Diversity of Mycosphaerella spp. and Teratosphaeria spp. in Eucalyptus globulus plantations in Brazil

Among the most important diseases affecting Eucalyptus is Mycosphaerella Leaf Disease (MLD) caused by Mycosphaerella spp. and Teratosphaeria spp. MLD has led to significant losses in eucalypt plantations in the South and Southeast Region of Brazil, as well as in several countries such as Portugal, Spain, South Africa and Australia. Symptoms of MLD include localized necrotic spots, early defoliation in juvenile plants, stem cankers, early death of branches, and in some cases, atrophy and death. In the present study, single spore isolations from leaves of E. globulus from five locations in Brazil allowed the differentiation of species of Mycosphaerella and Teratosphaeria based on ascospore germination and growth in culture. These isolates were also subjected to sequence analysis of the ribosomal RNA internal transcribed spacer regions, which allowed their identification to species level. The results of this study showed that six species of Mycosphaerella and four species of Teratosphaeria were associated with leaves showing symptoms of MLD in E. globulus plantations in various locations of Brazil. © 2013 KNPV.

Isolation, homology modeling and renal effects of a C-type natriuretic peptide from the venom of the Brazilian yellow scorpion (Tityus serrulatus)

Mammalian natriuretic peptides (NPs) have been extensively investigated for use as therapeutic agents in the treatment of cardiovascular diseases. Here, we describe the isolation, sequencing and tridimensional homology modeling of the first C-type natriuretic peptide isolated from scorpion venom. In addition, its effects on the renal function of rats and on the mRNA expression of natriuretic peptide receptors in the kidneys are delineated. Fractionation of Tityusserrulatus venom using chromatographic techniques yielded a peptide with a molecular mass of 2190.64Da, which exhibited the pattern of disulfide bridges that is characteristic of a C-type NP (TsNP, T. serrulatus Natriuretic Peptide). In the isolated perfused rat kidney assay, treatment with two concentrations of TsNP (0.03 and 0.1μg/mL) increased the perfusion pressure, glomerular filtration rate and urinary flow. After 60min of treatment at both concentrations, the percentages of sodium, potassium and chloride transport were decreased, and the urinary cGMP concentration was elevated. Natriuretic peptide receptor-A (NPR-A) mRNA expression was down regulated in the kidneys treated with both concentrations of TsNP, whereas NPR-B, NPR-C and CG-C mRNAs were up regulated at the 0.1μg/mL concentration. In conclusion, this work describes the isolation and modeling of the first natriuretic peptide isolated from scorpion venom. In addition, examinations of the renal actions of TsNP indicate that its effects may be related to the activation of NPR-B, NPR-C and GC-C. © 2013 Elsevier Ltd.

Identificação de marcadores moleculares de resposta à quimioterapia neoadjuvante e associação de radioterapia e quimioterapia em pacientes com carcinoma epidermóide de orofaringe

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Caracterização molecular e bioquímica de uma esterase macho-específica em Zaprionus indianus

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Diferenças moleculares entre citótipos de Mazama americana (Artiodactyla: Cervidae)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Análise por sequências multilocus de Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação da agressividade e caracterização genética de linhagens de Ralstonia Solanacearum isoladas de diferentes plantas hospedeiras

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Variabilidade genética de Fusarium spp. isolados de solos e de bananeiras com sintomas do Mal-do-Panamá

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Acidovorax citruli: genetic analyses and protocol for its detection in seeds

Bacterial fruit blotch of cucurbits (BFB), caused by the seed borne Gramnegative bacterium Acidovorax citrulli is a serious threat to cucurbit industry worldwide. Since late 1980`s after devastating outbreaks in watermelon fields in southern United States, BFB has spread worldwide and has been reported in other cucurbit crops such as melon, pumpkin, cucumber and squash. To date, there is evidence for the existence of at least two genetically and pathogenically distinct populations of A. citrulli. In Brazil, the first report of BFB was in 1991, in a watermelon field in São Paulo. Although widespread in the country, BFB has been a major problem to melon production. More precisely, BFB has caused significant yield losses to melon production in northeastern Brazil, which concentrates > 90% of the country`s melon production. Despite the management efforts and the recent advances in A. citrulli research, BFB is still a continuous threat to the cucurbit industry, including seed producers, growers and transplant nurseries. To better understand the population structure of A. citrulli strains in Brazil, and to provide a basis for the integrated management of BFB, we used pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence analysis (MLSA) of housekeeping and virulence-associated genes and pathogenicity tests on different cucurbit seedlings to characterize a Brazilian population of A. citrulli strains from different hosts and regions. Additionally, we conducted for the first time a comparative analysis of the A. citrulli group I and II population at genomic level and showed that these two groups differ on their genome sizes due to the presence of eight DNA segments, which are present in group II and absent in group I genomes. We also provide the first evidence to suggest that temperature might be a driver in the ecological adaptation of A. citrulli populations under nutrient-rich or -depleted conditions. Finally, in order to improve the routine detection of A. citrulli on melon seedlots, we designed a new primer set that is able to detect the different Brazilian haplotypes, thus minimizing the risk of false-negatives on PCR-based seed health testing.

