Structural and functional characterization of myotoxin I, a Lys49 phospholipase A(2) homologue from Bothrops moojeni (Caissaca) snake venom

Myotoxin-I (MjTX-I) was purified to homogeneity from the venom of Bothrops moojeni by ion-exchange chromatography on CM-Sepharose. Its molecular weight, estimated by SDS-PAGE, was 13,400 (reduced) or 26,000 (unreduced). The extinction coefficient (E-1.0 cm(1.0 mg/ml)) of MjTX-I was 1.145 at lambda = 278 nm, pH 7.0, and its isoelectric point was 8.2 at ionic strength mu = 0.1. When lyophilized and stored at 4 degrees C, dimeric, trimeric, and pentameric forms of the protein were identified by SDS-PAGE. This heterogeneous sample could be separated into three fractions by gel filtration on Sephadex 6-50. The fractions were analyzed by isoelectric focusing, immunoelectrophoresis, and amino acid composition, which indicated that heterogeneity was the result of different levels of self-association. Protein sequencing indicated that MjTX-I is a Lys49 myotoxin and consists of 121 amino acids (M-r = 13,669), containing a high proportion of basic and hydrophobic residues. It shares a high degree of sequence identity with other Lys49 PLA(2)-like myotoxins, but shows a significantly lower identity with catalytically active Asp49 PLA(2)s. The three-dimensional structure of MjTX-I was modeled based on the crystal structures of three highly homologous Lys49 PLA(2)-like myotoxins. This model showed that the amino acid substitutions are conservative, and mainly the beta-wing region, and the C-terminal extended random coil. MjTX-I displays local myotoxic and edema-inducing activities in mice, and is lethal by intraperitoneal injection, with an LD50 value of 8.5 +/- 0.8 mg/kg, In addition, it is cytotoxic to myoblasts/ myotubes in culture, and disrupts negatively charged liposomes. In comparison with the freshly prepared dimeric sample, the more aggregated forms showed significantly reduced myotoxic activity. However, the edema-inducing activity of MjTX-I was independent of molecular association. Phospholipase A(2) activity on egg yolk, as well as anticoagulant activity, were undetectable both in the native and in the more associated forms. His, Tyr, and Trp residues of the toxin were chemically modified by specific reagents. Although the myotoxic and lethal activities of the modified toxins were reduced by these treatments, neither its edema-inducing or Liposome-disrupting activities were significantly altered. Rabbit antibodies to native MjTX-I cross-reacted with the chemically modified forms, and both the native and modified MjTX-I preparations were recognized by antibodies against the C-terminal region 115-129 of myotoxin II from B. asper, a highly Lys49 PLA(2)-homologue with high sequencial similarity. (C) 2000 Academic Press.

Análise in silico de um novo “cluster” de PKS II Metagenômico

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Propriedades ópticas em filmes de opalas sintéticas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Caracterização biofísica e produção de antissoro policlonal contra a capa proteica recombinante do Southem bean mosaic virus

Pós-graduação em Genética - IBILCE

Modelagem numérica da influência do eletrojato equatorial em dados magnetotelúricos produzidos por estruturas tridimensionais

