Género y desarrollo humano: Estudio de las relaciones de género y su incidencia en el desarrollo humano de las mujeres en contextos urbanos y rurales. El caso de Brasil.

La lucha contra la pobreza y la desigualdad ocupa la lista de prioridades y tareas pendientes, en la mayoría de los países de América Latina; es un hecho, sustentado en estadísticas e informes de importantes organizaciones a nivel mundial (que se citan más adelante), que una gran parte de la población enfrenta dificultades y barreras que impiden el pleno disfrute de beneficios, derechos y libertades y que las desigualdades persisten en varios campos, afectando mayoritariamente a un grupo de población: las mujeres. Esa realidad implica que los proyectos, políticas, estrategias y acciones enfocadas en la promoción del desarrollo humano deben actuar con plena consciencia sobre esas desigualdades y procurar intervenciones más efectivas, que atiendan las necesidades e intereses diferenciados de hombres y mujeres y generen beneficios bajo criterios de igualdad. Para lograr tal fin, es necesario desvirtuar las intervenciones que asumen como ciertos los roles estereotipados de mujeres y hombres — desconociendo la existencia de relaciones, características, roles y responsabilidades diferenciadas por sexo — y adoptan fórmulas únicas para dar respuesta a problemas comunes, ya que no sólo no disminuyen las brechas de desigualdad entre los sexos si no que directa o indirectamente continúan perpetuándolas. ¿Por qué analizar el papel de la mujer en el desarrollo humano? Intentar entender la relación entre mujer y desarrollo humano es internarse en un complejo sistema de factores, causas y efectos que van desde intereses económicos y políticos hasta mitos y creencias socialmente aceptadas y reforzadas generacionalmente. A pesar de los avances logrados en los últimos años, aún hoy en muchos lugares del mundo siguen existiendo mujeres que se enfrentan a los estereotipos de género, las barreras sociales y culturales y una serie de situaciones desiguales que las hacen más propensas a la pobreza, más vulnerables y peor posicionadas en varios aspectos del desarrollo. Esa vulnerabilidad y empobrecimiento de las mujeres, también llamada feminización de la pobreza, es generalmente ocasionada por múltiple factores, entre los cuáles (FAO, 1998) cita: “Acceso limitado a los recursos de producción, a los servicios sociales, y comerciales; desempleo, subempleo y/o desigualdad en la remuneración; exclusión o limitada participación en los procesos de toma de decisiones y formulación de políticas; legislación desfavorable o discriminatoria…existencia y reproducción de la discriminación en el seno del hogar; creciente migración masculina y consecuente abandono de las mujeres e hijos...” adicionalmente los estereotipos, el sistema patriarcal y la privación de la mujer de sus derechos por medios violentos y de coacción le hacen aún más difícil avanzar hacia su desarrollo humano. Mantener, aproximadamente, al 50% de la población mundial en condiciones de desigualdad implica impactos negativos, no solo para las mujeres, sino para la eficiencia, el crecimiento económico y el desarrollo de la sociedad en su conjunto, que se dan por hechos como:  La correlación entre los bajos índices de desarrollo de las mujeres y los menores niveles de desarrollo alcanzados por sus hijos e hijas que se configuran como un mecanismo de reproducción de la pobreza de una generación a otra.  La correlación entre Índice de Desarrollo Humano (IDH) y el Índice de Potenciación de Género (IPG), que según datos del Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo (PNUD) sugieren que la igualdad de género va de la mano de mayores y mejores niveles de desarrollo de la sociedad.  La directa relación entre el papel de la mujer y su posibilidad para ejercer sus derechos y el logro de objetivos de desarrollo del milenio, en aspectos como el crecimiento demográfico.  La clara contribución de la mujer a la producción, la economía, el cuidado de la fuerza de trabajo y las futuras generaciones y el desarrollo comunitario. “La igualdad de género es parte de la economía inteligente: puede aumentar la eficiencia económica y mejorar otros resultados en materia de desarrollo de tres maneras distintas. En primer lugar, eliminar las barreras que impiden que las mujeres tengan el mismo acceso que los hombres a la educación, a las oportunidades económicas y a los insumos productivos puede dar lugar a aumentos generalizados de la productividad... En segundo lugar, mejorar el estatus absoluto y relativo de las mujeres promueve muchos otros resultados en materia de desarrollo, incluidos los que afectan a sus hijos e hijas. En tercer lugar, equilibrar la balanza —de manera que las mujeres y los hombres gocen de las mismas oportunidades de tener una actividad social y política, tomar decisiones y definir las políticas— probablemente conducirá con el tiempo al establecimiento de instituciones y opciones de política más representativas y más incluyentes, y por tanto a una vía más apropiada hacia el desarrollo. (Banco Mundial, 2012) En congruencia con todo lo anterior este trabajo busca entender la perspectiva de género y su influencia en el desarrollo humano de dos grupos de mujeres ubicadas en el estado de Alagoas en Brasil. Como punto de partida se definieron las siguientes preguntas de investigación: 1) ¿Los grupos analizados enfrentan desigualdades, en el contexto familiar y comunitario, por causa de su sexo? 2) ¿Qué factores están interfiriendo en el ejercicio de los derechos y libertades de las mujeres específicamente en las áreas de tiempo, trabajo, dinero y poder? 3) ¿Cuáles son las interrelaciones entre las áreas anteriormente mencionadas y el desarrollo de las mujeres? 4) ¿La situación de las mujeres y las relaciones de género guardan similitudes en contextos urbanos y rurales? Para lograr una respuesta aproximada a estas preguntas, se realizó un análisis de género utilizando la combinación de algunos aspectos del marco de Marco de Análisis de Género de Harvard y el Marco de Moser y se realizaron comparaciones entre dos grupos de mujeres de dos contextos geográficos diferentes, el rural y el urbano. Considerando la amplitud de las dimensiones de género que podrían ser incluidas, el análisis se realizó en torno a los aspectos de tiempo, trabajo, recursos financieros, participación y poder. La metodología utilizada incluyó siguientes herramientas: 1) Análisis del marco jurídico relativo a género 2) Análisis del contexto específico de cada grupo. 3) Aproximación a las necesidades e intereses de las mujeres 4) Análisis de roles y distribución sexual del trabajo 5) Análisis del acceso y control a los recursos 6) Aproximación al análisis de capacidad de las organizaciones responsables para trabajar con perspectiva de género. Con base en los resultados de estos análisis se aportan algunas recomendaciones para la disminución de esas brechas. 7) Análisis de brechas de género, mecanismos de reproducción e impactos en el desarrollo humano de las mujeres

