Aberrant regulation of the Src -FAK signaling pathway in the human colon adenocarcinoma cell line HT-29

c-Src, a protein tyrosine kinase (PTK) the specific activity of which is increased $>$20-fold in $\sim$80% of colon tumors and colon tumor cell lines, plays a role in both growth regulation and tumorigenicity of colon tumor cells. To examine the effect of increased c-Src specific activity on colon tumor cells, coumarin-derived tyrosine analog PTK inhibitors were assessed in a standard colon tumor cell line, HT-29. Of the nine compounds tested for inhibiting c-Src activity in a standard immune complex kinase assay from c-Src precipitated from HT-29 cells, the 7,8-dihydroxy-containing compounds daphnetin and fraxetin were most effective, with IC$\sb{50}$s of 0.6 $\pm$ 0.2 mM and 0.6 $\pm$ 0.3 mM, respectively. Treatment of HT-29 cells with daphnetin resulted in inhibition of cell growth in a dose-dependent manner. In contrast, scopoletin, a relatively poor Src inhibitor in vitro, did not inhibit HT-29 cell growth in the concentration range tested. In daphnetin treated cells, a dose-dependent decrease of c-Src activity paralleling cell growth inhibition was also observed; the IC$\sb{50}$ was 0.3 $\pm$ 0.1 mM for c-Src autophosphorylation. In contrast, the IC$\sb{50}$ for c-Src protein level was $>$ 0.6 mM, indicating that the effects of daphnetin were primarily an enzymatic activity of c-Src, rather than protein level in HT-29 cells. These results are the first to demonstrate that c-Src specific activity regulates colon tumor cell growth.^ To elucidate the signaling pathways activated by c-Src in colon tumor cells, the Src family substrate FAK, which has been shown to play a role in both extracellular matrix-dependent cell growth and survival, was examined. Coprecipitation assays showed Src-FAK association in detergent insoluble fractions of both attached and detached HT-29 cells, indicating that Src-FAK association in HT-29 cells is stable and, unlike untransformed cells, not dependent on cell-substratum contact. FAK also coprecipitated with Grb2, an adaptor protein also playing a role in cell proliferation and survival, in both attached and detached HT-29 cells, suggesting that a Src-FAK-Grb2-mediated signaling pathway(s) in HT-29 cells is/are constitutively activated.^ FAK was also analyzed in c-src antisense HT-29 clones AS15 and AS33 in which c-Src is specifically reduced by transfection of an antisense expression vector. FAK protein level is unexpectedly decreased in both AS15 and AS33 cells by 5-fold and 1.5-fold compared to HT-29, respectively, corresponding with the decreased expression of c-Src observed in these cells. FAK protein level was not decreased compared to parental in the c-src "sense" clone S8. Northern blot analyses showed decreased FAK mRNA levels compared to parental in AS15 and AS33, correlating with decreased FAK protein level, indicating that FAK activity in the antisense cells is regulated, at least in part, by altering FAK expression, and that this regulation is Src dependent. Because FAK has been implicated in anoikis, the ability of c-src antisense cells to survive in the absence of cell-substratum contact was examined. Decreased cell survival is seen in both AS15 and AS33, correlating with the decreases in c-Src and FAK levels and tumorigenicity in these cells. These results suggest that at least one mechanism by which activation of c-Src contributes to tumorigenic phenotype of colon tumor cells is by aberrantly promoting a survival signal through unregulated Src-FAK-Grb2 complexes. (Abstract shortened by UMI.) ^

