Effect of moderate and severe heat stress on avian embryonic Hsp70 gene expression

Stress response is a universal mechanism developed by all organisms to deal with adverse changes in the environment, which lead to the synthesis of heat shock proteins (Hsps). In this study, the effect of moderate (41degreesC) and severe (44degreesC) heat stress on Hsp70 transcript expression pattern was investigated during chicken embryogenesis. Acute exposure to severe heat stress for one hour resulted in a fifteen-fold increase in Hsp70 mRNA levels. The return of stressed embryos to normal incubation temperature resulted in Hsp70 mRNA levels five-fold higher than control after three hours and normal levels after six hours. Moderate heat stress did not induce enhancements on Hsp70 mRNA levels. The spatial expression of Hsp70 transcripts was detected in embryos under normal incubation conditions. Whole-mount in situ hybridization analysis showed that Hsp70 transcripts were constitutively present in somite and in distinct encephalic domains (predominantly in prosencephalon and mesencephalon areas) of the chicken embryo. These results showed that Hsp70 induction is dependent on incubation temperature conditions, suggesting that early chicken embryos may induce a quick emergence response to cope with severe heat stress by increasing Hsp70 mRNA levels.

Desenvolvimento folicular de embriões de frangos de corte de diferentes genótipos expostos ao estresse térmico crônico

O objetivo do trabalho foi avaliar as alterações tegumentares (morfogênese da pena), em embriões de frangos de corte de linhagens de diferentes padrões de crescimento, obtidos de ovos incubados sob diferentes temperaturas. Os ovos foram obtidos de matrizes das linhagens Cobb 500 e ISA JA57, distribuídos proporcionalmente em três incubadoras. do primeiro (D1) ao sexto dia (D6) de incubação, utilizou-se uma temperatura padrão (37,8°C). A partir do sétimo dia (D7) e até o momento do nascimento aos 21 dias (D21), uma das incubadoras teve a temperatura reduzida para 36,8°C (fria) e uma outra alterada para 38,8°C (quente). A terceira incubadora foi mantida a 37,8°C (controle). O delineamento adotado foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 2 (temperatura de incubação e linhagem). A temperatura de incubação e a linhagem não alteraram a densidade dos folículos da pena (número médio de folículos por área de 337,5µm²) nas regiões femural e dorsopélvica dos embriões até os 11 dias (D11). Entretanto, observou-se aumento na densidade folicular na região dorsal dos embriões aos 16 dias (D16) devido ao aumento da temperatura, permanecendo até o momento do nascimento. É possível oncluirque embriões incubados em temperatura acima da recomendada (38,8°C) apresentam uma maior densidade de folículos na região dorsopélvica. Apesar disso, a morfogênese dos folículos permaneceu inalterada.

Brycon gouldingi (Teleostei, Characidae): aspects of the embryonic development in a new fish species with aquaculture potential

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Aspectos morfológicos do saco vitelino em roedores da subordem Hystricomorpha: paca (Agouti paca) e cutia (Dasyprocta aguti)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Desenvolvimento do Trato Gastrointestinal de Embriões Oriundos de Matrizes Pesadas de 30 e 60 Semanas de Idade

O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da idade das matrizes pesadas sobre o desenvolvimento do trato gastrointestinal (TGI) dos embriões no terço final do período de incubação, bem como a utilização das reservas do saco vitelino nas 24 h pós-eclosão, em pintos alimentados ou em jejum. Foram utilizados ovos férteis da linhagem Cobb 500, oriundos de matrizes pesadas com 30 e 60 semanas de idade. O desenvolvimento do TGI (proventrículo+moela, segmentos do intestino delgado e saco vitelino) foi estudado entre o 17º e 21º dias de incubação (Experimento 1). Nas 24 h pós-eclosão foi pesquisado o efeito da presença ou não de alimento no lúmen intestinal sobre a utilização das reservas do saco vitelino (Experimento 2). Os achados deste trabalho mostraram que, ao contrário do embrião, o desenvolvimento do intestino delgado e o peso do saco vitelino não sofreram influência da idade das matrizes. Na fase pós-eclosão, na ausência de alimento, o desenvolvimento do intestino delgado foi maior nas matrizes com 60 semanas, sendo dependente do crescimento do jejuno. A presença do alimento no lúmen teve influência na utilização das reservas do saco vitelino apenas nas matrizes com 30 semanas de idade. Os resultados deste experimento mostraram que a idade da matriz é importante fator no desenvolvimento do trato gastrointestinal do embrião, sendo fator relevante no crescimento pós-ecloão dos pintos.

