Purification, characterization and crystallization of Jararacussin-I, a fibrinogen-clotting enzyme isolated from the venom of Bothrops jararacussu

A fibrinogen-clotting enzyme, Jararacussin-I, was purified from the venom of Bothrops jararacussu by a combination of ion exchange chromatography using Resource 15S resin and affinity chromatography using Benzamidine Sepharose 6B resin. Jararacussin-I displays a molecular mass of 28 kDa as estimated by sodium dodecyl sulphate-PAGE and possesses an isoetectric point of 5.0. The coagulant specific activity of the enzyme was determined to be 45.8 NIH U/mg using bovine fibrinogen as the substrate and the esterase specific activity was determined to be 258.7 U/mg. The protease inhibitors, benzamidine and DTT inhibited the esterase specific activity by 72.4 and 69.7%, respectively. The optimal temperature and pH for the degradation of both chains of fibrinogen and esterase specific activity were determined to be 37 degreesC and 7.4-8.0, respectively. The enzyme was inactivated at both 4 and 75 T. Single crystals of Jararacussin-I were obtained and complete three-dimensional X-ray diffraction data was collected at the Brazilian National Synchrotron Source (LNLS) to a resolution of 2.4 Angstrom. (C) 2002 Published by Elsevier B.V. Ltd.

Dynamics at infinity and other global dynamical aspects of Shimizu-Morioka equations

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Estrutura e composição da ictiofauna de riachos do rio Paranapanema, Sudeste e Sul do Brasil

Foram amostrados 17 trechos de riachos com 100 m de extensão, todos de ordem igual ou menor a três, ao longo de ambas as margens do canal principal do Rio Paranapanema, SP e PR. O ponto médio de cada trecho foi georreferenciado via satélite com receptor GPS e o uso de metodologia padronizada de coleta de dados ambientais e peixes (baseada principalmente na pesca elétrica), possibilitou a obtenção das seguintes informações em cada local: 1) composição taxonômica da ictiofauna e contribuição, em termos de número de indivíduos e biomassa, de cada espécie para a ictiofauna local como um todo; 2) documentação fotográfica de espécimes representativos de cada espécie coletada com sua coloração natural; 3) descrição de cada ambiente coletado, com ilustrações fotográficas coloridas, e seus principais parâmetros bióticos e abióticos. No total foram coletados 3.683 exemplares, pertencentes a seis ordens, 16 famílias, 37 gêneros e 52 espécies, com biomassa total de 16,8 kg. Das espécies coletadas, aproximadamente 36% pertencem a ordem Siluriformes, 36% a Characiformes, 11% a Gymnotiformes, 10% a Perciformes, 4% a Cyprinodontiformes e 2% a Synbranchiformes. As espécies mais abundantes em termos de número de indivíduos foram Astyanax altiparanae (15,2%) e Astyanax sp. 1 (12,3%); aquelas com maior biomassa foram A. altiparanae (28%) e Geophagus brasiliensis (13%). A composição da ictiocenose em termos de abundância e biomassa por família indica a predominância expressiva de Characidae, seguida por Loricariidae, Pimelodidae e Cichlidae. Dentre os trechos amostrados, o trecho 14 (24 espécies) e o 13 (cinco espécies), apresentaram a maior e a menor riqueza em espécies, respectivamente, coincidindo com os valores obtidos para o índice de diversidade específica de Shannon-Wienner (H´= 0,99 e 0,32, respectivamente). A riqueza média encontrada foi de 11 espécies por trecho de riacho. Na estimativa de riqueza por extrapolação para o conjunto total de riachos amostrados na bacia do rio Paranapanema, obtivemos um valor de 69 espécies (erro padrão igual a quatro) indicando ser necessário um esforço amostral adicional moderado para atingir a assíntota da curva. Das 52 espécies coletadas, oito (aproximadamente 15% do total) são seguramente novas, cinco (aproximadamente 10% do total) possuem status taxonômico ainda indefinido, enquanto outras três (aproximadamente 6% do total) são espécies introduzidas. Analisando a estrutura trófica e espacial da ictiocenose estudada, as 10 espécies numericamente dominantes nos riachos estudados dividem-se, em ordem decrescente de importância numérica, em quatro guildas: onívoros nectônicos; invertívoros bentônicos; perifitívoros; e onívoros bentônicos. Uma chave de identificação para todas as espécies de peixes coletadas durante este estudo é fornecida ao final deste trabalho.

