Fate of TLR-1/TLR-2 agonist functionalised pDNA nanoparticles upon deposition at the human bronchial epithelium in vitro.

BACKGROUND: Plasmid DNA vaccination is a promising approach, but studies in non-human primates and humans failed to achieve protective immunity. To optimise this technology further with focus on pulmonary administration, we developed and evaluated an adjuvant-equipped DNA carrier system based on the biopolymer chitosan. In more detail, the uptake and accompanying immune response of adjuvant Pam3Cys (Toll-like receptor-1/2 agonist) decorated chitosan DNA nanoparticles (NP) were explored by using a three-dimensional (3D) cell culture model of the human epithelial barrier. Pam3Cys functionalised and non-functionalised chitosan DNA NP were sprayed by a microsprayer onto the surface of 3D cell cultures and uptake of NP by epithelial and immune cells (blood monocyte-derived dendritic cells (MDDC) and macrophages (MDM)) was visualised by confocal laser scanning microscopy. In addition, immune activation by TLR pathway was monitored by analysis of interleukin-8 and tumor necrosis factor-α secretions (ELISA). RESULTS: At first, a high uptake rate into antigen-presenting cells (MDDC: 16-17%; MDM: 68-75%) was obtained. Although no significant difference in uptake patterns was observed for Pam3Cys adjuvant functionalised and non-functionalised DNA NP, ELISA of interleukin-8 and tumor necrosis factor-α demonstrated clearly that Pam3Cys functionalisation elicited an overall higher immune response with the ranking of Pam3Cys chitosan DNA NPâeuro0/00>âeuro0/00chitosan DNA NPâeuro0/00=âeuro0/00DNA unloaded chitosan NPâeuro0/00>âeuro0/00control (culture medium). CONCLUSIONS: Chitosan-based DNA delivery enables uptake into abluminal MDDC, which are the most immune competent cells in the human lung for the induction of antigen-specific immunity. In addition, Pam3Cys adjuvant functionalisation of chitosan DNA NP enhances significantly an environment favoring recruitment of immune cells together with a Th1 associated (cellular) immune response due to elevated IL-8 and TNF-α levels. The latter renders this DNA delivery approach attractive for potential DNA vaccination against intracellular pathogens in the lung (e.g., Mycobacterium tuberculosis or influenza virus).

Morfologia dos imaturos e do adulto de Coccidophilus citricola Brèthes (Coleoptera, Coccinellidae, Sticholotidinae), predador de cochonilhas-de-carapaça (Hemiptera, Diaspididae) de citros

Imaturos e adultos de Coccidophilus citricola Brèthes, 1905 são descritos e ilustrados com auxílio de microscopia eletrônica de varredura. A larva é comparada com as de Microweisea Cockerel e outras espécies de Coccinellidae, e o adulto com duas espécies norte-americanas de Coccidophilus Brèthes.

Morfologia externa dos estágios imaturos de heliconíneos neotropicais: VI. Dione moneta moneta Hübner (Lepidoptera, Nymphalidae, Heliconiinae)

As estruturas externas do ovo, larva e pupa de Dione moneta moneta Hübner, 1825 são descritas e ilustradas, baseadas em microscopia óptica e eletrônica de varredura.

Molecular determinants of vesicular storage and release of the gliotransmitter D-serine from cortical astrocytes