A novel DNA damage inducible inhibitor of p53

p53 is required for the maintenance of the genomic stability of cells. Mutations in the p53 tumor-suppressor gene occur in more than 50% of human cancers of diverse types. In addition, 70% of families with Li-Fraumeni syndrome have a germline mutation in p53, predisposing these individuals to multiple forms of cancer. In response to DNA damage, p53 becomes stabilized and activated. However the exact mechanism by which DNA damage signals the stabilization and activation of p53 still remains elusive. The biochemical activity of p53 that is required for tumor suppression, and presumably the cellular response to DNA damage, involves the ability of the protein to bind to specific DNA sequences and to function as a transcription factor. For the downstream targets, p53 transactivates many genes involved in growth arrest, apoptosis and DNA repair such as p21, Bax and GADD45, respectively. An open question in the field is how cells can determine the downstream effects of p53. ^ We hypothesize that, through its associated proteins, p53 can differentially transactivate its target genes, which determine its downstream effect. Additionally, p53 interacting proteins may be involved in signaling for the stabilization and activation of p53. Therefore, a key aspect to understanding p53 function is the identification and analysis of proteins that interact with it. We have employed the Sos recruitment system (SRS), a cytoplasmic yeast two-hybrid screen to identify p53 interacting proteins. The SRS is based on the ability of Sos to activate Ras when it becomes localized to the plasma membrane. The system takes advantage of an S. cerevisiae strain, cdc25-2 temperature sensitive mutant, harboring a mutation in Sos. In this strain, fusion proteins containing a truncated Sos will only localize to the membrane by protein-protein interaction, which allows growth at non-permissive temperature. This system allows the use of intact transcriptional activators such as p53. ^ To date, using a modified SRS library screen to identify p53 interacting proteins, I have identified p53 (known to interact with itself) and a novel p53-interacting protein (PIP). PIP is a specific p53 interacting protein in the SRS. The interaction of p53 and PIP was further confirmed by performing in vitro and in vivo binding assays. In the in vivo binding study, the interaction can only be detected in the presence of ionizing radiation suggesting that this interaction might be involved in DNA-damage induced p53-signalling pathway. After screening cDNA and genomic libraries, a full-length PIP-cDNA clone ( ∼ 3kb) was obtained which encodes a protein of 429 amino acids with calculated molecular weight of 46 kDa. The results of genebank search indicated that the PIP is an unidentified gene and contains a conserved ring-finger domain, which is present in a diverse family of regulatory proteins involved in different aspects of cellular function. Northern blot analysis revealed that the size of its messenge is approximately 3 kb preferentially expressed in brain, heart, liver and kidney. The PIP protein is mainly located in the cytoplasm as determined by the cellular localization of a green fluorescence fusion protein. Preliminary functional analysis revealed that PIP downregulated the transactivation activity of p53 on both p21 and mdm2 promoters. Thus, PIP may be a novel negative regulator of p53 subsequent to DNA damage. ^

Fas ligand and soluble Fas -opposing molecules in melanoma lung metastasis

Deregulation of apoptotic cell death can result in aberrant accumulation of cells and increased tumor incidence. Fas (CD95) and Fas ligand (FasL) are a receptor-ligand pair whose activation induces apoptosis in many cell types. Previously, we demonstrated that low metastatic, Fas+ K1735-P murine melanoma cells spontaneously metastasize to the lung following orthotopic injection into FasL-deficient (gld) mice compared to wild-type (wt) controls. We further demonstrated that the expression of the Fas antagonist soluble Fas (sFas) directly correlates with disease stage in patients with melanoma, breast, and colon cancer. These findings document a role for host-derived FasL, in the control of metastatic disease and suggest a role for tumor-associated sFas in acquiring metastatic potential. To directly test whether FasL expressed on lymphocytes or on lung stromal cells restricts metastasis, bone marrow chimeras were generated between C3H wt and C3H gld mice. Chimeric animals were injected subcutaneously with 5 × 105 K1735-P and the incidence and number of spontaneous lung metastases scored. The data show that wt mice receiving gld marrow had a greater number of lung metastases (median 9.5, range 2–31) than gld mice reconstituted with wt marrow (median 1, range 0–31; p < 0.016). Interestingly, both groups had fewer metastases compared to gld controls (median 18.5, range 0–46) but more than wt controls (median 2, range 0–7). These observations provide the first evidence that both hematopoietic- and nonhematopoietic-host derived FasL, are important in the control of melanoma metastasis to the lung. To directly test whether tumor-associated sFas expression can enhance metastasis, K1735-P cells were transfected with three isoforms of sFas (Exo4Del, Exo6Del, and Exo3, 4, 6Del). RT-PCR and ELISA analysis confirmed the expression of sFas RNA and protein respectively. Following intravenous injection of 5 × 104 cells, sFas transfected cells formed significantly more experimental lung metastases [Exo6Del clone 3 (median 22, range 0–36), Exo6Del clone 7 (median 31, range 4–50), Exo3, 4, 6Del (median 22.5, range 13–48)] compared to vector control cells (median 6.5, range 3–29). Together, these data provide the first evidence that sFas is sufficient to enhance the metastatic potential of Fas+ melanoma cells. ^

