Marcadores fenotípicos e genotípicos de resistência aos antimicrobianos em enterobactérias e Staphylococcus spp. e detecção de genes para a produção de enterotoxina estafilocócica em cepas isoladas de equipamentos da cozinha de um hospital universitário no município do Rio de Janeiro

A resistência aos antimicrobianos pela produção de β-lactamases em enterobactérias é um problema adicional neste cenário. Staphylococcus spp é considerado um patógeno humano freqüentemente associado a infecções adquiridas no ambiente hospitalar. O objetivo desse trabalho foi estudar a resistência aos antimicrobianos em cepas de Enterobactérias e Staphylococcus spp. isoladas de equipamentos utilizados no preparo de dietas destinadas à pacientes internados em um hospital universitário no município do Rio de Janeiro, além de verificar a presença de genes codificadores de enterotoxinas nas cepas de Staphylococcus spp. As enterobactérias e os Staphylococcus spp. foram isolados e identificados por metodologia convencional. Para o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos foram utilizados discos contendo antimicrobianos clinicamente relevantes. Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de microdiluição em caldo para os antimicrobianos clinicamente relevantes. A pesquisa de genes que codificam β-lactamases em enterobactérias foi realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento para os genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaOXA-1 e blaCMY-2. Para Staphylococcus spp. foram pesquisados, através da PCR e sequenciamento, os genes de resistência a meticilina, gentamicina e eritromicina e os genes codificadores de enterotoxinas (sea-see, seg-sej, sen-ser e seu). Foram isoladas 97 cepas de enterobactérias, 40 de liquidificador e 57 de batedeira e 40 cepas de Staphylococcus spp., 20 de cada equipamento. Dentre as enterobactérias, o gênero Enterobacter foi isolado com maior frequencia (n=37, 38%). Foram ainda isoladas seis cepas de Salmonella spp. Das enterobactérias, 80% (n=79) foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano e 38% (n=37) a três ou mais. A expressão fenotípica presuntiva de b-lactamases do tipo AmpC foi detectada em 32 cepas. O gene blaCMY-2 não foi encontrado. Doze cepas apresentaram halos de inibição com screaning positivo para a pesquisa de ESBL. Foi detectada a presença do gene blaSHV em K. pneumoniae subsp. pneumoniae. O sequenciamento desse gene permitiu identificá-lo como sendo blaSHV-36. Dentre os Staphylococcus spp., oito foram identificados como coagulase-positivas (SCP) e 32 como coagulase-negativas (SCN). As oito cepas de SCP foram identificadas como S. aureus subsp. aureus. Dentre os SCN, as espécies identificadas com maior frequência foram: S. caprae (n=7, 17,5%), S. simulans (n=5, 12,5%) e S. epidermidis (n=4, 10%). Destas, 83% (n=33) foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano e 30% (n=12) foram resistentes a mais do que três. Duas cepas (5%) de S. epidermidis apresentaram perfil de resistência a até seis antimicrobianos e genes de resistência a meticilina, a eritromicina e a gentamicina. Todas as sete cepas que foram resistentes no TSA e na CIM a gentamicina, apresentaram o gene aac(2)/aph(6). O gene ermB foi observado ainda em uma S hominis subsp hominis que apresentou resistência na CIM e no TSA. Foi detectada a presença de pelo menos um gene codificador de enteroxotxina em 83% (n=33) das cepas. O gene seg foi detectado em 11 cepas, o gene sei em 17 cepas e o gene sen em 31 cepas. Os resultados encontrados implicam as dietas preparadas com esses equipamentos como veículo de disseminação de enteropatógenos e Staphylococcus spp. com marcadores de resistência e genes codificadores de enterotoxinas relevantes no ambiente hospitalar.