Neuron-astrocyte reciprocal communication at synapses has emerged as a novel signalling pathway in brain function. Astrocytes sense the level of synaptic activity and, in turn, influence its efficacy through the regulated release of 'gliotransmitters' such as glutamate, ATP or D-serine. A calcium-dependent exocytosis is proposed to drive the release of gliotransmitters but its existence is still debated. Over the last years, we have been studying the molecular determinants governing D-serine release from glia using different approaches. Using a novel bioassay for D-serine, we have been able to show that D-serine release occurs mainly through a calcium- and SNARE proteindependent mechanism just supporting the idea that this amino acid is released by exocytosis from glia. We next have pursued our exploration by confocal imaging and tracking of the exocytotic routes for Dserine- mediated gliotransmission and have shown that D-serine releasable pools are confined to synaptobrevin2/cellubrevin-bearing vesicles. To shed light onto the mechanisms controlling the storage and the release of gliotransmitters and namely D-serine, we have developed a new method for the immunoisolation of synaptobrevin 2- positive vesicles from rat cortical astrocytes in culture while preserving their content in gliotransmitters. The purified organelles are clear round shape vesicles of excellent purity with homogeneous size (40 nm) as judged by electron microscopy. Immunoblotting analysis revealed that isolated vesicles contain most of the major proteins already described for neuron-derived vesicles like synaptic vesicle protein 2 (SV2) and the proton pump H?-ATPase. In addition, we have analyzed the content for various amino acids of these vesicles by means of chiral capillary electrophoresis coupled to laser-induced fluorescence detection. The purified vesicles contain large amount of D-serine. We also detect peaks corresponding to unidentified compounds that may correspond to others amino acids. Postembedding immunogold labelling of the rat neocortex further revealed the expression of D-serine in astrocytes processes contacting excitatory synapses. Finally, we have examined the uptake properties for Dserine and glutamate inside the isolated glial vesicles. Our results provide significant support for the existence of an uptake system for D-serine in secretory glial vesicles and for the storage of chemical substances like D-serine and glutamate. 11th International Congress on Amino Acids, Peptides and Proteins 763 123

Morfologia externa dos estágios imaturos de heliconíneos neotropicais: VII. Dryadula phaetusa (Linnaeus) (Lepidoptera, Nymphalidae, Heliconiinae)

As estruturas externas do ovo, larva e pupa de Dryadula phaetusa (Linnaeus, 1758) são descritas e ilustradas, baseadas em microscopia óptica e eletrônica de varredura.

Ácaros (Arachnida, Acari) de plantas ornamentais na região noroeste do estado de São Paulo, Brasil: inventário e descrição dos sintomas causados pelos fitófagos

No presente trabalho foram estudados os ácaros associados a plantas ornamentais de praças, ruas e jardins residenciais, no município de Ilha Solteira, SP. Foram amostradas folhas de 20 espécies de plantas e alguns representantes das morfoespécies de ácaros encontrados foram montados em lâminas de microscopia com o meio de Hoyer, para posterior identificação sob microscópio óptico com contraste de fases. Foram registradas 23 espécies pertencentes a 15 gêneros de oito famílias. Dessas espécies, 13 são fitófagas, nove predadoras e uma de hábito alimentar não determinado. A família com maior riqueza de ácaros foi Tetranychidae, com nove espécies, sendo uma delas registrada pela primeira vez após a descrição original e outra pela primeira vez no Brasil. Lorryia formosa Cooremann, 1958 (Tydeidae) foi a que ocorreu em maior número de hospedeiros. As plantas com as maiores riquezas de ácaros foram Lagerstroemia indica L., Mussaenda alicia Hort. e Tabebuia sp., com seis espécies registradas em cada uma.

Morfologia, comportamento, parasitismo e mecanismos de defesa dos imaturos de Heraclides anchisiades capys (Hübner)(Lepidoptera, Papilionidae)

Heraclides anchisiades capys é uma espécie comum de Papilionidae, cujas larvas se alimentam de várias espécies de Citrus spp. (Rutaceae). Neste estudo são descritas a morfologia e dados sobre a história natural dos imaturos através de ilustrações, incluindo fotografias em microscopia eletrônica de varredura.

Morfologia do exoesqueleto de adultos de Memphis moruus stheno (Pritwittz) (Lepidoptera, Nymphalidae, Charaxinae)

O presente trabalho visa fornecer subsídios para estudos morfológicos comparativos de Charaxinae neotropicais. Memphis moruus stheno (Prittwitz, 1865) é a segunda espécie neotropical de Anaeini e a primeira do gênero Memphis a ter sua morfologia detalhada. A morfologia externa é apresentada com descrições, ilustrações e imagens de microscopia eletrônica de varredura de estruturas da cabeça e apêndices cefálicos, região cervical, tórax e apêndices torácicos, abdome e genitálias masculina e feminina. A morfologia de M. moruus stheno é comparada com uma espécie do gênero proximamente relacionado Zaretis Hübner, [1819].