Plasmid -encoded virulence determinants of Borrelia burgdorferi

Borrelia burgdorferi, a spirochete and the causative agent of Lyme disease, infects both mammals and ticks. Its genome, sequenced in 1997, consists of one linear chromosome and over 20 linear and circular plasmids. Continuous passage of organisms in culture causes them to lose certain plasmids and also results in loss of infectivity in mammals. In this work, 19 B. burgdorferi clonal isolates were examined for infectivity in mice and for plasmid content utilizing polymerase chain reaction (PCR). Two plasmids, a 28 kilobase (kb) linear plasmid (Ip28-1) and a 25 kb linear plasmid (Ip25) were found to be required for full infectivity. Previous studies had demonstrated that Ip28-1 contains the vls locus, which is involved in antigenic variation and immune evasion. Gene BBE22 on Ip25 is predicted to encode the nicotinamidase PncA, an enzyme that converts nicotinamide to nicotinic acid as part of a pathway for NAD synthesis. To examine the potential role of BBE22 in infectivity, a shuttle vector containing BBE22 (pBBE22) was constructed and used to transform B. burgdorferi clone 5A13, which contains all plasmids except lp25. Transformation with pBBE22 restored infectivity of clone 5A13 in mice, whereas 5A13 transformed with the shuttle vector alone was not infectious. To determine whether BBE22 acts as a nicotinamidase in vivo, a Salmonella typhimurium pncA− nadB− transposon mutant was transformed with pBBE22 or with pQE30:BBE22, which contained BBE22 in an E. coli expression vector. Both constructs complemented the Salmonella mutant, permitting growth in minimal media plus nicotinamide. Salmonella cells over-expressing BBE22 also exhibited nicotinamidase activity, as determined by ammonia production in the presence of nicotinamide. Site-directed mutagenesis of BBE22 at the predicted active site (resulting in a Cys120Ala substitution) abrogated the ability to restore infectivity to B. burgdorferi 5A13 and to complement the pncA mutation in S. typhimurium. These studies indicate that BBE22 is a nicotinamidase required for NAD synthesis and survival of B. burgdorferi in mammals. This is also the first demonstration of ‘molecular Koch's postulates’ in B. burgdorferi, i.e. that a specific gene is essential for infectivity of the Lyme disease spirochete. ^

Populus spp : estabilidad y ganancia genética sobre la altura media dominante en tres ambientes de la pampa ondulada, Argentina

El objetivo de este trabajo fue evaluar la altura media dominante (AMD) y su estabilidad en 15 clones de álamos de 5 años de edad, implantados en tres ambientes diferentes de la pampa ondulada, Argentina. Los sitios fueron: Teodelina (Sitios 1 y 2), Santa Fe (34° 12' LS; 61° 43' W; 90 msnm) y Alberti (Sitio 3), Buenos Aires (34° 50' LS; 60° 30' W; 55 msnm) y se caracterizaron en base a variables de clima y suelo. Se realizaron los análisis de la varianza del conjunto de clones entre sitios y entre los clones por sitio. La comparación de AMD se realizó aplicando el test de Tukey. Se analizó la interacción clon-sitio. Se construyó un criterio de elección basado en parámetros genéticos de estabilidad sobre el carácter (AMD), estimándose la ganancia genética al seleccionar los mejores clones. Se realizaron los cálculos de heredabilidad en sentido amplio. Los posicionamientos en AMD fueron significativos entre clones por sitio y entre sitios. La interacción clon sitio fue significativa. Los valores de AMD y los de ecovalencia permitieron seleccionar genomas con mayor amplitud de adaptación y consecuentemente conciliar la producción con la plasticidad dentro de la disimilitud de los sitios evaluados.

