Freq����ncia do parvov��rus su��no em fetos mumificados, abortados e natimortos detectado atrav��s da rea����o em cadeia pela polimerase (PCR)

Porcine parvovirus (PPV) is associated with reproductive failure and it has been found worldwide, including Brazil. Many diagnostic procedures are used for its detection, for example, immunofluorescence, HA, HI and PCR and this is an important technique because it is very specific and sensitive. In this work, the presence of PPV in fetuses from swine farms with reproductive problems was detected by PCR. All of 170 samples from aborted fetuses, mummies or stillborns were sampled by PCR with primers designed to VP2 region of PPV and c-myc (endogenous control). Only 142 samples (83,53%) were positive for c-myc and among them six samples (4,22%) were positive for PPV which were tested in HA. In this test, erythrocytes suspension 1% was used and three samples (50%) agglutinated but they presented low titer (4). For this work, porcine parvovirus was detected in the samples analyzed by PCR and HA. It is important to emphasize the use of endogenous control when material with elevated degree of autolysis is examined

Perfil sanit��rio e pesquisa de Salmonella em frangos e ling��i��as pela metodologia tradicional e pela PCR

Novos h��bitos alimentares da popula����o e as mudan��as nos sistemas de produ����o e distribui����o dos alimentos podem estar fortemente relacionados aos casos de doen��as transmitidas pelo consumo de alimentos contaminados por microorganismos. Isso faz com que a preocupa����o com a qualidade microbiol��gica dos alimentos aumente mundialmente. Dentre os principais pat��genos, destaca-se a Salmonella sp, que pertence �� microbiota gatrentestinal de animais silvestres e de animais dom��sticos criados para o consumo humano (aves, bovinos e su��nos). Este fato torna o problema de grande relev��ncia para as autoridades de sa��de p��blica, pois esses microrganismos podem estar associados ��s infec����es ou surtos provocados pela ingest��o de alimentos contaminados. Foram coletadas 35 amostras de ling��i��as e 25 cortes de frango, nos principais supermercados do munic��pio de Botucatu-SP e avaliados quanto �� qualidade higi��nico-sanit��ria atrav��s da determina����o do n��mero mais prov��vel de coliformes termotolerantes (CT), al��m da presen��a de Salmonella sp. Os resultados obtidos mostram que 31% das ling��i��as e 84% das amostras de frango estavam fora dos padr��es higi��nico-sanit��rios estabelecido pela ANVISA (RDC n�� 12), que determina uma quantidade m��xima de 5x103 CT/g em ling��i��a e 104 /g em carne de aves. Em rela����o �� Salmonella sp, estabeleceu-se a aus��ncia dessa bact��ria em 25g de ling��i��a e n��o determina nenhum par��metro para o frango. Entre as 25 amostras de frango analisadas, duas (8%) foram positivas pela metodologia tradicional. Esse... (Resumo completo, clicar acesso eletr��nico abaixo)

Compara����o da sensibilidade da t��cnica parasitol��gica (OPG) e da PCR para o diagn��stico de Strongyloides venezuelensis em fezes de ratos (Rattus norvegicus) da linhagem Lewis infectados experimentalmente

