Diseño de una plataforma de lectura, test y caracterización para ROICs de rayos X basada en el microprocesador LEON

Aquest project es situa dins del marc del CNM-IMB (CSIC). Consisteix en el disseny d'un sistema de biòpsia mamaria en temps real. Per realitzar aquest sistema s’ha dissenyat una plataforma de lectura, test y caracterització pel ROIC Medipix2 que es basa en el microprocessador LEON3 i és programat sobre una FPGA.

The 'help' question doesn't help when screening for major depression : external validation of the three-question screening test for primary care patients managed for physical complaints

La dépression majeure est fréquente chez les patients qui consultent un cabinet de médecine générale. Elle reste toutefois difficile à diagnostiquer car elle est souvent masquée par une ou plusieurs plaintes physiques qui sont l'unique motif de consultation. Pour aider le médecin généraliste à démasquer ce trouble, un test de dépistage composé de deux questions a été développé et validé. Ce test indique une probabilité accrue de dépression si le patient répond positivement à au moins une des deux questions suivantes : « Est-ce que, durant le mois qui a précédé, vous vous êtes senti(e) triste, déprimé(e), désespéré(e) ? » et « Durant le mois qui a précédé, avez-vous ressenti un manque d'intérêt et de plaisir dans la plupart des activités que d'habitude vous appréciez ? ». Une troisième question, ajoutée aux deux questions ci-dessus, a été proposée récemment afin d'améliorer les performances de ce test de dépistage. Cette troisième question rend le test négatif si le patient répond négativement à la question suivante : « Souhaitez-vous de l'aide pour cela ? ». Une étude avait indiqué que l'ajout de la question supplémentaire améliorait la spécificité du test sans réduire sa sensibilité. Objectifs Il s'agissait de décrire la performance de deux tests de dépistage de la dépression majeure, composés, respectivement, de deux et de trois questions, dans une population de patients consultant dans un cabinet de médecine générale pour une plainte physique, et de les valider. Méthode Les réponses aux questions des tests de dépistage de la dépression dans la population de la cohorte SODA (Somatisation, Depression, Anxiety) ont été utilisées. Il s'agissait de patients de plus de 18 ans, sélectionnés aléatoirement, consultant pour au moins une plainte physique auprès de 24 médecins généralistes de Suisse Romande, réexaminés une année après l'inclusion dans la cohorte. Le questionnaire validé « Full Patient Health Questionnaire » a été utilisé, le même jour, pour diagnostiquer une dépression majeure. Ce résultat a été utilisé pour évaluer les performances des deux tests de dépistage en calculant la sensibilité et la spécificité, notamment. Résultats Les données de 724 / 937 patients inclus ont pu être utilisées. Un diagnostic de dépression majeure a été posé chez 9.5% des patients (n = 69). La sensibilité et la spécificité des deux questions de dépistage étaient de 91.3% (IC95% : 81.4-96.4%) et 65.0% (IC95% : 61.2-68.6%), respectivement. En ajoutant la troisième question, la sensibilité des deux questions de dépistage a diminué à 59.4% (IC95% : 47.0-70.9%) et la spécificité a augmenté à 88.2% (IC95% : 85.4-90.5%). Conclusions L'utilisation des deux questions pour le dépistage de la dépression majeure est associée à une haute sensibilité et à une basse spécificité chez des patients se présentant en cabinet de médecine générale pour une plainte physique. En ajoutant la troisième question, la spécificité augmente, mais la sensibilité diminue. Ainsi, en ajoutant la troisième question, quatre patients dépressifs majeurs sur dix ne sont pas détectés, alors que seulement un patient sur dix n'est pas détecté avec les deux questions de dépistage. Notre étude montre que le test composé de deux questions reste une méthode de choix pour le dépistage de la dépression majeure et que l'ajout de la troisième question n'est pas recommandée. Celle-ci reste toutefois pertinente dans l'incitation au dialogue sur le sujet de la dépression entre le médecin et son patient.