Factores que afectan la emisión de escapo floral y producción de bulbillos aéreos en ajo (Allium sativum L.)

El ajo constituye el principal producto agrícola no transformado destinado a la exportación en Mendoza. En la Argentina, la ausencia de cultivares específicas de ajo y producción de semilla fiscalizada han sido unas de las principales debilidades del sistema exportador. Para que los materiales provenientes de los planes de mejoramiento y saneados lleguen rápidamente al productor es necesario acelerar la tasa de multiplicación de los mismos. Con esta finalidad, los bulbillos aéreos que se forman en el extremo del escapo de ajo tipo “colorado" (Grupo IV, Argentina) libre de virus, pueden ser utilizados como propágulos en la producción de ajo “semilla". El objetivo general del presente trabajo fue establecer la influencia del: genotipo, liberación de virus (OYDV y LYSV), tamaño de “diente" empleado como propágulo, fertilización nitrogenada y conservación de los escapos luego de la cosecha, en la producción de bulbillos aéreos. En Mendoza, Argentina, se evaluaron durante el ciclo 1994, 32 introducciones de ajo tipo “colorado" de distinto origen, por su hábito de floración y producción de bulbillos aéreos. Se llevaron a cabo durante los años 1995 y 1996 dos ciclos de ensayos, en los que se evaluó en una población clonal de ajo “colorado criollo" (AR-I-051) y una de ajo “ruso" (AR-I-033) el efecto del saneamiento viral sobre la floración y producción de bulbillos aéreos, trabajando con material crónicamente enfermo y libre de OYDV y LYSV. En AR-I-051 además se estudió el efecto del tamaño de “diente" (2; 3,5 y 5 g ó 1,2; 3,2 y 5,2 g) e influencia de la fertilización nitrogenada (0, 50 y 100 kg.ha-1 de N como SO4(NH4)2). Entre 1995 y 1998, se compararon diversas métodos de “curado" de los escapos luego de la cosecha de las plantas (en planta entera, cortados de distintas longitudes, mantenidos en seco o con inmersión de sus bases en agua o en solución nutritiva con o sin el regulador del crecimiento CCC). Se concluye que la producción de bulbillos aéreos depende del genotipo considerado. En ajo “colorado" se distinguen 5 grupos por su modalidad de floración y potencialidad de producción de bulbillos. La producción de bulbillos aéreos útiles (>2,4 mm de diámetro) depende del tiempo transcurrido entre floración y cosecha y no entre plantación y floración. Se puede predecir la cantidad de bulbillos aéreos útiles (Numa) sobre la base del diámetro de espata (espa) y la longitud de escapo (long) al momento de cosecha, según la ecuación: Numa = - 81,62 + 4,79 espa + 1,05 long (r2 = 0,88). v La capacidad de cada genotipo de emitir escapos, disminuye con la liberación de OYDV y LYSV, por lo que la producción por hectárea de bulbillos aéreos útiles es menor en el material saneado. El empleo de material saneado, “dientes" grandes, como la fertilización con N producen plantas de mayor tamaño y con mayor área foliar, lo que se traduce en un mayor rendimiento en la producción de bulbos. Sin embargo, la producción de bulbillos aéreos por hectárea disminuye, debido al menor porcentaje de plantas que emiten escapos y no a la disminución del número de bulbillos por planta. En cambio, todas aquellas condiciones que favorecen menor expresión vegetativa de las plantas aumentan la emisión de escapos. El “curado" de los escapos separados de la planta madre se puede llevar a cabo sin necesidad de realizar la inmersión de la base de los mismos en agua o en solución nutritiva con o sin CCC. La longitud a la cual se deben cortar los escapos, de manera de no afectar la producción de bulbillos, depende del grado de crecimiento de los bulbillos en el campo. La longitud de corte del escapo en ajo “criollo", con escaso crecimiento de los bulbillos aéreos en el campo, no debe ser inferior a 50 cm. En ajo “ruso", que presenta al momento de cosecha de las plantas un desarrollo avanzado de los bulbillos aéreos, los escapos pueden cortarse de menor longitud, sin afectar la producción de bulbillos aéreos. La longitud del escapo, en planta o separado de ella, afecta la producción de bulbillos aéreos en forma directamente proporcional.