A América do Sul apresenta várias peculiaridades geomagnéticas, uma delas, é a presença do Eletrojato Equatorial, o qual se estende de leste para oeste no Brasil ao longo de aproximadamente 3500 km. Considerando-se o fato de que a influência do Eletrojato Equatorial pode ser detectada a grandes distâncias do seu centro, isto suscita o interesse em se estudar os seus efeitos na exploração magnetotelúrica no Brasil. A influência do eletrojato equatorial na prospecção magnetotelúrica tem sido modelada para meios geológicos uni e bidimensionais valendo-se para isto de soluções analíticas fechadas e de técnicas numéricas tais como elementos finitos e diferenças finitas. Em relação aos meios geológicos tridimensionais, eles tem sido modelados na forma de "camadas finas", usando o algoritmo "thin sheet". As fontes indutoras utilizadas para simular o eletrojato equatorial nestes trabalhos, tem sido linhas de corrente, eletrojatos gaussianos e eletrojatos ondulantes. Por outro lado, o objetivo principal da nossa tese foi o modelamento dos efeitos que o eletrojato equatorial provoca em estruturas tridimensionais próprias da geofísica da prospecção. Com tal finalidade, utilizamos o esquema numérico da equação integral, com as fontes indutoras antes mencionadas. De maneira similar aos trabalhos anteriores, os nossos resultados mostram que a influência do eletrojato equatorial somente acontece em frequências menores que 10^-1 Hz. Este efeito decresce com a distância, mantendo-se até uns 3000 km do centro do eletrojato. Assim sendo, a presença de grandes picos nos perfis da resistividade aparente de um semi-espaço homogêneo, indica que a influência do eletrojato é notável neste tipo de meio. Estes picos se mostram com diferente magnitude para cada eletrojato simulado, sendo que a sua localização também muda de um eletrojato para outro. Entretanto, quando se utilizam modelos geo-elétricos unidimensionais mais de acordo com a realidade, tais como os meios estratificados, percebe-se que a resposta dos eletrojatos se amortece significativamente e não mostra muitas diferenças entre os diferentes tipos de eletrojato. Isto acontece por causa da dissipação da energia eletromagnética devido à presença da estratificação e de camadas condutivas. Dentro do intervalo de 3000 km, a resposta eletromagnética tridimensional pode ser deslocada para cima ou para baixo da resposta da onda plana, dependendo da localização do corpo, da frequência, do tipo de eletrojato e do meio geológico. Quando a resposta aparece deslocada para cima, existe um afastamento entre as sondagens uni e tridimensionais devidas ao eletrojato, assim como um alargamento da anomalia dos perfis que registra a presença da heterogeneidade tridimensional. Quando a resposta aparece deslocada para baixo, no entanto, há uma aproximação entre estes dois tipos de sondagens e um estreitamento da anomalia dos perfis. Por outro lado, a fase se mostra geralmente, de uma forma invertida em relação à resistividade aparente. Isto significa que quando uma sobe a outra desce, e vice-versa. Da mesma forma, comumente nas altas frequências as respostas uni e tridimensionais aparecem deslocadas, enquanto que nas baixas frequências se mostram com os mesmos valores, com exceção dos eletrojatos ondulantes com parâmetros de ondulação α = —2 e —3. Nossos resultados também mostram que características geométricas próprias das estruturas tridimensionais, tais como sua orientação em relação à direção do eletrojato e a dimensão da sua direção principal, afetam a resposta devido ao eletrojato em comparação com os resultados da onda plana. Desta forma, quando a estrutura tridimensional é rotacionada de 90°, em relação à direção do eletrojato e em torno do eixo z, existe uma troca de polarizações nas resistividades dos resultados, mas não existem mudanças nos valores da resistividade aparente no centro da estrutura. Ao redor da mesma, porém, se percebe facilmente alterações nos contornos dos mapas de resistividade aparente, ao serem comparadas com os mapas da estrutura na sua posição original. Isto se deve à persistência dos efeitos galvânicos no centro da estrutura e à presença de efeitos indutivos ao redor do corpo tridimensional. Ao alongar a direção principal da estrutura tridimensional, as sondagens magnetotelúricas vão se aproximando das sondagens das estruturas bidimensionais, principalmente na polarização XY. Mesmo assim, as respostas dos modelos testados estão muito longe de se considerar próximas das respostas de estruturas quase-bidimensionais. Porém, os efeitos do eletrojato em estruturas com direção principal alongada, são muito parecidos com aqueles presentes nas estruturas menores, considerando-se as diferenças entre as sondagens de ambos tipos de estruturas. Por outro lado, os mapas de resistividade aparente deste tipo de estrutura alongada, revelam um grande aumento nos extremos da estrutura, tanto para a onda plana como para o eletrojato. Este efeito é causado pelo acanalamento das correntes ao longo da direção principal da estrutura. O modelamento de estruturas geológicas da Bacia de Marajó confirma que os efeitos do eletrojato podem ser detetados em estruturas pequenas do tipo "horst" ou "graben", a grandes distâncias do centro do mesmo. Assim, os efeitos do eletrojato podem ser percebidos tanto nos meios estratificados como tridimensionais, em duas faixas de freqüência (nas proximidades de 10^-1 Hz e para freqüências menores que 10^-3 Hz), possivelmente influenciados pela presença do embasamento cristalino e a crosta inferior, respectivamente. Desta maneira, os resultados utilizando o eletrojato como fonte indutora, mostram que nas baixas freqüências as sondagens magnetotelúricas podem ser fortemente distorcidas, tanto pelos efeitos galvânicos da estrutura tridimensional como pela presença da influência do eletrojato. Conseqüêntemente, interpretações errôneas dos dados de campo podem ser cometidas, se não se corrigirem os efeitos do eletrojato equatorial ou, da mesma forma, não se utilisarem algoritmos tridimensionais para interpretar os dados, no lugar do usual modelo unidimensional de Tikhonov - Cagniard.

Comparação dos efeitos do eletrojato equatorial nos dados magnetotelúricos bi e tridimensionais