UMA ECOLOGIA REFÉM DO PODER ECONÔMICO: Leitura exegética sócio-econômica de Deuteronômio 5,12-15

Com esse trabalho, visamos discutir a tentativa de estabelecer um equilíbrio entre o ser humano e natureza na área rural de Judá, pouco antes do reinado de Josias (640-609 a.C.). Nesse caso, pode-se perguntar: seria o mandamento de Deuteronômio 5,12-15 um discurso ecológico? A partir dos estudos de Frank Crüsemann e Haroldo Reimer se admite que partes das leis veterotestamentárias eram destinadas ao assim chamado grupo povo da terra de Judá, visando à manutenção de seu poder. O grupo teria assumido a liderança em Judá mediante um golpe político e, articulando-se, desde então, numa política de aliança para se conservar no poder, mesmo não o assumindo diretamente. Nesse contexto de política de alianças deve-se procurar a implementação do mandamento de Deuteronômio 5,12-15. Ele teria sido escrito por anciãos, um grupo junto ao qual o povo da terra teria se aliado para que ordenassem sentenças jurídicas para a acomodação social. Nesse caso, inicialmente o portão da cidade, espaço oficial para discussões, reclamações e propostas de intermediações, deve ter sido o lugar de elaboração de sentenças jurídicas sobre a utilização de técnicas na agricultura. Sendo elas posteriormente levadas ao tribunal do templo para passar pelas mãos dos sacerdotes, outro braço da coalizão. O uso dos animais de porte, cujo peso prejudicava as pequenas propriedades de terra de Judá, deve ter sido um motivo de incessantes conflitos entre pequenos e grandes proprietários de terra. Ressaltamos assim que apenas os homens mais abastados de Judá tinham acesso a esses animais. Esta solução, segundo se entende, liga o rodízio de culturas ao descanso do campo pertencente ao povo da terra de Judá. Liga-se o termo sábado com a vida da elite rural judaíta do período do reinado de Josias. Uma saída encontrada pelas elites de Judá, a qual nos leva a ponderar uma situação similar que ocorre na América Latina, diante da globalização. Se o texto Deuteronômio 5,12-15 é uma ponderação das elites hegemônicas de Judá que buscam o equilíbrio entre ser o humano e a natureza (ecologia), o discurso ecológico contemporâneo poderá ter neste texto um importante interlocutor. Esse discurso pode ocultar interesses econômicos, completamente diferentes, pois se trata de uma estratégia dominadora e não libertadora, objetivando-se, sobretudo, a reprodução social. O Brasil e os demais países da América Latina vêm sofrendo, há algum tempo, com essa distância entre a elite e o resto da sociedade. Nossas elites utilizam-se, há tempos, do discurso ecológico para se manterem no poder dessas sociedades. Por exemplo, vemos nos noticiários uma quantidade de programas e manchetes ligadas à destruição da natureza. Isso é interessante porque, após terem eles mesmo destruído a natureza, passam agora a defendê-la; controlando as reservas naturais, garantindo sua produtividade e seu status quo no sistema econômico atual.(AU)

UMA ECOLOGIA REFÉM DO PODER ECONÔMICO: Leitura exegética sócio-econômica de Deuteronômio 5,12-15