Comparación de materiales y épocas de plantación para Populus sp. : Mendoza (Argentina)

Este ensayo tuvo como objetivo determinar el material y la época de plantación más adecuada para la instalación en sitio definitivo de un cultivo de álamos con los clones Populus euramericana Conti 12 y Populus deltoides Harvard en las condiciones ambientales de la provincia de Mendoza. La plantación se realizó en dos épocas distintas: otoño y primavera, utilizando como material de plantación en ambos casos: a. barbados: plantas con raíz y brote de 1 año (R1T1); b. plantas recepadas: plantas con raíz de 1 año y brote del año cortado a 30 cm de nivel de suelo (R1T0); c. estacas: 1.5-2.5 cm de diámetro y 30-40 cm de longitud. Los resultados se expresaron en porcentaje de plantas prendidas y en volumen de madera producida por hectárea a los siete años en cada una de las variantes. Para los materiales y condiciones del ensayo el mejor resultado fue para el clon Conti 12 plantación en otoño utilizando barbados (plantas R1T1) o plantación en primavera utilizando estacas, barbados (R1T1) o plantas recepadas (R1T0). Para el clon Harvard, plantación en primavera utilizando planta recepada (R1T0) o estacas.

Asociaciones entre clones y anormalidades morfológicas en ajo

Con el objeto de detectar la influencia del genotipo en la presencia de anormalidades morfológicas, se tomó una muestra de 200 bulbillos de cada uno de los 7 clones de ajo colorado, incluidos en un ensayo experimental en bloques completamente aleatorizados con 4 repeticiones, en un solo ambiente de expresión. En cada clon se computaron las proporciones de bulbos normales, pera, cebollón y doble. En los bulbos normales se midió la distribución de calibres. Se compararon las proporciones de anormalidades entre los clones. Un clon se diferenció (p < 0,05) de los restantes por no poseer malformaciones y presentar un calibre promedio bajo. Utilizando en conjunto la información obtenida, se realizó un análisis de componentes principales y de conglomerado. Se utilizó la distancia euclidiana promedio y el método de ligamiento promedio. Los dos primeros ejes del análisis de componentes principales representaron el 74% de la variación de los datos. La información obtenida permitió reunir 3 grupos de clones por su asociación a calibres y anormalidades morfológicas. El primer grupo formado por un clon sin anormalidades y con mayor proporción de calibre 4 y 5; el segundo, de cuatro clones con presencia de ajo cebollón y el tercero, de dos clones asociados a los bulbos pera, dobles y de calibres 6. Se demostró la influencia del genotipo en la frecuencia de anormalidades morfológicas.

Fuste comercial de clones del género Populus : relación entre volumen y densidad de la madera con nutrientes inorgánicos

El objetivo del trabajo fue determinar sobre 10 clones de álamos, provenientes de cruzamientos intraespecíficos de Populus deltoides e interespecíficos de Populus x canadensis, implantados en Teodelina, Santa Fe, Argentina (34°09' S; 61°15' W), la concentración de nutrientes inorgánicos en su corteza y leño, y sus relaciones con los volúmenes comerciales alcanzados a los 9 años de edad y la densidad básica de la madera. Se apearon ejemplares seleccionados, se calculó su volumen comercial individual y se determinaron la densidad básica y las concentraciones de Ca, Mg, P y K en fuste y corteza. Se realizó análisis de la varianza, test de comparación de medias de Tukey y correlación simple de los diferentes parámetros evaluados. Los resultados arrojaron diferentes contenidos de nutrientes por clon y concentraciones más bajas en la madera que en la corteza, en todos los casos. No hubo correlaciones significativas entre el volumen comercial obtenido, los valores de densidad básica de la madera y los nutrientes inorgánicos, indicando eficiencias individuales en el uso de los recursos inorgánicos.