Diferenciação entre os estágios agudo e crônico na infecção toxoplásmica pelo método de aglutinação direta modificado e pesquisa do agente no leite de ovelhas naturalmente infectadas por Toxoplasma gondii

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Atividade anti-leishmania e imunomodulatória in vitro da melitina natural na infecção experimental por Leishmania (L.) infantum chagasi

Pós-graduação em Doenças Tropicais - FMB

Dinâmica populacional de minicírculos de cinetoplastos em Leishmania infantum chagasi

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Isolamento, caracterização e expressão em sistema bacteriano de um gene que codifica uma proteína transportadora de lipídeos de Piper nigrum

A pimenteira-do-reino (Piper nigrum L.) constitui uma das espécies de pimenta mais amplamente utilizadas no mundo, pertencendo à família Piperaceae, a qual compreende cerca de 1400 espécies distribuídas principalmente no continente americano e sudeste da Ásia, onde esta cultura originou. A pimenteira-do-reino foi introduzida no Brasil no século XVII, e tornou-se uma cultura de importância econômica desde 1933. O Estado do Pará é o principal produto brasileiro de pimenta-do-reino, contudo sua produção vem sendo afetada pela doença fusariose causada pelo fungo Fusarium solani f. sp. piperis. Estudos prévios revelaram a identificação de sequencias de cDNA diferencialmente expressas durante a interação da pimenteira-do-reino com o F. solani f. sp. piperis. Entre elas, uma sequencia de cDNA parcial que codifica para uma proteína transportadora de lipídeos (LTP), a qual é conhecida por seu importante papel na defesa de plantas contra patógenos e insetos. Desta forma, o objetivo principal deste trabalho foi isolar e caracterizar as sequencias de cDNA e genômica de uma LTP de pimenteira-do-reino, denominada PnLTP. O cDNA completo da PnLTP isolado por meio de experimentos de RACE apresentou 621 bp com 32 pb and 235 bp nas regiões não traduzidas 5‘ e 3‘, respectivamente. Este cDNA contem uma ORF de 354 bp codificando uma proteína deduzida de 117 resíduos de aminoácidos que apresentou alta identidade com LTPs de outras espécies vegetais. Análises das sequencias revelou que a PnLTP contem um potencial peptídeo sinal na extremidade amino-terminal e oito resíduos de cisteína preditos por formar quatro pontes de dissulfeto, as quais poderiam contribuir para a estabilidade desta proteína. O alinhamento entre as sequencias de cDNA e genômica revelou a ausência de introns na região codificante do gene PnLTP, o que está de acordo ao encontrado em outros genes de LTPs de plantas. Por último, a PnLTP madura foi expressa em sistema bacteriano. Experimentos adicionais serão realizados com o objetivo de avaliar a habilidade da PnLTP recombinante em inibir o crescimento do F. solani f. sp. piperis.

Detecção laboratorial de Chlamydia trachomatis em escolares da rede pública do estado do Pará com diagnóstico clínico de tracoma