Com esse trabalho, visamos discutir a tentativa de estabelecer um equilíbrio entre o ser humano e natureza na área rural de Judá, pouco antes do reinado de Josias (640-609 a.C.). Nesse caso, pode-se perguntar: seria o mandamento de Deuteronômio 5,12-15 um discurso ecológico? A partir dos estudos de Frank Crüsemann e Haroldo Reimer se admite que partes das leis veterotestamentárias eram destinadas ao assim chamado grupo povo da terra de Judá, visando à manutenção de seu poder. O grupo teria assumido a liderança em Judá mediante um golpe político e, articulando-se, desde então, numa política de aliança para se conservar no poder, mesmo não o assumindo diretamente. Nesse contexto de política de alianças deve-se procurar a implementação do mandamento de Deuteronômio 5,12-15. Ele teria sido escrito por anciãos, um grupo junto ao qual o povo da terra teria se aliado para que ordenassem sentenças jurídicas para a acomodação social. Nesse caso, inicialmente o portão da cidade, espaço oficial para discussões, reclamações e propostas de intermediações, deve ter sido o lugar de elaboração de sentenças jurídicas sobre a utilização de técnicas na agricultura. Sendo elas posteriormente levadas ao tribunal do templo para passar pelas mãos dos sacerdotes, outro braço da coalizão. O uso dos animais de porte, cujo peso prejudicava as pequenas propriedades de terra de Judá, deve ter sido um motivo de incessantes conflitos entre pequenos e grandes proprietários de terra. Ressaltamos assim que apenas os homens mais abastados de Judá tinham acesso a esses animais. Esta solução, segundo se entende, liga o rodízio de culturas ao descanso do campo pertencente ao povo da terra de Judá. Liga-se o termo sábado com a vida da elite rural judaíta do período do reinado de Josias. Uma saída encontrada pelas elites de Judá, a qual nos leva a ponderar uma situação similar que ocorre na América Latina, diante da globalização. Se o texto Deuteronômio 5,12-15 é uma ponderação das elites hegemônicas de Judá que buscam o equilíbrio entre ser o humano e a natureza (ecologia), o discurso ecológico contemporâneo poderá ter neste texto um importante interlocutor. Esse discurso pode ocultar interesses econômicos, completamente diferentes, pois se trata de uma estratégia dominadora e não libertadora, objetivando-se, sobretudo, a reprodução social. O Brasil e os demais países da América Latina vêm sofrendo, há algum tempo, com essa distância entre a elite e o resto da sociedade. Nossas elites utilizam-se, há tempos, do discurso ecológico para se manterem no poder dessas sociedades. Por exemplo, vemos nos noticiários uma quantidade de programas e manchetes ligadas à destruição da natureza. Isso é interessante porque, após terem eles mesmo destruído a natureza, passam agora a defendê-la; controlando as reservas naturais, garantindo sua produtividade e seu status quo no sistema econômico atual.(AU)

Detection and characterization of carcinoma cells in the blood

A highly sensitive assay combining immunomagnetic enrichment with multiparameter flow cytometric and immunocytochemical analysis has been developed to detect, enumerate, and characterize carcinoma cells in the blood. The assay can detect one epithelial cell or less in 1 ml of blood. Peripheral blood (10–20 ml) from 30 patients with carcinoma of the breast, from 3 patients with prostate cancer, and from 13 controls was examined by flow cytometry for the presence of circulating epithelial cells defined as nucleic acid+, CD45−, and cytokeratin+. Highly significant differences in the number of circulating epithelial cells were found between normal controls and patients with cancer including 17 with organ-confined disease. To determine whether the circulating epithelial cells in the cancer patients were neoplastic cells, cytospin preparations were made after immunomagnetic enrichment and were analyzed. Epithelial cells from patients with breast cancer generally stained with mAbs against cytokeratin and 3 of 5 for mucin-1. In contrast, no cells that stained for these antigens were observed in the blood from normal controls. The morphology of the stained cells was consistent with that of neoplastic cells. Of 8 patients with breast cancer followed for 1–10 months, there was a good correlation between changes in the level of tumor cells in the blood with both treatment with chemotherapy and clinical status. The present assay may be helpful in early detection, in monitoring disease, and in prognostication.

Incidence and functional consequences of hMLH1 promoter hypermethylation in colorectal carcinoma

Inactivation of the genes involved in DNA mismatch repair is associated with microsatellite instability (MSI) in colorectal cancer. We report that hypermethylation of the 5′ CpG island of hMLH1 is found in the majority of sporadic primary colorectal cancers with MSI, and that this methylation was often, but not invariably, associated with loss of hMLH1 protein expression. Such methylation also occurred, but was less common, in MSI− tumors, as well as in MSI+ tumors with known mutations of a mismatch repair gene (MMR). No hypermethylation of hMSH2 was found. Hypermethylation of colorectal cancer cell lines with MSI also was frequently observed, and in such cases, reversal of the methylation with 5-aza-2′-deoxycytidine not only resulted in reexpression of hMLH1 protein, but also in restoration of the MMR capacity in MMR-deficient cell lines. Our results suggest that microsatellite instability in sporadic colorectal cancer often results from epigenetic inactivation of hMLH1 in association with DNA methylation.