Clones de sauce : longitud de la fibra de su madera

En la madera de clones de sauce (Salix spp.) la longitud de fibra, que está asociada con su aptitud papelera, varía ampliamente en el mismo árbol. En algunas especies se ha comprobado diferencias entre la médula y el exterior -a lo largo de ejes radiales (variación radial)- y longitudinales, entre la base del tronco y la parte superior (variación axial). La determinación de dichas diferencias permitiría localizar muestras útiles para evaluar la calidad de árboles completos, utilizables en la industria celulósica. Por tal motivo se han estudiado en 8 clones de sauces de 13 años extrayendo material a 3 distintas alturas en el fuste: 1,3; 4,3 y 6,5 m. En cada una de ellas se tomaron muestras de 3 posiciones radiales correspondientes a las edades, en años: 3-4 (interna), 6-7 (media) y 10-11 (externa). Se midió el largo de 30 fibras por posición sobre material disociado. En el sentido radial se verificó -en todos los clones y a todas las alturas- un aumento de la longitud de fibra desde el interior hacia el exterior. Para la variación axial se registró una tendencia general de disminución desde las secciones inferiores a las superiores.

Índices de calidad de sitio de Populus nigra ‘Italica’ en plantaciones lineales en el noroeste de Chubut

En el noroeste del Chubut, los álamos se encuentran establecidos en cortinas de protección en predios de pastoreo o donde se cultivan pasturas y forrajes en secano. El Populus nigra ‘Italica’ es el clon más difundido en plantaciones lineales, ubicadas en diferentes calidades de sitio. No existen antecedentes sobre crecimiento en altura e Índice de Sitio en la zona. Se seleccionaron ocho sitios de muestreo, donde fueron apeados 24 árboles dominantes, a los que se les realizó análisis fustal. Con los pares de datos de edad-altura, resultantes del análisis de fuste de los árboles muestra, se ajustó el modelo de Chapman-Richards mediante técnicas de regresión no lineal. Se construyó una familia de curvas de crecimiento en altura, según la metodología de curva guía. Las curvas de Índice de Sitio, basadas en altura y edad, se construyeron mediante deducción matemática a partir de la función de crecimiento en altura, tomándose como edad de referencia 25 años a la altura del pecho. Se definieron cinco calidades de sitio, con un rango de 4 metros, con Índices de Sitio comprendidos entre 19 y 35 m.

Nueva especie de Melampsora sobre Populus deltoides Stoneville 70 en Mendoza, Argentina

En Argentina, al igual que en otros países, las plantaciones de álamo siempre han estado sujetas a peligros fitosanitarios. La roya, causada por Melampsora spp., es una de las enfermedades más serias a nivel mundial. La clasificación de las especies de Melampsora se basa principalmente en las características morfológicas de los estados uredial y telial, y a los hospederos que poseen en su estado aecial y telial. Dada la observación de pústulas con características diferentes a las de Melampsora larici-populina (única especie citada para la provincia de Mendoza), es que el objetivo del presente trabajo fue identificar la especie de Melampsora observada en álamos del clon Stoneville 70, localizados en el distrito de San Carlos, provincia de Mendoza, Argentina. Para ello, fueron tomadas al azar, muestras de hojas sintomáticas, a partir de las cuales se realizó la descripción sintomatológica y posteriormente microscópica, registrándose la morfometría de 100 uredosporas y teliosporas. Las características analizadas concuerdan con aquellas reportadas en la bibliografía para las especies M. larici-tremulae, M. magnusiana, M. pinitorqua y M. rostrupii. Debido a la dificultad que muestran estas especies en ser distinguidas, Wilson y Henderson (1966) adoptan el nombre de M. populnea como especie colectiva. Por ello, se considera oportuno citar a la especie encontrada como M. populnea hasta aclarar con estudios más profundos la identificación definitiva del microorganismo.

