Estabelecimento de culturas de raízes in vitro e avaliação da produção de metabólitos secundários de Cleome spinosa Jacq. (Cleomaceae)

Cleome spinosa é uma espécie herbácea de uso na medicina popular, especialmente no Nordeste do Brasil. A cultura in vitro de raízes adventícias da espécie foi iniciada com segmentos radiculares (0,5 e 1,0 cm) obtidos a partir de duas fontes de explantes: plantas propagadas in vitro e plantas oriundas do processo de germinação in vitro. Os explantes foram inoculados em meio MS líquido suplementado ou não com as auxinas ANA, AIA e AIB em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 1,5; 3,0; 5,0 mg.L-1). As culturas foram mantidas em sala de crescimento, sob agitação (100 rpm) e sob fotoperíodo de 16h ou no escuro, com subculturas a cada 45 dias. Explantes oriundos de plantas propagadas in vitro também foram cultivados em meio contendo a citocinina BAP em associação com auxinas, na presença de sorbitol (isoladamente ou em associação com sacarose), em meio MS contendo redução na concentração total de sais minerais (MS1/2 e MS1/4) e em meio sólido. Os resultados mostraram que a adição de auxinas ao meio de cultura foi essencial à multiplicação das raízes, uma vez que em meio MS0 ocorreu significativo desenvolvimento de brotos. A suplementação com ANA não foi eficiente para a produção de raízes e acarretou no calejamento dos explantes, enquanto que a presença de AIA e AIB resultaram na multiplicação das raízes. Ainda assim, independentemente das manipulações realizadas no meio de cultivo, a capacidade de multiplicação mostrou-se reduzida. Uma expressiva multiplicação de raízes foi observada em culturas iniciadas a partir de explantes oriundos de plantas obtidas por germinação in vitro. A maior produção de biomassa foi alcançada em culturas iniciadas com segmentos radiculares de plantas obtidas por germinação in vitro cultivadas em meio contendo com 3,0 mg.L-1 de AIB e mantidas no escuro. Culturas estabelecidas nas melhores condições para acúmulo de biomassa foram acompanhadas por três subculturas, sendo avaliados períodos de cultura de 45 dias e de 60 dias. Culturas mantidas a intervalos de 45 dias apresentaram maior produção de raízes durante a segunda subcultura, enquanto que para o intervalo de 60 dias, embora tenha sido observada a capacidade de multiplicação das raízes, a maior produção de biomassa ocorreu nos primeiros 60 dias de cultivo. A partir de materiais in vivo e in vitro foram realizadas extrações com solventes de polaridade crescente (hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol) e os extratos foram submetidos a avaliações cromatográficas. As análises por cromatografia em camada delgada mostraram a presença de terpenos nos extratos obtidos com hexano e diclorometano, tanto em material obtido a campo como naqueles produzidos in vitro e de compostos fenólicos nos extratos em acetato de etila obtidos a partir de material de campo. Pelas análises por cromatografia líquida associada à espectrometria de massas foi possível observar a presença de flavonoides nas culturas in vitro, não detectados no material de campo. As análises por cromatografia de fase gasosa associada à espectrometria de massas apontaram a presença de esteroides nos extratos em hexano de raízes coletadas a campo e nas culturas in vitro de raízes. Os resultados obtidos mostraram a viabilidade da produção de culturas de raízes in vitro para a espécie C. spinosa e o potencial deste material para a produção de substâncias bioativas, algumas não encontradas em material coletado a campo

Estudo da reação entre o metanol e o acetato de etila em catalisadores Mg/La por espectroscopia no infravermelho acoplada a espectrometria de massas