NADPH-oxidase and a hydrogen peroxide-sensitive K+ channel may function as an oxygen sensor complex in airway chemoreceptors and small cell lung carcinoma cell lines

Pulmonary neuroepithelial bodies (NEB) are widely distributed throughout the airway mucosa of human and animal lungs. Based on the observation that NEB cells have a candidate oxygen sensor enzyme complex (NADPH oxidase) and an oxygen-sensitive K+ current, it has been suggested that NEB may function as airway chemoreceptors. Here we report that mRNAs for both the hydrogen peroxide sensitive voltage gated potassium channel subunit (KH2O2) KV3.3a and membrane components of NADPH oxidase (gp91phox and p22phox) are coexpressed in the NEB cells of fetal rabbit and neonatal human lungs. Using a microfluorometry and dihydrorhodamine 123 as a probe to assess H2O2 generation, NEB cells exhibited oxidase activity under basal conditions. The oxidase in NEB cells was significantly stimulated by exposure to phorbol esther (0.1 μM) and inhibited by diphenyliodonium (5 μM). Studies using whole-cell voltage clamp showed that the K+ current of cultured fetal rabbit NEB cells exhibited inactivating properties similar to KV3.3a transcripts expressed in Xenopus oocyte model. Exposure of NEB cells to hydrogen peroxide (H2O2, the dismuted by-product of the oxidase) under normoxia resulted in an increase of the outward K+ current indicating that H2O2 could be the transmitter modulating the O2-sensitive K+ channel. Expressed mRNAs or orresponding protein products for the NADPH oxidase membrane cytochrome b as well as mRNA encoding KV3.3a were identified in small cell lung carcinoma cell lines. The studies presented here provide strong evidence for an oxidase-O2 sensitive potassium channel molecular complex operating as an O2 sensor in NEB cells, which function as chemoreceptors in airways and in NEB related tumors. Such a complex may represent an evolutionary conserved biochemical link for a membrane bound O2-signaling mechanism proposed for other cells and life forms.

α1 and α2 Integrins Mediate Invasive Activity of Mouse Mammary Carcinoma Cells through Regulation of Stromelysin-1 Expression

Tumor cell invasion relies on cell migration and extracellular matrix proteolysis. We investigated the contribution of different integrins to the invasive activity of mouse mammary carcinoma cells. Antibodies against integrin subunits α6 and β1, but not against α1 and α2, inhibited cell locomotion on a reconstituted basement membrane in two-dimensional cell migration assays, whereas antibodies against β1, but not against α6 or α2, interfered with cell adhesion to basement membrane constituents. Blocking antibodies against α1 integrins impaired only cell adhesion to type IV collagen. Antibodies against α1, α2, α6, and β1, but not α5, integrin subunits reduced invasion of a reconstituted basement membrane. Integrins α1 and α2, which contributed only marginally to motility and adhesion, regulated proteinase production. Antibodies against α1 and α2, but not α6 and β1, integrin subunits inhibited both transcription and protein expression of the matrix metalloproteinase stromelysin-1. Inhibition of tumor cell invasion by antibodies against α1 and α2 was reversed by addition of recombinant stromelysin-1. In contrast, stromelysin-1 could not rescue invasion inhibited by anti-α6 antibodies. Our data indicate that α1 and α2 integrins confer invasive behavior by regulating stromelysin-1 expression, whereas α6 integrins regulate cell motility. These results provide new insights into the specific functions of integrins during tumor cell invasion.

Radiation-induced Release of Transforming Growth Factor α Activates the Epidermal Growth Factor Receptor and Mitogen-activated Protein Kinase Pathway in Carcinoma Cells, Leading to Increased Proliferation and Protection from Radiation-induced Cell Death

Exposure of A431 squamous and MDA-MB-231 mammary carcinoma cells to ionizing radiation has been associated with short transient increases in epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine phosphorylation and activation of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) and c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) pathways. Irradiation (2 Gy) of A431 and MDA-MB-231 cells caused immediate primary activations (0–10 min) of the EGFR and the MAPK and JNK pathways, which were surprisingly followed by later prolonged secondary activations (90–240 min). Primary and secondary activation of the EGFR was abolished by molecular inhibition of EGFR function. The primary and secondary activation of the MAPK pathway was abolished by molecular inhibition of either EGFR or Ras function. In contrast, molecular inhibition of EGFR function abolished the secondary but not the primary activation of the JNK pathway. Inhibition of tumor necrosis factor α receptor function by use of neutralizing monoclonal antibodies blunted primary activation of the JNK pathway. Addition of a neutralizing monoclonal antibody versus transforming growth factor α (TGFα) had no effect on the primary activation of either the EGFR or the MAPK and JNK pathways after irradiation but abolished the secondary activation of EGFR, MAPK, and JNK. Irradiation of cells increased pro-TGFα cleavage 120–180 min after exposure. In agreement with radiation-induced release of a soluble factor, activation of the EGFR and the MAPK and JNK pathways could be induced in nonirradiated cells by the transfer of media from irradiated cells 120 min after irradiation. The ability of the transferred media to cause MAPK and JNK activation was blocked when media were incubated with a neutralizing antibody to TGFα. Thus radiation causes primary and secondary activation of the EGFR and the MAPK and JNK pathways in autocrine-regulated carcinoma cells. Secondary activation of the EGFR and the MAPK and JNK pathways is dependent on radiation-induced cleavage and autocrine action of TGFα. Neutralization of TGFα function by an anti-TGFα antibody or inhibition of MAPK function by MEK1/2 inhibitors (PD98059 and U0126) radiosensitized A431 and MDA-MB-231 cells after irradiation in apoptosis, 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), and clonogenic assays. These data demonstrate that disruption of the TGFα–EGFR–MAPK signaling module represents a strategy to decrease carcinoma cell growth and survival after irradiation.