Imaturos de Sarsina violascens (Herrich-Schäffer) (Lepidoptera, Noctuidae, Lymantriinae)

Imaturos de Sarsina violascens (Herrich-Schäffer) (Lepidoptera, Noctuidae, Lymantriinae). Sarsina violascens é uma espécie polífaga que eventualmente se alimenta de P. cattleianum Sabine (Myrtaceae) durante sua fase larval. Neste estudo são descritas a morfologia e o comportamento dos imaturos, com ilustrações, fotografias e imagens de microscopia eletrônica de varredura.

Krypton laser photocoagulation induces retinal vascular remodeling rather than choroidal neovascularization.

The purpose of this study is to analyze the retina and choroid response following krypton laser photocoagulation. Ninety-two C57BL6/Sev129 and 32 C57BL/6J, 5-6-week-old mice received one single krypton (630 nm) laser lesion: 50 microm, 0.05 s, 400 mW. On the following day, every day thereafter for 1 week and every 2-3 days for the following 3 weeks, serial sections throughout the lesion were systematically collected and studied. Immunohistology using specific markers or antibodies for glial fibrillary acidic protein (GFAP) (astrocytes, glia and Muller's cells), von Willebrand (vW) (vascular endothelial cells), TUNEL (cells undergoing caspase dependent apoptosis), PCNA (proliferating cell nuclear antigen) p36, CD4 and F4/80 (infiltrating inflammatory and T cells), DAPI (cell nuclei) and routine histology were carried out. Laser confocal microscopy was also performed on flat mounts. Temporal and spatial observations of the created photocoagulation lesions demonstrate that, after a few hours, activated glial cells within the retinal path of the laser beam express GFAP. After 48 h, GFAP-positive staining was also detected within the choroid lesion center. "Movement" of this GFAP-positive expression towards the lasered choroid was preceded by a well-demarcated and localized apoptosis of the retina outer nuclear layer cells within the laser beam path. Later, death of retinal outer nuclear cells and layer thinning at this site was followed by evagination of the inner nuclear retinal layer. Funneling of the entire inner nuclear and the thinned outer nuclear layers into the choroid lesion center was accompanied by "dragging" of the retinal capillaries. Thus, from days 10 to 14 after krypton laser photocoagulation onward, well-formed blood capillaries (of retinal origin) were observed within the lesion. Only a few of the vW-positive capillary endothelial cells stained also for PCNA p36. In the choroid, dilatation of the vascular bed occurred at the vicinity of the photocoagulation site and around it. Confocal microscopy demonstrates that the vessels throughout the path lesion are located within the neuroretina while in the choroid (after separation of the neural retina) only GFAP-positive but no lectin-positive cells can be seen. The involvement of infiltrating inflammatory cells in these remodeling and healing processes remained minimal throughout the study period. During the 4 weeks following krypton laser photocoagulation in the mouse eye, processes of wound healing and remodeling appear to be driven by cells (and vessels) originating from the retina.

Isolated integrin beta3 subunit cytoplasmic domains require membrane anchorage and the NPXY motif to recruit to adhesion complexes but do not discriminate between beta1- and beta3-positive complexes.

Integrin adhesion receptors consist of non-covalently linked alpha and beta subunits each of which contains a large extracellular domain, a single transmembrane domain and a short cytoplasmic tail. Engaged integrins recruit to focal structures globally termed adhesion complexes. The cytoplasmic domain of the beta subunit is essential for this clustering. beta1 and beta3 integrins can recruit at distinct cellular locations (i.e. fibrillar adhesions vs focal adhesions, respectively) but it is not clear whether individual beta subunit cytoplasmic and transmembrane domains are by themselves sufficient to drive orthotopic targeting to the cognate adhesion complex. To address this question, we expressed full-length beta3 transmembrane anchored cytoplasmic domains and truncated beta3 cytoplasmic domains as GFP-fusion constructs and monitored their localization in endothelial cells. Membrane-anchored full-length beta3 cytoplasmic domain and a beta3 mutant lacking the NXXY motif recruited to adhesion complexes, while beta3 mutants lacking the NPXY and NXXY motifs or the transmembrane domain did not. Replacing the natural beta subunit transmembrane domain with an unrelated (i.e. HLA-A2 alpha chain) transmembrane domain significantly reduced recruitment to adhesion complexes. Transmembrane anchored beta3 and cytoplasmic domain constructs, however, recruited without discrimination to beta1- and beta3-rich adhesions complexes. These findings demonstrate that membrane anchorage and the NPXY (but not the NXXY) motif are necessary for beta3 cytoplasmic domain recruitment to adhesion complexes and that the natural transmembrane domain actively contributes to this recruitment. The beta3 transmembrane and cytoplasmic domains alone are insufficient for orthotopic recruitment to cognate adhesion complexes.

