Influência do SNP T3801C CYP1A1 sobre os níveis de danos oxidativos no DNA de células da mucosa gástrica de pacientes infectados pelo H. Pylori

Helicobacter pylori (H. pylori) is a common gastric pathogen that has infected more than 50% of the population of the world and it has been associated with chronic gastritis, gastric ulcers, duodenal ulcer, and gastric cancer. Although, almost all infected people develop gastritis, there is a variety of clinical outcomes, and only a minority (<1%) of infected individuals develop gastric cancer. There are evidences which suggest that the chronic inflammatory reaction caused by the bacterial infection may be involved in the production of reactive oxygen species or reactive nitrogen species. It may lead to DNA damage, which together with the cellular response could lead to gene mutations, chromosomal aberrations characterizing genomic instability that may represent the early step in gastric carcinogenesis. The extent and severity of gastric mucosal inflammation, as well as the clinical outcome of the infection, depend on a number of factors, including the host genetic susceptibility such SNP T3801 CYP1A1, immune response, age at which the infection was acquired, environmental factors, especially dietary and bacterial virulence factors. Due to the risk of developing gastric cancer in humans infected by H. pylori, we used the Comet Assay to investigate the influence of the SNP T3801C CYP1A1 on levels of oxidative DNA damage in gastric epithelial cells. The study was conducted with biopsies from the gastric antrum and corpus of 103 H. pylori-infected patients and 24 uninfected control patients. Genotype of SNP T3801C CYP1A1 was determined by PCR-RFLP and DNA damage levels were measured in gastric mucosal cells from antrum and corpus by the Comet assay. Levels of DNA damage in gastric mucosa cells from antrum and corpus of H. pylori-infected patients with mild, moderate, severe gastritis, and gastric cancer were significantly higher compared to uninfected normal mucosa cells. However, levels... (Complete abstract click electronic access below)

Impacto da eferocitose na atividade microbicida via receptores “scavenger” em macrófagos alveolares: papel de prostaglandina E2

Segundo a Organização Mundial da Saúde, em países de baixa renda as infecções do trato respiratório ocupam o primeiro lugar dentre as causas de morte, sendo responsável por 11,2% das mesmas. Dentre estas, a causada por Streptococcus pneumoniae é uma das responsáveis pelo maior número de mortes em crianças ou adultos acometidos por doenças pulmonares crônicas. No pulmão os macrófagos alveolares (MAs) através de receptores expressos na superfície celular, como receptores “scavenger”, possuem um papel crítico na fagocitose e atividade microbicida de diferentes bactérias Gram-positivas. Em indivíduos acometidos por doenças pulmonares crônicas há um grande acúmulo de células apoptóticas (ACs) e estes podem ser mais susceptíveis a infecções pulmonares bacterianas como por S. pneumoniae. A presença destas ACs poderia contribuir para o aumento desta susceptibilidade através da supressão da resposta imune. Portanto, neste trabalho avaliamos se o efeito supressor mediado por ACs pode interferir na modulação das atividades microbicidas de MAs contra S. pneumoniae via receptores “scavenger”. A partir dos resultados encontrados, pode-se sugerir que 1) a eferocitose por MAs possui efeito imunossupressor na atividade microbicida contra S. pneumoniae; 2) a atividade supressora mediada pela fagocitose de ACs por MAs foi inibida na presença de bloqueadores de SR-A, sugerindo que os SR-B I/II são menos sensíveis a efeito supressor decorrente da eferocitose; 3) a PGE2, oriunda da eferocitose, liga-se ao receptor EP2 e suprime a atividade microbicida de MAs; 4) as produções de IL-1α, TNF-α e NO estão aumentadas na presença de ACs, sugerindo que a eferocitose por MAs promove um descontrole na ativação de MAs mediante a infecção por S. pneumoniae

Modelo discreto para o ciclo eritrocitário da Malária

In this work, some aspects of the erythrocyte cycle of the malaria parasite was incorporated into a cellular automata model to simulated the major factors leading to disruption of the erythrocyte cycle and consequent appearance of gametocytes, which infected the mosquitoes. Furthermore, the time seies of parasitaemia of infected patients was analyzed and compared to simulated data. The results suggested that differences in the temporal patterns of the asexual parasitaemia are associated with different effectiveness of the immune system in controlling the infection

Produção de PGE2 por células dendríticas mediante fagocitose de células apoptóticas infectadas