Evaluación de clones de Populus spp., a los dos años de edad, en dos micrositios de la región pampeana, Argentina

La producción de álamos en la pampa ondulada de la provincia de Buenos Aires podría constituir una actividad alternativa y/o complementaria, debido a zonas ecológicas favorables para su cultivo. En este contexto es importante conocer el comportamiento de los clones en los diversos ambientes para poder definir cuáles de ellos podrían presentar mayor estabilidad para los diferentes sitios. El objetivo del trabajo fue estudiar la interacción existente entre los parámetros de crecimiento y supervivencia de 16 clones de Populus spp. en dos micrositios geomorfológicamente diferentes en la región pampeana, Argentina. Los clones en estudio provienen de cruzamientos intraespecíficos de P. deltoides e interespecíficos de P. deltoides x P. nigra (Populus x canadensis). Se plantaron en dos ensayos, uno por cada situación geomórfica: loma y bajo, y se completó con un análisis estadístico comparando los ensayos en forma individual y conjunta. Cada ensayo se instaló con un diseño de bloques completos al azar. Las variables analizadas fueron la supervivencia, la altura media y el área basal al concluir el segundo año de crecimiento. Para el sitio regional evaluado, la interacción entre los clones y los micrositios fue significativa para las variables altura y supervivencia. La mayor disponibilidad de agua en el micrositio bajo produjo mayores crecimientos clonales con diferencias significativas respecto del micrositio loma. La estabilidad de los atributos de supervivencia y crecimiento frente a los micrositios es un objetivo fundamental en las plantaciones clonales. Siendo los micrositios una realidad ambiental importante, propia como variable no controlable, la reducción de la variabilidad de respuesta ante ellos permitiría la constitución de unidades de manejo más homogéneas.

Regeneración de plantas de té (Camellia sinensis) por cultivo in vitro de meristemas, yemas axilares y segmentos uninodales

Tres tipos de explantes de dos clones ( C H 1 4 I N TA y C H 3 1 8 I N TA ) d e t é (Camellia sinensis (L.) O. Kuntze) fueron evaluados para su regeneración in vitro, bajo la influencia de dos citocininas (BAP y CIN) y una giberelina (AG3). Previa desinfección, con etanol 70% (1 minuto) e hipoclorito de sodio 1,5% (20 minutos) y tres enjuagues con agua destilada estéril, los explantes fueron aislados y cultivados en los distintos medios de cultivo. Las mejores respuestas en formación de vástagos se registraron con los segmentos uninodales de ambos clones cultivados en el medio ½ MS + 1 mg/L de BAP o con el cultivo de yemas axilares del clon CH 14 INTA en el medio ½ MS + 1 mg/L de BAP o del clon CH 318 INTA en el medio ½ MS + 1 mg/L BAP + 1 mg/L AG3. Los mejores resultados con el empleo de meristemas caulinares se obtuvieron en el medio ½ MS + 1 mg/L de CIN y 1 mg/L de AG3. Los vástagos obtenidos fueron enraizados mediante su cultivo en ¼ MS + 6 mg/L de IBA.

Evaluación del crecimiento inicial de clones de álamo en el norte de la Patagonia

En los valles irrigados de Río Negro y Neuquén, el cultivo de álamos acompañó históricamente la producción agrícola, utilizándose clones de Populus nigra L. en cortinas rompeviento y clones de Populus xcanadensis Moench. para las forestaciones en macizo. Buscando ampliar la disponibilidad de genotipos para los diferentes sitios de cultivo, se instaló un ensayo comparativo con trece clones de álamo en la localidad de Pomona, Provincia de Río Negro. Se evaluaron seis clones de P. xcanadensis ('Triplo', 'Ragonese 22 INTA', "Pangui INTA", "Pudú INTA", y los testigos comerciales 'Conti 12' e 'I-214'), seis clones de P. deltoides ('Harvard', 'Onda', 'Stoneville 67', 'Carabelas INTA', "20-82" y "C-657") y un clon de P. xcanescens. Se utilizó un diseño experimental de bloques completos al azar (DBCA) con quince repeticiones y parcelas de una planta. Luego de cuatro períodos de crecimiento, 'I-214' y 'Triplo' tuvieron los mayores incrementos de DAP, no encontrándose diferencias significativas con los valores de 'Conti 12', 'Ragonese 22 INTA', "Pangui INTA", "Pudú INTA", "20-82" y P. xcanescens. Los menores crecimientos fueron observados en los deltoides 'Stoneville 67' y "C- 657". Los clones 'Ragonese 22 INTA', 'Triplo' y "20-82" constituyen alternativas para el cultivo de álamos en macizos y cortinas rompeviento.