MOLECULAR IDENTIFICATION AND ANTIMICROBIAL RESISTANCE PATTERN OF SEVEN CLINICAL ISOLATES OF Nocardia spp. IN BRAZIL

Nocardia is a ubiquitous microorganism related to pyogranulomatous infection, which is difficult to treat in humans and animals. The occurrence of the disease is on the rise in many countries due to an increase in immunosuppressive diseases and treatments. This report of cases from Brazil presents the genotypic characterization and the antimicrobial susceptibility pattern using the disk-diffusion method and inhibitory minimal concentration with E-test® strips. In summary, this report focuses on infections in young adult men, of which three cases were cutaneous, two pulmonary, one neurological and one systemic. The pulmonary, neurological and systemic cases were attributed to immunosuppressive diseases or treatments. Sequencing analysis of the 16S rRNA segments (1491 bp) identified four isolates of Nocardia farcinica, two isolates of Nocardia nova and one isolate of Nocardia asiatica. N. farcinica was involved in two cutaneous, one systemic and other pulmonary cases; N. nova was involved in one neurological and one pulmonary case; and Nocardia asiatica in one cutaneous case. The disk-diffusion antimicrobial susceptibility test showed that the most effective antimicrobials were amikacin (100%), amoxicillin/clavulanate (100%), cephalexin (100%) and ceftiofur (100%), while isolates had presented most resistance to gentamicin (43%), sulfamethoxazole/trimethoprim (43%) and ampicillin (29%). However, on the inhibitory minimal concentration test (MIC test), only one of the four isolates of Nocardia farcinica was resistant to sulfamethoxazole/trimethoprim.

ISOLATION OF Cryptococcus neoformans FROM ENVIRONMENTAL SAMPLES COLLECTED IN SOUTHEASTERN NIGERIA

SUMMARY Cryptococcosis caused by Cryptococcus neoformans is the second most common fungal opportunistic pathogen and a lifethreatening infection with serious clinical manifestations especially in HIV/AIDS and other immunocompromised patients. In Nigeria, HIV/AIDS infection has reached an alarming level. Despite this, information on the presence of this fungus in clinical and environmental samples is very scanty in Nigeria and many other parts of Africa. We set out to evaluate the presence of Cryptococcus neoformans or C. gattii in pigeon droppings obtained from Southeastern Nigeria. One hundred and seventy-seven samples of pigeon droppings from six sample types were collected. The area covered comprised of ten cities and other locations spanning across five States in Nigeria. Using established techniques, Cryptococcus neoformans was isolated from 39 of the 177 (22.0%) samples overall. No C. gattiiwas isolated. Most of the isolates (32.4%) were recovered from dovecotes (11 of 34) followed closely by samples taken from markets (31.8%; seven of 22) and least from the church (4.0%; one of 25). The highest isolation rate (38.9%) was found in samples from Enugu-Ezike(seven of 23) while the least came from Afikpoand the other locations each with 9.1% isolation rate. This is the first large-scale screening of Cryptococcus neoformans from pigeon droppings in Nigeria. The ecological and epidemiological significance of these findings are discussed.

EPIDEMIOLOGY OF PARACOCCIDIOIDOMYCOSIS

SUMMARYThe epidemiological characteristics of paracoccidioidomycosis were reviewed and updated. The new endemic areas in Brazil were discussed in the section regarding the geographic distribution of the mycosis. Subclinical infection with Paracoccidioides brasiliensis was discussed on the basis of skin test surveys with antigens of the fungus, seroepidemiological studies, and disease cases outside Latin America. Large case series permitted a comparison of the prevalence of the mycosis in different regions, its estimated incidence and risk factors for the development of the disease. Aspects modulating the expression of the clinical forms of paracoccidioidomycosis are also presented. This review also deals with diseases associated with the mycosis, opportunistic paracoccidioidomycosis, lethality, mortality and infection and disease in animals.

The role of Di-iron proteins in pathogen resistance

Dissertation presented to obtain the Ph.D. degree in Biochemistry

INVESTIGATION OF BIOFILM FORMATION IN COAGULASE-NEGATIVE STAPHYLOCOCCI ISOLATED FROM PLATELET CONCENTRATE BAGS

Platelet Concentrates (PCs) are the blood components with the highest rate of bacterial contamination, and coagulase-negative staphylococci (CoNS) are the most frequently isolated contaminants. This study investigated the biofilm formation of 16 contaminated units out of 691 PCs tested by phenotypic and genotypic methods. Adhesion in Borosilicate Tube (ABT) and Congo Red Agar (CRA) tests were used to assess the presence of biofilm. The presence of icaADC genes was assessed by means of the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. With Vitek(r)2, Staphylococcus haemolyticus was considered the most prevalent CoNS (31.25%). The CRA characterized 43.8% as probable biofilm producers, and for the ABT test, 37.5%. The icaADC genes were identified in seven samples by the PCR. The ABT technique showed 85.7% sensitivity and 100% specificity when compared to the reference method (PCR), and presented strong agreement (k = 0.8). This study shows that species identified as PCs contaminants are considered inhabitants of the normal skin flora and they might become important pathogens. The results also lead to the recommendation of ABT use in laboratory routine for detecting biofilm in CoNS contaminants of PCs.

SEROLOGICAL DETECTION OF HEPATITIS A VIRUS IN FREE-RANGING NEOTROPICAL PRIMATES (Sapajus spp., Alouatta caraya) FROM THE PARANÁ RIVER BASIN, BRAZIL

Nonhuman primates are considered as the natural hosts of Hepatitis A virus (HAV), as well as other pathogens, and can serve as natural sentinels to investigate epizootics and endemic diseases that are of public health importance. During this study, blood samples were collected from 112 Neotropical primates (NTPs) (Sapajus nigritus and S. cay, n = 75; Alouatta caraya, n = 37) trap-captured at the Paraná River basin, Brazil, located between the States of Paraná and Mato Grosso do Sul. Anti-HAV IgG antibodies were detected in 4.5% (5/112) of NTPs, specifically in 6.7% (5/75) of Sapajus spp. and 0% (0/37) of A. caraya. In addition, all samples were negative for the presence of IgM anti-HAV antibodies. These results suggest that free-ranging NTPs were exposed to HAV within the geographical regions evaluated.

Candida albicans PROTEIN PROFILE CHANGES IN RESPONSE TO THE BUTANOLIC EXTRACT OF Sapindus saponariaL.

Candida albicans is an opportunistic human pathogen that is capable of causing superficial and systemic infections in immunocompromised patients. Extracts of Sapindus saponaria have been used as antimicrobial agents against various organisms. In the present study, we used a combination of two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) and matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) to identify the changes in protein abundance of C. albicans after exposure to the minimal inhibitory concentration (MIC) and sub-minimal inhibitory concentration (sub-MIC) of the butanolic extract (BUTE) of S. saponaria and also to fluconazole. A total of six different proteins with greater than 1.5 fold induction or repression relative to the untreated control cells were identified among the three treatments. In general, proteins/enzymes involved with the glycolysis (GPM1, ENO1, FBA1), amino acid metabolism (ILV5, PDC11) and protein synthesis (ASC1) pathways were detected. In conclusion, our findings reveal antifungal-induced changes in protein abundance of C. albicans. By using the previously identified components of the BUTE of S. saponaria(e.g., saponins and sesquiterpene oligoglycosides), it will be possible to compare the behavior of compounds with unknown mechanisms of action, and this knowledge will help to focus the subsequent biochemical work aimed at defining the effects of these compounds.

BRAIN ABSCESS DUE TO Staphylococcus aureus OF CRYPTOGENIC SOURCE IN AN HIV-1 INFECTED PATIENT IN USE OF ANTIRETROVIRAL THERAPY

The spectrum of neurological complications associated with human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection is broad. The most frequent etiologies include primary diseases (caused by HIV itself) or secondary diseases (opportunistic infections or neoplasms). Despite these conditions, HIV-infected patients are susceptible to other infections observed in patients without HIV infection. Here we report a rare case of a brain abscess caused by Staphylococcus aureus in an HIV-infected patient. After drainage of the abscess and treatment with oxacilin, the patient had a favorable outcome. This case reinforces the importance of a timely neurosurgical procedure that supported adequate management of an unusual cause of expansive brain lesions in HIV-1 infected patients.

Thoracic Manifestations of Connective Tissue Diseases

Connective tissue diseases (CTDs) comprise several immunologic systemic disorders, each of which associated with a particular set of clinical manifestations and autoimmune profile. CTDs may cause numerous thoracic abnormalities, which vary in frequency and pattern according to the underlying disorder. The CTDs that most commonly involve the respiratory system are progressive systemic sclerosis, systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, Sjögren syndrome, polymyositis, dermatomyositis, and mixed connective tissue disease. Pulmonary abnormalities in this group of patients may result from CTD-related lung disease or treatment complications, namely drug toxicity and opportunistic infections. The most important thoracic manifestations of CTDs are interstitial lung disease and pulmonary arterial hypertension, with nonspecific interstitial pneumonia being the most common pattern of interstitial lung disease. High-resolution computed tomography is a valuable tool in the initial evaluation and follow-up of patients with CTDs. As such, general knowledge of the most common high-resolution computed tomographic features of CTD-related lung disease allows the radiologist to contribute to better patient management.

Molecular mechanisms of sexual development in basidiomycetes: exploring connections with lifestyles

Dissertação para obtenção do Grau de Doutor em Biologia

Aconselhamento médico na prevenção da doença e promoção da saúde : análise a propósito do consumo de tabaco

RESUMO - O consumo de tabaco foi responsável por 100 milhões de mortes no século XX. Apesar dos grandes avanços alcançados no controlo deste problema a nível mundial, sob os auspícios da OMS, no contexto da Convenção-Quadro para o Controlo do Tabaco da OMS, se não forem adoptadas medidas consistentes e efectivas de saúde pública, a morbi-mortalidade que lhe está associada continuará a aumentar durante o presente século. A promoção da cessação tabágica constitui a estratégia populacional que permitirá obter ganhos em saúde a mais curto prazo. Embora a larga maioria dos fumadores faça, ao longo da vida, várias tentativas para parar de fumar sem apoio, apenas uma pequena minoria consegue manter-se abstinente a longo prazo. Os médicos de Medicina Geral e Familiar são, de entre todos os profissionais de saúde, os que podem intervir de modo mais consistente e efectivo neste âmbito e que melhores resultados obtêm na cessação tabágica dos pacientes fumadores, dado o vínculo terapêutico e a interacção frequente e continuada que com eles estabelecem ao longo do seu ciclo de vida. O aconselhamento breve, tendo por base a adopção de um estilo de comunicação motivacional centrado no paciente, adaptado aos estádios de mudança comportamental, tem-se revelado efectivo no apoio à mudança de comportamentos relacionados com a saúde e à resolução da ambivalência que caracteriza este processo. A revisão de literatura evidenciou o facto de os médicos nem sempre intervirem nas áreas preventivas e de promoção da saúde, em particular na área da cessação tabágica, com o investimento e a continuidade desejáveis. Por outro lado, muitos pacientes fumadores referem nunca ter sido aconselhados pelo seu médico a deixar de fumar.. Não são conhecidos estudos de âmbito nacional que permitam conhecer esta realidade, bem como os factores associados às melhores práticas de intervenção ou as barreiras sentidas pelos médicos de MGF à actuação nesta área. O presente trabalho teve como objectivos: (i) avaliar a hipótese de que os médicos que disseram adoptar o método clínico centrado no paciente teriam atitudes mais favoráveis relativamente à cessação tabágica e uma maior probabilidade de aconselhar os seus pacientes a parar de fumar; (ii) estudar a relação entre as atitudes, a percepção de auto-eficácia, a expectativa de efectividade e as práticas de aconselhamento sobre cessação tabágica, auto-referidas pelos médicos; (iii) Identificar as variáveis preditivas da adopção de intervenções breves de aconselhamento adaptadas ao estádio de mudança comportamental dos pacientes fumadores; (iv) identificar as barreiras e os incentivos à adopção de boas práticas de aconselhamento nesta área. A população de estudo foi constituída pelo total de médicos de medicina geral e familiar inscritos na Associação Portuguesa de Médicos de Clínica Geral, residentes em Portugal. Para recolha de informação, foi utilizado um questionário de resposta anónima, de autopreenchimento, aplicado por via postal a 2942 médicos, em duas séries de envio. O questionário integrou perguntas fechadas, semifechadas, escalas de tipo Likert e escalas de tipo visual analógico. Para avaliação da adopção do método clínico centrado no paciente, foi usada a Patient Practitioner Orientation Scale (PPOS). O tratamento estatístico dos dados foi efectuado com o Programa PASW Statistics (ex-SPSS), versão 18. Foram utilizados: o índice de α de Cronbach, diversos testes não paramétricos e a análise de regressão logística binária. Foi obtida uma taxa de resposta de 22,4%. Foram analisadas 639 respostas (67,4% de mulheres e 32,6% de homens). Referiram ser fumadores 23% dos homens e 14% das mulheres. Foi identificada uma grande carência formativa em cessação tabágica, tendo apenas 4% dos médicos afirmado não necessitar de formação nesta área. Responderam necessitar de formação em entrevista motivacional 66%, em prevenção da recaída 59%, de treino numa consulta de apoio intensivo 55%, em intervenção breve 54% e em terapêutica farmacológica 55%. Cerca de 92% dos respondentes consideraram que o aconselhamento para a cessação tabágica é uma tarefa que faz parte das suas atribuições, mas apenas 76% concordaram totalmente com a realização de uma abordagem oportunística deste assunto em todos os contactos com os seus pacientes. Como prática mais frequente, perante um paciente em preparação para parar, 85% dos médicos disseram tomar a iniciativa de aconselhar, 79% avaliar a motivação, 67% avaliar o grau de dependência, 60% marcar o “dia D” e 50% propor terapêutica farmacológica. Apenas 21% assumiram realizar com frequência uma intervenção breve com pacientes em preparação (5 Ás); 13% uma intervenção motivacional com pacientes não motivados para mudar (5 Rs) e 20% uma intervenção segundo os princípios da entrevista motivacional, relativamente a pacientes ambivalentes em relação à mudança. A análise multivariada de regressão logística permitiu concluir que as variáveis com maior influência na decisão de aconselhar os pacientes sobre cessação tabágica foram a percepção de auto-eficácia, o nível de atitudes negativas, a adopção habitual do Programa-tipo de cessação tabágica da DGS, a posse de formação específica nesta área e a não identificação de barreiras ao aconselhamento, em particular organizacionais ou ligadas ao processo de comunicação na consulta. Embora se tenha confirmado a existência de associação entre a adopção do método clínico centrado no paciente e as atitudes face à cessação tabágica, não foi possível confirmar plenamente a associação entre a adopção deste método e as práticas autoreferidas de aconselhamento. Os médicos que manifestaram um nível baixo ou moderado de atitudes negativas, uma percepção elevada de auto-eficácia, que nunca fumaram, que referiram adoptar o Programa-tipo de cessação tabágica e que não identificaram barreiras organizacionais apresentaram uma maior probabilidade de realizar uma intervenção breve (“5 Ás”) de aconselhamento de pacientes fumadores em preparação para parar de fumar. Nunca ter fumado apresentou-se associado a uma probabilidade de realizar uma intervenção breve (“5 Ás”) com frequência, superior à verificada entre os médicos que referiram ser fumadores (Odds-ratio ajustado = 2,6; IC a 95%: 1,1; 5,7). Os médicos com o nível de auto-eficácia no aconselhamento mais elevado apresentaram uma probabilidade superior à encontrada entre os médicos com o menor nível de auto-eficácia de realizar com frequência uma intervenção breve de aconselhamento, integrando as cinco vertentes dos “5 Ás” (Odds ratio ajustado = 2,6; IC a 95%: 1,3; 5,3); de realizar uma intervenção motivacional breve com fumadores renitentes a parar de fumar (Odds ratio ajustado = 3,1; IC a 95%: 1,4; 6,5) ou de realizar com frequência uma intervenção motivacional com pacientes em estádio de ambivalência (Odds ratio = 8,8; IC a 95%: 3,8; 19,9). A falta de tempo, a falta de formação específica e a falta de equipa de apoio foram as barreiras ao aconselhamento mais citadas. Como factores facilitadores de um maior investimento nesta área, cerca de 60% dos médicos referiram a realização de um estágio prático de formação; 57% a possibilidade de dispor do apoio de outros profissionais; cerca de metade a melhoria da sua formação teórica. Cerca de 25% dos médicos investiria mais em cessação tabágica se dispusesse de um incentivo financeiro e 20% se os pacientes demonstrassem maior interesse em discutir o assunto ou existisse uma maior valorização desta área por parte dos colegas e dos órgãos de gestão. As limitações de representatividade da amostra, decorrentes da taxa de resposta obtida, impõem reservas à possibilidade de extrapolação destes resultados para a população de estudo, sendo de admitir que os respondentes possam corresponder aos médicos mais interessados por este tema e que optam por não fumar. Outra importante limitação advém do facto de não ter sido estudada a vertente relativa aos pacientes, no que se refere às suas atitudes, percepções e expectativas quanto à actuação do médico neste campo. Pesem embora estas limitações, os resultados obtidos revelaram uma grande perda de oportunidades de prevenção da doença e de promoção da saúde. Parece ter ficado demonstrada a importante influência que as atitudes, em especial as negativas, e as percepções, em particular a percepção de auto-eficácia, podem exercer sobre as práticas de aconselhamento auto-referidas. Todavia, será necessário aprofundar os resultados agora encontrados com estudos de natureza qualitativa, que permitam compreender melhor, por um lado, as percepções, expectativas e necessidades dos pacientes, por outro, as estratégias de comunicação que deverão ser adoptadas pelo médico, atendendo à complexidade do problema e ao tempo disponível na consulta, tendo em vista aumentar a literacia dos pacientes para uma melhor autogestão da sua saúde. Parece ter ficado igualmente patente a grande carência formativa neste domínio. A adopção do modelo biomédico como paradigma da formação médica pré e pós-graduada, proposto, há precisamente cem anos, por Flexner, tem contribuído para a desvalorização das componentes psicoemocionais e sociais dos fenómenos de saúde e de doença, assim como para criar clivagens entre cuidados curativos e preventivos e entre medicina geral e familiar e saúde pública. Porém, o actual padrão de saúde/doença próprio das sociedades desenvolvidas, caracterizado por “pandemias” de doenças crónicas e incapacitantes, determinadas por factores de natureza sociocultural e comportamental, irá obrigar certamente à revisão daquele paradigma e à necessidade de se (re)adoptarem os grandes princípios Hipocráticos de compreensão dos processos de saúde/doença e do papel da medicina.

T cell-dependent immunodepression in vivo in Schistosoma mansoni infected patients

T-cell function was evaluated in 29 patients with either hepatointestinal or hepatosplenic schistosomiasis by intradermal tests to recall antigens. Immunodepression was detected in 26% of the subjects with hepatointestinal schistosomiasis and in 50% of those with the hepatosplenic form. Cellular immunodepression was related to worm load and spleen size. This non specific T-cell immunodepression may represent a serious constraint to the elimination of intracellular pathogens both in hepatosplenic or hepatointestinal schistosomiasis.

The value relevance of tangible fixed assets

A Work Project, presented as part of the requirements for the Award of a Masters Degree in Finance from the NOVA – School of Business and Economics

Enterococcus faecalis V583 prophages: Dynamic interactions and contribution to bacterial pathogenic traits

Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Biology.