Este trabalho trata da comparação dos efeitos do eletrojato equatorial nos dados magnetotelúricos bi e tridimensionais. Ele compõe-se fundamentalmente de duas partes: Na primeira, que consiste na comparação dos efeitos dos modelos bi e tridimensionais (linha de corrente e eletrojato gaussiano), determinamos as dimensões que deve apresentar uma estrutura tridimensional para que a resposta magnetotelúrica proveniente dessa estrutura, nas polarizações YX e XY, possa ser substituída pela resposta magnetotelúrica proveniente de uma estrutura bidimensional nos modos TE e TM respectivamente, para a resistividade aparente e fase. Os resultados mostram, para um embasamento condutivo ou resistivo, que é necessário aumentar a dimensão da estrutura tridimensional na direção principal acima de dezesseis vezes, em relação à dimensão inicial, para que a resposta magnetotelúrica proveniente dessa estrutura na polarização YX, possa ser substituída pela resposta magnetotelúrica proveniente de uma estrutura bidimensional no modo TE; no caso da polarização ser XY, essa substituição ocorrerá, no modo TM bidimensional, se aumentarmos a dimensão da estrutura tridimensional na direção principal acima de vinte e seis vezes em relação à dimensão inicial. Na segunda parte, que consiste na determinação dos efeitos do eletrojato equatorial Onwumechilliano, posicionamos a estrutura tridimensional a 10 km, 100 km, 300 km, 500 km, 1000 km e 1500 km, respectivamente, de distância do eletrojato. Dessa forma, determinamos a distância na qual os efeitos do eletrojato equatorial Onwumechilliano sobre as sondagens magnetotelúricas são praticamente desprezíveis. Verificamos que, posicionando a estrutura tridimensional a 1500 km de distância da fonte, para embasamento condutivo, o eletrojato não afeta as sondagens magnetotelúricas. Quando o embasamento é resistivo, o eletrojato afeta as sondagens magnetotelúricas, mesmo posicionando-se a estrutura tridimensional a 1500 km de distância da fonte. De um modo geral, constatamos que o eletrojato equatorial afeta as sondagens magnetotelúricas para freqüências inferiores a 10^-2 Hz, tanto na resistividade aparente quanto na fase e em ambas as polarizações, principalmente, quando o embasamento é resistivo. Observamos também que o efeito galvânico é mais pronunciado na polarização YX que na XY.

Caracterização funcional e estrutural de uma ?-glucanase GH12 de Aspergillus terreus

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Modular Hyperthermostable Bacterial Endo-beta-1, 4-Mannanase: Molecular Shape, Flexibility and Temperature-Dependent Conformational Changes

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Investigation of Human Albumin-Induced Circular Dichroism in Dansylglycine

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Análise in silico de uma pirofosfatase e de uma tiosterase de uma biblioteca metagenômica de solo de Eucalipto spp

Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária - FCAV

Increasing Doxycycline Hyclate Photostability by Complexation with beta-Cyclodextrin

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Expansão ex vivo de células uroteliais em scaffolds 3D

Malformations and possible damages to the urogenital system can be originated in the embryonic period. Moreover, fire guns, knives and accidents, where there is the disruption of the urethra, also cause these lesions. The objective was to analyze the contribution of tissue engineering in the construction of neo-urethra, developed by bioengineering. We performed an urothelial ex vivo expansion of cells in 3D scaffolds (platelet gel matrix and acellular porcine aorta) to assess the contribution of this technique in the construction of a neo-urethra. Mechanical dissociation was made of the inner wall of 10 North Folk rabbit’s bladder, weighing 2.5 to 3.0 kg. After dissociation the cell content was centrifuged and obtained a pellet of urothelial cells. The pellet was ressuspended in culture medium DMEM F12 and cells were maintained in culture for 15 days. Immunohistochemical analysis characterized the urothelial culture. The cells were then implanted in the scaffold - platelet gel. In a second experiment using aortic porcine acellular matrix were implanted urothelial cells alone and urothelial cells on platelet gel, on the inner wall of the scaffold - aorta, with space for setting bordered by a urethral probe. The complex probe - cells - aorta and probe - cells in platelet gel - aorta, were sealed with suture material and culture were maintained in a humidified 37ºC incubator with 5% CO2 in air for 12 days to subsequent histological analysis of urothelium cell adhesion to the scaffolds. By observation under an optical microscope, we could see the growth of cells in the scaffold platelet gel, from a monolayer in to a three-dimensional structure. In the acellular porcine aortic matrix containing the platelet gel, we could observe a few quantity of urothelial cells adhered. However with the acellular porcine aortic matrix in which was implanted only the urothelial cells, we have obtained adhesion to the wall

Avaliação do uso de Selante de Fibrina derivado do veneno de serpente como arcabouço biológico de células tronco mesenquimais na regeneração óssea do fêmur de ratos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Predição de sítios de ligação para a cisplatina e transplatina baseada em ligações de hidrogênio

Pós-graduação em Biofísica Molecular - IBILCE

Preparation and characterization of monomodal grapevine virus a capsid protein

Grapevine virus A (GVA), a flexible filament of approximately 800 nm in length is composed of capsid subunits that spontaneously assembles around a positive sense genomic RNA. In addition to encapsidation, plant viruses capsid proteins (CPs) participate in other processes throughout infection and GVA CP is involved in cell-to-cell translocation of the virus. A protocol was developed to obtain low-molecular weight GVA-CP that is not prone to aggregation and spontaneous assembly and this was characterized by circular dichroism and dynamic light scattering. These results indicate the suitably of GVA-CP for X-ray crystallographic and NMR studies that should lead to the elucidation of the first three-dimensional structure of a flexible filamentous virus from the Betaflexiviridae family.