Fear assessment in pigs exposed to a novel object test

The experiment aimed to study approach and locomotive behaviour as indicators of fear in a novel object test carried out in pigs. Thirty post-weaning (30 kg) and 30 finishing (90 kg) pigs were exposed to visual, auditory and olfactory novel stimuli during 2 different experiments. The facilities consisted of a test pen in which a trough was located. The trough contained chopped apples. Once the animals were trained to enter the test pen individually they were subjected to 3 different fear stimuli. These stimuli were applied in the test pen and next to the trough. The variables studied were feeding behaviour, approach behaviour (the distance and position of the animal with respect to the trough) and locomotive behaviour (general activity, reluctance to move, turning back and retreat attempts). Two groups were studied: saline and midazolam treated group. Twenty minutes before the start of the sessions, 15 post-weaning and finishing pigs received an intramuscular injection of 0.20 and 0.15 mg/kg, respectively, midazolam (Dormicum1). The saline pigs (15 animals per group) were injected with saline. The administration of midazolam increased the feeding behaviour and approaching behaviour, and reduced the locomotive behaviour. In front of the visual and olfactory stimuli post-weaning pigs showed a higher general activity than finishing pigs, but the contrary was found when the auditory stimulus was applied. The olfactory stimulus was more related to the turning back behaviour, whereas the visual stimulus was more related to retreat attempts. Although it could be concluded that reluctant to move was the most common response to the different fear stimuli applied in our study regardless of the age of animals, the combination of reluctant to move and turning back would be a good criterion to assess fear in domestic pigs. The use of midazolam as anxiolytic for studies of fear in commercial conditions in pigs is recommended.

A high-throughput test to detect C.E.R.A. doping in blood.

C.E.R.A., a continuous erythropoietin receptor activator, is a new third-generation erythropoiesis-stimulating agent (ESA) that has recently been linked with abuse in endurance sports. In order to combat this new form of doping, we examined an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) designed to detect the presence of C.E.R.A. in serum samples. The performance of the assay was evaluated using a pilot excretion study that involved six subjects receiving C.E.R.A. Validation data demonstrated an excellent reproducibility and ensured the applicability of the assay for anti-doping purposes. To maximize the chances of detecting the drug in serum samples, we propose the use of this specific ELISA test as a high-throughput screening method, combined with a classic isoelectric focusing test as a confirmatory assay. This strategy should make C.E.R.A. abuse relatively easy to detect, thereby preventing the future use of this drug as a doping agent.

A simple and economic slide micro-immunoenzymatic (Micro-SIA) test for epidemiological studies of toxoplasmosis

A slide micro-immunoenzymatic assay (micro-SIA) to detectantibodies to non-particulate Toxoplasma gondii antigens is described. This assay allows the diagnosis of toxoplasmosis infection in about 1 hr. Twenty-four determinations can be performed per slide. Five hundred ng of antigen and 5 or 10 µl drop of each reactive are necessary per well. The clear contrast of colours obtained for negative and positive sera after the test is finished, allows direct discrimination of the results. However, it is possible to quantify the results of the reaction using a minireader. Sera dilution cutoff value, determined as themost frequent titre for the general population, is 1:100. The toxoplasma micro-SIA correlates well with indirect immunofluorescence (IIF), its sensitivity is atleast three times as much as IIF. The test has an intra and inter assay variation coefficient of 5.46 per cent and of 6.24 per cent respectively. Sera obtained at random from argentinian people were analyzed and a 56 per cent of infection was found. The main features of the Toxoplasma micro-SIA are its simplicity, sensitivity, reproducibility, and the virtual absence of background making it very suitable for screening tests.

Impaired skin wound healing in peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)alpha and PPARbeta mutant mice.