Qual é o risco do consumo combinado de bebidas energéticas e etanol? Efeitos comportamentais em camundongos adolescentes

O uso combinado de etanol e bebidas energéticas tem aumentado entre adolescentes. Além disso, estudos epidemiológicos indicam que o co-uso aumenta a probabilidade de consumo abusivo e dependência de etanol. Apesar disso, pouco se sabe sobre as consequências neurocomportamentais da co-exposição no cérebro adolescente. Este estudo tem como objetivo avaliar o curso temporal dos efeitos agudos da exposição à bebida energética e/ou etanol na atividade motora e ansiedade no teste de campo aberto, como também, os efeitos agudos ou prolongados sobre aprendizagem/memória e coordenação motora em camundongos adolescentes. Camundongos Suíços foram divididos em 4 grupos: bebidas energéticas e etanol, bebida energética, etanol e água. Três estudos separados foram conduzidos para avaliar cada um dos objetivos específicos deste trabalho. No primeiro estudo, realizado em PN40, os animais receberam a administração de bebida energética (8 ml/kg) e/ou etanol (4 g/kg) por gavagem e após 55 minutos foram submetidos ao teste do campo aberto (sessão 1). Outras duas sessões foram realizadas em sequência usando a metade da dose inicial (sessão 2 e 3). Nos estudos 2 e 3, estudamos os efeitos agudos (PN40) e crônicos (exposição de PN30-40) sobre o teste de esquiva passiva (0,3 mA, 3 s) e sobre o desempenho no teste do cilíndro giratório (sessão de treinamento e após 1 e 3 horas da gavagem das drogas). Em ambos os casos, a dose de bebida energética (8 ml/kg) e/ou etanol (4 g/kg) foi administrada. No teste da esquiva passiva, as sessões de treino e retenção foram realizadas 1 e 24 horas após a administração da droga, respectivamente. No teste do Rotarod, cada sessão foi constituída por 5 tentativas em modelo de aceleramento contínuo (4 a 40 rpm/min em uma tentativa de 2 min). Os nossos dados indicam que a exposição concomitante a bebida energética potencializa o efeito de hiperatividade induzido pelo etanol, como também, gera uma resposta ansiogênica no teste do campo aberto. A exposição aguda ao etanol induz déficit de memória/aprendizagem que não é revertida pela BE. A co-exposição aguda a bebida energética e etanol prolongou incoordenação motora induzida pelo etanol. No entanto, a bebda energética reverteu o comprometimento da coordenação motora gerada pela exposição crônica de etanol em camundongos fêmeas. O presente estudo fornece evidência experimental de que bebida energética e etanol interagem durante a adolescência, resultando em padrões de comportamento que poderiam aumentar o risco de desenvolvimento de abuso ou dependência de etanol. Além disso, os dados indicaram que a exposição aguda à bebida energética não atenuou as consequências negativas geradas pela etanol no desempenho do motor e cognitivo.

Estudo da resistência aos antimicrobianos em enterobactérias isoladas de mãos de manipuladores de alimentos em cantinas permissionárias de uma universidade no Município do Rio de Janeiro

