The mechanism of action of a novel benzo[c]phenanthridine alkaloid, NK314 and the cellular responses

NK314 is a novel synthetic benzo[c]phenanthridine alkaloid that is currently in clinical trials as an antitumor compound, based on impressive activities in preclinical models. However, its mechanism of action is unknown. The present investigations were directed at determining the mechanism of action of this agent and cellular responses to NK314. My studies demonstrated that NK314 intercalated into DNA, trapped topoisomerase IIα in its cleavage complex intermediate, and inhibited the ability of topoisomerase IIα to relax super-coiled DNA. CEM/VM1 cells, which are resistant to etoposide due to mutations in topoisomerase IIα, were cross-resistant to NK314. However, CEM/C2 cells, which are resistant to camptothecin due to mutations in topoisomerase I, retained sensitivity. This indicates topoisomerase IIα is the target of NK314 in the cells. NK314 caused phosphorylation of the histone variant, H2AX, which is considered a marker of DNA double-strand breaks. DNA double-strand breaks were also evidenced by pulsed-field gel electrophoresis and visualized as chromosomal aberrations after cells were treated with NK314 and arrested in mitosis. Cell cycle checkpoints are activated following DNA damage. NK314 induced significant G2 cell cycle arrest in several cell lines, independent of p53 status, suggesting the existence of a common mechanism of checkpoint activation. The Chk1-Cdc25C-Cdk1 G2 checkpoint pathway was activated in response to NK314, which can be abrogated by the Chk1 inhibitor UCN-01. Cell cycle checkpoint activation may be a defensive mechanism that provides time for DNA repair. DNA double-strand breaks are repaired either through ATM-mediated homologous recombination or DNA-PK-mediated non-homologous end-joining repair pathways. Clonogenic assays demonstrated a significant decrease of colony formation in both ATM deficient and DNA-PK deficient cells compared to ATM repleted and DNA-PK wild type cells respectively, indicating that both ATM and DNA-PK play important roles in the survival of the cells in response to NK314. The DNA-PK specific inhibitor NU7441 also significantly sensitized cells to NK314. In conclusion, the major mechanism of NK314 is to intercalate into DNA, trap and inhibit topoisomerase IIα, an action that leads to the generation of double-strand DNA breaks, which activate ATM and DNA-PK mediated DNA repair pathways and Chk1 mediated G2 checkpoint pathway. ^

Involvement of HMGB1 in the repair of DNA adducts and the responses to DNA damage in mammalian cells

High mobility group protein B1 (HMGB1) is a multifunctional protein with roles in chromatin structure, transcription, V(D)J recombination, and inflammation. HMGB1 also binds to and bends damaged DNA, but the biological consequence of this interaction is not clearly understood. We have shown previously that HMGB1 binds cooperatively with nucleotide excision repair (NER) damage recognition proteins XPA and RPA to triplex-directed psoralen DNA interstrand crosslinks (ICLs). Based on this we hypothesized that HMGB1 is enhancing the repair of DNA lesions, and through this role, is affecting DNA damage-induced mutagenesis and cell survival. Because HMGB1 is also a chromatin protein, we further hypothesized that it is acting to facilitate chromatin remodeling at the site of the DNA damage, to allow access of the repair machinery to the DNA lesion. We demonstrated here that HMGB1 could bind to triplex-directed psoralen ICLs in a complex with NER proteins XPC-RAD23B, XPA and RPA, which occurred in the presence or absence of DNA. Supporting these findings, we demonstrated that HMGB1 enhanced repair of triplex-directed psoralen ICLs (by nucleotide incorporation), as well as removal of UVC irradiation-induced DNA lesions from the genome (by radioimmunoassay). We also explored HMGB1's role in chromatin remodeling upon DNA damage. Immunoblotting demonstrated that, in contrast to HMGB1 proficient cells, cells lacking HMGB1 showed no increase in histone acetylation after UVC irradiation. Additionally, purified HMGB1 protein enhanced chromatin formation in an in vitro chromatin assembly system. However, HMGB1 also has a role in DNA repair in the absence of chromatin, as shown by measuring UVC-induced nucleotide incorporation on a naked substrate. Upon exploration of HMGB1's effect on several cellular outcomes of DNA damage, we found that mammalian cells lacking HMGB1 were hypersensitive to DNA damage induced by psoralen plus UVA irradiation or UVC radiation, showing less survival and increased mutagenesis. These results reveal a new role for HMGB1 in the error-free repair of DNA lesions in a chromosomal context. As strategies targeting HMGB1 are currently in development for treatment of sepsis and rheumatoid arthritis, our findings draw attention to potential adverse side effects of anti-HMGB1 therapy in patients with inflammatory diseases. ^

