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Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Informática

Radiometric detection of metabolic activity of Paracoccidioides brasiliensis and its susceptibility to amphotericin B and diethylstilbestrol

Paracoccidioidomycosis (South American blastomycosis) is a systemic disease, strikingly more frequent in males, caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. A radiometric assay system has been applied to study the metabolic activity and the effect of drugs on this fungus "in vitro". The Y form of the yeast, grown in liquid Sabouraud medium was inoculated into sterile reaction vials containing the 6B aerobic medium along with 2.0 μCi of 14C-substrates. Control vials, prepared in the same way, contained autoclaved fungi. To study the effects of amphotericin B (AB) (0.1 and 10 μg/ml) and diethylstilbestrol (DSB) (1.0, 5.0 and 10 μg/ml) extra controls with live fungi and no drug were used. All vials were incubated at 35°C and metabolism measured daily with a Bactec instrument. 14CO2 production by P. brasiliensis was slow and could be followed for as long as 50 days. AB at 10mg/ml and DSB at 5 μg/ml inhibited the metabolism and had a cidal effect on this fungus. The results with DSB might explain the low incidence of the disease in females. This technique shows promise for studying metabolic pathways, investi gating more convenient 14C-substrates to expedite radiometric detection and for monitoring the effects of other drugs and factors on the metabolism of P. brasiliensis "in vitro".

Lectins for the detection of IgM antibodies to T. gondii in the diagnosis of acute toxoplasmosis by immunofluorescence test

Lectins were labeled with fluorescein and tried as conjugates in the immunofluorescence (IP) test for the detection of IgM antibodies to T. gondii, in the diagnosis of acute toxoplasmosis. This approach was an attempt to find alternative reagents for anti-human IgM fluorescent conjugates (AHIgMFC), which contain quite frequently anaibcdies to toxoplasma, as contaminants, due to natural T. gondii infections among animals used for imunization. Lentil (Lens culinaris) lectin fluorescence conjugates (LcFC) provided most satisfactory results. The evaluation of LcFC carried out in a total of 179 sera from patients with acute and chronic toxoplasmosis, with non-related infections or healthy subjects, gave high values of relative efficiency, co-positivity and co-negativity indices, respectively 0.989, 0.969 and 1.000, in reference to the conventional AHIgMFC. Moreover, three batches of LcFC successively prepared gave reproducible test results. The advantage of LcFC as an alternative reagent for the serodiagnosis of acute toxoplasmosis is supported by practical aspects of its preparation.

An ELISA method using serum derived HDAg for the sorological detection of HDV antigens and antibodies

One of the main difficulties related to the detection of the Hepatitis Delta Virus (HDV) antigen and antibody has been the source of the needed HD antigen since HDV containing human and animal livers are very difficult to obtain and since yield is low. This fact prompted us to try to use the serum of patients in the acute phase of HDV infection as a source of HDAg and turn to enzyme immunoassays (EIA) instead of RIA for the sake of easiness and economy in the amount of HDAg needed. The antigen for EIA was obtained from patients during the acute phase of HDV infection and the antibody from patients who have been carriers for many years. For the detection of the antigen, a sandwich type method was employed, whereas for the antibody a competition assay was developed. In order to assess the relative specificity and sensibility of the test, the antibody assay was compared to a commercial RIA (C. RIA, Abbott) and to a non-commercial RIA (NC RIA). Forty-two sera were tested by the two methods and only in two cases discrepant results were obtained. Its is concluded that: 1) sera from patients in the acute and chronic phases of HDV infection can be used as source of both antigen and antibody, for immunoassays; 2) EIA and RIA have comparable relative specificity and sensibility and 3) EIA is easier to perform, cheaper, non-hazardous, has a longer shelf-life and saves scarce HDAg.