A transesterificação metílica em meio homogêneo é catalisada por bases, tais como hidróxidos e alcóxidos de sódio ou potássio e se processa em baixa temperatura de reação, mesmo em escala industrial. A utilização de catalisadores formados por sólidos básicos aparece como uma alternativa promissora aos processos homogêneos convencionais, tendo em vista as inúmeras vantagens como a redução da ocorrência das reações indesejáveis de saponificação e redução de custos dos processos pela diminuição do número de operações associadas. Em estudos anteriores realizados pelo grupo, catalisadores a base de Mg/La com diferentes composições químicas (9:1, 1:1 e 1:9) mostraram-se promissores para a obtenção de ésteres metílicos via reação de transesterificação, porém não foi possível fazer uma correlação entre atividade catalítica e as propriedades físico-químicas quando toda a série foi considerada. Assim, a realização de um estudo de caráter fundamental, baseado em reações modelo e uso de moléculas sonda, permite avançar no entendimento das propriedades de superfície destes catalisadores. Portanto, o presente trabalho estuda a reação entre metanol e acetato de etila em catalisadores a base de Mg/La utilizando espectroscopia de reflectância difusa no infravermelho com transformada de Fourier (DRIFTS) acoplada a espectrometria de massas (MS) identificando os intermediários e produtos formados para determinar a rota reacional. As análises de difração de raios X mostram que os precursores são predominantemente compostos por carbonatos hidratados de magnésio (Mg/La 1:1 e 9:1) e de lantânio (Mg/La 1:9). Os perfis de decomposição térmica e difratogramas de raios X obtidos a partir de tratamento térmico in situ indicaram que estes carbonatos se decompõem apenas a partir de 750 C. As análises de Dessorção a Temperatura Programada realizadas com moléculas sonda, metanol e acetato de etila, mostraram a adsorção em maior quantidade do metanol independente da composição química do sólido. A partir dos resultados obtidos por DRIFTS-MS foi proposta uma rota reacional para a reação de transesterificação do acetato de etila e metanol, que ocorre via adsorção do metanol e do acetato de etila na superfície do catalisador, seguida da formação de um intermediário tetraédrico formado pelas moléculas adsorvidas, que sofre um rearranjo formando etanol, acetato de metila, acetona e metano. Simultaneamente, parte do metanol adsorvido como metoxi monodentado é desidrogenado formando formiatos que são dessorvidos na forma de formaldeído e decompostos formando CO2 e H2

Carboxilesterase na adaptação do metabolismo de lipídios do pacu à hipoxia

Os peixes são vertebrados que vivem em vários habitats. Adaptações de sua fisiologia e de sua bioquímica são estudadas para entender como conseguem sobreviver aos desafios presentes em cada ambiente. A diminuição da concentração de oxigênio dissolvido na água é um fenômeno natural cíclico em águas do Pantanal e da Amazônia. A crescente poluição antrópica dos rios da Amazônia e do Pantanal pode, somada à hipoxia, oferecer ameaça à permanência de muitas espécies de peixes. Ao estudarmos a carboxilesterase (CarbE), enzima importante para a biotransformação de xenobióticos, observamos que sua atividade diminuía em plasma de pacu, um peixe típico do Pantanal, mantido em hipoxia durante 42 horas. As carboxilesterases participam de inúmeras reações químicas no organismo, incluindo uma transesterificação capaz de produzir ésteres etílicos tóxicos de ácido graxo (FAEE, fatty acid ethyl esters) a partir de etanol e ésteres de ácidos graxos. Já que a diminuição da atividade de CarbE poderia ser uma vantagem, pois que o etanol (um produto da glicólise em peixes sob hipoxia) seria menos esterificado, resolvemos saber mais sobre a bioquímica da CarbE do plasma e do fígado de pacus. Os pacus foram submetidos à hipoxia por diminuição da concentração até 0,5 mg O2/L por meio de borbulhamento de nitrogênio na água. Os animais ficaram nessas condições por 42 horas, quando então coletamos sangue e retiramos seus fígados. A atividade de CarbE ensaiada foi 50% menor no soro e 25% menor nos microssomos de fígado se comparada com a de peixes sob 6 mg O2/L. A CarbE isolada do soro dos pacus em normoxia possui massa molecular relativa de 56.000. A eletroforese em gel desnaturante com a fração purificada rendeu três bandas, mas o gel nativo apresentou só duas bandas com atividades sobre α-naftil acetato. Inferimos que mais do que uma isoforma da enzima está no plasma dos pacus. A CarbE isolada do soro não possui atividade de lipase sobre o Tween 20, mas os microssomos dos fígados dos animais em normoxia e hipoxia possuem. No entanto, a CarbE possui atividade sobre acil-CoA assim como o microssomo de fígado. A enzima pura apresenta Vmáx três vezes maior e uma KM quatro vezes maior do que a atividade presente nos microssomos. Além disso, os microssomos do fígado dos pacus em normoxia podem hidrolisar acil-CoA com o dobro da velocidade daqueles em hipoxia. A atividade clássica de CarbE do soro foi inibida por 4-HNE a 4 mM. A atividade de acil-CoA dos microssomos de fígado também foi sensível a 4-HNE a 4 mM, enquanto 2 mM de 4-HNE inibiu metade desta atividade do soro.