ETIOLOGIC AND CLINICAL FACTORS WHICH DIFFERENTIATE PATIENTS WITH CHROMOSOMAL ABNORMALITIES FROM DIPLOID PATIENTS IN ACUTE NONLYMPHOCYTIC LEUKEMIA

Tumor-specific chromosomal abnormalities have been demonstrated in bone marrow of approximately 50% of newly diagnosed acute nonlymphocytic (ANLL) patients. This study examined two hypotheses: (1) Aneuploid (AA) patients are diagnosed later in the course of their disease than diploid (NN) patients; and (2) AA patients are more likely to have been exposed to environmental agents. Of 324 patients eligible for study, environmental exposure data were obtained for 236 (73%) of them. No evidence was found to suggest that AA patients had more advanced disease than NN patients. Aneuploid patients were more likely than NN patients to: (a) report treatment with cytotoxic drugs for a prior medical condition (odds ratio, adjusted for age, sex and other exposures (OR) = 4.25, 95% confidence intervals, 1.38 to 13.17); (b) smoke cigarettes, OR = 1.82 (1.02, 3.26) and (c) drink alcoholic beverages, OR = 1.91 (1.05, 3.48). No statistically significant associations between aneuploidy and occupational exposures were present, OR = 3.59 (0.76, 17.13). Problems in interpreting these ORs are discussed. ^

Herramientas para el análisis político del plano extra-lingüístico del discurso desde la perspectiva de Ernesto Laclau

La teoría del discurso de Ernesto Laclau ha relegado notablemente el análisis y la reflexividad acerca del componente extra-lingüístico del discurso, en desmedro de los factores lingüísticos. Sin embargo, existe una pluralidad de fragmentos de los textos laclonianos que destacan su importancia en los procesos políticos. El presente trabajo toma como base estas contribuciones para analizar esta dimensión central de los procesos de construcción de hegemonías. Integrando la perspectiva de Laclau con una serie de categorías provenientes del psicoanálisis lacaniano y la teoría social contemporánea de Giddens y Habermas, se busca aportar algunas herramientas teórico-metodológicas que permitan examinar de forma rigurosa las relaciones entre el plano lingüístico y extra-lingüístico del discurso, desde el análisis político del discurso. Cuatro son las tesis que guían este trabajo. En primer lugar, que lo discursivo extra-lingüístico, pese a que adquiere significación desde y a través del orden simbólico, debe ser distinguido analíticamente del orden lingüístico. En segundo término, que existen diferentes ejes de análisis dentro del plano no lingüístico del discurso. Tercero, que entre el plano de lo lingüístico y el plano de lo extra-lingüístico se establece una compleja relación dialéctica, en los procesos políticos, que incluye tanto factores racionales como irracionales. Finalmente, que esta relación dialéctica permite relegitimar y fortalecer, o bien deslegitimar y poner en cuestión, determinado orden hegemónico, o con pretensiones de hegemonizar el espacio social. De este modo, el análisis político de estas relaciones permite examinar el grado de eficacia interpelativa de determinada hegemonía

Variação e mudança no português da amazônia : Uma análise do marcador pragmático extra-cláusula tá no falar santareno (Estado do Pará)