O tracoma como principal causa de cegueira prevenível no mundo, é uma doença negligenciada relacionada a baixas condições socioeconômicas e locais sem saneamento básico. Presente principalmente nos países subdesenvolvidos traz grandes prejuízos aos cofres públicos com a perda de produtividade e a deficiência visual. Com a criação da Aliança para Eliminação Global de Tracoma em 1997 (GET2020), o Estado do Pará, com apoio do Ministério da Saúde do Brasil, realizaram em 2006 o inquérito epidemiológico do tracoma em escolares de 1ª a 4ª série da rede oficial de ensino, nos municípios com índice de desenvolvimento humano inferior a média nacional, para conhecer a prevalência da doença. Os dados obtidos no inquérito comprovaram que a doença não foi erradicada, revelando 35 municípios paraenses prioritários e prevalências acima de 5%. Uma sub-amostra da conjuntiva de escolares clinicamente positivos foi coletada para a confirmação diagnóstica por Imunofluorescência direta (IFD). O presente estudo utilizou 52 amostras crio conservadas obtidas durante o inquérito, para serem analisadas pelos métodos de IFD e de biologia molecular, na identificação laboratorial da Chlamydia trachomatis. Foram encontradas as frequências de 26,92% (14/52) e 49% (24/49) de resultados positivos pelas técnicas de IFD e reação em cadeia da polimerase (nested-PCR), respectivamente. Considerando as 49 amostras analisadas pelas duas metodologias, as sensibilidades para a detecção do agente etiológico, por IFD e PCR foram de 28,57% (14/49) e 48,98% (24/49), respectivamente (p = 0,0127). As duas técnicas juntas confirmaram a infecção em 57,14% (n=28) das amostras, onde 50% (n=14) foram positivas apenas pela PCR, 35,72% (n=10) para ambas as técnicas e 14,28% (n=4) somente pela IFD. A análise de sete sequências nucleotídicas demonstrou homologia para isolados de C. trachomatis genótipo L1. Este estudo é pioneiro no Brasil, pois além de confirmar a presença de C. trachomatis em amostras oculares de escolares clínicamente positivos para tracoma, validou protocolo de obtenção de DNA a partir de lâminas de IFD crioconservadas, demonstrou a maior sensibilidade do método molecular frente à IFD e identificou o genótipo L1 presente nas amostras.

Caracterização genética de micobactérias não tuberculosas isoladas de espécimes clínicos pulmonares no estado do Pará

Nos últimos anos tem sido observado um aumento de relatos de infecções causadas por micobactérias não tuberculosas (MNT). No entanto, dados sobre frequência e espécies envolvidas em infecções pulmonares no Brasil são limitados, principalmente em estados da Região Norte do Brasil. O conhecimento das espécies de MNT associadas às infecções pulmonares tem importância clínica e epidemiológica, sendo as técnicas moleculares ferramentas capazes de oferecer um diagnóstico espécie-específico, o qual é necessário para a instituição de terapia adequada. O presente trabalho descreve a diversidade de MNT isoladas de espécimes pulmonares encaminhados ao Instituto Evandro Chagas entre 1999 e 2011 para pesquisa de micobactérias. As MNT foram inicialmente caracterizadas por PCR-restriction analysis (PRA-hsp65) e reidentificadas por sequenciamento dos genes RNAr 16S, hsp65, rpoB e região ITS1. De acordo com os achados, o método de PRA-hsp65 mostrou-se uma ferramenta prática para identificação MNT, permitindo a distinção de uma grande variedade de espécies de forma rápida, simples e barata, em comparação com o sequenciamento. Além disso, como sugerido no presente estudo, de acordo com a diversidade de espécies local, este método pode ser passível de modificações para proporcionar maior poder discriminatório. Para isolados do complexo Mycobacterium avium (MAC), a aplicação da análise de sequência do gene rpoB não se mostrou como alternativa adequada para discriminação de isolados do Estado do Pará, gerando resultados discrepantes com baixa resolução taxonômica. Um espectro particular de MNT foi associado aos casos de infecção pulmonar na região, representado principalmente por espécies dos complexos M. chelonae-M. abscessus (M. abscessus, M. massiliense e M. bolletii), M. avium (M. avium, M. intracellulare e M. colombiense) e M. simiae (M. simiae e taxa não nomeados). Dentre esse último, duas potenciais espécies foram detectadas, M. paraensis sp. nov. e M. amazoniensis sp. nov., sendo propostas como novos membros do complexo M. simiae. Entre os indivíduos afetados, as principais características encontradas foram sexo feminino, a idade superior a 50 anos, etnia parda e história de infecção prévia por tuberculose. Embora este estudo não demonstre a real magnitude de infecções pulmonares por MNT no Estado do Pará, ele descreve a diversidade de espécies e claramente retrata a importância desse grupo na região, chegando a representar 13,5% dos isolamentos micobacterianos em um laboratório de referência. Conjuntamente a esse achado, a identificação de casos de MNT em indivíduos presuntivamente diagnosticados com TB, indica a necessidade de confirmação bacteriológica, especialmente nos casos de resistência primária ao esquema básico da tuberculose.