杉料（Taxodiaceae）植物精油和双黄酮成分研究及化学分类初探

本文以杉科（Taxodiaceae）五属六种植物--杉木属（Cunninghamia）的杉木（C. lanceolata）、水松属（Glyptostrobus）的水松（G. pensilis）、落羽杉属（Taxodium）的池杉（T. ascendens）、水杉属（Metasequoia）的水杉（M. glyptostroboides）、柳杉属（Cryptomeria）的柳杉（C. fortunei）及日本柳杉（C. japonica）为材料，进行了以下研究： 1、用气相色谱－质谱－计算机联用法，在统一条件下测定了上述植物叶的精油成分及各成分百分含量。共检测到七十余种成分，包括α－蒎稀（α－pinene）、龙脑（borneol）、乙酸松油酯（terpinyl acetate）、杜松烯（cadinene）等十六种共有成分和其它分布各异的成分。 2、用柱层析和薄层层析法从杉木中提取、分离、纯化了5个双黄酮成分，鉴定为一类3'-8"联接的化合物，分别为穗花杉双黄酮（amentoflavone）、长叶世界爷双黄酮（sequoiaflavone）、银杏双黄酮（gingetin）、榧黄素（kayaflavone）和金松双黄酮（sciadopitysin）。 3、用薄层层析法检测上述5个双黄酮成分在6种植物中的分布，发现每一植物均含有这五个已知化合物。 4、根据以上结果并结合文献资料，讨论了以下问题： 1）、杉科植物精油成分及其组成特点; 2）、杉科植物双黄酮成分及其分布规律; 3）有关柳杉与日本柳杉关系的化学证据; 4）有关水杉归属的化学证据。

Acyclic diterpene alcohols isolated from four algae of Bryopsidophyceae and their toxicity

Three new acylic diterpenoids belonging to the class of phytol series have been isolated. They were obtained from the ethyl acetate soluble fractions of four siphonaceous green seaweeds, Bryopsis pennata Lamour., Caulerpa taxifolia (Vahl) C. Ag., Codium decorticatum (Woodw.) Howe and Valoniopsis pachynema (Mart.) Børg., collected from Karachi coast of Pakistan. Structures of these compounds were elucidated with the help of spectroscopic methods and confirmed by comparison with the known compounds. Even the known compounds are being reported for the first time from a green algal source. All the compounds were found to display a strong toxicity at all the three concentrations tested in the brine shrimp bioassay.