Evaluation of interface characterization and adhesion of glass ceramics to commercially pure titanium and gold alloy after thermal- and mechanical-loading

Objectives. This study evaluated the effect of thermal- and mechanical-cycling on the shear bond strength of three low-fusing glassy matrix dental ceramics to commercial pure titanium (cpTi) when compared to conventional feldspathic ceramic fused to gold alloy.Methods. Metallic frameworks (diameter: 5 min, thickness: 4 mm) (N = 96, n = 12 per group) were cast in cpTi and gold alloy, airborne particle abraded with 150 mu m aluminum oxide. Low-fusing glassy matrix ceramics and a conventional feldspathic ceramic were fired onto the alloys (thickness: 4mm). Four experimental groups were formed; Gr1 (control group): Vita Omega 900-Au-Pd alloy; Gr2: Ticeram-cpTi; Gr3: Super Porcelain Ti-22-cpTi and G4: Vita Titankeramik-cpTi. While half of the specimens from each ceramic-metal combination were randomly tested without aging (water storage at 37 C for 24h only), the other half were first thermocycled (6000 cycles, between 5 and 55 C, dwell time: 13 s) and then mechanically loaded (20,000 cycles under SON load, immersion in distilled water at 37 C). The ceramic-alloy interfaces were loaded under shear in a universal test machine (cross-head speed: 0.5 mm/min) until failure occur-red. Failure types were noted and the interfaces of the representative fractured specimens from each group were examined with stereo microscope and scanning electron microscope (SEM). in an additional study (N = 16, n = 2 per group), energy dispersive X-ray spectroscopy (EDS) analysis was performed from ceramic-alloy interfaces. Data were analyzed using ANOVA and Tukey's test.Results. Both ceramic-metal combinations (p < 0.001) and aging conditions (p < 0,001) significantly affected the mean bond strength values. Thermal- and mechanical-cycling decreased the bond strength (MPa) results significantly for Gr3 (33.4 +/- 4.2) and Gr4 (32.1 +/- 4.8) when compared to the non-aged groups (42.9 +/- 8.9, 42.4 +/- 5.2, respectively). Gr1 was not affected significantly from aging conditions (61.3 +/- 8.4 for control, 60.7 +/- 13.7 after aging) (p > 0.05). Stereomicroscope images showed exclusively adhesive failure types at the opaque ceramic-cpTi interfacial zone with no presence of ceramic on the substrate surface but with a visible dark titanium oxide layer in Groups 2-4 except Gr1 where remnants of bonder ceramic was visible. EDS analysis from the interfacial zone for cpTi-ceramic groups showed predominantly 34.5-85.1% O(2) followed by 1.1-36.7% Aland 0-36.3% Si except for Super Porcelain Ti-22 where a small quantity of Ba (1.4-8.3%), S (0.7%) and Sn (35.3%) was found. In the Au-Pd alloy-ceramic interface, 56.4-69.9% O(2) followed by 15.6-26.2% Si, 3.9-10.9% K, 2.8-6% Na, 4.4-9.6% Al and 0-0.04% Mg was observed.Significance. After thermal-cycling for 6000 times and mechanical-cycling for 20,000 times, Triceram-cpTi combination presented the least decrease among other ceramic-alloy combinations when compared to the mean bond strength results with Au-Pd alloy-Vita Omega 900 combination. (c) 2008 Academy of Dental Materials. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.

Effect of silica coating combined to a MDP-based primer on the resin bond to Y-TZP ceramic