Human renal cell carcinoma expresses distinct binding sites for growth hormone-releasing hormone

Antagonists of growth hormone-releasing hormone (GHRH) inhibit the proliferation of various human cancers in vitro and in vivo by mechanisms that include apparent direct effects through specific binding sites expressed on tumors and that differ from pituitary human GHRH (hGHRH) receptors. In this study, GHRH antagonist JV-1–38 (20 μg/day per animal s.c.) inhibited the growth of orthotopic CAKI-1 human renal cell carcinoma (RCC) by 83% and inhibited the development of metastases to lung and lymph nodes. Using ligand competition assays with 125I-labeled GHRH antagonist JV-1–42, we demonstrated the presence of specific high-affinity (Kd = 0.25 ± 0.03 nM) binding sites for GHRH with a maximal binding capacity (Bmax) of 70.2 ± 4.1 fmol/mg of membrane protein in CAKI-1 tumors. These receptors bind GHRH antagonists preferentially and display a lower affinity for hGHRH. The binding of 125I-JV-1–42 is not inhibited by vasoactive intestinal peptide (VIP)-related peptides sharing structural homology with hGHRH. The receptors for GHRH antagonists on CAKI-1 tumors are distinct from binding sites detected with 125I-VIP (Kd = 0.89 ± 0.14 nM; Bmax = 183.5 ± 2.6 fmol/mg of protein) and also have different characteristics from GHRH receptors on rat pituitary as documented by the insignificant binding of [His1,125I-Tyr10,Nle27]hGHRH(1–32)NH2. Reverse transcription-PCR revealed the expression of splice variants of hGHRH receptor in CAKI-1 RCC. Biodistribution studies demonstrate an in vivo uptake of 125I-JV-1–42 by the RCC tumor tissue. The presence of specific receptor proteins that bind GHRH antagonists in CAKI-1 RCC supports the view that distinct binding sites that mediate the inhibitory effect of GHRH antagonists are present on various human cancers.

Urokinase Receptor and Fibronectin Regulate the ERKMAPK to p38MAPK Activity Ratios That Determine Carcinoma Cell Proliferation or Dormancy In Vivo

We discovered that a shift between the state of tumorigenicity and dormancy in human carcinoma (HEp3) is attained through regulation of the balance between two classical mitogen-activated protein kinase (MAPK)-signaling pathways, the mitogenic extracellular regulated kinase (ERK) and the apoptotic/growth suppressive stress-activated protein kinase 2 (p38MAPK), and that urokinase plasminogen activator receptor (uPAR) is an important regulator of these events. This is a novel function for uPAR whereby, when expressed at high level, it enters into frequent, activating interactions with the α5β1-integrin, which facilitates the formation of insoluble fibronectin (FN) fibrils. Activation of α5β1-integrin by uPAR generates persistently high level of active ERK necessary for tumor growth in vivo. Our results show that ERK activation is generated through a convergence of two pathways: a positive signal through uPAR-activated α5β1, which activates ERK, and a signal generated by the presence of FN fibrils that suppresses p38 activity. When fibrils are removed or their assembly is blocked, p38 activity increases. Low uPAR derivatives of HEp3 cells, which are growth arrested (dormant) in vivo, have a high p38/ERK activity ratio, but in spite of a similar level of α5β1-integrin, they do not assemble FN fibrils. However, when p38 activity is inhibited by pharmacological (SB203580) or genetic (dominant negative-p38) approaches, their ERK becomes activated, uPAR is overexpressed, α5β1-integrins are activated, and dormancy is interrupted. Restoration of these properties in dormant cells can be mimicked by a direct re-expression of uPAR through transfection with a uPAR-coding plasmid. We conclude that overexpression of uPAR and its interaction with the integrin are responsible for generating two feedback loops; one increases the ERK activity that feeds back by increasing the expression of uPAR. The second loop, through the presence of FN fibrils, suppresses p38 activity, further increasing ERK activity. Together these results indicate that uPAR and its interaction with the integrin should be considered important targets for induction of tumor dormancy.

Surface-epitope masking and expression cloning identifies the human prostate carcinoma tumor antigen gene PCTA-1 a member of the galectin gene family.