微藻光合放氢的生理生化调控及生物技术研究

氢能将是主宰未来世界的主要能源之一，氢能的研究开发已经成为世界各国能源研究的重要方向。微藻光合制氢，因其无污染、可再生，成为生物制氢领域最有应用前景的研究方向之一。 本论文选取模式植物莱茵衣藻、经济藻种钝顶螺旋藻作为实验材料，对微藻光合放氢的生理生化过程调控及相关生物技术进行综合研究。获得的主要成果如下： （1）建立起微藻两步法放氢的技术平台和批次培养的回馈监控模式;同时，运用离子色谱追踪整个放氢过程中的离子变化，我们的实验结果证明对于衣藻两步法放氢而言，乙酸的存在是必要条件之一。这个结果与文献报道不尽相同，值得进一步深入地研究。 （2）筛选出一株联合固氮菌，摸索出藻菌共培养的培养基合适配置和活性控制条件;在两步法放氢的基础上，充分利用藻菌之间的优势互补，设计构建藻菌共培养放氢体系，与两步法放氢比较，该体系能提前12小时进入放氢状态，提高单位叶绿素放氢效率1倍左右，延长体系稳定时间近20小时。 （3）利用固定化技术获得高产氢效率，去固定化后持续产氢是我们设计出微藻连续放氢的一个特点。同时，摸索出衣藻放氢过程中的间歇进料进流程序，使连续放氢时间可达3周左右。 （4）实验证明两步法放氢技术，并不适用于螺旋藻;同时，在摸索建立螺旋藻的藻菌共培养放氢体系过程中，发现非致病性肺炎克雷伯氏杆菌培养液可以破碎螺旋藻细胞，这种全新的提取藻蓝蛋白的方法，具有节约成本，便于操作，温和均匀的独特优势。 （5）在连续放氢体系中加入适量蔗糖做底物和引物，剩余存活的菌可以继续利用提取藻蓝蛋白后剩余螺旋藻藻渣和放氢后死亡的衣藻进行发酵放氢，可获得更高产率的氢气，之后继续利用光合细菌进一步放氢，形成连续放氢网络，这一步还在探索之中。 作为一项应用基础研究，从三角瓶里的实验到工厂化生产还有很长的路，希望本实验的工作能为以后同类研究提供一些有用的信息和启发。

The influence of peel angle on the mechanics of peeling flexible adherends with arbitrary load-extension characteristics

The peel test is commonly used to determine the strength of adhesive joints. In its simplest form, a thin flexible strip which has been bonded to a rigid surface is peeled from the substrate at a constant rate and the peeling force which is applied to the debonding surfaces by the tension in the tape is measured. Peeling can be carried out with the peel angle, i.e. the angle made by the peel force with the substrate surface, from any value above about 10° although peeling tests at 90 and 180° are most common. If the tape is sufficiently thin for its bending resistance to be negligibly small then as well as the debonding or decohesion energy associated with the adhesive in and around the point of separation, the relation between the peeling force and the peeling angle is influenced both by the mechanical properties of the tape and any pre-strain locked into the tape during its application to the substrate. The analytic solution for a tape material which can be idealised as elastic perfectly-plastic is well established. Here, we present a more general form of analysis, applicable in principle to any constitutive relation between tape load and tape extension. Non-linearity between load and extension is of increasing significance as the peel angle is decreased: the model presented is consistent with existing equations describing the failure of a lap joint between non-linear materials. The analysis also allows for energy losses within the adhesive layer which themselves may be influenced by both peel rate and peel angle. We have experimentally examined the application of this new analysis to several specific peeling cases including tapes of cellophane, poly-vinyl chloride and PTFE. © 2005 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Phycochemical studies on sterols from three brown seaweeds of northern Arabian Sea

Three brown algae i.e. Dictyota hauckiana Nizamuddin, Levringia boergesenii Kylin and Spatoglossum variabile Figari et De Notaris, collected from the coastal areas of Karachi, have been investigated for their sterol composition. Four sterols with cholesta skeleton including a new one, 17α-hydroxy-24β-vinyl cholesterol have been isolated from them. Their structures were elucidated with the help of spectroscopic analysis. The new sterol has been named as hauckiosterol after its first source of isolation.

Photosynthetic bacteria in the marine environment at Porto-Novo

Sediment and water samples were collected from mangrove and estuarine biotopes at fortnightly intervals. The physico-chemical characters of the overlying water were studied. In the mangrove biotope maximum temperature (31.5°C) and in the estuarine biotope maximum salinity (35.6‰) were recorded during the summer season, whereas in post-monsoon period the sulphate content was increased to 516 p.p.m. and the pH was reduced to 7.4. Invariably both in the enriched sediment and water samples four major peaks (at wavelengths 460, 705, 772 and 850 nm) and two minor peaks (at wavelengths 580 and 663 nm) of absorption spectra were noticed. A pure culture of Chromatium sp., isolated from mangroves sediment, showed three peaks of absorption spectra at wavelengths, 500, 580 and 850 nm. The effect of sodium chloride on the growth of Chromatium sp., was also studied and it was observed that maximum growth occurred in the range 1-3% sodium chloride concentration. This isolate was also capable of utilizing various sulphur and carbon compounds. Glycerol and glucose did not show any specific effect whereas pyruvate, malate and acetate increased the growth.