We show here that the alpha, beta, and gamma isotypes of peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) are expressed in the mouse epidermis during fetal development and that they disappear progressively from the interfollicular epithelium after birth. Interestingly, PPARalpha and beta expression is reactivated in the adult epidermis after various stimuli, resulting in keratinocyte proliferation and differentiation such as tetradecanoylphorbol acetate topical application, hair plucking, or skin wound healing. Using PPARalpha, beta, and gamma mutant mice, we demonstrate that PPARalpha and beta are important for the rapid epithelialization of a skin wound and that each of them plays a specific role in this process. PPARalpha is mainly involved in the early inflammation phase of the healing, whereas PPARbeta is implicated in the control of keratinocyte proliferation. In addition and very interestingly, PPARbeta mutant primary keratinocytes show impaired adhesion and migration properties. Thus, the findings presented here reveal unpredicted roles for PPARalpha and beta in adult mouse epidermal repair.

Notch1 functions as a tumor suppressor in mouse skin.

Notch proteins are important in binary cell-fate decisions and inhibiting differentiation in many developmental systems, and aberrant Notch signaling is associated with tumorigenesis. The role of Notch signaling in mammalian skin is less well characterized and is mainly based on in vitro studies, which suggest that Notch signaling induces differentiation in mammalian skin. Conventional gene targeting is not applicable to establishing the role of Notch receptors or ligands in the skin because Notch1-/- embryos die during gestation. Therefore, we used a tissue-specific inducible gene-targeting approach to study the physiological role of the Notch1 receptor in the mouse epidermis and the corneal epithelium of adult mice. Unexpectedly, ablation of Notch1 results in epidermal and corneal hyperplasia followed by the development of skin tumors and facilitated chemical-induced skin carcinogenesis. Notch1 deficiency in skin and in primary keratinocytes results in increased and sustained expression of Gli2, causing the development of basal-cell carcinoma-like tumors. Furthermore, Notch1 inactivation in the epidermis results in derepressed beta-catenin signaling in cells that should normally undergo differentiation. Enhanced beta-catenin signaling can be reversed by re-introduction of a dominant active form of the Notch1 receptor. This leads to a reduction in the signaling-competent pool of beta-catenin, indicating that Notch1 can inhibit beta-catenin-mediated signaling. Our results indicate that Notch1 functions as a tumor-suppressor gene in mammalian skin.

Mechanisms of skin adherence and invasion by dermatophytes.

Dermatophytes are keratinophilic fungi that can be pathogenic for humans and animals by infecting the stratum corneum, nails, claws or hair. The first infection step consists of adherence of arthroconidia to the stratum corneum. The mechanisms and the kinetics of adherence have been investigated using different in vitro and ex vivo experimental models, most notably showing the role of a secreted serine protease from Microsporum canis in fungal adherence to feline corneocytes. After germination of the arthroconidia, dermatophytes invade keratinised structures that have to be digested into short peptides and amino acids to be assimilated. Although many proteases, including keratinolytic ones, have been characterised, the understanding of dermatophyte invasion mechanisms remains speculative. To date, research on mechanisms of dermatophyte infection focused mainly on both secreted endoproteases and exoproteases, but their precise role in both fungal adherence and skin invasion should be further explored.

Involvement of PPARβ/δ in mesenchymal-epidermal interactions during skin wound healing