The selective production of monoclonal antibodies (mAbs) reacting with defined cell surface-expressed molecules is now readily accomplished with an immunological subtraction approach, surface-epitope masking (SEM). Using SEM, prostate carcinoma (Pro 1.5) mAbs have been developed that react with tumor-associated antigens expressed on human prostate cancer cell lines and patient-derived carcinomas. Screening a human LNCaP prostate cancer cDNA expression library with the Pro 1.5 mAb identifies a gene, prostate carcinoma tumor antigen-1 (PCTA-1). PCTA-1 encodes a secreted protein of approximately 35 kDa that shares approximately 40% sequence homology with the N-amino terminal region of members of the S-type galactose-binding lectin (galectin) gene family. Specific galectins are found on the surface of human and marine neoplastic cells and have been implicated in tumorigenesis and metastasis. Primer pairs within the 3' untranslated region of PCTA-1 and reverse transcription-PCR demonstrate selective expression of PCTA-1 by prostate carcinomas versus normal prostate and benign prostatic hypertrophy. These findings document the use of the SEM procedure for generating mAbs reacting with tumor-associated antigens expressed on human prostate cancers. The SEM-derived mAbs have been used for expression cloning the gene encoding this human tumor antigen. The approaches described in this paper, SEM combined with expression cloning, should prove of wide utility for developing immunological reagents specific for and identifying genes relevant to human cancer.

G1 arrest and down-regulation of cyclin E/cyclin-dependent kinase 2 by the protein kinase inhibitor staurosporine are dependent on the retinoblastoma protein in the bladder carcinoma cell line 5637.

The protein kinase inhibitor staurosporine has been shown to induce G1 phase arrest in normal cells but not in most transformed cells. Staurosporine did not induce G1 phase arrest in the bladder carcinoma cell line 5637 that lacks a functional retinoblastoma protein (pRB-). However, when infected with a pRB-expressing retrovirus [Goodrich, D. W., Chen, Y., Scully, P. & Lee, W.-H. (1992) Cancer Res. 52, 1968-1973], these cells, now pRB+, were arrested by staurosporine in G1 phase. This arrest was accompanied by the accumulation of hypophosphorylated pRB. In both the pRB+ and pRB- cells, cyclin D1-associated kinase activities were reduced on staurosporine treatment. In contrast, cyclin-dependent kinase (CDK) 2 and cyclin E/CDK2 activities were inhibited only in pRB+ cells. Staurosporine treatment did not cause reductions in the protein levels of CDK4, cyclin D1, CDK2, or cyclin E. The CDK inhibitor proteins p21(Waf1/Cip1) and p27 (Kip1) levels increased in staurosporine-treated cells. Immunoprecipitation of CDK2, cyclin E, and p2l from staurosporine-treated pRB+ cells revealed a 2.5- to 3-fold higher ratio of p2l bound to CDK2 compared with staurosporine-treated pRB- cells. In pRB+ cells, p2l was preferentially associated with Thrl6O phosphorylated active CDK2. In pRB- cells, however, p2l was bound preferentially to the unphosphorylated, inactive form of CDK2 even though the phosphorylated form was abundant. This is the first evidence suggesting that G1 arrest by 4 nM staurosporine is dependent on a functional pRB protein. Cell cycle arrest at the pRB- dependent checkpoint may prevent activation of cyclin E/CDK2 by stabilizing its interaction with inhibitor proteins p2l and p27.

Identification of the human prostatic carcinoma oncogene PTI-1 by rapid expression cloning and differential RNA display.

Elucidating the relevant genomic changes mediating development and evolution of prostate cancer is paramount for effective diagnosis and therapy. A putative dominant-acting nude mouse prostatic carcinoma tumor-inducing gene, PTI-1, has been cloned that is expressed in patient-derived human prostatic carcinomas but not in benign prostatic hypertrophy or normal prostate tissue. PTI-1 was detected by cotransfecting human prostate carcinoma DNA into CREF-Trans 6 cells, inducing tumors in nude mice, and isolating genes displaying increased expression in tumor-derived cells by using differential RNA display (DD). Screening a human prostatic carcinoma (LNCaP) cDNA library with a 214-bp DNA fragment found by DD permitted the cloning of a full-length 2.0-kb PTI-1 cDNA. Sequence analysis indicates that PTI-1 is a gene containing a 630-bp 5' sequence and a 3' sequence homologous to a truncated and mutated form of human elongation factor 1 alpha. In vitro translation demonstrates that the PTI-1 cDNA encodes a predominant approximately 46-kDa protein. Probing Northern blots with a DNA fragment corresponding to the 5' region of PTI-1 identifies multiple PTI-1 transcripts in RNAs from human carcinoma cell lines derived from the prostate, lung, breast, and colon. In contrast, PTI-1 RNA is not detected in human melanoma, neuroblastoma, osteosarcoma, normal cerebellum, or glioblastoma multiforme cell lines. By using a pair of primers recognizing a 280-bp region within the 630-bp 5' PTI-1 sequence, reverse transcription-PCR detects PTI-1 expression in patient-derived prostate carcinomas but not in normal prostate or benign hypertrophic prostate tissue. In contrast, reverse transcription-PCR detects prostate-specific antigen expression in all of the prostate tissues. These results indicate that PTI-1 may be a member of a class of oncogenes that could affect protein translation and contribute to carcinoma development in human prostate and other tissues. The approaches used, rapid expression cloning with the CREF-Trans 6 system and the DD strategy, should prove widely applicable for identifying and cloning additional human oncogenes.