A contaminação dos alimentos e transmissão de patógenos via manipuladores pode ocorrer se as condições de higiene, armazenamento e preparo não estiverem satisfatórios. Procedimentos inadequados de manipulação oferecem um perigo potencial à saúde pública devido ao alto risco de ocorrência de doenças de origem alimentar por microrganismos resistentes aos antimicrobianos. Neste estudo foram coletados swabs das mãos de 49 manipuladores de alimentos, isoladas e identificadas por metodologia convencional 244 enterobactérias de 7 cantinas permissionárias em uma Universidade do Município do Rio de Janeiro. Foram utilizados discos contendo os seguintes antimicrobianos: aztreonam, tobramicina, ceftazidima, cloranfenicol, tetraciclina, sulfa, amicacina, ampicilina e sulbactam, ciprofloxacina, gentamicina, cefalotina, cefepime, cefoxitina, imipenem, ampicilina, cefotaxima. A pesquisa de genes que codificam β-lactamases foi realizada pela Reação em Cadeia da Polimerase para os genes blaTEM, blaSHV, blaCTX, blaOXA-1 e blaCMY-2. As espécies mais prevalentes identificadas foram: Enterobacter cloacae (21,3%), Citrobacter braakii (15,2%), Escherichia coli (12,7%), Klebsiella pneumoniae subesp. Pneumoniae (12,2%). O perfil de resistência aos antimicrobianos revelou que 94 (38,5%) cepas identificadas apresentaram resistência a pelo menos dois antibióticos, 55 cepas (22,5%) a pelo menos um antibiótico, 34 cepas (13,9%) a três antibióticos, 14 cepas (5,7%) mostraram-se resistentes a quatro antibióticos. Uma cepa de E. cloacae mostrou resistência múltipla a dez antibióticos e 140 cepas (57,3%) foram resistentes simultaneamente a cefalotina e cefoxitina. Nenhuma cepa foi resistente ao aztreonam e a sulfa e apenas 01 foi resistente ao ciprofloxacina, 01 ao imipenem e 02 a cefotaxima. Foi identificado a presença do gene blaSHV em uma cepa de K. pneumoniae subsp. pneumoniae. Este dado aponta para uma mudança no perfil dessas bactérias isoladas da comunidade que passam a ter características semelhantes com as de origem hospitalar. Os resultados alertam para um perigo à saúde dos consumidores e conseqüentemente à saúde pública, devido a presença de enterobactérias resistentes aos antimicrobianos nas mãos de manipuladores de alimentos.

ExoU, uma proteína do sistema de secreção do tipo III de Pseudomonas aeruginosa, induz a secreção de eicosanóides por células epiteliais respiratórias. Papel dos corpúsculos lipídicos neste processo

Para pesquisar o papel de ExoU no desencadeamento de resposta inflamatória nas vias aéreas, células epiteliais respiratórias humanas (CERs) da linhagem BEAS-2B foram tratadas com AA radiomarcado e infectadas com a cepa PA103 de P. aeruginosa, que secreta ExoU, e com os mutantes PA103exoU (com deleção do gene exoU), PA103ΔUT/exoU (com deleção de exoU e complementação com o gene funcional) e PA103UT/S142A (com deleção de exoU e complementação com gene com mutagênese sítio-específica no domínio catalítico da enzima). Após 1 hora, a liberação de AA pelas culturas infectadas com as cepas produtoras de ExoU foi significativamente superior à observada em culturas infectadas pelas cepas não-produtoras ou por células controle. O tratamento das bactérias com MAFP, um inibidor de PLA2, resultou em significativa redução na liberação de AA. Células infectadas pelas cepas PA103 e PA103ΔUT/exoU secretaram PGE2 e LTB4 em concentrações significativamente maiores que as secretadas por células infectadas pelas demais cepas ou não infectadas. O tratamento com o MAFP reduziu significativamente a secreção de PGE2. A análise, por citometria de fluxo, de células infectadas e não infectadas tratadas com anticorpo anti-COX-2 mostrou que o percentual de células infectadas por PA103 marcadas foi significativamente superior ao percentual encontrado em culturas controle. Nenhuma diferença foi observada quanto ao percentual de células marcadas em culturas infectadas por PA103ΔexoU. O tratamento das culturas com NS-398 (um inibidor seletivo de COX-2) resultou na diminuição significativa da concentração de PGE2, secretada por células infectadas com PA103, mas não por células infectadas com PA103ΔexoU ou por células controle. Corpúsculos lipídicos (CLs) são domínios citoplasmáticos ricos em COX-2 e outras enzimas responsáveis pelo metabolismo do AA, sede da produção de eicosanóides. Como células infectadas pelas cepas produtoras de ExoU liberam AA livre, formulamos a hipótese de que a maior produção de eicosanóides por estas células seria dependente da indução do aumento no número dos CLs. No entanto, a análise por citometria de fluxo de células tratadas com uma sonda lipofílica com afinidade com os CLs mostrou que o percentual de células marcadas em culturas infectadas pelas cepas produtoras de ExoU foi significativamente inferior ao percentual em culturas controle ou infectadas pelas outras 2 cepas bacterianas. O tratamento das células com MAFP inibiu significativamente a redução do percentual de células contendo CLs. A análise, por citometria de fluxo, de células controle ou infectadas tratadas simultaneamente com a sonda lipofílica e com o anticorpo anti-PGE2, mostrou, em células infectadas com PA103, a redução da mediana da intensidade de marcação com a sonda lipofílica e o aumento da mediana da intensidade de marcação com o anticorpo anti-PGE2. Nossa hipótese é que a presença de ExoU nas células infectadas com a cepa PA103 resulte no metabolismo de glicerofosfolipídios presente nos CLs levando à diminuição da afinidade dos CLs pela sonda lipofílica e à síntese local de PGE2.