Esp��cies do g��nero Strongyloides s��o importantes parasitas de humanos e animais dom��sticos e aquelas que parasitam roedores s��o freq��entemente utilizadas como modelos experimentais para o estudo da estrongiloid��ase. S. venezuelensis parasita ratos (Rattus norvegicus) e seu estudo tem permitido o entendimento de mecanismos imunol��gicos envolvidos na rela����o parasita���hospedeiro da estrongiloid��ase humana e animal. O diagn��stico parasitol��gico de S. venezuelensis pode ser realizado pela detec����o de ovos embrionados nas fezes, com o uso do OPG (ovos por grama de fezes), tamb��m empregado no monitoramento da infec����o. Entretanto, essa t��cnica se mostra pouco sens��vel quando a carga parasit��ria �� leve. Os m��todos moleculares aumentam a sensibilidade e a especificidade das an��lises. A PCR tem se mostrado como uma t��cnica sens��vel e precisa na detec����o de parasitas em tecidos e fezes de hospedeiros infectados. A fim de comparar a sensibilidade das t��cnicas de OPG e PCR em ratos Lewis infectados por S. venezuelensis, foram realizados dois protocolos no presente estudo. No Protocolo I foi comparada a sensibilidade das duas t��cnicas em amostras de ratos Lewis com diferentes cargas parasit��rias. A PCR com o emprego par de primers descrito por Dorris et al. (2002) obteve melhores resultados que o OPG nos grupos inoculados com 40 L3, considerada como infec����o leve. Entretanto, n��o foi verificada diferen��a estat��stica significativa entre as t��cnicas (P>0,05), provavelmente por terem sido utilizados poucos animais (n=10). O outro par de primers utilizado foi desenhado a partir de uma seq����ncia parcial do gene do rDNA de S. venezuelensis e n��o foi capaz de detectar a presen��a do DNA do helminto em nenhuma amostra desse grupo. J�� nos grupos inoculados com 400 e 4000 L3, tanto a PCR com...(Resumo completo, clicar acesso eletr��nico abaixo)

Metodologia Microbiol��gica Convencional e Rea����o em Cadeia pela Polimerase (PCR) na detec����o de Salmonella spp em carca��as de frango

Salmonella is the etiological agent responsible for one of the most important Food Borne Disease (FBD), Salmonellosis, which generates significant economic consequences in several countries, including Brazil. Poultry meat is one of the most important disseminators of the pathogen. Accordingly, several countries have developed programs trying to reduce the prevalence of Salmonella in poultry meat. Such programs are based on the research of the pathogen in the carcasses, establishing a maximum limit of positive samples at each set of analysis. The Salmonella scans are usually made using the conventional microbiological methods, which tend to be expensive and time consuming. In recent years were developed rapid methods such as polymerase chain reaction (PCR), which can greatly shorten the results time, showing greater sensitivity and specificity than conventional methodology

Clonagem de sequ��ncias codificantes de citocinas felinas para constru����o de curva padr��o para PCR em tempo real

A quantifica����o de citocinas felinas possibilita uma avalia����o do sistema imune do animal em diferentes doen��as, permite tamb��m a identifica����o de diferentes fatores que alteram sua secre����o, e colabora na compreens��o da patog��nese das enfermidades. Em humanos e camundongos essa mensura����o �� feita principalmente pelo m��todo de ELISA, mas para os felinos h�� uma menor disponibilidade de kits espec��ficos para determinadas citocinas, e estes possuem um custo elevado. Assim, uma alternativa �� utilizar a rea����o de PCR em tempo real com transcri����o reversa (RT-qPCR) para quantifica����o absoluta dos RNAs mensageiros das citocinas felinas, uma t��cnica bastante sens��vel e espec��fica para analisar a express��o desses genes. Com esse intuito, esse trabalho teve como objetivo clonar as sequ��ncias g��nicas codificantes de citocinas, para construir uma curva padr��o para a qPCR. Assim, foi feita extra����o de RNA de amostras de sangue total de gatos dom��sticos, e estes foram tratados com DNAse para evitar contamina����o por DNA gen��mico. O cDNA foi sintetizado, e amplificado com os primers espec��ficos para cada fragmento codificante de citocina e o GAPDH felino. Cada amplicon purificado foi inserido em um plasm��deo comercial, e introduzido em bact��rias E. coli cepa DH5���. Os clones recombinantes foram sequenciados para confirmar a inser����o do fragmento no vetor. As curvas padr��o da qPCR foram constru��das com cada plasm��deo recombinante numa de 106 a 101 c��pias por rea����o. O sequenciamento mostrou que todos os clones eram semelhantes ��queles encontrados no GenBank. A efici��ncia das amplifica����es, baseado no slope das curvas padr��o foram: 101,3% para GAPDH, 99,1% para IL-1, 83,2% para IL-6, 94,4% para IL-10, 105,5% para IL-12, 83,4% para IFN-��� e 83,8% para TNF-. O valor de r2 foi de 0,99 em todas as rea����es. Dessa forma, com a clonagem dos fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletr��nico abaixo)