Investigação de mecanismos genéticos e epigenéticos em distúrbios do crescimento humano

Parcela considerável de pacientes com distúrbios de crescimento não têm a causa de seus quadros clínicos estabelecida, incluindo aproximadamente 50% dos pacientes com diagnóstico clínico de síndrome de Silver−Russell (SRS) e 10-20% dos pacientes com síndrome de Beckwith-Wiedemann (BWS). O objetivo deste estudo foi investigar as causas genéticas e epigenéticas de distúrbios de crescimento, de etiologia desconhecida, numa contribuição para o entendimento de mecanismos que regulam o crescimento. O estudo compreendeu: (1) a investigação de microdesequilíbrios cromossômicos, por aCGH; (2) a análise do perfil de expressão alelo-específica de genes sujeitos a imprinting (IG), por pirossequenciamento (PSQ) ou sequenciamento de Sanger; (3) a investigação do padrão de metilação global em pacientes com restrição de crescimento, utilizando microarray de metilação. A casuística constituiu-se de 41 pacientes não aparentados, com distúrbios de crescimento, de etiologia desconhecida: (1) 25, com hipótese diagnóstica de SRS; (2) seis, com restrição de crescimento intrauterino e peso ao nascimento abaixo do 10º percentil, associados a outros sinais clínicos; (3) sete, com hipótese diagnóstica de BWS; e (4) três, com macrossomia pré-natal ou pós-natal, associada a outros sinais. A investigação de microdesequilíbrios cromossômicos foi realizada em 40 pacientes. Foram detectadas 58 variantes raras em 30/40 pacientes (75%): 40 foram consideradas provavelmente benignas (18 pacientes, 45%), 12, com efeito patogênico desconhecido (11 pacientes, 27,5%), duas, provavelmente patogênicas (um paciente, 2,5%) e quatro, patogênicas (três pacientes, 7,5%). Essas frequências são comparáveis àquelas descritas em estudos que investigaram CNV em grupos de pacientes com distúrbios de crescimento e outras alterações congênitas, incluindo SRS, e mostram a importância da investigação de microdesequilíbrios cromossômicos nesses pacientes. A diversidade dos microdesequilíbrios cromossômicos identificados é reflexo da heterogeneidade clínica das casuísticas. Neste estudo, muitos dos pacientes com hipótese diagnóstica de SRS e BWS apresentavam sinais clínicos atípicos, explicando a ausência neles das alterações (epi)genéticas que causam essas síndromes. A identificação de CNV características de outras síndromes reflete a sobreposição de sinais clínicos com BWS e SRS. A análise do perfil de expressão alelo-específica de IG foi realizada em um subgrupo de 18 pacientes com restrição de crescimento. Trinta IG com função em proliferação celular, crescimento fetal ou neurodesenvolvimento foram inicialmente selecionados. Após seleção de SNP transcritos com alta frequência na população, genotipagem de pacientes, genitores e indivíduos controle, determinação da expressão dos IG em sangue periférico e seu padrão de expressão (mono ou bialélico), 13 IG, expressos no sangue, tiveram a expressão alelo-específica avaliada, sete deles por PSQ e seis por sequenciamento de Sanger. Alterações no perfil de expressão de dois genes, de expressão normalmente paterna, foram detectadas em 4/18 pacientes (22%). Este estudo é o primeiro a utilizar pirossequenciamento e sequenciamento de Sanger na avaliação do perfil de expressão alelo-específica de IG, em pacientes com restrição de crescimento. Apesar de terem limitações, ambas as técnicas mostraram-se robustas e revelaram alterações de expressão alélica interessantes; entretanto, a relação dessas alterações com o quadro clínico dos pacientes permanece por esclarecer. A investigação da metilação global do DNA foi realizada em subgrupo de 21 pacientes com restrição de crescimento e em 24 indivíduos controle. Dois tipos de análise foram realizados: (1) análise diferencial de grupo e (2) análise diferencial individual. Na primeira análise, em que foi comparado o padrão de metilação do grupo de pacientes com quadro clínico sugestivo de SRS (n=16) com o do grupo controle (n=24), não houve indicação de hipo ou hipermetilação global no grupo SRS. Na segunda análise, foi comparado o padrão de metilação de cada um dos 21 pacientes com restrição de crescimento e dos 24 indivíduos controle, com o padrão de metilação do grupo controle. O número médio de CpG hipermetilados e de segmentos diferencialmente metilados (SDM) foi significativamente maior nos pacientes. Foram identificados 82 SDM hipermetilados, estando 57 associados a gene(s) (69,5%), em 16 pacientes, e 51 SDM hipometilados, 41 deles associados a gene(s) (80,4%), em 10 pacientes. A análise de ontologia genética dos 61 genes associados aos SDM hipo ou hipermetilados nos pacientes destacou genes que atuam no desenvolvimento e na morfogênese do sistema esquelético e de órgãos fetais, e na regulação da transcrição gênica e de processos metabólicos. Alterações de metilação em genes que atuam em processos de proliferação e diferenciação celulares e crescimento foram identificadas em 9/20 dos pacientes (45%), sugerindo implicação clínica. Não foi detectada alteração epigenética comum aos pacientes com diagnóstico clínico de SRS, explicável provavelmente pela heterogeneidade clínica. A investigação de metilação global, utilizando microarray, produziu novos dados que podem contribuir para a compreensão de mecanismos moleculares que influenciam o crescimento pré- e pós-natal. Na translocação aparentemente equilibrada - t(5;6)(q35.2;p22.3)dn, detectada em paciente com suspeita clínica de SRS, a interrupção de um gene, pela quebra no cromossomo 6, pode ser a causa do quadro clínico; alternativamente, a translocação pode ter impactado a regulação de genes de desenvolvimento localizados próximos aos pontos de quebra. A análise de expressão em sangue periférico mostrou que os níveis de cDNA do gene, interrompido pelo ponto de quebra da translocação, estavam reduzidos à metade. Além de sinais típicos da SRS, a paciente apresentava algumas características clínicas sugestivas de displasia cleidocraniana. Assim, a translocação t(5;6) pode ter alterado a interação de genes de desenvolvimento e seus elementos reguladores, levando à desregulação de sua expressão espaço-temporal, e resultando num fenótipo atípico, com características sobrepostas de mais de uma síndrome genética