A fagocitose de células apoptóticas é um processo dinâmico e de fundamental importância para homeostase dos tecidos após uma injúria. A fagocitose de células apoptóticas promove a síntese de mediadores anti-inflamatórios como PGE2, TGF-β e IL-10, podendo resultar na supressão da resposta imune do hospedeiro contra agentes infecciosos. Entretanto, um elegante estudo utilizando células apoptóticas infectadas demonstrou que a fagocitose destas células promove a geração não apenas de citocinas anti-inflamatórias como TGF-β mas também de IL-6 e IL-23, promovendo um efeito imunoestimulador, a diferenciação de células Th17. A atuação da PGE2 na imunidade adaptativa vem sendo investigada quanto à diferenciação e ativação de linfócitos Th1, Treg e Th17. Os resultados aqui apresentados demonstram que o protocolo de diferenciação de células dendríticas utilizado foi capaz de gerar em torno de 85% de CD imaturas evidenciado pela expressão de um perfil fenotípico CD11c+CD11b+MHCIIlowCD80lowCD86low. Quanto à produção de PGE2, a fagocitose de AC+PAMP por células dendríticas foi capaz de induzir níveis elevados deste mediador lipídico nas diferentes proporções de células apoptóticas utilizadas. Os níveis de PGE2 encontrados no sobrenadante de cultura foi proporção dependente evidenciando uma relação direta entre fagocitose de AC+PAMP e a produção de PGE2. A fim de mimetizar a cinética da carga bacteriana durante uma infecção, ou seja, inicialmente uma menor carga bacteriana que tende a aumentar conforme ocorre a colonização, os animais foram inoculados com alta (high - 106 UFC de E. coli) e baixa (low - 105 UFC de E. coli) cargas bacterianas, gerando desta forma o que chamamos de AC+PAMPhigh e AC+PAMPlow, respectivamente. Os resultados aqui apresentados demonstram que diante de uma alta carga bacteriana há uma maior produção dos mediadores

Sanidade Uterina Pós Parto: Aspectos Imunológicos e Terapêuticos

Function of the uterus is often compromised in cattle by bacterial contamination of the uterine lumen after parturition. Pathogenic bacteria often persist, causing uterine disease, a major cause of infertility in cattle. Knowledge of the immunological aspects of the uterus involved in maintaining reproductive healthiness is fundamental to the study of uterine infections that affect the uterus postpartum. Polymorphonuclear leukocytes have an important role because they are the first line of defense against colonization of bacteria in utero (Hammon and Goff, 2006). The establishment of uterine infection depends in parts of endocrine environment, particularly progesterone, which suppresses the immune system (Lewis, 2003). In the puerperium may occur uterine disorders, such as retained placenta, puerperal metritis, clinical and subclinical endometritis and pyometra, this review was proposed a study of the immunology involved in uterine health and a better understanding of uterine disorders, using the model of Sheldon et al. al, (2006) for classification of diseases, and a study of best treatment options and discussion about its functionality, because a lot of controversy among authors about choosing a treatment and another and between treated and untreated

Avaliação de concentração de citocinas no soro de pacientes portadoras de lesão intraepitelial escamosa de baixo grau, lesão intraepitelial escamosa de alto grau e carcinoma cervical invasor

A infecção genital por Papilomavírus Humano (HPV) é uma das doenças sexualmente transmissíveis (DST), de origem viral, mais prevalente no mundo. As lesões intraepiteliais escamosas de baixo grau (LIEBG) e de alto grau (LIEAG), assim como carcinoma cervical invasor (CCI), estão associadas à presença do HPV. A resposta imune tem papel importante na infecção pelo HPV na cérvice uterina, sendo as citocinas importantes reguladoras da transcrição viral. Avaliar a concentração de IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-γ e TNF-α no soro de mulheres portadoras de LIEBG, LIEAG e CCI. Foram incluídas no estudo 40 mulheres com diagnóstico histopatológico de LIEBG (n=11), LIEAG (n=10), CCI (n=10) e 9 mulheres com suspeita de doença HPV induzida, mas sem alterações histopatológicas na biópsia do colo do útero (controle), atendidas no Ambulatório de Colposcopia da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP) e no Ambulatório de Ginecologia Preventiva do Hospital Amaral Carvalho, Jaú, SP. O sangue periférico foi colhido por punção venosa e o soro armazenado até o processamento. A dosagem das citocinas no soro foi avaliada por ensaio imunoenzimático (ELISA). A pesquisa de HPV foi realizada empregando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os dados sócio-demográficos foram obtidos por entrevista no momento da consulta ginecológica. A mediana de idade das pacientes do grupo controle, LIEBG, LIEAG, e CCI foi de 38 (21-69), 32,5 (17-51), 39 (23-65) e 51,5 (29-72), respectivamente. Houve diferença estatisticamente significante de mediana de idade das pacientes do grupo CCI quando esta foi comparada com os demais grupos. Em relação às características das pacientes, 76% eram brancas, 68% relataram união estável, 31% concluíram o 2º grau, 42% eram fumantes, 37% das mulheres relataram 3 ou mais parceiros sexuais durante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Expressão de defensinas por membranas corioamnióticas de gestações pré-termo complicadas por corioamnionite