Padroniza����o da t��cnica de PCR em tempo-real na avalia����o da pluripot��ncia de c��lulas-tronco mesequimais caninas

Este relat��rio final tem como objetivo apresentar as atividades desenvolvidas no per��odo de janeiro/2009 a mar��o/2010, pela aluna Thaila Isabel Wodewotzky, relativas ao projeto de conclus��o de curso intitulado ���Padroniza����o da T��cnica de PCR em tempo-real na Avalia����o da Pluripot��ncia de C��lulas-tronco Mesenquimais Caninas���, para fins de obten����o do t��tulo de Bacharel em Ci��ncias Biol��gicas. O referido projeto objetiva avaliar a quantifica����o e relev��ncia dos n��veis de express��o g��nica do fator de transcri����o Oct4 em CTM��s, por meio da padroniza����o da t��cnica de PCR em tempo-real. Para tanto, o RNA total das CTM��s obtidas, isoladas e cultivadas a partir da medula ��ssea de c��es foi extra��do a partir da medula ��ssea de c��es a fim de avaliar a quantifica����o e relev��ncia dos n��veis de express��o g��nica do Oct4 por meio da utiliza����o da t��cnica de PCR em tempo-real com transcri����o reversa (RT-qPCR). O RNA total foi extra��do e submetido �� rea����o de transcriptase reversa, para a obten����o do cDNA. Posteriormente esse cDNA foi utilizado na padroniza����o da t��cnica de qPCR utilizando primers desenhados a partir de sequ��ncias obtidas no genebank. . Como normalizador utilizou-se o RNA codificante de GAPDH.Verificou-se desempenho satisfat��rio dos primers para Otc4 na avalia����o de CTM��s de c��es. Tamb��m o RNAm do GAPDH foi adequado como normalizador. Dessa forma, esse sistema pode ser utilizado na realiza����o de testes quantitativos utilizando amostras de c��lulas-tronco embrion��rias caninas

Aplica����o de conjugado de microesferas de poliestireno para preparo de RNA no diagn��stico da cinomose canina por RT-qPCR

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Pat��genos periodontais: compara����o entre cultura bacteriana e PCR em tempo real para teste diagn��stico

The correct distinguishment of microorganisms involved in the periodontal disease pathogen, it is important in the understanding of its progression and adequate treatment planning. Considering this fact, some molecular methods of identification and quantification were developed and are extremely sensitive and precise in the characterization of different bacteria species. The present study aimed to realize a literature review, including studies that realized a comparative analysis between bacterial culture and real time PCR methods in the identification of pathogens. The bacterial culture method can possibly identify new microorganisms and realize antibiotics sensitivity tests. The real time PCR is a microbiologic test that identifies and quantifies bacterial species, through gene amplification of predetermined DNA fragments, with high sensitivity and specificity, and need a shorter operation time of the operator when compared to the bacterial culture method. In this way, to determine a specific diagnostic test, should be considered not only its precision in the identification of microorganisms, but the cost-benefit relationship as well.

DDRT-PCR approaches applied for preeminent results in the isolation of DETs from fish brain tissues

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Caracteriza����o das esp��cies de leishmania em sangue perif��rico de c��es por PCR-RFLP NA ��rea end��mica de Bauru/SP

P��s-gradua����o em Ci��ncia Animal - FMVA

Detec����o do herpes v��rus felino tipo 1 (HVF-1) pela t��cnica de PCR em tempo real e sua associa����o com sinais oculares em uma poipula����o de gatos dom��sticos

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Improving DNA extraction quality by the salting-out method to prepare blood samples for real-time PCR.

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Differentiation of Haemonchus placei from Haemonchus contortus by PCR and by morphometrics of adult parasites and third stage larvae

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Detection of Trypanosoma vivax using PCR and LAMP during aparasitemic periods

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Validation of absolute quantitative real-time PCR for the diagnosis of streptococcus agalactiae in fish

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)