Avaliação de fatores virológicos associados ao desenvolvimento de carcinoma hepatocelular (CHC) em pacientes com hepatite B crônica

O objetivo principal deste estudo foi avaliar fatores virais associados com a evolução para o carcinoma hepatocelular (CHC) em pacientes com hepatite B crônica. Para tanto caracterizamos os subgenótipos do HBV, investigamos a ocorrência de mutações nos genes pré-core/core do HBV associadas à presença de CHC avaliamos por análise filogenética a associação de linhagens virais com a ocorrência de CHC e por fim a associação de outros fatores de risco com o desenvolvimento de CHC. Foram incluídos 119 amostras de soro de pacientes com infecção crônica pelo HBV, destas amostras 60 pertencem ao grupo 1 (CHC), que são pacientes com diagnóstico confirmado de carcinoma hepatocelular e 59 amostras pertencem ao grupo 2 (sem CHC) que são pacientes com hepatite crônica sem detecção prévia de nódulos hepáticos. Foram obtidas informações acerca da idade, sexo e naturalidade. Além disso, os pacientes responderam a um questionário sobre fatores de riscos associados ao desenvolvimento de CHC. Foram realizados exames bioquímicos, sorológicos, determinação da carga viral, e amplificação por nested PCR e sequenciamento das regiões S/polimerase e pré-core/core do genoma viral para posterior caracterização dos genótipos/subgenótipos do HBV e pesquisa de mutações associadas com evolução da doença hepática. Em relação à idade e sexo não houve grande variação entre os grupos. Quanto à naturalidade a maioria era procedente da região sudeste, seguido pela região nordeste; e por fim seis pacientes eram procedentes de outros países. Com base no sobrenome dos pacientes avaliou-se também a frequência de etnia oriental na casuística estudada, que foi similar nos 2 grupos. O perfil sorológico HBeAg negativo foi o mais frequente nos dois grupos de pacientes, assim como níveis de carga viral abaixo de 2.000 UI/mL. Em relação aos exames bioquímicos foram observadas diferenças estatisticamente significantes nos níveis séricos de AFP (p= 0,0013), FA (p= 0,0003) e GGT (p= 0,005). Dentre os fatores de risco analisados neste estudo, o consumo de amendoim foi o único que apresentou significância estatística (p= 0,003). A região S/pol foi amplificada e sequenciada com sucesso em 58 amostras (28 do grupo 1 e 30 do grupo 2). Entre as 58 amostras analisadas 4 genótipos e 8 subgenótipos do HBV foram identificados, sendo o subgenótipo A1 o mais frequente nos dois grupos. Não se observou diferença estatisticamente significante na distribuição dos subgenótipos entre os dois grupos de pacientes. Na topologia da árvore filogenética construída com sequências do HBV isoladas dos pacientes incluídos neste estudo e sequências disponíveis no GenBank não se observou padrões de agrupamento associados com o perfil clinico do paciente (com e sem CHC). Foram obtidas sequências de boa qualidade da região précore/ core em 44 amostras, sendo 20 amostras do grupo 1 e 24 do grupo 2. Diversas das mutações investigadas foram identificadas na região précore/ core, as quais foram avaliadas estatisticamente para verificar a existência de diferença na frequência das mesmas entre os grupos de pacientes estudados. Entre as mutações identificadas se destacaram com significância estatística as seguintes mutações: T1768A (p= 0,006), a combinação das mutações C1766T + T1768A (p= 0,043) e G1888H (p= 0,05). Na análise de regressão logística simples foi possível identificar que a chance de um paciente do grupo 2 desenvolver CHC aumenta 14,7 vezes na presença de infecção por cepas do HBV com a mutação T1768A, enquanto que a infecção com cepas do HBV que albergam a mutação G1888H reduz tal chance 2,5 vezes