The aim of this study was to evaluate the influence of silica coating and 10-methacryloyloxydecyl dihydrogen phosphate (MDP)-based primer applications upon the bonding durability of a MDP-based resin cement to a yttrium stabilized tetragonal zirconia (Y-TZP) ceramic. Ninety-six Y-TZP tabs were embedded in an acrylic resin (free surface for adhesion: 5 x 5 mm(2)), ground finished and randomly divided into four groups (N = 24) according to the ceramic surface conditioning: (1) cleaning with isopropanol (ALC); (2) ALC + phosphoric acid etching + MDP-based primer application (MDP-primer); (3) silica coating + 3-methacryloyloxypropyl trimethoxysilane (MPS)-based coupling agent application (SiO(2) + MPS-Sil); and (4) SiO(2) + MDP-primer. The MDP-based resin cement was applied on the treated surface using a cylindrical mold (diameter=3 mm). Half of the specimens from each surface conditioning were stored in distilled water (37 C, 24 h) before testing. Another half of the specimens were stored (90 days) and thermo-cycled (12,000x) during this period (90d/TC) before testing. A shear bond strength (SBS) test was performed at a crosshead speed of 0.5 mm/min. Two factors composed the experimental design: ceramic conditioning strategy (in four levels) and storage condition (in two levels), totaling eight groups. After 90d/TC (Tukey; p < 0.05), SiO(2) + MDP-primer (24.40 MPa) promoted the highest SBS. The ALC and MDP-primer groups debonded spontaneously during 90d/TC. Bonding values were higher and more stable in the SiO2 groups. The use of MDP-primer after silica coating increased the bond strength. (C) 2010 Wiley Periodicals, Inc. J Biomed Mater Res Part 8: Appl Biomater 95B: 69-74, 2010.

Crystal Structure Determination of Mebendazole Form A Using High-Resolution Synchrotron X-Ray Powder Diffraction Data

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Sport fishing in Cachoeira de Emas in Mogi-Guaçu River, State of São Paulo, Brazil

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Prevalência e caracterização de espécies de lactobacilos vaginais em mulheres em idade reprodutiva sem vulvovaginites

OBJETIVO: identificar espécies de lactobacilos isolados do conteúdo vaginal de mulheres saudáveis e assintomáticas; determinar as espécies mais prevalentes e caracterizá-las fenotipicamente. MÉTODOS: lactobacilos foram isolados em meio seletivo a partir de amostras de conteúdo vaginal de 135 mulheres, sem queixa de corrimento e com diagnóstico laboratorial negativo para infecções vaginais, acompanhadas em um ambulatório de Planejamento Familiar. Os isolados foram identificados por PCR multiplex e, quando necessário, submetidos ao sequenciamento do gene RNAr 16S. Foram também avaliados quanto à acidificação do meio de cultura, à produção de ácido láctico, de H2O2, bacteriocinas e a capacidade de adesão às células epiteliais. RESULTADOS: oitenta e três cepas de lactobacilos foram isoladas e identificadas, sendo as espécies predominantes L. crispatus (30,1%), L. jensenii (26,5%), L. gasseri (22,9%) e L. vaginalis (8,4%). Apenas 20 destes isolados não produziram H2O2 em quantidades detectáveis. Das 37 linhagens selecionadas para teste de adesão a células epiteliais, 12 apresentaram adesão entre 50 a 69%, 10 apresentaram 70% ou mais, e as restantes pouca ou nenhuma adesão. Nenhum dos isolados produziu bacteriocinas. CONCLUSÕES: as espécies de lactobacilos mais prevalentes em mulheres sem vulvovaginites, isoladas em meio de cultura seletivo e identificadas por métodos moleculares, foram L. crispatus, L. jensenii e L. gasseri. Além de mais frequentes, tais linhagens também apresentaram melhor produção de H2O2 e atingiram menores valores de pH em meio de cultura.

A suplementação de L-carnitina não promove alterações na taxa metabólica de repouso e na utilização dos substratos energéticos em indivíduos ativos

OBJETIVO: Avaliar o efeito da suplementação de L-carnitina, por 30 dias, sobre a taxa metabólica de repouso (TMR) e oxidação de ácidos graxos livres (AGL), em repouso e exercício. SUJEITOS E MÉTODOS: Vinte e um voluntários ativos (40 a 58 anos) com sobrepeso foram randomizados em dois grupos: suplementado (GS; N = 11; 1,8 g/dia de L-carnitina) e placebo (GP; N = 10; maltodextrina). Foi feita avaliação da ingestão calórica, antropometria, determinação da TMR, VO2máx, quociente respiratório e AGL plasmáticos. RESULTADOS: Não houve diferença significativa na ingestão (-244,66 vs. -126,00 kcal/dia), composição corporal (-0,07 vs. -0,17 kg/m²), TMR (0,06 vs. -0,02 kcal/ dia), quociente respiratório em repouso (3,69 vs. -1,01) e exercício (0,01 vs. -0,01) e VO2máx (0,50 vs. 1,25 mL/kg/min) para o grupo GS em relação ao GP. Houve aumento dos AGL em repouso no GP (0,27), porém sem diferenças no exercício para os grupos. CONCLUSÃO: Não houve efeito da L-carnitina em nenhuma das variáveis analisadas no estudo.