Infectious bronchitis virus: detection and vaccine Strain differentiation by semi-nested RT-PCR

A semi-nested reverse transcription-polymerase chain reaction (Semi-N-RT-PCR) was developed and used to detect the S glycoprotein gene of infectious bronchitis virus (IBV) strains and to discriminate H120 vaccine strain from other strains. Viral RNA was extracted from the allantoic fluid of chicken embryos and from tissues of chickens experimentally infected with different strains of IBV. Amplification and identification of the viral RNA was performed using two sets of primers complementary to a region of the S glycoprotein gene in the Semi-N-RT-PCR assay. The pair of primers used in the first PCR consisted of universal oligonucleotides flanking a more variable region of S1-S2 gene. The second primer pair was used in the Semi-N-RT-PCR and was comprised of one of the primers from the first universal pair together with either another universal internal oligolucleotide or a oligonucleotide sequence specific for the H120 strain of IBV. The universal primers detected all reference IBV strains and field isolates tested herein. The Semi-N-RT-PCR had high sensitivity and specificity, and was able to differentiate the H120 vaccine strain from other reference IBV strains; including M41 strain. All tissue samples collected from chickens experimentally infected with H120 or M41 strains were positive in the semi-nested RT-PCR using universal primers, while only the H120-infected tissue samples were amplified by the set of primers containing the H120-oligonucleotide. In conclusion, the ability of Semi-N-RT-PCR to detect distinct IBV strains and preliminarily discriminate the vaccine strain (H120) closes a diagnostic gap and offers the opportunity to use comprehensive PCR procedures for the IBV diagnosis.

A quantitative nature of somatic embryogenesis in soybean

The objectives of this research were to investigate the genetic parameters associated with the in vitro formation of somatic embryos in soybean and to determine the effect of light intensity on the embryogenic capability of F-1, F-2, and backcross (RC1P1 and RC1P2) progenies derived from crosses between embryogenic (IAS-5 and Embrapa-1) and nonembryogenic (Parana) cultivars. Immature cotyledons (4-6 mm in length) derived from the parental lines, F-1, F-2, RC1P1, and RC1P2 were grown for 90 d on the inductive N10 medium, after which the number of somatic embryos was recorded. Chi-square tests for goodness of fit showed that the genetic component of the somatic embryogenesis trait is controlled in a quantitative manner by approximately 10 genes. A normal distribution for somatic embryo formation in the F-2 generations was observed reinforcing the quantitative nature of the trait. Variation in light intensity (8-12 and 27-33 mu mol m(-2) s(-1)) had no effect on somatic embryo formation in the parental material tested.

Embryology of the mangrove crab Ucides cordatus (Brachyura : Ocypodidae)

Ovigerous females of Ucides cordatus were collected at different mangrove areas in Iguape, SP, Brazil, and reared in the laboratory in order to describe each embryonic stage. Accounts of the biometry, internal morphology, and coloration of the eggs were taken. The embryonic development took 19 +/- 1d (27degreesC, 12:12 h) with eight well-defined stages. A salinity test on embryonic development was conducted, and a better result was obtained in a rearing at 15parts per thousand. Eggs are slightly ellipsoid through development and undergo an increase of 13.9% in diameter to 91.7% in volume. Cluster analysis revealed three different groups for diameter (Stages I-II, III-VI, and VII-VIII) and volume (Stages I-III, IV-V, and VI-VIII), supporting the classification of embryos into initial, intermediate, and final stages, which are currently used in studies on the reproductive biology of decapod crustaceans. In this species, the identification of the different embryonic stages can be achieved only if biometric data are combined with information on the internal morphology of embryos and coloration of the eggs.

Capacidade embriogênica da cultivar IAS-5 de soja

O objetivo deste trabalho foi estudar o controle genético da formação de embriões somáticos da cultivar IAS-5 de soja. O experimento foi conduzido em casa de vegetação, cultivando-se quatro plantas por vaso, sob fotoperíodo de 14 horas e temperatura em torno de 28°C. Efetuaram-se cruzamentos entre os parentais não-embriogênicos (cultivares IAC-6, Paraná e IAC-15) e embriogênico (cultivar IAS-5) e retrocruzamentos para obtenção das gerações F1, F2,RC1P1 e RC1P2. Cotilédones imaturos, com 4-6 mm de comprimento, derivados dos parentais das gerações F1, F2, RC1P1 e RC1P2 foram cultivados em placas de Petri contendo meio N10, por um período de 90 dias, em câmara de crescimento. Os embriões somáticos derivados da indução foram contados, e os números, usados para obtenção dos parâmetros genéticos. Os resultados obtidos mostraram que o caráter capacidade de produção de embriões somáticos da cultivar IAS-5 é de natureza quantitativa e controlado por, aproximadamente, 20 genes.

