980 resultados para Activité tyrosine kinase
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The initial step in viral infection is the attachment of the virus to the host cell via an interaction with its receptor. We have previously shown that a receptor for human papillomavirus is the alpha6 integrin. The alpha6 integrin is involved in the attachment of epithelial cells with the basement membrane, but recent evidence suggests that ligation of many integrins results in intracellular signaling events that influence cell proliferation. sere we present evidence that exposure of A431 human epithelial cells to human papillomavirus type 6b L1 virus-like particles (VLPs) results in a dose-dependent increase in cell proliferation, as measured by bromodeoxyuridine incorporation. This proliferation is Lost if VLPs are first denatured or incubated with a monoclonal antibody against L1 protein. The MEK1 inhibitor PB98059 inhibits the VLP-mediated increase in fell proliferation, suggesting involvement of the Ras-MAP kinase pathway, Indeed, VLP binding results in rapid phosphorylation of the beta4 integrin upon tyrosine residues and subsequent recruitment of the adapter protein She to beta4, Within 30 min, the activation of Ras, Raf, and Erk2 was observed. Finally, the upregulation of c-myc mRNA was observed at 60 min, These data indicate that human papillomavirus type 6b is able to signal cells via the Ras-MAP kinase pathway to induce cell proliferation. We hypothesize that such a mechanism would allow papillomaviruses to infect hosts more successfully by increasing the potential pool of cells they are able to infect via the initiation of proliferation in resting keratinocyte stem and suprabasal cells.
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Epithelial locomotility is a fundamental determinant of tissue patterning that is subject to strict physiological regulation. The current, study sought to identify cellular signals that initiate cell migration in cultured thyroid epithelial cells. Porcine thyroid cells cultured as 3-dimensional follicles convert to 2-dimensional monolayers when deprived of agents that stimulate cAMP/PKA signaling. This morphogenetic event is driven by the activation of cell-on-substrate locomotility, providing a convenient assay for events that regulate the initiation of locomotion. In this system, the extracellular signal regulated kinase (ERK) pathway became activated as follicles converted to monolayer, as demonstrated by immunoblotting for activation-specific phosphorylation and nuclear accumulation of ERK. Inhibition of ERK activation using the drug PD98059 effectively prevented cells from beginning to migrate. PD98059 inhibited cell spreading, actin filament reorganization and the assembly of focal adhesions, cellular events that mediate the initiation of thyroid cell locomotility. Akt (PKB) signaling was also activated during follicle-to-monolayer conversion and the phosphoinositide 3-kinase (PI3-kinase) inhibitor, wortmannin, also blocked the initiation of cell movement. Wortmannin did not, however, block activation of ERK signaling. These findings, therefore, identify the ERK and PI3-kinase signaling pathways as important stimulators of thyroid cell locomotility. These findings are incorporated into a model where the initiation of thyroid cell motility constitutes a morphogenetic checkpoint regulated by coordinated changes in stimulatory (ERK, PI3-kinase) and tonic inhibitory (cAMP/PKA) signaling pathways. Cell Motil. Cytoskeleton 49:93-103, 2001. (C) 2001 Wiley-Liss, Inc.
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Cells normally grow to a certain size before they enter mitosis and divide. Entry into mitosis depends on the activity of Cdk1, which is inhibited by the Wee1 kinase and activated by the Cdc25 phosphatase. However, how cells sense their size for mitotic commitment remains unknown. Here we show that an intracellular gradient of the dual-specificity tyrosine-phosphorylation regulated kinase (DYRK) Pom1, which emanates from the ends of rod-shaped Schizosaccharomyces pombe cells, serves to measure cell length and control mitotic entry. Pom1 provides positional information both for polarized growth and to inhibit cell division at cell ends. We discovered that Pom1 is also a dose-dependent G2-M inhibitor. Genetic analyses indicate that Pom1 negatively regulates Cdr1 and Cdr2, two previously described Wee1 inhibitors of the SAD kinase family. This inhibition may be direct, because in vivo and in vitro evidence suggest that Pom1 phosphorylates Cdr2. Whereas Cdr1 and Cdr2 localize to a medial cortical region, Pom1 forms concentration gradients from cell tips that overlap with Cdr1 and Cdr2 in short cells, but not in long cells. Disturbing these Pom1 gradients leads to Cdr2 phosphorylation and imposes a G2 delay. In short cells, Pom1 prevents precocious M-phase entry, suggesting that the higher medial Pom1 levels inhibit Cdr2 and promote a G2 delay. Thus, gradients of Pom1 from cell ends provide a measure of cell length to regulate M-phase entry.