Liver dysfunction in patients bitten by Crotalus durissus terrificus (Laurenti, 1768) snakes in Botucatu (State of São Paulo, Brazil)

Os autores estudaram 32 doentes picados por serpentes venenosas, sendo 16 picados por Bothrops spp. e 16 por Crotalus durissus terrificus. Trinta doentes eram do sexo masculino e dois do feminino com idades variando entre 8 e 63 anos (méda 33±15). A prova da retenção da bromosulfaleína apresentou-se aumentada na maioria dos doentes picados por serpentes Crotalus durissus terrificus. Houve correlação positiva entre a retenção da bromosulfaleína e os níveis séricos de alanina aminotransferase e entre alanina e aspartato aminotransferase apenas nos doentes do grupo Crotalus. Um dos doentes evoluiu para o óbito e apresentou no exame anatomopatológico do fígado degeneração hidrópica e lesões mitocondriais. Os autores concluem que as alterações hepáticas são causadas por pelo menos dois mecanismos a saber: lesão mitocondrial por efeito do veneno crotálico; efeito das citoquinas, especialmente a interleucina-6.

Exigências nutricionais de caprinos da raça Alpina em crescimento: 1. Exigência nutricional de fósforo para mantença: perdas endógenas e abate comparativo

O objetivo deste trabalho foi determinar a exigência dietética de fósforo (P) para mantença de caprinos da raça Alpina em crescimento pelo método das perdas endógenas e pela técnica do abate comparativo. Foram usados 21 animais, machos, castrados, com idade média de quatro a seis meses e 18 kg PV. Destes, três foram abatidos no início do experimento, como referência, e os 18 restantes, distribuídos em tratamentos com dietas isoenergéticas e isoprotéicas, em um delineamento inteiramente casualizado com arranjo fatorial 3x2 (nível de P na dieta [0,12; 0,21; e 0,29% MN] e forma de fornecimento da dieta [restrito ou à vontade]). O período experimental foi de 37 dias, com 30 dias para adaptação e sete dias para coleta total de fezes e urina. No final do período de coleta, três animais de cada tratamento foram abatidos. As exigências dietéticas de P para mantença foram então estimadas por meio das perdas endógenas fecal e urinária (perdas endógenas) e da retenção de P no corpo animal em relação à sua ingestão e aquele retido nos animais referência (abate comparativo). Os valores médios foram coeficiente de absorção aparente e real de P, -157+30, 98+10, 43+24, e 65+33; 235+09, 145+24%, respectivamente; perda diária endógena fecal e urinária de P, 8,84 e 4,84 mg/kg PV, respectivamente; e balanço de P, 187,62+153,87; 14,0+160,59; 85,96+337,85 mg/d; e -11,42+10,98; 1,04+9,14; -2,33+11,69 mg/kg PV, respectivamente. A exigência líquida diária estimada de P para a mantença foi de 13,68 mg/kg PV. As exigências dietéticas diárias de P para mantença foram estimadas em 72 e 58,46 mg/kg PV, pelo método das perdas endógenas e pelo abate comparativo, respectivamente.

Efeitos de diferentes fontes de concentrado sobre o consumo e a produção de cordeiros na fase de terminação

Objetivou-se avaliar os efeitos dos grãos de milho e sorgo, secos ou ensilados úmidos, sobre o consumo de nutrientes e o desempenho de cordeiros em confinamento. O confinamento teve duração de 77 dias e foi dividido em dois períodos: no primeiro (35 dias), utilizou-se como volumoso capim-elefante (Pennisetum purpureum Schum.), na proporção de 50:50 e, no segundo (42 dias), feno de capim-braquiária (Brachiaria brizantha), na proporção de 30:70. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em blocos, de acordo com o peso, conforme os tratamentos, que consistiram de diferentes fontes de alimento concentrado energético: silagem de grão úmido de milho; silagem de grão úmido de sorgo; grão seco de milho; e grão seco de sorgo. Os consumos de MS, em g/dia, em %PV e em PV0,75, não diferiram entre os animais alimentados com grãos de milho e sorgo, secos ou úmidos, e capim-elefante cv. Napier, com média de 920,79 g/dia; 3,59% e 81,01 g/kg PV0,75. Os grãos de milho e de sorgo ensilados úmidos, quando comparados aos grãos secos, proporcionaram melhor ganho de peso (0,17 vs 0,13 e 0,19 vs 0,13 kg/dia), conversão (5,57 vs 6,37 e 5,05 vs 6,86) e eficiência alimentar (17,95 vs 15,69 e 19,79 vs 14,74). O uso de grãos de sorgo, secos e úmidos, em dietas à base de feno de capim-braquiária, resultou em maior ganho de peso, ao passo que o de grãos secos de sorgo promoveu melhor conversão alimentar. Na proporção volumoso:concentrado 50:50, os grãos de milho e sorgo ensilados proporcionaram melhores ganhos de peso, conversão e eficiência alimentar que os grãos secos. em dietas com maior participação de concentrado (proporção 30:70), fontes de maior degradabilidade (milho) influenciaram negativamente o ambiente ruminal, resultando em desempenho inferior.