As membranas corioamnióticas são barreiras mecânicas contra a ascensão de microrganismos e possuem papel fundamental no sistema imune inato. Quando é invadida por microrganismos apresenta corioamnionite aguda, que é a infiltração das membranas fetais por leucócitos polimorfonucleares. Entretanto as membranas têm efeito inibitório sobre o crescimento de muitas bactérias, em parte, pela produção de defensinas. Quantificar a expressão de defensinas (HBD1, 3 e 4) por membranas corioamnióticas de gestações complicadas por corioamnionite. Foram incluídos no estudo 40 fragmentos de membranas corioamnióticas, com diagnóstico histológico de corioamnionite, provenientes de gestações complicadas por rotura prematura de membranas pré-termo (RPM-PT) e/ou trabalho de parto prematuro (TPP) que apresentaram parto prematuro como desfecho gestacional, constituindo o grupo estudo (G1). Como grupo controle (G2), foram avaliadas 40 membranas corioamnióticas, com ausência de corioamnionite e pareadas pela idade gestacional ao grupo estudo. Fragmentos das membranas corioamnióticas foram encaminhados à análise histopatológica para confirmação de corioamnionite histológica. Outros fragmentos de 1cm2 das membranas foram acondicionados em RNA later e submetidos à extração de RNA total. Após a extração do RNA, as amostras com concentração entre 0,02 e 0,2μg/ μL de RNA foram submetidas à obtenção de cDNA e posterior utilização na quantificação da expressão de defensinas pela técnica da PCR em tempo real empregando-se o sistema TaqMan® Gene Expression Assays. Em relação às variáveis sócio-demográficas, as porcentagens de mulheres que referiram união estável, cor branca e hábito tabagista foram similares entre os grupos estudados. Em relação às variáveis obstétricas não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos G1 e G2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Avaliação do efeito terapêutico da associação proteoglicano /vitamina D3 na artrite experimental

A artrite reumatóide (AR) é uma doença inflamatória crônica de caráter autoimune que compromete as articulações. A maioria das terapias aprovadas para o tratamento desta e outras patologias autoimunes é baseada na inibição global da resposta imune, o que aumenta a susceptibilidade aos agentes infeciosos. O objetivo geral deste projeto foi definir se a associação de vitamina D (VitD3) com o antígeno proteoglicano (PG) é tolerogênica e serve como medida terapêutica. Para isso, utilizamos o modelo de artrite experimental obtido pela imunização de camundongos BALB/c com PG. Inicialmente, os animais foram imunizados com diferentes doses do antígeno específico (PG) na presença de VitD3 para determinação da dose tolerogênica. O potencial terapêutico da estratégia mais tolerogênica foi testado no período pré-clínico da doença, isto é, no período após o aparecimento do nível máximo de anticorpos anti-PG, mas antes das manifestações clínicas da artrite (eritema e edema articular). A eficácia terapêutica foi avaliada através da incidência de artrite e do escore clínico da doença. O possível mecanismo imunológico envolvido no efeito terapêutico foi estudado por avaliação dos níveis de citocinas (IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-10 e IL-17) produzidas por células esplênicas estimuladas in vitro com PG. Analisados em conjunto, os resultados obtidos mostraram que os três procedimentos (PG, VitD3 e PG+VitD3) determinaram efeito terapêutico. Entretanto, a análise mais detalhada, incluindo número de animais com escore clínico maior que oito (escore > 8), início dos sintomas clínicos e escore máximo atingido, sugere que o uso de PG50 (50μg de PG) associado à VitD3 ou o uso isolado de VitD3 foram os procedimentos terapêuticos mais eficazes. A produção mais elevada de IL-10 nestes dois grupos sugere contribuição desta citocina neste efeito terapêutico