Este trabalho é orientado pela vertente funcionalista da linguagem, que estuda a estrutura linguística associada a fatores comunicativos. Nosso objetivo é identificar e analisar a multifuncionalidade do marcador pragmático extra-cláusula tá na comunidade de fala do município de Santarém, localizado a oeste do estado do Pará (PA). Considerando o processo de gramaticalizaçao, compreendido como o processo de mudança linguística pelo qual um item e/ou construçao lexical torna se gramatical ou um item e/ou construçao gramatical torna-se ainda mais gramatical (Hopper & Traugott,1993), apresentamos os diferentes usos do verbo estar, isto é, a coocorrência de seus usos como verbo lexical (estar, como em Ele está em casa), verbo funcional (como em Ele está cansado), verbo auxiliar (estar + Vndo, como em Ele está escrevendo) e como marcador pragmático (tá, como em vou descrever agora a sala, tá?). Etimologicamente, o verbo estar resulta da forma latina stare, cujo significado indicava localizaçao física no espaço era empregada com sentido locativo. Após investigaçao preliminar dos usos dessa forma, levantamos a hipótese de que o verbo ESTAR sofre o processo de gramaticalizaçao o que explica os diferentes usos do verbo e a migraçao do item TA para a categoria dos marcadores pragmáticos extra cláusulas (Dik, 1997; Hengeveld E Mackenzie,2008). Entendemos por marcadores pragmáticos extra cláusulas expressoes que nao podem ser analisadas nem como cláusulas nem como fragmentos de cláusula. Os resultados confirmam nossa hipótese e apontam que o marcador TA desempenha as seguintes funçoes: de afirmaçao, de iniciador de tópico, de finalizador, de sequenciador e de checador. Como nossa abordagem é funcionalista, valemo-nos de dados reais da língua, constituímos um corpus de ocorrência do item em causa, extraído de textos do tipo Narrativa de Experiência Pessoal e Descriçao de Local que constituem o Corpus de Textos Orais do Português Santareno - CTOPS organizado por Pena-Ferreira e Lima-Gomes (2010)

Herramientas para el análisis político del plano extra-lingüístico del discurso desde la perspectiva de Ernesto Laclau

La teoría del discurso de Ernesto Laclau ha relegado notablemente el análisis y la reflexividad acerca del componente extra-lingüístico del discurso, en desmedro de los factores lingüísticos. Sin embargo, existe una pluralidad de fragmentos de los textos laclonianos que destacan su importancia en los procesos políticos. El presente trabajo toma como base estas contribuciones para analizar esta dimensión central de los procesos de construcción de hegemonías. Integrando la perspectiva de Laclau con una serie de categorías provenientes del psicoanálisis lacaniano y la teoría social contemporánea de Giddens y Habermas, se busca aportar algunas herramientas teórico-metodológicas que permitan examinar de forma rigurosa las relaciones entre el plano lingüístico y extra-lingüístico del discurso, desde el análisis político del discurso. Cuatro son las tesis que guían este trabajo. En primer lugar, que lo discursivo extra-lingüístico, pese a que adquiere significación desde y a través del orden simbólico, debe ser distinguido analíticamente del orden lingüístico. En segundo término, que existen diferentes ejes de análisis dentro del plano no lingüístico del discurso. Tercero, que entre el plano de lo lingüístico y el plano de lo extra-lingüístico se establece una compleja relación dialéctica, en los procesos políticos, que incluye tanto factores racionales como irracionales. Finalmente, que esta relación dialéctica permite relegitimar y fortalecer, o bien deslegitimar y poner en cuestión, determinado orden hegemónico, o con pretensiones de hegemonizar el espacio social. De este modo, el análisis político de estas relaciones permite examinar el grado de eficacia interpelativa de determinada hegemonía

Variação e mudança no português da amazônia : Uma análise do marcador pragmático extra-cláusula tá no falar santareno (Estado do Pará)

Este trabalho é orientado pela vertente funcionalista da linguagem, que estuda a estrutura linguística associada a fatores comunicativos. Nosso objetivo é identificar e analisar a multifuncionalidade do marcador pragmático extra-cláusula tá na comunidade de fala do município de Santarém, localizado a oeste do estado do Pará (PA). Considerando o processo de gramaticalizaçao, compreendido como o processo de mudança linguística pelo qual um item e/ou construçao lexical torna se gramatical ou um item e/ou construçao gramatical torna-se ainda mais gramatical (Hopper & Traugott,1993), apresentamos os diferentes usos do verbo estar, isto é, a coocorrência de seus usos como verbo lexical (estar, como em Ele está em casa), verbo funcional (como em Ele está cansado), verbo auxiliar (estar + Vndo, como em Ele está escrevendo) e como marcador pragmático (tá, como em vou descrever agora a sala, tá?). Etimologicamente, o verbo estar resulta da forma latina stare, cujo significado indicava localizaçao física no espaço era empregada com sentido locativo. Após investigaçao preliminar dos usos dessa forma, levantamos a hipótese de que o verbo ESTAR sofre o processo de gramaticalizaçao o que explica os diferentes usos do verbo e a migraçao do item TA para a categoria dos marcadores pragmáticos extra cláusulas (Dik, 1997; Hengeveld E Mackenzie,2008). Entendemos por marcadores pragmáticos extra cláusulas expressoes que nao podem ser analisadas nem como cláusulas nem como fragmentos de cláusula. Os resultados confirmam nossa hipótese e apontam que o marcador TA desempenha as seguintes funçoes: de afirmaçao, de iniciador de tópico, de finalizador, de sequenciador e de checador. Como nossa abordagem é funcionalista, valemo-nos de dados reais da língua, constituímos um corpus de ocorrência do item em causa, extraído de textos do tipo Narrativa de Experiência Pessoal e Descriçao de Local que constituem o Corpus de Textos Orais do Português Santareno - CTOPS organizado por Pena-Ferreira e Lima-Gomes (2010)