Passive haemagglutination test for human neurocysticercosis immunodiagnosis: I. Standardization and evaluation of the passive haemagglutination test for the detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies

A passive haemagglutination test (PHA) for human neurocysticercosis was standardized and evaluated for the detection of specific antibodies to Cysticercus cellulosae in cerebrospinal fluid (CSF). For the assay, formaldehyde-treated group O Rh-human red cells coated with the cysticerci crude total saline extract (TS) antigen were employed. A total of 115 CSF samples from patients with neurocysticercosis was analysed, of these 94 presented reactivity, corresponding to 81.7% sensitivity, in which confidence limit of 95% probability (CL95%) ranged from 74.5% to 88.9%. Eighty-nine CSF samples derived from individuals of control group presented as nonreactive in 94.4% (CL95% from 89.6% to 99.2%). The positive and negative predictive values were 1.4% and 99.9%, respectively, considering the mean rate of that this assay provide a rapid, highly reproducible, and moderately sensitive mean of detecting specific antibodies in CSF samples.

Passive haemagglutination test for human neurocysticercosis immunodiagnosis: II - Comparison of two standardized procedures for the passive haemagglutination reagent in the detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in cerebrospinal fluids

A comparison of two different standardized reagent procedures for the passive haemagglutination test (PHA) in the detection of specific antibody to Cysticercus cellulosae in cerebrospinal fluid (CSF) was carried out. The formaldehyde-treated group O Rh-human red blood cells (HuRBC) and glutaraldehyde-treated sheep red blood cells (SRBC) were the supplies for the reagents preparation and, in the tests, they were designated as PHA-1 and PHA-2, respectively. For both reagents the cells were coated with the cysticerci total saline extract (TS) antigen. PHA-1 and PHA-2 were assessed in a total of 204 CSF from patients with neurocysticercosis, from non-related infections and from healthy individuals. The positivity and specificity indices obtained were respectively 81.7% and 94.4% for PHA-1 and for PHA-2, 88.7% and 96.6%. Since no significant differences were observed between the results provided by two reagents, at level of significance of 0.05, either processes of cell sensitization can alternatively be used according to the own laboratory convenience.

Detection of circulating polysaccharide antigen of Schistosoma mansoni in hamster sera by crossed immunoelectrophoresis

Crossed immunoelectrophoresis (IEC) was used for detection of free and complexed circulating polisaccharide anodic antigen (AgCA) of Schistosoma mansoni in sera of infected hamsters. An attempt was also done to detect AgCA in human sera from patients infected with S. mansoni. The conditions for isolation and detection of complexed AgCA were established. The sensitivity of IEC was increased by incorporation of 2% polyethylene glicol (PEG) to the agarose and by maintaining the system at 4°C during the electrophoretic run. Free AgCA was detected in 12 and the complexed in 30 of the 37 hamsters sera analysed. Correlation between AgCA (free and complexed) and the parasite load was observed. AgCA was not detected, under the experimental conditions used, in human sera from 7 patients in the acute and 23 in the chronic phase of infection.

Web services recovery mechanisms

Dissertação de Mestrado em Engenharia Informática

SAKWeb – Spatial autocorrelation and kriging web, a W3 geocomputation perspective

A thesis submitted in partial satisfaction of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy in Information Systems

Benchmarking de identificação de ano: criação de um site para benchmarking de técnicas de identificação de dano

Dissertação para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Mecânica na Área de Manutenção e Produção

Simplification of Immune Adherence Hemagglutination test for detection of rabies antibodies in human serum

In the present work the immune adherence hemagglutination test (IAHA) was standardized in a simplified procedure. This test showed good reproducibility, better than the classical mice serum neutralization test (SN). The tests showed high correlation degree: high titers in one test corresponded to high titers in the other one, and the same occured with low titers. The IAHA test is extremely simple, fast to perform, and of low cost when compared to tests such as SN or indirect immunofluorescense (IIF). It also proved to be useful in less sophisticated laboratories or even as a screening test for the titration of rabies antibodies.