Relação da taxa de gestação com sêmen bovino congelado e testes de avaliação espermática in vitro

Avaliou-se a relação entre os testes complementares (teste hiposmótico, teste de termorresistência lento e teste de reação acrossômica) e os testes de avaliações convencionais (aspectos físicos e morfológicos) de sêmen bovino congelado/descongelado e os índices de prenhez. Os valores médios da motilidade espermática progressiva retilínea avaliados pelo teste de termorresistência foram de 53,48 (pós-descongelamento), 43,69 (60 minutos), 35,88 (120 minutos) e 33,04% (180 minutos) e a porcentagem de células reativas ao teste hiposmótico foi de 37,89%. Correlação positiva e de média intensidade foi encontrada para a motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento e o teste hiposmótico (0,21). Entretanto, a correlação da motilidade aos 180 minutos com o teste hiposmótico foi alta (0,64). A porcentagem de células que tiveram acrossoma reagido pós-descongelamento foi de 9,85%, apresentando correlações negativas de média e alta intensidade (-0,25 e -0,46, respectivamente) com a motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento e após 3 horas de incubação. Não houve correlação dos testes complementares e da motilidade pós-descongelamento com a taxa de gestação. Nenhum parâmetro considerado isoladamente serviu para avaliar a capacidade fertilizante do sêmen congelado/descongelado.

INJECTION OF RAMIPRIL INTO THE LATERAL VENTRICLE INTERFERES WITH THE DRINKING RESPONSE INDUCED BY PHARMACOLOGICAL AND NATURAL THIRST STIMULI

We investigated the effects of ramipril, an angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitor, on water intake by male Holtzman rats (250-300 g) with cannulae implanted into the lateral ventricle. Intracerebroventricular (icv) injection of ramipril (1 mu g/mu l) significantly reduced drinking in response to subcutaneous (sc) injection of isoprenaline (100 mu g/kg) from 8.49 +/- 0.69 to 2.96 +/- 0.36 ml/2 h, polyethyleneglycol (PEG) (30% w/v, 10 ml/kg) from 9.51 +/- 2.20 to 1.6 +/- 0.34 ml/2 h or water deprivation for 24 h from 12.61 +/- 0.83 to 5.10 +/- 1.37 ml/2 h. Ramipril had no effect on water intake induced by cellular dehydration produced by sc injection of hypertonic saline (2 M NaCl). These results are consistent with the hypothesis that ramipril acts as an ACE-blocking agent in the brain. The possibility that ramipril is transformed to ramiprilat, the active drug, by the brain is suggested.

Verruciform xanthoma of the oral mucosa. Report of four cases and a review of the literature

We present four new cases of verruciform xanthoma (VX) in the oral mucosa and review the literature. Clinical, histological, and immunohistochemical features of four new cases of VX were analysed together with cases found in a review of the literature. Expression of CD-68 was studied by immunohistochemistry. Only 162 cases were reported in the oral mucosa. Ninety were males (55.5%) and 72 were females (44.5%). Mean age was 44.9 years. The majority of cases occurred in masticatory mucosa (69.7%). Our cases exhibited papillary or verrucous proliferation of squamous epithelium associated with hyperparakeratosis and with numerous foamy cells confined to the lamina propria papillae. Foamy cells were positive to CD-68 antibody, showing a macrophagic nature. VX is a rare benign lesion, and is probably inflammatory. However, its aetiology and pathological mechanisms remain unknown. (C) 2001 Elsevier B.V. Ltd. All rights reserved.