恒河猴TRIM5α的组织分布及不同刺激促进PBMC中TRIM5α转录水平的上调

TRIM5α(tripartite motif protein 5-alpha)蛋白是恒河猴体内一种非常重要的限制因子,能抑制人免疫缺陷病毒(HIV-1,human immunodeficiency virus type 1)、马感染性贫血病毒(EIAV, equine infectious anemia virus)和猫免疫缺陷病毒(FIV, feline immunodeficiencyvirus)等逆转录病毒的复制.恒河猴TRIM5α的组织分布以及在受到外界刺激时TRIM5α mRNA表达量的变化研究还未见报道.本研究从中国恒河猴的各组织中提取总RNA,以β-actin基因作为内参照,通过半定量RT-PCR检测各组织中TRIMSα mRNA的表达.选择HIV-GFP-VSVG假病毒感染外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),非特异性刺激剂--佛波脂(Phorbol myfismte acetate,PMA)+离子霉素(ionomycin,Ion)及CD28抗体+CD49d抗体分别共刺激恒河猴PBMC,研究不同刺激对恒河猴TRIM5α mRNA表达水平的影响.结果表明:TRIM5α mRNA表达于所研究的恒河猴21种组织中,免疫系统和泌尿生殖系统组织中表达量最高,而神经系统组织,如大脑、脊髓中表达较少,其他组织中未见明显的表达差异;HIV-GFP-VSVG感染和用PMA+Ion、CD28抗体+CD49d抗体分别共刺激PBMC能促进PBMC中TRIM5α mRNA的转录水平的上调.

Cultural conditions of arylsulfatase activity in Escherichia coli

Arylsulfatase activity and growth were estimated in Escherichia coli, isolated from marine sediment. Maximum activity was observed at pH 6.6 whereas the maximum growth was at pH 5.6. 2x10ˉ³ M is the optimum substrate concentration for the highest level of enzyme activity/synthesis as well as for its growth. In general higher substrate concentration tended to inhibit enzyme activity and also the growth of the bacterium. Maximum growth and highest enzyme activity occurred at 29°C and above this temperature decreased both of them. Besides these, glucose, sodium sulfate, sodium chloride, sodium dihydrogen phosphate, sodium acetate and ammonium chloride at higher concentrations were inhibiting the enzyme activity and growth. Above 0.2% of glucose, 3% of sodium chloride, 10x10ˉ³ M concentrations of sodium sulfate, sodium dihydrogen phosphate, sodium acetate and ammonium chloride inhibited the activity and growth also. These observations indicate that, to generalize a compound as inhibitor or activator it is difficult since this depends not only on its concentration but also on the source of the enzyme when more than one type is encountered in nature.

法落海的化学成分及抗HIV活性

下载PDF阅读器利用多种柱层析方法,从法落海(Angelica apaensis)95%乙醇提取物中分离得到8个化合物.经IR、MS、NMR等波谱数据鉴定为氧化前胡素(oxypeucedanin,1)、氧化前胡素水合物(oxypeucedanin hydrate,2)、异欧芹属乙素(isoimperatorin,3)、白当归脑(byakangelicin,4)、白当归素(byakangelicol,5)、3'-O-acetylhamaudol (6)、(+)-9(Z),17-octadecadiene-12,14-diyne-1,11,16-triol(7)和9,17-octadecadiene-12,14-diyne-1,11,16-triol,1-acetate(8),其中,化合物6-8是首次从该植物中分离得到.我们对所有得到的8个化合物进行抗HIV活性分析,化合物1具有明显的抗HIV活性,其抑制合胞体形成的半数有效浓度(EC50)为1.6 ms/L,治疗指数(TI)为17.59.

