MALARIA DIAGNOSIS BY LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION (LAMP) IN THAILAND

The loop-mediated isothermal amplification method (LAMP) is a recently developed molecular technique that amplifies nucleic acid under isothermal conditions. For malaria diagnosis, 150 blood samples from consecutive febrile malaria patients, and healthy subjects were screened in Thailand. Each sample was diagnosed by LAMP, microscopy and nested polymerase chain reaction (nPCR), using nPCR as the gold standard. Malaria LAMP was performed using Plasmodiumgenus and Plasmodium falciparum specific assays in parallel. For the genus Plasmodium, microscopy showed a sensitivity and specificity of 100%, while LAMP presented 99% of sensitivity and 93% of specificity. For P. falciparum, microscopy had a sensitivity of 95%, and LAMP of 90%, regarding the specificity; and microscopy presented 93% and LAMP 97% of specificity. The results of the genus-specific LAMP technique were highly consistent with those of nPCR and the sensitivity of P. falciparum detection was only marginally lower.

Malária Grave — Um Caso Clínico

Descreve-se um caso de malária grave por Plasmodium falciparum numa criança de raça negra, de 5 anos de idade, residente em Angola até 2 semanas antes do internamento. Apesar da terapêutica com quinino i.v. o quadro evoluiu com falência multiorgânica, nomeadamente coma, insuficiência renal, necrose hepática, diátese hemorrágica e rabdomiólise. Foi necessário instituir ventilação mecânica e na terapêutica de suporte recorreu-se à administração de derivados plasmáticos, aminas vasoactivas e diuréticos em altas doses, tendo havido regressão do quadro clínico. Discutem-se as complicações bem como os factores de mau prognóstico presentes neste caso.

Aspectos ultraestruturais do processo de divisão do Toxoplasma gondii

Neste trabalho é feita uma revisão sobre alguns aspectos biológicos do Toxoplasma gondii, principalmente sobre a ultraestrutura da forma interfásica e as modificações ultraestruturais que ocorrem no parasito durante o seu processo de divisão. Considera-se inicialmente o processo de divisão binária admitindo-se, porém, a possibilidade de que as imagens interpretadas como senão de divisão binária representem estágios da divisão por endodiogenia. Quanto à endodiogenia descrevem-se as alterações que ocorrem na "parasito mãe" durante o processo de formação dos dois "parasitos filhos". Este processo é semelhante no Toxoplasma gondii, Besnoitia jellisoni, Sarcocystis tenella e Frenkelia. Discute-se a possibilidade da formação de mais de dois "parasitos filhos" por um processo de endopoligenia, bem como o processo de esquizogonia. Os resultados mais recentes mostram que não existe esquizogonia nas formas vsgetativas do Toxoplasma gondii, senão que as imagens interpretadas como tal, ao microscópio ótico, são o resultado de endodiogenias sucessivas em que os endozoitas formados permanecem ligados entre si pela região posterior. A esquizogonia é, no entanto, encontrada nas formas que se desenvolvem no interior de células epiteliais do intestino do gato, que é o hospedeiro definitivo do Toxoplasma gondii. Discute-se o conceito de esquizogonia, comparando-o em três protozoários: Eimeria bovis, E. callospermophili e Plasmodium juxtanucleare, que apresentam diferenças entre si quanto ao processo de iniciação da individualização dos "parasitos filhos". Refere-se à recente hipótese que considera a endodiogenia como o processo fundamental de divisão dos esporozoárlos, ocorrendo na fase final da esquizogonia. Finalmente é acentuado o papel que a microscopia eletrônica aliada às modernas técnicas de citoquímica e imunocitoquimica poderá desempenhar no sentido de um melhor conhecimento da biologia do Toxoplasma gondii e da fisiopatogenia da Toxoplasmose.

Infecção experimental de Calomys callosus (Rengger, 1830), (Cricetidae - Rodentia) a quatro espécies de parasitos

Neste trabalho foram estudados exemplares do roedor, Calomys callosus, nascidos em laboratório, a infecções experimentais com quatro parasitos: Plasmodium berghei, Leishmania mexicana amazonensis, Schistosoma mansoni e Hymenolepsis nana. A positividade das infecções foi de 80% para os três primeiros parasitos e 0 para H. nana. C. callosus é um roedor de excelente adaptação em laboratório e de fácil manuseio. Acredita-se que, de acordo com os resultados obtidos neste trabalho, este animal poderia ser um bom modelo experimental de laboratório para certos agentes patogênicos.

Effects of lethal and non-lethal malaria on the mononuclear phagocyte system

The effects ofone non-lethal species ofmalarialparasite, Plasmodium yoelii, and one lethal species, P. berghei, on the mononuclear phagocyte system (MPS) of BALB/c mice were studied. P. yoelii caused a greater and more sustained expansion and activation of the MPS, and the two major populations of spleen phagocytic cells-red pulp and marginal zone macrophages - exhibited a greater increase in numbers in this infection. During the course of P. berghei mataria, the spleen was progressively occupied by haematopoietic tissue and, at the terminal stage of infection, an extensive depletion of lymphocytes and macrophages was apparent. The possibility was suggested that the outcome of mataria may be inftuenced by the particular way the parasite interacts with the MPS.

Metabolismo do ácido fólico na malária

O estudo de 27 pacientes infectados pelo Plasmodium falciparum comparado com pessoas aparentemente sadias mostra: a) diminuição do folato no soro dos pacientes infectados; b) diminuição do folato sêrico nos primeiros 8 dias que seguiram ao tratamento, interpretados como sendo devido à mobilização pela eritropoiese compensadora; c) folato eritrocítico normal.

The role of spleen macrophages in malaria: an ultrastructural study

An electronmicroscopy study of the spleen from mice infected with Plasmodium berghei was carried out to investigate the types ofcells in volved in the removal of parasites from the blood, and the mechanisms by which this occurs. Macrophages, particularly from the red pulp and the marginal zone of the spleen, constituted the most important population of phagocytic cells in the spleen. At the height ofparasitaemia, macrophages in the periphery of the white pulp, especially in the mantle zone of secondary follicles, were also found to participate in phagocytosis, although to a limited extent. Our fingings suggest that phagocytosis of free parasites or parasitized erythrocytes in the spleen is an important mechanism of clearance of parasites from the circulation. Parasites removed from the erythrocytes when these cells cross the interendothelial slits are further phagocytosed by neighbouring macrophages. Evidence is presented suggesting that spleen macrophages may act against the parasite through a process of cytotoxicity.

Comparison of vigilance methods in three houses with different Triatoma infestans densities

Através da prova de 7 dias foi estudado o grau de resistência do Plasmodium falciparum à cloroquina, amodiaquina e sulfadoxina-pirimetamina em Porto Velho, Estado de Rondônia, Brasil. Não se observaram diferenças significativas nas médias de parasitas nos dias de seguimento e nas proporções de resistência entre os três medicamentos testados, fazendo com que os autores recomendem a manutenção das 4-aminoquinoleínas como drogas a serem usadas atualmente em infecções não graves por P. falciparum na área de Porto Velho.

Frequency of human leukocyte antigen (hla) in patients with malaria and in the general population of Humaitá county, Amazonas state, Brazil

In August 1983,85 inhabitants of the municipality of Humaitá, Amazonas State, Brazil were studied to determine the prevalence of antigens to HLA-A, -B, -C and DR. Thirty-eight were sick with malaria due to Plasmodium falciparum. All subjects were examined for splenomegaly, blood parasitaemia and antibodies to malaria. They constituted three groups: 1) 25 subjects native to the Amazon region who had never had malaria; 2) 38 Amazonian subjects who had malaria in the past or currently had an infection; 3) 22 patients with malaria who had acquired the infection in the Amazon Region but came from other regions of Brazil. Blood was taken from each person, the lymphocytes were separated and typed by the test of microlymphocytotoxicity. There was a high frequency of antigens that could not be identified in the groups studied which suggests the existence of a homozygote or phenotype not identified in the population. There was a high frequency of the phenotype Ag(W24) (44.7%) in group 2 when compared with group 1 (32%) or group 3 (9%). Also the individuals in group 2 showed an elevated frequency of antigen DR(4)80%) when compared with group 1 (36.6%) or group 3 (16.6%). These observations suggest the possibility of a genetic susceptibility to malaria among Amazonian residents and indicate a necessity for more extensive studies of the frequency of HLA antigens among inhabitants of this endemic malarial zone.

Infrequency of asymptomatic malaria in an endemic area in Amazonas, Brazil

A malaria survey was conducted in an area of high transmission (Costa Marques, Rondonia, Brazil) to determine the prevalence of asymptomatic parasitemia and its clinical significance. Most of the people surveyed were immigrants who had lived in the endemic area < 5 years. The people had easy access to free diagnostic and treatment services at the Malaria Clinic in the town of Costa Marques. The prevalence of plasmodial parasitemia in 344 people was 22%. There were 36 individuals with asymptomatic infections among the 77 parasitemic patients. During the two days following the initial examination, 19 ofthe 36 individuals: with asymptomatic infections developed malaria. Among the 17 patients who remained asymptomatic for > 2 days, 4 had only gametocytes, 1 had taken inadequate anti-malarial treatment, 3 were under treatment and 2 moved. Six asymptomatic patients denied the use of anti-malarial drugs and they developed malaria 3-6 days after the initial parasitological diagnosis. The final patient remained asymptomatic during the 7 day observation period. He had a history of > 40 malaria attacks and denied the use of antimalarial treatment. With the exception of the latter all of the other asymptomatic patients, were either in the incubation period or had been treated It is concluded that asymptomatic malaria is rare in the Costa Marques area and that it is necessary to treat all individuals with plasmodial parasitemia.

Malária induzida no estado de São Paulo, Brasil

Procedeu-se uma revisão dos 58 casos de malária induzida diagnosticados em São Paulo, de janeiro de 1983 ajulho de 1990, correspondendo a 0,3% do total de casos de malária confirmados. As variáveis sexo, idade, nível de parasitemia, sintomatologia, evolução e tempo médio de início dos sintomas e o diagnóstico foram analisadas entre os 25 casos infectados por transfusão e 28 por uso de agulhas contaminadas. Predominou a infecção por Plasmodium vivax (79,4%), destacando-se 5,6% de casos com infecção mista. A idade média dos infectados por uso de agulhas foi significativamente menor (p 0,10). Apesar dos casos induzidos representarem percentual pequeno em relação ao total de casos notificados ea transmissão através do sangue estar sob controle, a transmissão acidental por agulhas contaminadas devido ao uso de drogas injetáveis, constitui risco parao restabelecimento da malária em áreas do Estado de São Paulo.

Quimioprofilaxia da malária com mefloquina na amazônia brasileira

Em estudo randômico dupb-cego, 122 voluntários morando em área endêmica de malária na Região Amazônica (Estado de Rondônia) foram divididos em quatro grupos para estudo da supressão malárica. O grupo 1 recebeu 500mg de mefloquina a cada quatro semanas; o grupo II 250mg de mefloquina a cada duas semanas; o grupo III um comprimido de Fansidar (500mg de sulfadoxina + 25mg de pirimetamina) por semana e o grupo IV, recebeu apenas placebo. Um ataque agudo de malária ocorreu em um indivíduo do grupo 1, em dois indivíduos do grupo II e em seis indivíduos dos grupos III e IV. A proteção verificada nos grupos em uso de mefloquina foi significantemente superior comparada ao grupo placebo. A mefloquina, em ambas as dosagens usadas, mostrou-se efetiva na supressão malárica em uma área onde o Plasmodium falciparum plurirresistente é altamente prevalente.

Imunobiossensores capacitivos interdigitais com camadas sensíveis micro e nano-estruturadas

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Biotecnologia

Estudo sobre a eventual utilidade de raios gama na profilaxia da malária transmissível por transfusão de sangue

O estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a eventual utilidade de raios gama na profilaxia da malária transmissível por transfusão de sangue, tendo sido, para isso, usados camundongos infectados pelo Plasmodium berghei. Na primeira fase, quando submetemos sangue deles retirado a 2.500 e 5.000rad, com associação ou não de metronidazol, não obtivemos sucesso, já que todos os animais antes sem a parasitose apresentaram parasitemia e morreram após inoculação do sangue irradiado. Porém, ocorreu êxito parcial na segunda fase, ao serem empregados 10.000 e 15.000rad, porquanto 20% e 40% dos roedores, respectivamente, embora tenham ficado infectados, sobreviveram, com posterior negativação quanto à presença do P. berghei.

Avaliação in vitro e in vivo da atividade antimalárica dos trioxolanos NAC89, LDC67 e LC50 em estirpes sensíveis e resistentes à artemisinina e ao artesunato.

A malária mantem-se como uma das doenças mais importantes do mundo, causando a morte de mais de 1 milhão de pessoas anualmente e elevada morbilidade. Face à propagação da resistência do Plasmodium falciparum à maioria dos medicamentos antimaláricos disponíveis, a Organização Mundial de Saúde (OMS), desde 2006, recomenda a utilização de terapias combinadas com artemisinina (ACTs) como tratamento de primeira linha para a malária não complicada. Em 2008, relatórios clínicos revelaram a falha terapêutica dos ACTs na fronteira Tailândia-Camboja e uma vez que não existem alternativas para o tratamento da malária é fundamental manter linhas de investigação sobre novos e eficazes fármacos. A partir da artemisinina (ART) surgiram novos peróxidos designados trioxolanos que apresentam como farmacóforo a função 1,2,4-trioxano. A acessibilidade, a preparação relativamente económica e a estabilidade da função 1,2,4-trioxano permite a síntese de derivados com estruturas diversas, alargando a possibilidade de desenvolvimento de novos fármacos. Foram realizados testes in vitro de triagem com o MARK III (OMS micro-ensaio), com controlos positivos (artemisinina e dihidroartemisinina) e controlo negativo (sem fármaco). Foram efetuados ensaios diversos com 3 compostos, aqui denominados NAC89, LCD67 e LC50 em culturas da estirpe de P. falciparum (Dd2) para avaliação da atividade antimalárica dos compostos, bem como ensaios utilizando o modelo de malária de murino, Plasmodium chabaudi, com 4 estirpes, denominadas AS-3CQ, AS-ATN, respectivamente sensível e resistente ao artesunato (ATN) e AS-30CQ e AS-ART respectivamente sensível e resistente à (ART). Também foi avaliada a citotoxicidade dos compostos, utilizando células HepG2 de hepatoma humano pelo ensaio com método colorimétrico metil-tiazol-tetrazólico (MTT). No modelo murino compararam-se também duas vias de administração dos novos compostos, sendo uma por via subcutânea nos 3 compostos e outra por via tópica apenas para LC50. A verificação de cura foi efetuada por observação microscópica de esfregaços sanguíneos corados pelo método de Giemsa e determinação da parasitemia. Os resultados observados foram: a) baixa citotoxicidade dos três compostos; b) o composto LC50 eliminou a parasitémia nos ensaios in vitro em cultivos de P. falciparum bem como eliminou P. chabaudi nos tratamentos por via subcutânea e tópica na dose de 50 mg/kg e na dose de 10 mg/Kg na via subcutânea; c) o NAC89 mostrou boa atividade no mesmo ensaio in vivo, na dose de 10 mg/Kg e 50 mg/Kg por via subcutânea; d) fraca atividade para LCD67 na dose de 50 mg/Kg. O LC50 e o NAC89 foram muito eficazes contra parasitas resistentes ao ATN e à ART sugerindo novos mecanismos de ação. Assim, este trabalho de investigação trouxe resultados promissores na àrea de potenciais novos antimaláricos.