Análise dos aspectos biológicos e epidemiológicos de cepas de Escherichia coli associadas à infecção do trato urinário (ITU)

A invasão de bactérias no trato urinário caracteriza a infecção do sistema urinário. A Escherichia coli é o principal microrganismo associado a esta infecção devido a sua importância em causar ITU, recebeu a denominação de UPEC (Escherichia coli uropatogênica). No presente trabalho pesquisamos em 50 cepas de UPEC, inicialmente isolados de urina de pacientes ambulatoriais com infecções sintomática ou assintomática, a presença de 7 fatores de virulência, através das técnicas de PCR simples e multiplex para verificação dos genes que codificam adesinas P (pap) , fímbria S (sfa), adesina afimbrial (afa), sideroforo (aerobactina- aer), toxinas fator necrotizante citotóxico (cnf) e alfa-hemolisinas (hly), proteína de membrana (traT); ilhas de patogenicidade (virulência) através do marcador PAI. O marcador pCVD432 de EAEC também foi pesquisado nestas amostras. O método difusão em disco foi o utilizado para a determinação dos testes de susceptibilidade aos antimicrobianos. Podemos observar duas faixas etárias de maior incidência de ITU entre as mulheres: 19 a 35 anos, e acima de 50 anos. Sessenta e oito por cento das amostras apresentaram pelo menos um fator de virulência, onde os genes traT (54%) e aer (34%) foram os mais prevalentes. A sequência pCVD432 foi detectado em 6 amostras. No entanto, no ensaio de adesão em células Hep-2, doze amostras não apresentaram aderência (NA 24%). Nas 38 cepas restantes, 24 (48%) apresentaram aderência agregativa (AA). Observamos aderência sem padrão típico (SPT) em 48% das amostras, tendo sido dividido em discreto (SPT-D 22%), moderado (SPT-M 18%) e intenso (SPT-I 8%). Notamos os seguintes perfis de resistência para os antimicrobianos testados: ampicilina (44%), gentamicina (8%), nitrofurantoína (2%), norfloxacino (18%) e sulfametozaxol-trimetoprima (34%).

Reproductive potential of Yellowfin Tuna (Thunnus albacares) in the western Indian Ocean

The reproductive biology of Yellowfin Tuna (Thunnus albacares) in the western Indian Ocean was investigated from samples collected in 2009 and 2010. In our study, 1012 female Yellowfin Tuna were sampled: 320 fish on board a purse seiner and 692 fish at a Seychelles cannery. We assessed the main biological parameters that describe reproductive potential: maturity, spawning seasonality, fish condition, and fecundity. The length at which 50% of the female Yellowfin Tuna population matures (L50) was estimated at 75 cm in fork length (FL) when the maturity threshold was established at the cortical alveolar stage of oocyte development. To enable comparison with previous studies, L50 also was estimated with maturity set at the vitellogenic stage of oocyte development; this assessment resulted in a higher value of L50 at 102 cm FL. The main spawning season, during which asynchrony in reproductive timing among sizes was observed, was November–February and a second peak occurred in June. Smaller females (<100 cm FL) had shorter spawning periods (December to February) than those (November to February and June) of large individuals, and signs of skip-spawning periods were observed among small females. The Yellowfin Tuna followed a “capital-income” breeder strategy during ovarian development, by mobilizing accumulated energy while using incoming energy from feeding. The mean batch fecundity for females 79–147 cm FL was estimated at 3.1 million oocytes, and the mean relative batch fecundity was 74.4 oocytes per gram of gonad-free weight. Our results, obtained with techniques defined more precisely than techniques used in previous studies in this region, provide an improved understanding of the reproductive cycle of Yellowfin Tuna in the western Indian Ocean.