Reduction in Chaetoceros populations by furanace

One of the most promising prophylactic agents being tested to control Penaeus monodon larval diseases is furanace (6-hydroxymethyl-2 2(5-nitro-2-furyl) vinyl pyridine). To evaluate further its suitability as a chemotherapeutic agent, its effects on the population growth of Chaetoceros calcitrans, the diatom used as feed for the zoeal stages, was examined. Chaetoceros populations of uniform density (initial density in all runs: 130-141x10 SUP-3 cells /ml) were placed in nine white, circular (382 sq cm), plastic basins. The physio-chemical characteristics of the culture water were as follows: salinity, 28 . 5-30 . 0 ppt; pH, 8 . 62-8 . 72; temperature, 23-25 . 5 degree C; dissolved oxygen, 7 . 1-9 . 3 ppm; nitrate, 0 . 03-0 . 07 ppm; and ammonia, 0 . 005-0 . 03 ppm. Preweighed furanace granules were dissolved in the culture water, with resulting concentrations of 1 and 2 mg/l (3 replicates each). A set of replicates without furanace served as the control. Population counts of the diatom were taken after 2, 4, 6, 8, and 10 hr exposures. After 4 hr, the population decreased in all three levels. The population in 2 mg/l furanace showed the lowest count and that in control the highest. The population means are not statistically different from one another. The results of the study show that the furanace causes reductions in Chaetoceros population at all durations of exposure.

Anti-HIV-1 activities of extracts from the medicinal plant Rhus chinensis

Rhus chinensis, a species used in folk medicine by Chinese native people, the anti-HIV-1 activities of the petroleum ether, ethyl acetate, butanol and aqueous extract of Rhus chinensis, named as RC-1, RC-2, RC-3 and RC-4, respectively, was evaluated. The

Genetic diversity study of Caspian brown trout (Salmo trutta caspius Kessler, 1877) population in five rivers in the southern part of Caspian Sea, Iran

For study the genetic diversity of Caspian brown trout population in five rivers in the southern part of Caspian Sea in Iran 182 number generators in the fall and winter of 1390 were collected in Chalus, Sardab Rud, Cheshmeh Kileh, Kargan Rud and Astara rivers. Then about 3-5 g of soft and fresh tissue from the bottom fin fish removed and were fixed in ethanol 96°. Genomic DNA was extracted by using ammonium acetate, then quantity and quality of the extracted DNA were determined by using spectrophotometry and horizontal electrophoresis in 1% agarose gel. The polymerase chain reaction was performed by using 16 SSR primers and sequencing primers (D-Loop) and the quality of PCR products amplified by SSR method were performed by using horizontal electrophoresis in 2% agarose gel. Alleles and their sizes were determined by using vertical electrophoresis in 6% polyacrylamide gel and silver nitrate staining method. Gel images were recorded by gel documentarian, the bands were scored by using Photo- Capt software and statistical analysis was performed by using Gene Alex and Pop Gene software. Also the PCR sequencing products after quality assessment by usinghorizontal electrophoresis in 1.5% agarose gel were purified and sent to South Korea Bioneer Corporation for sequencing. Sequencing was performed by chain termination method and the statistical analysis was performed by using Bio- Edit, Mega, Arlequin and DNA SP software. The SSR method, 5 pairs of primers produced polymorphic bands and the average real and effective number of alleles were calculated 5.60±1.83 and 3.87±1.46 in the Cheshmeh Kileh river and 7.60±1.75 and 5.48±1.32 in the Karganrud river and the mean observed and expected heterozygosity were calculated 0.44 ±0.15 and 0.52 ±0.16 in the Cheshmeh Kileh river and 0.50 ±0.11 and 0.70±0.13 in the Karganrud river. Analysis of Molecular Variance results showed that significant differences in genetic diversity between and within populations and between and within individuals in the studied rivers (P<0.01). The sequencing method identified 35 different haplotype, the highest number of polymorphic position (251) and haplotype (14) were observed in the Chalus river. The highest mean observed number of alleles (2.24±0.48) was calculated in the Sardabrud river, the highest mean observed heterozygosity (1.00±0.03) was calculated in the Chalus river and the highest mean nucleotide diversity (0.13±0.07) was observed in the Sardabrud river and mean haplotype diversity was obtained (1) in three studied rivers. The overall results show that there are no same population of this fish in the studied rivers and Karganrud and Chalus rivers in the SSR and sequencing methods had the highest levels of genetic diversity.