Propofol anesthesia impairs the maturation and survival of adult-born hippocampal neurons.

BACKGROUND: Adult neurogenesis occurs in the hippocampus of most mammals, including humans, and plays an important role in hippocampal-dependent learning. This process is highly regulated by neuronal activity and might therefore be vulnerable to anesthesia. In this article, the authors investigated this possibility by evaluating the impact of propofol anesthesia on mouse hippocampal neurons generated during adulthood, at two functionally distinct maturational stages of their development. METHODS: Adult-born hippocampal neurons were identified using the cell proliferation marker bromodeoxyuridine or a retroviral vector expressing the green fluorescent protein in dividing cells and their progenies. Eleven or 17 days after the labeling procedure, animals (n = 3-5 animals per group) underwent a 6-h-long propofol anesthesia. Twenty-one days after labeling, the authors analyzed the survival, differentiation, and morphologic maturation of adult-born neurons using confocal microscopy. RESULTS: Propofol impaired the survival and maturation of adult-born neurons in an age-dependent manner. Anesthesia induced a significant decrease in the survival of neurons that were 17 days old at the time of anesthesia, but not of neurons that were 11 days old. Similarly, propofol anesthesia significantly reduced the dendritic maturation of neurons generated 17 days before anesthesia, without interfering with the maturation of neurons generated 11 days before anesthesia. CONCLUSIONS: These results reveal that propofol impairs the survival and maturation of adult-born hippocampal neurons in a developmental stage-dependent manner in mice.

Mineralogia de solos com excesso de sódio no estado do Ceará

Foram estudados dois perfis de solos com problemas de sodicidade (Planossolo Solódico e Solonetz-Solodizado), no estado do Ceará, com o objetivo de conhecer a mineralogia das frações areia, silte e argila e os processos de alterações que ocorrem nos respectivos minerais. A areia e o silte grosso foram avaliados por microscopia de polarização e contraste de fase, enquanto o silte fino e a argila foram analisados por difração de raios-X. Utilizou-se, ainda, a microscopia eletrônica de varredura para obtenção de informações complementares sobre as transformações mineralógicas ocorridas nos horizontes dos dois perfis. Verificou-se que o Planossolo Solódico apresenta na fração argila quantidades mais ou menos equivalentes de caulinita e montmorilonita no horizonte 2Btn, o mesmo acontecendo com as proporções de caulinita e vermiculita no horizonte A. Nas outras frações, foram encontrados teores variáveis de quartzo, plagioclásios, hornblenda e biotita. Por sua vez, o Solonetz-Solodizado mostrou uma fração argila essencialmente caulinítica ao longo de todo o perfil e com quantidades variáveis de quartzo, feldspato e biotita nas outras frações. Em ambos os perfis, o enriquecimento de argila no Bt resultou essencialmente das alterações "In situ" dos minerais primários intemperizáveis contidos na rocha subjacente. A hipótese de alternância de processos de oxi-redução nos horizontes A e, ou, E, em razão da baixa permeabilidade do horizonte 2Btn, provocando um processo de ferrólise naqueles horizontes, é também uma alternativa de gênese que não pode ser descartada para explicar o alto contraste textural desses solos. O intemperismo da albita e de outros plagioclásios ricos em sódio, o clima semi-árido, e a drenagem impedida são os fatores condicionantes dos percentuais elevados de sódio, observados nos dois pedons. Também nos dois solos, os teores destoantes de quartzo, a geomorfologia da região e a presença de uma linha de pedras separando os horizontes A ou A + E do 2Btn revelam duplicidade de materiais originários.