Evaluation of enzyme-linked immunosorbent and alternative assays for detection of HIV antibodies using panels of Brasilian sera

Sera from 472 Brazilian subjects, confirmed to be either positive or negative for HIV antibodies and comprising the total clinical spectrum of HIV infection, were utilized in the evaluation of six commercially available enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), as well as of four alternative assays, namely indirect immunofluorescence (IIF), passive hemagglutination (PHA), dot blot and Karpas AIDS cell test. The sensitivities ranged from 100% (Abbott and Roche ELISA) to 84.2% (PHA) and the specificities ranged from 99.3% (IIF) to 80.2% (PHA). The sensitivity and specificity of the PHA and the sensitivity of the Karpas cell test were significantly lower than those of the other tests. Although the IFF and dot blot had good sensitivities and specificities, the six ELISA were more attractive than those tests when other parameters such as ease of reading and duration of assay were considered.

DOT-ELISA for detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in human cerebrospinal fluid using a new solid-phase (resin-treated polyester fabrics): preliminary report

A dot enzyme-linked immunosorbent assay (DOT-ELISA) was developed to detect specific antibodies in cerebrospinal fluid (CSF) for human neurocysticercosis immunodiagnosis, with Cysticercus cellulosae antigen dotted on a new solid-phase. This was represented by sheets of a synthetic polyester fabric impregnated with a polymerized resin (N-methylol-acrylamide). A very stable preparation was thus obtained, the antigen being covalently bound by cross-linking with free N-methylol groups on the resin. Since robust, no special care was necessary for handling the solid-phase. The test could be performed at room-temperature. From 30 CSF samples assayed, 14 were positive, from a group of 15 cases of neurocysticercosis, with titers from 1 to 128; 15 other samples, from normals or other neurological diseases, were all negative. Test characteristics seem to indicate it as adequate for epidemiological surveys. A more detailed study on sensitivity, specificity, reproducibility and the use in serum samples is being conducted.

Web marketing: desenvolvimento de uma presença online para uma unidade hoteleira – Projeto Oporto Invictus Hostel