Cellular and molecular characterization of an embryonic cell line (BME26) from the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus

The cellular and molecular characteristics of a cell line (BME26) derived from embryos of the cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus were studied. The cells contained glycogen inclusions, numerous mitochondria, and vesicles with heterogeneous electron densities dispersed throughout the cytoplasm. Vesicles contained lipids and sequestered palladium meso-porphyrin (Pd-mP) and rhodamine-hemoglobin, suggesting their involvement in the autophagic and endocytic pathways. The cells phagocytosed yeast and expressed genes encoding the antimicrobial peptides (microplusin and defensin). A cDNA library was made and 898 unique mRNA sequences were obtained. Among them, 556 sequences were not significantly similar to any sequence found in public databases. Annotation using Gene Ontology revealed transcripts related to several different functional classes. We identified transcripts involved in immune response such as ferritin, serine proteases, protease inhibitors,. antimicrobial peptides, heat shock protein, glutathione S-transferase, peroxidase, and NADPH oxidase. BME26 cells transfected with a plasmid carrying a red fluorescent protein reporter gene (DsRed2) transiently expressed DsRed2 for up to 5 weeks. We conclude that BME26 can be used to experimentally analyze diverse biological processes that occur in R. (B.) microplus such as the innate immune response to tick-borne pathogens. (C) 2008 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Desempenho de diferentes estádios embrionários no cultivo in vitro de embriões de 'Pêra Rio' x 'Poncã'

Objetivou-se verificar qual o melhor estádio embrionário para o cultivo de embriões imaturos oriundos de frutos provenientes de hibridação entre 'Pêra Rio' x 'Poncã' , bem como o efeito de diferentes concentrações do meio de cultura MT. Os embriões em diferentes estádios de desenvolvimento (globulares, torpedo e cordiforme) foram excisados e inoculados em tubos de ensaio contendo 15 mL do meio MT com diferentes concentrações (0; 50; 100 e 150% da composição original e acrescido de 50 g.L-1 de sacarose). Após a inoculação, os embriões foram incubados à 27±1ºC, fotoperíodo de 16 horas e irradiância de 32 mmol.m-2.s-1. Após 90 dias, avaliou-se o comprimento da parte aérea e do sistema radicular, massa fresca e número de folhas das plântulas. Melhor desenvolvimento dos embriões imaturos foi obtido em estádio cotiledonar e com a concentração de 150% do meio MT.

Effect of recombinant bovine somatotropin (bST) on follicular population and on in vitro buffalo embryo production

The objective of this study was to evaluate the effect of bovine somatotropin (bST) on ovarian follicular population in buffalo heifers and its influence on oocyte quality, recovery rates and in vitro embryo production. We tested the hypothesis that bST treatment in buffalo females submitted to an ovum pick-up (OPU) program Would improve the number of follicles recruited, oocyte quality and in vitro embryo production. A total of 10 heifers were assigned into two treatment groups: group bST (n = 5; receiving 500 mg of bST in regular intervals) and control group (n = 5; without additional treatment). Both groups were subjected to OPU sessions twice a week (every 3 or 4 days), for a total of 10 sessions per female, although due to procedural problems, only the first five OPU sessions produced embryos. The number of follicles and the diameters were recorded at all OPU sessions. The harvested oocytes were counted and classified according to their quality as either A, B, C, D or E, with A and B considered good quality. Cleavage and blastocyst production rates were evaluated 2 and 7 days after in vitro fertilization, respectively. The bST treatment increased the total number of antral follicles (> 3 mm in diameter; 12.2 compared with 8.7: p, < 0.05) and of small antral follicles (< 5 mm; 9.1 compared with 6.5; p < 0.05) per OPU session. The bST also tended to increase the number of oocytes recovered per session (5.2 compared with 4.1; p = 0.07), and enhanced the percentage of good quality oocytes (48.8% compared with 40.6%; p = 0.07), bST showed no effect on cleavage and blastocyst production rates (p > 0.05). The significant effects of performing repeated OPU sessions were decreasing the follicular population (p < 0.001) as well as the number of follicles aspirated (p < 0.001), and oocytes recovered (p < 0.02). In conclusion, bST treatment improves the follicular population, demonstrating its possible application in buffalo donors submitted to OPU programs. (c) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Mobilização de água e conservação da viabilidade de embriões de sementes recalcitrantes de ingá (Inga vera Willd. subsp. affinis (DC.) T. D. Pennington)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Mechanism and control of Genipa americana seed germination

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Isoenzimas na diferenciação de sementes de três espécies do gênero Euterpe

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)