Caracterização micropedológica de alguns solos da Zona da Mata Mineira

Realizou-se o estudo micromorfológico de oito solos da Zona da Mata Mineira, incluindo um Latossolo Una, dois Podzólicos Vermelho-Escuros, dois Brunizéns Avermelhados, uma Terra Roxa Estruturada, um Vertissolo e um Podzólico Vermelho-Amarelo câmbico. Após coleta, impregnação, polimerização e preparo de seções finas, estas foram analisadas por microscopia óptica para estudo micropedológico, caracterizando a microestrutura, porosidade, esqueleto, organização do plasma e estruturas associadas, com destaque para a argila iluviada. Em adição, análises em microscópio eletrônico de varredura da superfície de agregados foram realizadas em agregados individualizados. O horizonte B do Latossolo estudado apresenta forte microestrutura com influência de atividade biológica, que tende a coalescer intensamente em profundidade e torna-se apédico no saprolito, separado por cascalheiro de quartzo. Nódulos de hematita em processo de degradação foram observados, indicando o processo atual de goethização dos solos, notadamente no Vertissolo e no Latossolo Una. O estudo micromorfológico evidenciou solos com Bt que apresentaram cerosidade forte em observação macroscópica e não a evidenciaram claramente em microscópio, sendo esse fato mais marcante nos solos mais vermelhos. Solos com Bt mais amarelados mostraram cerosidade fraca no campo, com correspondente detecção de cutãs iluviais em microscopia óptica. O Podzólico Vermelho-Amarelo câmbico, com cerosidade fraca e comum no campo, não teve sua presença confirmada em nível microscópico, evidenciando seu caráter câmbico. Esse solo evidencia nódulos de hematita circundados por gibbsita, o que poderia contribuir para explicar a manutenção dos altos teores de óxidos de ferro desses solos. A não-confirmação, ao microscópio, da cerosidade descrita em campo nos solos com Bt indica a necessidade da intensificação de estudos (descrição x micropedologia) na tentativa de melhor aferição e consistência de resultados.

Potássio e magnésio em minerais das frações areia e silte de diferentes solos

Os solos mais intemperizados, desenvolvidos nos trópicos úmidos, apresentam baixa reserva de nutrientes nas frações mais grosseiras. Para avaliar a presença de potássio e magnésio nos minerais, amostras das frações areia e silte de solos desenvolvidos de diferentes materiais de origem e estádios de intemperismo dos estados de MG, ES, RS e RR foram estudadas por difratometria de raios-X (DRX), análise termodiferencial, análise termogravimétrica diferencial e microscopia eletrônica. Os teores totais de elementos da TFSA e das frações do solo foram determinados por digestão fluorídrica das amostras. A fração silte também foi submetida a extrações seqüenciais e seletivas dos minerais para estimar a contribuição das espécies minerais nos teores totais de K e Mg. A fração areia dos solos mais intemperizados é muito pobre em nutrientes, com predomínio de quartzo, indicando limitada reserva de K e Mg. Para os solos mais jovens, esta fração apresenta os maiores teores totais de K e Mg, superando as frações mais finas do solo, com presença de minerais primários, como mica, feldspato e anfibólio. Partículas de mica e agregados de caulinita foram as principais fontes de K e Mg totais para as frações areia e silte dos solos mais intemperizados. Os minerais micáceos nestes solos, identificados e analisados por microscopia eletrônica, apresentaram teores de K2O variando de 33,3 a 62,8 e 27,4 a 98,1 g kg-1 e de MgO de 76,5 a 116,8 e 19,7 a 68 g kg-1 para as frações areia e silte, respectivamente. Devido aos baixos teores de mica na fração silte dos solos mais intemperizados (menor que 1%) e a alta proporção de quartzo, mesmo após a extração de caulinita, a concentração da amostra não foi suficiente para detecção de minerais micáceos por DRX. Apenas para o LV de Barroso (MG), verificou-se o aparecimento de discreta reflexão de mica.