurídico brasileiro adotou o conceito amplo de ilicitude, pois define como ilícitas as provas obtidas com violação a normas constitucionais ou legais, sem excluir àquelas de natureza processual nem exigir que o núcleo do direito fundamental seja atingido. Referido dispositivo tem sido alvo de críticas, pois a violação da lei processual pode não implicar na inadmissibilidade da prova e aconselhar o seu desentranhamento dos autos. A declaração de nulidade ou renovação do ato cuja formalidade tenha sido preterida pode ser suficiente para contornar o problema, sem a necessidade de exclusão da prova do processo. Noutra vertente, como a vedação da prova ilícita não pode ser levada às últimas consequências nem se converter em meio facilitador da prática de atos ilícitos e consagrador da impunidade, defende-se a sua admissão nos casos de estado de necessidade, legítima defesa, estrito cumprimento do dever legal e exercício regular de um direito. Assim, entende-se possível a utilização pela vítima de estupro, no processo de investigação de paternidade movido em prol do seu filho, do exame de DNA realizado mediante análise do sêmen deixado em sua vagina por ocasião do ato sexual que resultou na gravidez. Sustenta-se, ainda, a possibilidade de utilização das imagens captadas por circuito interno de câmaras comprobatórias do estupro para fazer prova da paternidade. Ressalta-se, outrossim, que no Brasil a doutrina e a jurisprudência têm admitido a prova ilícita, no processo penal, para comprovar a inocência do acusado e, em favor da vítima, nos casos de extorsão, concussão, sequestro e outros delitos similares. No ponto relativo ao efeito-àdistância das proibições de prova, aduz-se que as experiências americana e alemã da fruit of the poisonous tree doctrine e da fernwirkung são fonte de inspiração para as legislações de vários países. Por força da teoria dos frutos da árvore envenenada, o vício da planta transmite-se aos seus frutos. Ainda no segundo capítulo, estabelece-se breve comparação do tratamento conferido à prova ilícita nos ordenamentos jurídicos brasileiro e português, destacando-se que no regime de controle adotado pela Constituição da República Federativa do Brasil a prova ilícita é tratada como ineficaz e deve ser rejeitada de plano ou desentranhada do processo. Já na Constituição portuguesa adotou-se o regime de nulidade. Após o ingresso da prova ilícita no processo, o juiz declara a sua nulidade. O terceiro capítulo é dedicado ao estudo dos meios de prova e da incidência da ilicitude no processo de investigação de paternidade. Para tanto são eleitos os meios de prova enumerados no art. 212 do Código Civil, quais sejam: a) confissão; b) documento; c) testemunha; d) presunção; e) perícia, além do depoimento pessoal previsto no CPC, analisando a incidência da ilicitude em cada um deles. Má vontade a investigação de paternidade envolva direitos indisponíveis, isso não significa que as declarações das partes não tenham valor probatório, pois o juiz pode apreciá-las como elemento probatório (CC, art. 361º). Por meio do depoimento e confissão da parte são extraídas valiosas informações sobre o tempo, o lugar e a frequência das relações sexuais. Todavia, havendo emprego de métodos proibidos, tais como ameaça, coação, tortura, ofensa à integridade física ou moral, hipnose, utilização de meios cruéis, enganosos ou perturbação da capacidade de memória, a prova será considerada ilícita e não terá validade nem mesmo como elemento probatório a ser livremente apreciado pelo juiz. A prova documental é estudada como a mais vulnerável à incidência da ilicitude, pelo fato de poder expressar-se das mais variadas formas. Essa manifestação da ilicitude pode verificar-se por ocasião da formação da prova documental, no ato da sua obtenção ou no momento da sua exibição em juízo por meio falsificação material do documento público ou particular, da omissão de declaração deveria constar, inserção de declaração falsa ou diversa da que devia ser escrita, alteração de documento verdadeiro, emprego de métodos proibidos de prova para confecção do documento, etc. Na esteira desse raciocínio, em se fazendo constar, por exemplo, da escritura pública ou particular ou do testamento (CC, art. 1.609, II e III) declaração falsa da paternidade, a prova assim constituída é ilícita. Do mesmo modo, é considerada ilícita a prova obtida mediante indevida intromissão na vida privada, com violação de domicílio, emails, sigilos da correspondência, telefônico ou fiscal, realização de gravações, filmagens, etc. Na prova testemunhal entende-se como elemento configurador da ilicitude o emprego de métodos proibidos por parte de agentes públicos ou particulares, tais como tortura, coação, ameaça, chantagem, recursos que impliquem na diminuição ou supressão da capacidade de compreensão, etc, para que a testemunha faça afirmação falsa, negue ou cale a verdade dos fatos. Destaca-se, ainda, como ilícita a prova cujo acesso pela testemunha tenha ocorrido mediante violação à reserva da vida privada. No caso das presunções, vislumbra-se a possibilidade de incidência da ilicitude quando houver ilicitude no fato conhecido, do qual se vale a lei ou o julgador para extraírem as consequências para dedução da existência do fato desconhecido. A troca maliciosa de gametas é citada como meio ilícito de prova para alicerçar a presunção de paternidade no caso de inseminação artificial homóloga. A consecução da prévia autorização do marido, mediante coação, tortura, ameaça, hipnose, etc, na inseminação artificial heteróloga, também é tratada como ação danosa e capaz de viciar e infirmar a presunção legal de paternidade. Enxerga-se, outrossim, no meio de prova pericial, a possibilidade de maculação do resultado do exame por falha humana intencional no processo de coleta, transporte, armazenamento, manipulação ou troca do material genético coletado. Em se verificando essa situação, fica comprometida a credibilidade da prova pericial ante a sua ilicitude.