Predicting the distribution of Vibrio vulnificus in Chesapeake Bay

Vibrio vulnificus is a gram-negative pathogenic bacterium endemic to coastal waters worldwide, and a leading cause of seafood related mortality. Because of human health concerns, understanding the ecology of the species and potentially predicting its distribution is of great importance. We evaluated and applied a previously published qPCR assay to water samples (n = 235) collected from the main-stem of the Chesapeake Bay (2007 – 2008) by Maryland and Virginia State water quality monitoring programs. Results confirmed strong relationships between the likelihood of Vibrio vulnificus presence and both temperature and salinity that were used to develop a logistic regression model. The habitat model demonstrated a high degree of concordance (93%), and robustness as subsequent bootstrapping (n=1000) did not change model output (P > 0.05). We forced this empirical habitat model with temperature and salinity predictions generated by a regional hydrodynamic modeling system to demonstrate its utility in future pathogen forecasting efforts in the Chesapeake Bay.

Bycatch in the tuna purse-seine fisheries of the western Indian Ocean

Bycatch taken by the tuna purse-seine fishery from the Indian Ocean pelagic ecosystem was estimated from data collected by scientific observers aboard Soviet purse seiners in the western Indian Ocean (WIO) during 1986–92. A total of 494 sets on free-swimming schools, whale-shark-associated schools, whale-associated schools, and log-associated schools were analyzed. More than 40 fish species and other marine animals were recorded. Among them only two species, yellow-fin and skipjack tunas, were target species. Average levels of bycatch were 0.518 metric tons (t) per set, and 27.1 t per 1000 t of target species. The total annual purse-seine catch of yellowfin and skipjack tunas by principal fishing nations in the WIO during 1985–94 was 118,000–277,000 t. Nonrecorded annual bycatch for this period was estimated at 944–2270 t of pelagic oceanic sharks, 720–1877 t of rainbow runners, 705–1836 t of dolphinfishes, 507–1322 t of triggerfishes, 113–294 t of wahoo, 104–251 t of billfishes, 53–112 t of mobulas and mantas, 35–89 t of mackerel scad, 9–24 t of barracudas, and 67–174 t of other fishes. In addition, turtle bycatch and whale mortalities may have occurred. Because the bycatches were not recorded by some purse-seine vessels, it was not possible to assess the full impact of the fisheries on the pelagic ecosystem of the Indian Ocean. The first step to solving this problem is for the Indian Ocean Tuna Commission to establish a pro-gram in which scientific observers are placed on board tuna purse-seine and longline vessels fishing in the WIO.

Culture of Moina micrura on various organic waste products

Moina micrura, a cladoceran species, is considered to be one of the best live food organisms for rearing the young larval stages of fish and prawn. Considering the importance of this species in hatchery operations the present study was undertaken to record its fecundity and life span and to culture it using different locally available organic waste products. In indoor culture, a maximum production of 2600 ind/1 and a minimum of 1050 ind/1 were obtained when treated with gram + maize oilcake and "till" oilcake respectively. In outdoor culture, a highest production of 6000 ind/1 was achieved with "Alsi" and "till" oilcakes and a lowest density of 1050 ind/1 with coconut oilcake and raw cattle dung was obtained with an inoculation rate of 5 ind/1.

Fecundity of the snow-trout, Schizothorax plagiostomus (Heckel) from Garhwal Himalaya

Absolute fecundity of Schizothorax plagiostomus varied from 3474 in a fish measuring 345 mm (T.L.) and weighing 315 g to 13916 in a fish measuring 540 mm (T.L.) and weighing 1370 g. The weight of the fish ovaries accounted for 7.02 to 17.78% of the total weight of the fish. The average number of eggs per kg weight of fish and per gram of ovary weight was found to be 10820 and 81 respectively. The fecundity per kg of body weight was found to be 11539. The relationships between fecundity and other parameters (fish length/fish weight/ovary weight/ovary volume/ovary length) and fish length-ovary weight and fish weight-ovary weight were also determined.

Breeding, age and growth of the freshwater shark Wallago attu (Bloch and Schneider) from the Dhir Beel of the Brahmaputra Basin, Assam, India

The Dhir Beel, one of the major live beels of the Brahmaputra Basin, Assam, has an area of 689 ha and situated in Dhubri district of Assam. The dominance of freshwater shark, Wallago attu (8.10%) in the beel is a striking feature. Restricted breeding of W. attu once a year from June to September was observed. The mean observed length was 37.5, 65.0, 84.5 and 99.0 cm in the 6th, 12th, 18th and 24th months of age respectively. The length growth coefficient (K), the asymptotic length (L infinity ), and the arbitrary origin of the growth curve (t omicron ), for W. attu were estimated to be 0.054484 per month, 136.16 cm and 0.0355 month respectively. The calculated life span (T infinity ) of the fish is 123.86 months (about 10 years). The weight growth parameters were estimated where the monthly growth coefficient (K), the asymptotic weight (W infinity) and the arbitrary origin of the growth curve (t omicron) were found to be 0.0743 per month, 7636.92 gram and 0.431908 month respectively. The length-weight relationship follows the cube law.

Salt-tolerance in mangrove soil bacteria

A total of sixteen bacterial species were isolated from mangrove soils of Karachi, Pakistan. Twelve of the isolates were gram positive while four were gram negative. All sixteen species showed resistance to high concentration of streptomycin, however, resistance to chloramphenicol and tetracycline was variable. The isolates tolerated up to 110‰ salinity and accumulated sodium form the media.

A survey of the microbiological quality of commercial frozen prawn products

The paper presents the results of a bacteriological survey carried out on 2,917 samples of frozen prawn, 55 samples of raw material, 35 samples of water, 4 samples of ice and 42 samples of various equipment used for processing. The survey covered a period of three years (1960-63) and comprised of samples collected from five of the leading processing factories in Cochin. Frozen products tested consisted of headless (marine and fresh water), peeled and deveined and cooked frozen samples. Statistical analysis of the data shows that there is no significant variation between samples and between factories with respect to product quality. The standard plate count varied between 1.0x10(4 superscript) and 1.0x10(6 superscript) per gram for headless and between 1.0x10(4 superscript) and 1.0x10(7 superscript) for peeled and deveined and cooked frozen samples. Majority of the samples had bacterial load well within the limits prescribed for such products.

The bacterial flora and their possible association with spoilage in a variety of fresh-water fish: Cyprinus carpio. var. communis

The bacteria from a variety of fresh-water fish, Cyprinus carpio. var. communis, showed the presence of micrococci, Gram positive and Gram negative rods. These have been characterized as far as was possible. Of thirty-eight strains of bacteria used, only six strains were considered as causing spoilage of fish flesh in experiments where flesh was incubated with individual cultures of the bacteria. These six strains had been found on the surface and/or intestine of the fish and support the suggestions that, after death, invasion of flesh by bacteria from the surface and intestine could be the cause of bacterial spoilage of fish.

Utilisation of trash fish. Pt. 1. Preparation of fish flake

The paper deals with the investigations carried out on the preparation of odorless fish-starch flakes using partially deodorized trash fish meat and different sources of starch like corn, tapioca, maida and black gram. It has been found that the products using corn and tapioca are better compared to those prepared using other two starches, the product from corn being the best. The product has a protein content of about 20% and has been found to have a storage life of 4 months at 37°c.