SUMMARY : Skin wound repair is a complex and highly coordinated process, where a variety of cell types unite to regenerate the damaged tissue. Several works have elucidated cellular and molecular mechanisms, in which mesenchymal-epidermal interactions play an essential role for the regulation of skin homeostasis and repair. Peroxisome Proliferator-Activated Receptors (PPARs) are ligand-activated transcription factors that belong to the nuclear receptor superfamily. Three related isotypes (PPARα, PPARß/δ and PPARγ) have been found, which exhibit distinct tissue distribution and specific physiological functions. PPARß/δ was identified as a crucial player of skin homeostasis. In the mouse skin, PPARß/δ has been described to control proliferation-differentiation state, adhesion and migration, and survival of the keratinocytes during healing. PPARß/δ has been implicated as well in the development of the hair follicles, in which mesenchymal-secreted hepatocyte growth factor (HGF) is involved. These data suggest that the biological activity of PPARß/δ is modulated by mesenchymal-epidermal interactions and that, in turn, PPARß/δ also modulates some of these signals. The aim of the present work was to elucidate the nature of the signals exchanged between the epidermis and dermis compartments, and more particularly those which are under the control of PPARß/δ. In the first part of the study, we showed that PPARß/8 in dermal fibroblasts down-regulates the mitotic activity of keratinocytes by inhibiting the IL-1 signalling pathway via the production of secreted IL-1 receptor antagonist (sIL-1Ra), a natural antagonist of this signalling. The regulation of IL-1 signalling by PPARß/δ is required for anon-pathological skin wound repair. These findings provide evidence for a novel homeostatic control of keratinocyte proliferation and differentiation mediated by the regulation of IL-1 signalling via dermal PPARß/δ fibroblasts. Proteolysis of the extracellular matrix (ECM) is a key process involved in wound repair and modifications in its activity are often associated with an alteration óf the wound closure. This process implies specific proteinases, as matrix metalloproteinases (MMPs), which are finely modulated by IL-1 signalling. In line with the first results, the second part of the work showed that MMP8 and MMP13, which are two important collagenases involved in mouse skin wound repair, are regulated by PPARß/δ. Their expression is indirectly down-regulated by dermal PPARß/δ, via the production of sIL-1Ra, resulting in the inhibition of IL-1 signalling, known to regulate the expression of numerous MMPs. We suggest that, in absence of PPARß/δ, the positive regulation of these two collagenases could participate to the delay of skin wound healing, which has been observed in mice deleted for PPARßlS. The potential therapeutic role of PPARß/b could be as well extending to inflammatory and hyperproliferative skin diseases involving IL-1 signalling, such as psoriasis or skin cancers. Quite interestingly, MMP1 (analogue of mouse MMP13) plays an essential role in human photoaging, suggesting that PPARß/δ could as well be an attractive target for photoprotection. RESUME : La cicatrisation est un processus complexe et extrêmement organisé, impliquant un grand nombre de cellules qui s'unissent pour régénérer le tissu endommagé. De nombreux travaux nous ont éclairés sur les mécanismes cellulaires et moléculaires, dans lesquels les interactions épidermo-mésenchymateuses détiennent un rôle capital à la fois dans la régulation de l'homéostasie et dans la réparation de la peau. PPAR (Peroxisome proliferatar-activated receptor), qui appartient à la superfamille des récepteurs nucléaires, se définit comme un facteur de transcription activé par des ligands très spécifiques. Trois isotypes (PPARa, PPARß/δ et PPARy) ont été décrits et sont caractérisés par une distribution tissulaire et des fonctions physiologiques clairement définies. PPARß/δ a été identifié comme étant un important acteur dans l'homéostasie de la peau. Chez la souris, il a été décrit comme contrôlant l'état de prolifération et de différenciation, le processus d'adhésion et de migration, ainsi que la survie des kératinocytes au cours de la cicatrisation. PPARßIS a également été défini comme contrôlant le développement des follicules pileux, impliquant la sécrétion par le mésenchyme du facteur de croissance HGF. Ces données suggèrent que l'activité biologique de PPARß/δ est modulée par des interactions épidermo-mésenchymateuses, et qu'en retour, il possède la capacité de moduler certains de ces signaux. L`objectif de ce travail a été d'élucider la nature des signaux échangés entre les compartiments épidermique et dermique, et plus particulièrement ceux qui sont sous le contrôle de PPARß/δ. Dans la première partie de l'étude, nous avons montré que les fibroblastes exprimant PPARß/δ réduisent l'activité mitotique des kératinocytes en inhibant la voie de signalisation IL-1, via la production de sIL-1Ra (secreted IL-1 receptor antagonist), défini comme un antagoniste naturel de cette voie de signalisation. La régulation de cette dernière par PPARß/δ est donc nécessaire pour une cicatrisation de type non pathologique. Ces résultats offrent donc une nouvelle preuve du contrôle de l'homéostasie et de l'état de prolifération/différenciation des kératinocytes par les fibroblastes exprimant PPARß/δ, en régulant la voie de signalisation IL-1. Le mécanisme de dégradation de la matrice extracellulaire (MEC) est une étape essentielle lors du processus de cicatrisation. Ainsi des modifications de cette activité protéolytïque sont souvent associées à une altération de la fermeture de la plaie. Ce processus implique des protéinases, comme les MMPs, qui sont finement modulés par la voie de signalisation IL-1. En accord avec les premiers résultats, la seconde partie des nos travaux a montré que les collagénases MMP8 et MMP13, connues pour être d'importantes molécules impliquées lors de la réparation tissulaire chez la souris, sont modulées par l'activité de PPARß/δ. Leurs expressions sont indirectement régulées par PPARß/δ, via la production. de sIL-1 Ra, entraînant ainsi l'inhibition de la voie de signalisation IL-1, décrite pour réguler l'expression de nombreuses MMPs, Nous suggérons donc qu'en absence de PPARß/δ, la régulation de ces deux collagénases pourrait être impliquée dans le retard de cicatrisation, observé chez les souris déficientes pour PPARß/δ. L'activité biologique de PPARß/δ pourrait être ainsi étendue à des maladies hyperproliferatives et inflammatoires de la peau, impliquant la voie de signalisation IL-1, comme le psoriasis ou certains cancers de la peau, et ce à des fins thérapeutiques. Il est aussi intéressant de relever que chez l'homme, MMP1 (présenté comme l'analogue de MMP13 de la souris} joue un rôle primordial dans le photo-vieillissement, nous suggérons donc que PPARß/δ pourrait ainsi être une cible attrayante concernant la photoprotection.