O hotel, para muitos autores, tem como função oferecer abrigo para quem está distante da sua casa e atender às suas necessidades básicas. A hotelaria tem como função básica alojar as pessoas que estão longe da sua residência e que precisam de um quarto com uma cama para dormir e uma casa de banho (Duarte, 1996). Para Beni (2003), um hotel, além de ter a função básica de alojar, tem uma característica que nenhum outro estabelecimento comercial possui, que é o facto de o consumidor se deslocar até ao hotel para poder utilizar os serviços disponíveis. Outra característica muito especifica da atividade hoteleira, é o facto de o atendimento ser o mais importante na hora da prestação do serviço. O Hostel é uma designação muito usada atualmente como sinónimo de albergue. É um tipo de unidade hoteleira que se caracteriza pelos preços convidativos e pela possibilidade de socialização dos hóspedes, onde cada hóspede pode arrendar uma cama ou beliche, num dormitório partilhado, com casa de banho, lavandaria e, por vezes, cozinha, também em regime partilhado. Os Hostels são geralmente económicos praticando preços intitulados low-­‐cost. Definir uma estratégia para a Internet é hoje um imperativo para qualquer organização que pretenda utilizar este canal de comunicação para promover a sua atividade. As unidades hoteleiras também não são exceção; a necessidade de comunicar com os públicos alvo no sentido de aumentarem a captação de turistas exige uma presença na Internet que consiga simultaneamente informar e motivar à escolha pelos serviços prestados. A Internet evidencia um incontornável potencial informativo e comunicativo em questões de rapidez de circulação: número de pessoas que atinge e áreas geográficas que abarca; e devido às suas características de imaterialidade, instantaneidade e multimédia, democratiza o acesso à informação e a determinados tipos de bens, facilita a comunicação entre pessoas e instituições e universaliza as oportunidades, eliminando as barreiras espaciais, geográficas e temporais (Balsa, 2007). Rapidamente as unidades hoteleiras se aperceberam das vantagens e potencialidades da Internet: rápida, imediata, económica, integrada no dia-­‐a-­‐dia de trabalho e lazer e acessível a um cada vez maior número de pessoas. A nível geral, mas com especial incidência no caso das unidades hoteleiras, a Internet apresenta inúmeras vantagens ao nível da estruturação da informação em bases de dados e da sua apresentação dinâmica, tirando partido da inclusão de objetos multimédia em páginas HTML. Os objetos multimédia podem incluir áudio, vídeo,animações em tecnologia Flash e mesmo animações 3D tornando a visita a um sítio Web com este tipo de conteúdos, uma experiência muito gratificante. Por sua vez, a interatividade, característica do próprio funcionamento das páginas Web, facilita a interação entre a unidade hoteleira e o visitante. A interatividade permite ou facilita uma relação ativa entre o utilizador e o hotel. O utilizador passa de espectador passivo a interveniente ativo no processo de consulta da informação. Na web, os avanços tecnológicos têm sido constantes. Em 1980, Alvin Toffler’s no seu bestseller ‘The Third Wave’ previu um novo tipo de consumidor a quem chamou de ‘prosumer’ e que seria um misto de DIY (do-­it-­yourself) produtor e consumidor em mercados offline (Toffler, 1980). Foi sem dúvida de uma grande visão, mas sem os recentes avanços na web e nas tecnologias digitais, a maioria dos utilizadores não poderia ter dado o salto de espectador passivo para ator que participa ativamente na construção da web (Shuen, 2008). O aparecimento das redes sociais que permitem criar comunidades com interesses afins, o desenvolvimento de plataformas como o Youtube.com para a partilha de vídeos, a vulgarização de plataformas como o flickr.com para a partilha de imagens constituíram marcos determinantes para aquilo a que se designa por WEB 2.0 (tecnologia do século XXI). Enquanto no tempo da WEB 1.0 (tecnologia dos anos 90) os sites eram essencialmente estáticos e a interatividade não era levada aos limites, agora com a WEB 2.0 é possível construir modelos de negócio com conteúdos mais ricos simulando, com muito maior realismo, em ambientes virtuais, o que se passa em ambientes reais. Os sítios Web das unidades hoteleiras estão a evoluir rapidamente para um modelo que contemple as potencialidades da WEB 2.0 Tendo em consideração a importância das unidades hoteleiras no panorama do turismo, a relevância da Internet como meio de comunicação entre as instituições e os cidadãos e a necessidade das unidades hoteleiras disporem de uma estratégia de comunicação digital para difundir as suas valências e atividades, entendemos justificar-­se fazer uma revisão da literatura onde: procuraremos compreender a importância do turismo na sociedade atual assim como, o impacto das novas tecnologias da informação em atividades relacionadas com o turismo e ainda, procuraremos perceber quais os canais de comunicação digital que estão ao dispor dos profissionais de turismo, nomeadamente os gestores de unidades hoteleiras, para promover os seus serviços. O objetivo principal deste trabalho consiste em mostrar como foi desenvolvido uma estratégia de comunicação digital para promover online uma unidade hoteleira low cost, no caso presente o Oporto Invictus Hostel. Trata­‐se de um projeto integrado em que não só se criaram as diferentes peças de comunicação como se definiu e aplicou uma estratégia promocional com vista à divulgação do Hostel. O projeto apresentado evidencia como é possível, com recursos limitados, criar um sistema integrado de comunicação digital online que promova uma pequena unidade hoteleira, de forma a dar-­‐lhe visibilidade tanto a nível nacional como internacional. O projeto está dividido em cinco partes. Numa primeira parte é feita a apresentação do briefing que resultou de uma primeira reunião com o cliente. Numa segunda parte apresenta­‐se a fase de planeamento relativa ao desenvolvimento do projeto. Numa terceira parte descreve-­se o processo de implementação do projeto. Na quarta fase abordam-se os testes funcionais e na quinta e última fase faz-­se referencia a aspetos relacionados com a conclusão do projeto.