Clonagem de sequências codificantes de citocinas felinas para construção de curva padrão para PCR em tempo real

A quantificação de citocinas felinas possibilita uma avaliação do sistema imune do animal em diferentes doenças, permite também a identificação de diferentes fatores que alteram sua secreção, e colabora na compreensão da patogênese das enfermidades. Em humanos e camundongos essa mensuração é feita principalmente pelo método de ELISA, mas para os felinos há uma menor disponibilidade de kits específicos para determinadas citocinas, e estes possuem um custo elevado. Assim, uma alternativa é utilizar a reação de PCR em tempo real com transcrição reversa (RT-qPCR) para quantificação absoluta dos RNAs mensageiros das citocinas felinas, uma técnica bastante sensível e específica para analisar a expressão desses genes. Com esse intuito, esse trabalho teve como objetivo clonar as sequências gênicas codificantes de citocinas, para construir uma curva padrão para a qPCR. Assim, foi feita extração de RNA de amostras de sangue total de gatos domésticos, e estes foram tratados com DNAse para evitar contaminação por DNA genômico. O cDNA foi sintetizado, e amplificado com os primers específicos para cada fragmento codificante de citocina e o GAPDH felino. Cada amplicon purificado foi inserido em um plasmídeo comercial, e introduzido em bactérias E. coli cepa DH5. Os clones recombinantes foram sequenciados para confirmar a inserção do fragmento no vetor. As curvas padrão da qPCR foram construídas com cada plasmídeo recombinante numa de 106 a 101 cópias por reação. O sequenciamento mostrou que todos os clones eram semelhantes àqueles encontrados no GenBank. A eficiência das amplificações, baseado no slope das curvas padrão foram: 101,3% para GAPDH, 99,1% para IL-1, 83,2% para IL-6, 94,4% para IL-10, 105,5% para IL-12, 83,4% para IFN- e 83,8% para TNF-. O valor de r2 foi de 0,99 em todas as reações. Dessa forma, com a clonagem dos fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Influência da luz LED em culturas de células-tronco mesenquimais in-vitro

Stem cells are defined as cells capable of self-renewal and differentiation into specialized cells when submited to external signalings in the enviroment. Among adult stem cells, mesenchymal cells occupy an important position because they can differentiate into mesodermal cells such as osteoblasts, adipocytes and chondrocytes. Cell therapy consists in the use of mesenchymal stem cells (MSC) in the treatment of degenerative diseases and harmed tissue reconstruction. Due to the longstanding and costly procedure for cultivation of MSC, it was proposed the use of low power light sources, such as light emitting diodes (LED), to optimize these factors. Recent works have shown a series of results from the influence of LED light on biological tissues such as increased rate of cell proliferation, increased RNA, DNA and ATP synthesis rate. The purpose of this study is to compare the biomodulator effect of LED light set at wavelengths 630nm ± 10nm and 805nm ± 10nm on the mesenchymal stem cells proliferation. For this, the mesenchymal stem cells culture adopted the procedure used in the Departament of Animal Reproduction and Veterinary Radiology of the Faculty of Veterinary Medicine and Animal Sciences of Botucatu. MSC were obtained from an adult horse bone marrow, and isolated by density gradient separation, with the FICOLL reagent and by centrifugation. The pellet containing the stem cells was removed and these were placed in low glucose DMEM culture medium, containing 10% fetal calf serum and antibiotics. The material was observed daily by inverted microscopy for monitoring the progression of the cells and subsequently the amount of cells were counted in a Neubauer counting chamber. The amount of MSC was obtained by cell culture seeded in 24 wells culture plate and segregated into three distinct groups: Group 1 was irradiated with wavelength set at 630nm ± 10 nm, Group... (Complete abstract click electronic access below)

Avaliação da expressão gênica em pacientes com Diabetes Mellitus tipo 2

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Células T reguladoras em sangue periférico de cães portadores de mastocitoma cutâneo

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Avaliação das atividades citotóxicas e imunomoduladora de paládio(II) contendo o ligante DMBA= N,N-dimetilbenzilamina

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Efeitos da adição de mananoproteínas derivadas da parede celular de leveduras sobre parâmetros imunológicos de cães adultos e idosos

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Imunidade de aves (Gallus gallus) para Salmonella enterica subesp. enterica Sorovar Gallinarum biovar Gallinarum

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV