Desafios na era pós genômica para o desenvolvimento de testes laboratoriais para o diagnóstico da hanseníase

O diagnóstico da hanseníase se baseia em manifestações clínicas e não existe teste laboratorial para diagnosticar casos assintomáticos ou para prever progressão da doença entre indivíduos expostos. Novas análises genômicas comparativas in silico e ferramentas de biologia molecular têm sido empregadas para revelar proteínas exclusivas do Mycobacterium leprae que apresentem potencial aplicação diagnóstica. A hanseníase tuberculóide paucibacilar (PB) apresenta baixo nível de anticorpos e forte resposta imune celular (RIC) tipo Th1/interferon gamma (IFN-γ). A doença lepromatosa multibacilar (MB) apresenta sorologia positiva e fraca RIC. Portanto, testes laboratoriais para diagnosticar hanseníase PB e MB devem contemplar testes de RIC e sorologia. Proteínas recombinantes do Mycobacterium leprae sorologicamente reativas podem ser incorporadas ao antígeno PGLI para melhorar o diagnóstico sorológico de pacientes MB. Proteínas recombinantes e peptídeos sintéticos do Mycobacterium leprae têm sido testados em ensaios de RIC/IFN-γ para diagnosticar casos PB. Sorologia anti-PGLI modificada incorporando novos antígenos do Mycobacterium leprae e ensaios baseados na RIC/produção de IFN-γ devem permitir a detecção precoce de casos MB e PB em países endêmicos.

Avaliação da expressão de interleucina 1 beta (IL-1β) e antagonista do receptor de interleucina 1 (IL-1Ra) em pacientes com hanseníase

A hanseníase é uma doença infectocontagiosa espectral que acompanha-se por uma série de eventos imunológicos desencadeados pela resposta do hospedeiro frente ao agente etiológico, o Mycobacterium leprae. Evidências sugerem que a indução e manutenção da resposta imune/inflamatória na hanseníase estão vinculadas a interações de múltiplas células e fatores solúveis, particularmente através da ação de citocinas. Nesse estudo, foram mensurados níveis de IL-1β e IL-1Ra de 37 casos novos de hanseníase acompanhados ao longo do tratamento e 30 controles sadios pelo teste ELISA. A coleta de sangue periférico foi realizada em quatro tempos para os casos de hanseníase (pré-tratamento com PQT, 2ª dose, 6ª dose e pós-PQT) e em único momento para os controles. Na comparação dos níveis das moléculas de casos no pré-PQT e controles, houve diferença estatisticamente significativa somente para IL-1β. Nossos resultados sugerem a participação dessa citocina no processo imune/inflamatório.

Aplicação de sistemas moleculares na detecção rápida de MDR-TB e XDR-TB

Mycobacterium tuberculosis é o agente etiológico da tuberculose em humanos e segundo as estimativas da Organização Mundial da Saúde, um terço da população mundial está infectada com esta bactéria, calculando-se que no ano de 2008 aproximadamente 9,4 milhões de pessoas contraíram tuberculose activa. Associada a esta tendência, encontra-se o aumento alarmante da incidência de tuberculose resistente aos antibióticos, mais propriamente da tuberculose multirresistente e extensivamente resistente. Nesta Dissertação estudaram-se três sistemas de detecção molecular (INNO-LiPA Rif. TB, Innogenetics, Ghent, Bélgica, MTBDRplus e MTBDRsl, GenoType, GmbH, Nehren, Alemanha), que permitem detectar o complexo M. tuberculosis e as mutações mais comuns associadas à resistência aos antibióticos de primeira e segunda linha. Para o efeito, na primeira parte do trabalho os três sistemas em estudo foram testados em 21 isolados clínicos pertencentes à colecção do Laboratório de Micobactérias do Instituto de Higiene e Medicina Tropical (IHMT, UNL), com o propósito de avaliar a sua capacidade para identificar o complexo M. tuberculosis e detectar mutações ligadas à resistência aos fármacos de primeira e segunda linha. Na segunda parte do trabalho, os sistemas INNO-LiPA Rif. TB e MTBDRplus foram testados em 33 amostras respiratórias com baciloscopia positiva, com o propósito de aferir a “performance” destes sistemas para a detecção directa de tuberculose multirresistente em amostras respiratórias. Na primeira parte do trabalho os três sistemas em estudo apresentaram elevada sensibilidade na identificação do complexo M. tuberculosis em culturas, bem como na detecção de mutações ligadas à resistência aos antibióticos de primeira linha, com excepção do etambutol. No que diz respeito à detecção da resistência aos antibióticos de segunda linha, não foi possível calcular os valores de sensibilidade e especificidade. Na segunda parte do trabalho, o INNO-LiPA Rif. TB demonstrou ser o sistema mais robusto para a análise directa de amostras respiratórias com baciloscopia positiva, para um diagnóstico precoce de tuberculose e detecção de resistência à rifampicina. O MTBDRplus não se mostrou uma alternativa viável ao INNO-LiPA Rif. TB, pois apresentou baixa sensibilidade para a identificação do complexo M. tuberculosis e vários problemas no passo de amplificação. O MTBDRsl não foi testado, por não ter sido detectada nenhuma amostra multirresistente.

Identificação laboratorial de micobactérias em amostras respiratórias de pacientes HIV-positivos com suspeita de tuberculose

Foram analisados retrospectivamente os registros (2000 a 2004) do Laboratório de Microbiologia do Instituto Adolfo Lutz de Santos, SP referentes a pacientes infectados pelo virus da imunodeficiência humana com suspeita de tuberculose pulmonar. Foram encaminhadas 1.321 amostras com finalidade de diagnóstico, correspondendo a 880 casos suspeitos de tuberculose em 693 pacientes. Cento e trinta e quatro baciloscopias foram positivas e em 188 culturas houve crescimento de micobactérias, correspondendo a 161 casos confirmados. Houve identificação de Mycobacterium tuberculosis em 126 (78,3%) e micobactérias não tuberculosas em 39 (24,2%). Em quatro casos, houve concomitância de Mycobacterium tuberculosis e micobactérias não tuberculosas (porém em amostras distintas). O perfil de sensibilidade às drogas antituberculose revelou 18 (14,3%) casos de resistência a pelo menos um medicamento. Estes resultados reforçam a necessidade de submeter à rotina laboratorial completa - baciloscopia, cultura com identificação e testes de sensibilidade às drogas - as amostras respiratórias de pacientes soropositivos para o vírus da imunodeficiência humana com suspeita de tuberculose para direcionamento terapêutico adequado.

Thomsen-Friedenreich antigens in bladder cancer: evaluation of their prognostic value

RESUMO: Introdução. O cancro de bexiga é uma patologia comum que representa o 6° e o 5° cancro mais incidente em Portugal e na Itália, respetivamente. Em mais de metade dos casos ocorre reincidência durante o primeiro ano, requerendo acompanhamento clínico ao longo da vida. A instilação intravesical de Bacillus Calmette-Guérin (BCG) (uma estirpe atenuada do Mycobacterium bovis) representa uma imunoterapia eficaz no combate ao cancro de bexiga, no entanto, muitos aspetos da interação de BCG com as células tumorais bem como com as células do sistema imunitário permanecem por desvendar. As células tumorais de bexiga expressam frequentemente as formas sialiladas dos antigénios de Thomsen-Friedenreich (TF), i.e., sialil-T (sT) e sialil-Tn (sTn). Contudo ainda se desconhece o significado da sua expressão na malignidade tumoral e se afeta a eficácia da terapêutica BCG. Objetivo do estudo. Investigar o papel dos antigénios sT e sTn no fenótipo maligno de células de cancro de bexiga bem como na resposta mediada pelo sistema imunitário à terapia com BCG. Metodologia. Para tal, foram utilizadas as linhas celulares de cancro da bexiga HT1376 e MCR, geneticamente modificadas por transdução com vetores codificantes para as sialiltransferases ST3GAL1 ou ST6GALNAC1, de forma a expressar homogeneamente os antigénios sT ou sTn respetivamente. Estes modelos celulares foram estudados após confronto com BCG. O nível de BCG internalizado foi avaliado por citometria de fluxo. O perfil global de expressão genética dos modelos celulares antes e após incubação com BCG foi analisado pela tecnologia de microarray. O perfil de citocinas secretadas pelos modelos celulares após incubação com BCG, bem como de macrófagos estimulados pelo secretoma de células de cancro de bexiga que por sua vez foram estimuladas previamente por BCG, foi estudado pelo sistema multiplex de “imuno-esferas”. Resultados. A análise do transcritoma dos modelos celulares revelou que grupos de genes envolvidos em funções específicas foram modulados em paralelo nos dois modelos celulares, após transdução, independentemente da sialiltransferase expressa. Ou seja, em células que expressavam a sialiltransferase ST3GAL1 ou ST6GALNAC1, os genes envolvidos na regulação da segregação cromossómica e na reparação do DNA foram consistentemente regulados negativamente. Genes descritos na literatura como marcadores para o cancro de bexiga foram também modulados. A incubação com BCG resultou numa tendência ao aumento da expressão de genes relevantes na preservação e estabilidade genómica e menor malignidade, no entanto, apenas em células que expressavam sT ou sTn. Entre as dez citocinas testadas, apenas a IL-6 e IL-8 foram expressas pelas linhas celulares de cancro da bexiga, com indução destas após estimulação com BCG, e principalmente em células que expressavam ST3GAL1 ou ST6GALNAC1. Em macrófagos, citocinas inflamatórias, tais como IL-1β, IL-6 e TNFα, e a citocina anti-inflamatória IL-10, foram induzidas apenas pelo secretoma de células de cancro da bexiga confrontadas com BCG, com maior relevância quando estas expressavam ST3GAL1 ou ST6GALNAC1, prevendo a estimulação de macrófagos semelhantes aos de tipo M1 e uma melhor resposta à terapia com BCG. Conclusões. O efeito geral da expressão destas sialiltransferases e dos produtos enzimáticos sT ou sTn nas células de cancro de bexiga conduz a um fenótipo de maior malignidade. Contudo, a maior avidez de estas na produção de citocinas inflamatórias após confronto com BCG, bem como a maior capacidade de estimulação de macrófagos, predirá uma resposta à terapia com BCG mais eficaz em tumores que expressem os antigénios de TF sialilados. Tais conclusões são totalmente concordantes com os nossos mais recentes dados clínicos obtidos em colaboração, que mostram que em doentes com cancro de bexiga que expressam sTn respondem melhor a terapia BCG. ----------ABSTRACT: Background. Bladder cancer is a common malignancy representing the 6th and the 5th most incident cancer in Portugal and in Italy, respectively. More than half of the cases relapse within one year, requiring though a lifelong follow-up. Intravesical instillation of Bacillus Calmette-Guérin (BCG) (an attenuated strain of Mycobacterium bovis) represents an effective immunotherapy of bladder cancer, although many aspects of the interaction of BCG with cancer cells and host immune cells remain obscure. Bladder cancer cells often express the sialylated forms of the Thomsen-Friedenreich (TF), i.e., sialil-T (sT) e sialil-Tn (sTn). However, it’s still unknown the sense of such expression in tumour malignancy and in the BCG therapy efficacy. Aim of the study. To investigate the role of the sT and sTn antigens on the malignant phenotype of bladder cancer cells and the immune mediated response to BCG therapy. Experimental. We have utilized populations of the bladder cancer cell lines HT1376 and MCR, genetically modified by transduction with the sialyltransferases ST3GAL1 or ST6GALNAC1 to express homogeneously sT or sTn antigens. The level of BCG internalized was assessed by flow cytometry. The whole gene expression profile of BCG-challenged or unchallenged bladder cancer cell lines was studied by microarray technology. The profile of cytokines secreted by BCG-challenged bladder cancer cells and that of macrophages challenged by the secretome of BCG-challenged bladder cancer cells was studied by multiplex immune-beads assay. Results. Transcriptome analysis of the sialyltransferase-transduced cells revealed that groups of genes involved in specific functions were regulated in parallel in the two cell lines, regardless the sialyltransferase expressed. Namely, in sialyltransferase-expressing cells, genes involved in the proper chromosomal segregation and in the DNA repair were consistently down-regulated, while genes reported in literature as markers for bladder cancer were modulated. BCG-challenging induced a tendency to up-regulation of the genes preserving genomic stability and reducing malignancy, but only in cells expressing either sT or sTn. Among the ten cytokines tested, only IL-6 and IL-8 were expressed by bladder cancer cell lines and up-regulated by BCG-challenging, mainly in sialyltransferases-expressing cells. In macrophages, inflammatory cytokines, such as IL-1β, IL-6 and TNFα, and the antinflammatory IL-10 were induced only by the secretome of BCG-challenged bladder cancer cells, particularly when expressing either sialyltransferase, predicting the stimulation of M1-like macrophages and a better response to BCG therapy. Conclusions. The general effect of the expression of the two sialyltransferases and their products in the bladder cancer cells is toward a more malignant phenotype. However, the stronger ability of sialyltransferase expressing cells to produce inflammatory cytokines upon BCG-challenging and to stimulate macrophages predicts a more effective response to BCG in tumours expressing the sialylated TF antigens. This is fully consistent with our recent clinical data obtained in collaboration, showing that patients with bladder cancer expressing sTn respond better to BCG therapy.

Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex

O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons de 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias.

HTLV-1 associated myelopathy diagnosed during lepromatous leprosy reaction treatment: a case report

Leprosy and human T cell lymphotropic virus type 1 infection are prevalent in Brazil. Coinfection by Mycobacterium leprae and HTLV-1 is reviewed and a case is reported. A 59 year-old woman was followed and HTLV-1 associated myelopathy was diagnosed during leprosy treatment. The clinical and neurological aspects of this unusual association were initially reviewed. Immunological markers and the possible prognoses due to the association of the diseases were discussed. The unexpected association of leprosy and HTLV-1 associated myelopathy may occur in endemic areas and causes difficulties in determining the correct diagnosis and adequate management of the neurological manifestations.

Estudo clínico-radiológico de crianças e adolescentes indígenas Suruí, Região Amazônica

INTRODUÇÃO: Entre os Suruí de Rondônia foram registradas incidências médias de TB > 2.500/100.000 habitantes, entre 1991-2002. Aproximadamente 50% desses casos foram notificados em < 15 anos. MÉTODOS: Trata-se de um estudo clínico-epidemiológico que teve como objetivo descrever as características clínico-radiológicas em crianças e adolescentes identificados como contatos de doentes de TB. Além disto, aplicar o sistema de pontuação para o diagnóstico de TB na infância e verificar se as condutas adotadas no nível local foram concordantes com as diretrizes nacionais. RESULTADOS: Foram analisados 52 Rx de 37 indígenas. Deste conjunto, 48,1% foram normais e 51,9% anormais. Alguns dos Rx apresentaram duas ou mais alterações, totalizando 36 eventos independentes. Observou-se infiltrados (38,9%), calcificações (38,9%), cavitações (11,1%) e atelectasias/derrame pleural (11,1%). Nas imagens anormais, 22,2% eram TB provavelmente ativa e 33,3% sequelas. A confrontação com as diretrizes constatou 52,6% de condutas discordantes. CONCLUSÕES: A presença da infecção tuberculosa latente (ITBL) e TB ativa, entre crianças e adolescentes, são indicadores de transmissão ativa e continuada do Mycobacterium tuberculosis. Os Rx mostrando alta frequência de infiltrados e calcificações é compatível com primo-infecção em idade precoce. Entretanto, essas alterações não são diferentes daquelas observadas entre outros grupos, não sugerindo comprometimento imunológico. As discordâncias apontadas indicam que o momento ideal para o tratamento da ITBL passou despercebido. Conclui-se que é fundamental a utilização do sistema de pontuação para o correto diagnóstico de TB na infância, assim como a realização de baciloscopia e cultura de escarro em adolescentes capazes de expectorar.

Class-I human leukocyte alleles in leprosy patients from Southern Brazil

INTRODUCTION: The present study was designed to investigate a possible role of HLA (histocompatibility leucocyte antigen) class-I alleles (HLA-A, -B, and -C) in leprosy patients from Southern Brazil. METHODS: Two hundred and twenty-five patients with leprosy and 450 individuals for the control group were involved in this research. HLA genotyping was performed through PCR-SSO protocols (One Lambda, USA); the frequency of these alleles was calculated in each group by direct counting, and the frequencies were then compared. RESULTS: There was an association between HLA-A*11 (6.9% vs 4.1%, p=0.0345, OR=1.72, 95% CI=1.05-2.81), HLA-B*38 (2.7% vs. 1.1%, p=0.0402, OR=2.44, 95% CI=1.05-5.69), HLA-C*12 (9.4% vs. 5.4%, p=0.01, OR=1.82, 95% CI=1.17-2.82), and HLA-C*16 (3.1% vs. 6.5%, p=0.0124, OR=0.47, 95% CI=0.26-0.85) and leprosy per se. In addition, HLA-B*35, HLA-C*04, and HLA-C*07 frequencies were different between lepromatous (LL) and tuberculoid (TT) patients. However, after adjusting for the number of alleles compared, Pc values became nonsignificant. CONCLUSIONS: Although our results do not support the previous findings that HLA class-I alleles play a role in leprosy pathogenesis, we suggest new studies because of the importance of the association between the HLA and KIR in the innate immune response to leprosy.

Epidemiological, clinical, and operational aspects of leprosy patients assisted at a referral service in the state of Maranhão, Brazil

INTRODUCTION: Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae. The aim of this study was to describe the epidemiological, clinical, and operational aspects of leprosy carriers. METHODS: A cross-sectional study leprosy patients assisted in São Luis, MA, was performed. RESULTS: Of the 85 cases analyzed, 51.7% were male participants, and 60% were brown. Concerning the age, 54.8% of women were between 35 and 49 years, and 57.6% of men were between 20 and 34 years. Lepromatous leprosy was found in 42.3% of cases, and the multibacillary form was found in 72.9%. The skin smear was positive in 42.3%. The occurrence of reaction was found in 43.5% of cases, and 83.5% had no Bacillus Calmette-Guérin scar. Leprosy in the family was reported by 44.7% of the patients. Most of the individuals (96.4%) lived in houses made of brick with more than three rooms (72.6%) and two persons per room (65.1%). Concerning the level of education, 41.4% of women and 34.1% of men had more than one to three years of education. The most evaluated age group in the beginning of the treatment was that of 35 to 49 years with a Grade 0 incapability (64.5%), and that in the end was the age group of 20 to 34 (29.9%) with Grade 0, 30.7% Grade 1, and 11.5% Grade 2. CONCLUSIONS: The frequency of multibacillary forms found in this study and the cases in family members point out delayed diagnoses. Thus, early diagnosis and appropriate treatment are important in decreasing the outcome of disabilities.

Abnormal spontaneous interleukin 8 receptor expression: a brief report of two cases

Interleukin 8 (CXCL8) is an autocrine chemokine specific for the chemoattraction and activation of granulocytes, NKT cells and T lymphocytes. Patients with tuberculosis and latent Mycobacterium tuberculosis infection were assessed for the spontaneous expression of CXCR1 (CD128) and CXCR2 on lymphocytes and monocytes. Compared with ex vivo profiles, increased spontaneous CXCR2 expression and normal CXCR1 expression were found on lymphocytes in two out of 59 individuals. Monocytes showed normal ex vivo profiles for both receptors. After stimulation with purified protein derivative, the in vitro levels of CXCL8 were below the median levels of all patients with prior tuberculosis. Spontaneous CXCR2 modulation did not cause notable variation in the in vitro levels of CXCL8.

Improving tuberculosis control through the partnership between university and the health system

INTRODUCTION: Tuberculosis (TB) control is linked to the availability of qualified methods for microbiological diagnostics; however, microscopy with limited sensitivity is the only method available in many locations. The objective of this study was to evaluate the introduction of culture, drug susceptibility testing (DST), and genotyping in the routine of a Municipal Program of Tuberculosis Control. METHODS: Direct microscopy of sputum and culture in Ogawa-Kudoh were performed on 1,636 samples from 787 patients. DST of positive cultures was performed by resazurin microtiter assay and genotyping by mycobacterial interspersed repetitive units-variable number tandem repeat. RESULTS: A total 91 patients with TB were identified. The culture increased case detection by 32% compared with the microscopy; acquired resistance was 3.3% and the genotyping showed high genetic diversity. CONCLUSIONS: Ogawa-Kudoh contributed significantly to the increase in case detection and is suitable for implementation in poor-resource locations. The acquired resistance rate was lower than that reported in a recent Brazilian survey. The high genetic diversity is possibly related to the high TB prevalence in the population, as well as to early detection and suitable treatment of patients. The interaction between research and health care is important for reorienting the practice, transferring technology, and improving TB control.

Oral coinfection can stress peripheral lymphocyte to inflammatory activity in leprosy

INTRODUCTION: This study evaluated the intracellular profile of interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-10 (IL-10) and interferon-γ (IFN-γ) in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from leprosy patients based on oral infections presence to determine whether these coinfections could be associated with pro-inflammatory activity in leprosy. METHODS: Leprosy patients regardless of clinical form and specific leprosy treatment (n=38) were divided into two groups: Group I - leprosy patients with oral infections (n=19), and Group II - leprosy patients without oral infections (n=19). Non-leprosy patients presenting oral infections were assigned to the control Group (n=10). Intracellular IL-2, IL-4, IL-10 and IFN-γ production was evaluated by flow cytometry (FACS) before and 7 days after controlling the oral infection in the Group I, before and 7 days after dental prophylaxis in the Group II, and during oral infection process in control Group. RESULTS: Low percentages of CD3+ lymphocytes bearing IL-2, IL-10 and IFN-γ were observed in the Group I and Group II at baseline and 7 days after therapy or prophylaxis compared to controls. Group I showed reduced percentages of IL-4 at baseline and 7 days after therapy compared to controls, or at baseline of Group II, and the Group II showed reduced percentages of CD3+ cells bearing IL-4 compared to control. An increase of the percentages of CD3+cells bearing IL-4 was observed in the Group I after the oral infections treatment. CONCLUSIONS: The occurrence of oral infections favors the intracellular cytokines expression and, probably, the inflammatory reaction operating as a stimulatory signal triggering the leprosy reactions.

Bone tuberculosis: a case report on child

The authors report a case of a 12-year-old child with a complaint of pain and deformity in the lower thoracic region that had lasted for two years. Clinical, epidemiological and laboratory characteristics associated with images of apparent damage in the T9-T10 and T11-T12 vertebrae taken by radiography of the thoracic spine and nuclear magnetic resonance in addition to the positivity of the molecular test based on the polymerase chain reaction, led to tuberculous spondylitis being diagnosed and specific therapy was started. Culture of vertebral biopsy was positive for Mycobacterium tuberculosis after thirty days.

The performance of an in-house nested-PCR technique for pleural tuberculosis diagnoses

Introduction This study evaluated the performance of an in-house nested-PCR system for the detection of the Mycobacterium tuberculosis complex in pleural fluid, blood and urine samples from pleural effusion tuberculosis patients by health services physicians in Pernambuco, Brazil. Methods A prospective double-blind study with 37 hospitalized patients of both sexes, aged over 15, was used to investigate the diagnosis of pleural effusion. The criteria used to define the cases included the demonstration of bacillus in biological samples by smear or culture or by a granulomatous finding in the histopathological examination, associated with an evident response to specific treatments to each clinical situation. Pleural fluid, blood and urine samples were collected and subjected to routine tests and the nested PCR technique to assess for M. tuberculosis amplification. Results In total, 37 pleural effusion patients took part in the study, of whom 19 (51.3%) had tubercular etiologies and 18 (48.7%) had etiologies from other causes. When the pleural fluid, blood and/or urine sample in-house nested-PCR sensitivities were evaluated simultaneously, the results were positive regardless of the biological specimen (the sensitivity was 84.2%); however, when the blood and/or urine samples were analyzed together, the sensitivity was 72.2%. When the pleural fluid samples were evaluated alone, the sensitivity was only 33.3%. Conclusions The performance of the diagnostic pleural tuberculosis nested-PCR was directly related to the diversity of the samples collected from the same patient. Additionally, this study may identify a need to prioritize non-invasive blood and urine collection for this diagnosis.