Local heating of human skin causes hyperemia without mediation by muscarinic cholinergic receptors or prostanoids.

RESUME Les changements locaux de la température à la surface de la peau humaine ont une influence importante sur sa perfusion. La chaleur augmente localement le flux sanguin cutané, mais les mécanismes et les médiateurs de cette réponse (réponse thermique d'hyperémie) sont incomplètement élucidés. Dans la présente étude, nous avons examiné la relation possible entre la réponse thermique d'hyperémie, les récepteurs cholinergiques muscariniques et la production des prostaglandines vasodilatatrices. Chez 13 sujets de sexe masculin en bonne santé âgés entre 20 et 30 ans, une chambre métallique (contenant de l'eau) dont la température peut être contrôlée, a été placée sur la face palmaire de leur avant-bras et utilisée pour augmenter la température de surface de 34 à 41°C. L'hyperémie cutanée consécutive a été enregistrée par l'intermédiaire d'un scanner laser-Doppler. Dans une expérience, chacun des 8 sujets a reçu un bolus i.v. de glycopyrolate (agent antimuscarinique) (4 µg/kg) lors d'une visite et de NaCl 0,9% lors de l'autre visite. La réponse thermique d'hyperémie a été déterminée dans l'heure suivant les injections. Les glycopyrolate a efficacement empêché la vasodilation des micro-vaisseaux cutanés induite par iontophorèse d'acétylcholine mais n'a pas influencé la réponse thermique d'hyperémie. Dans une deuxième expérience entreprise avec 5 autres sujets 1 g d'aspirine (inhibiteur de la cyclooxygénase) administrée oralement a totalement supprimé la vasodilatation induite dans la peau par le courant anodique, sans modifier la réponse thermique d'hyperémie. La présente étude confirme l'absence de stimulation des récepteurs muscariniques et la production de prostaglandines vaso-dilatatrices dans la vasodilatation induite chez l'homme par réchauffement local de la peau de l'avant-bras. ABSTRACT Local changes in surface temperature have a powerful influence on the perfusion of human skin. Heating increases local skin blood flow (SkBF), but the mechanisms and mediators of this response (thermal hyperemia response) are incompletely elucidated. In the present study, we examined the possible dependence of the thermal hyperemia response on stimulation of muscarinic cholinergic receptors and on production of vasodilator prostanoids. In 13 male healthy subjects aged 20 - 30 years, a temperature- controlled chamber was positioned on the volar face of one forearm and used to raise surface temperature from 34to41°C. The time-course of the resulting thermal hyperemia response was recorded with a laser-Doppler imager. In one experiment, each of 8 subjects received an i.v. bolus of the antimuscarinic agent glycopyrrolate (4µg/kg) on one visit and saline on the other. The thermal hyperemia response was determined within the hour following the injections. Glycopyrrolate effectively inhibited the skin vasodilation induced by iontophoresis of acetylcholine, but did not influence the thermal hyperemia response. In a second experiment conducted in 5 other subjects, 1 gram of the cyclooxygenase inhibitor aspirin administered orally totally abolished the vasodilation induced in the skin by anodal current, but also failed to modify the thermal hyperemia response. The present study excludes the stimulation of muscarinic receptors and the production of vasodilator prostaglandins as essential and nonredundant mechanisms for the vasodilation induced by local heating in human forearm skin.