Variação e mudança no português da amazônia : Uma análise do marcador pragmático extra-cláusula tá no falar santareno (Estado do Pará)

Este trabalho é orientado pela vertente funcionalista da linguagem, que estuda a estrutura linguística associada a fatores comunicativos. Nosso objetivo é identificar e analisar a multifuncionalidade do marcador pragmático extra-cláusula tá na comunidade de fala do município de Santarém, localizado a oeste do estado do Pará (PA). Considerando o processo de gramaticalizaçao, compreendido como o processo de mudança linguística pelo qual um item e/ou construçao lexical torna se gramatical ou um item e/ou construçao gramatical torna-se ainda mais gramatical (Hopper & Traugott,1993), apresentamos os diferentes usos do verbo estar, isto é, a coocorrência de seus usos como verbo lexical (estar, como em Ele está em casa), verbo funcional (como em Ele está cansado), verbo auxiliar (estar + Vndo, como em Ele está escrevendo) e como marcador pragmático (tá, como em vou descrever agora a sala, tá?). Etimologicamente, o verbo estar resulta da forma latina stare, cujo significado indicava localizaçao física no espaço era empregada com sentido locativo. Após investigaçao preliminar dos usos dessa forma, levantamos a hipótese de que o verbo ESTAR sofre o processo de gramaticalizaçao o que explica os diferentes usos do verbo e a migraçao do item TA para a categoria dos marcadores pragmáticos extra cláusulas (Dik, 1997; Hengeveld E Mackenzie,2008). Entendemos por marcadores pragmáticos extra cláusulas expressoes que nao podem ser analisadas nem como cláusulas nem como fragmentos de cláusula. Os resultados confirmam nossa hipótese e apontam que o marcador TA desempenha as seguintes funçoes: de afirmaçao, de iniciador de tópico, de finalizador, de sequenciador e de checador. Como nossa abordagem é funcionalista, valemo-nos de dados reais da língua, constituímos um corpus de ocorrência do item em causa, extraído de textos do tipo Narrativa de Experiência Pessoal e Descriçao de Local que constituem o Corpus de Textos Orais do Português Santareno - CTOPS organizado por Pena-Ferreira e Lima-Gomes (2010)

Herramientas para el análisis político del plano extra-lingüístico del discurso desde la perspectiva de Ernesto Laclau

La teoría del discurso de Ernesto Laclau ha relegado notablemente el análisis y la reflexividad acerca del componente extra-lingüístico del discurso, en desmedro de los factores lingüísticos. Sin embargo, existe una pluralidad de fragmentos de los textos laclonianos que destacan su importancia en los procesos políticos. El presente trabajo toma como base estas contribuciones para analizar esta dimensión central de los procesos de construcción de hegemonías. Integrando la perspectiva de Laclau con una serie de categorías provenientes del psicoanálisis lacaniano y la teoría social contemporánea de Giddens y Habermas, se busca aportar algunas herramientas teórico-metodológicas que permitan examinar de forma rigurosa las relaciones entre el plano lingüístico y extra-lingüístico del discurso, desde el análisis político del discurso. Cuatro son las tesis que guían este trabajo. En primer lugar, que lo discursivo extra-lingüístico, pese a que adquiere significación desde y a través del orden simbólico, debe ser distinguido analíticamente del orden lingüístico. En segundo término, que existen diferentes ejes de análisis dentro del plano no lingüístico del discurso. Tercero, que entre el plano de lo lingüístico y el plano de lo extra-lingüístico se establece una compleja relación dialéctica, en los procesos políticos, que incluye tanto factores racionales como irracionales. Finalmente, que esta relación dialéctica permite relegitimar y fortalecer, o bien deslegitimar y poner en cuestión, determinado orden hegemónico, o con pretensiones de hegemonizar el espacio social. De este modo, el análisis político de estas relaciones permite examinar el grado de eficacia interpelativa de determinada hegemonía