Chromoblastomycosis murine model and in vitro test to evaluate the sensitivity of Fonsecaea pedrosoi to ketoconazole, itraconazole and saperconazole

An experimental model of murine chromoblastomycosis and in vitro tests with Fonsecaea pedrosoi were used to test the sensitivity of this fungus to three different antimycotics. The experimental model was standardized in BALB/c mice inoculated intraperitoneally with a 10(6) CFU/ml suspension of a F. pedrosoi isolate. Clinical infection was evident after 5 days of inoculation. Three groups of 27 mice each were used in the experiment. One group was treated with ketoconazole (KTZ), another with itraconazole (ITZ) and the other with saperconazole (SPZ). Antimycotic therapy was continued for 21 days. The control group consisted of 40 mice which were inoculated, but not treated. Infection was documented by macroscopic and microscopic examination of affected tissue in addition to culture of tissue macerates. Minimal inhibitory concentrations (MIC) and minimal fungicidal concentrations (MFC) for the F. pedrosoi strain used were done. The in vitro results showed that SPZ was the most active with MIC 0.01 mg/ml and MFC 0.1 mg/ml, followed by ITZ. SPZ was also the most effective in vivo since 63% of the treated animals (p=0.01) showed a curative effect after the observation period. We concluded that SPZ had the best in vitro and in vivo activity against F. pedrosoi.

Asymptomatic Leishmania chagasi Infection in Relatives and Neighbors of Patients with Visceral Leishmaniasis

The frequency of asymptomatic infection among relatives and neighbors of cases of visceral leishmaniasis (VL) was compared and characterization of the immunological response in these subjects was performed. Cases were from a new endemic area, close to the beach and near Salvador, capital of the State of Bahia, Brazil. The characterization of asymptomatic infection was made using a skin reaction test and detection of antibody to Leishmania chagasi by the ELISA test. To characterize the immunological response of these subjects with asymptomatic L. chagasi infection the cytokines profile and the lymphoproliferative response were determined after stimulation of lymphocytes by L. chagasi antigen. There was no difference in the frequency of L. chagasi infection in relatives (45%) and in neighbors (27%) of cases of VL (P>0.05). The immunological response from these subjects was characterized by high production of IFN-g and a low production of IL-10 and a good lymphoproliferative response to L. chagasi antigen