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In the pathogenesis of type I diabetes mellitus, activated leukocytes infiltrate pancreatic islets and induce beta cell dysfunction and destruction. Interferon (IFN)-gamma, tumor necrosis factor-alpha and interleukin (IL)-1 beta play important, although not completely defined, roles in these mechanisms. Here, using the highly differentiated beta Tc-Tet insulin-secreting cell line, we showed that IFN-gamma dose- and time-dependently suppressed insulin synthesis and glucose-stimulated secretion. As described previously IFN-gamma, in combination with IL-1 beta, also induces inducible NO synthase expression and apoptosis (Dupraz, P., Cottet, S., Hamburger, F., Dolci, W., Felley-Bosco, E., and Thorens, B. (2000) J. Biol. Chem. 275, 37672--37678). To assess the role of the Janus kinase/signal transducer and activator of transcription (STAT) pathway in IFN-gamma intracellular signaling, we stably overexpressed SOCS-1 (suppressor of cytokine signaling-1) in the beta cell line. We demonstrated that SOCS-1 suppressed cytokine-induced STAT-1 phosphorylation and increased cellular accumulation. This was accompanied by a suppression of the effect of IFN-gamma on: (i) reduction in insulin promoter-luciferase reporter gene transcription, (ii) decrease in insulin mRNA and peptide content, and (iii) suppression of glucose-stimulated insulin secretion. Furthermore, SOCS-1 also suppressed the cellular effects that require the combined presence of IL-1 beta and IFN-gamma: induction of nitric oxide production and apoptosis. Together our data demonstrate that IFN-gamma is responsible for the cytokine-induced defect in insulin gene expression and secretion and that this effect can be completely blocked by constitutive inhibition of the Janus kinase/STAT pathway.
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Adrenal chromaffin cells synthesize and secrete catecholamines and neuropeptides that may regulate hormonal and paracrine signaling in stress and also during inflammation. The aim of our work was to study the role of the cytokine interleukin-1beta (IL-1beta) on catecholamine release and synthesis from primary cell cultures of human adrenal chromaffin cells. The effect of IL-1beta on neuropeptide Y (NPY) release and the intracellular pathways involved in catecholamine release evoked by IL-1beta and NPY were also investigated. We observed that IL-1beta increases the release of NPY, norepinephrine (NE), and epinephrine (EP) from human chromaffin cells. Moreover, the immunoneutralization of released NPY inhibits catecholamine release evoked by IL-1beta. Moreover, IL-1beta regulates catecholamine synthesis as the inhibition of tyrosine hydroxylase decreases IL-1beta-evoked catecholamine release and the cytokine induces tyrosine hydroxylase Ser40 phosphorylation. Moreover, IL-1beta induces catecholamine release by a mitogen-activated protein kinase (MAPK)-dependent mechanism, and by nitric oxide synthase activation. Furthermore, MAPK, protein kinase C (PKC), protein kinase A (PKA), and nitric oxide (NO) production are involved in catecholamine release evoked by NPY. Using human chromaffin cells, our data suggest that IL-1beta, NPY, and nitric oxide (NO) may contribute to a regulatory loop between the immune and the adrenal systems, and this is relevant in pathological conditions such as infection, trauma, stress, or in hypertension.
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Bisphosphonates are potent inhibitors of osteoclast function widely used to treat conditions of excessive bone resorption, including tumor bone metastases. Recent evidence indicates that bisphosphonates have direct cytotoxic activity on tumor cells and suppress angiogenesis, but the associated molecular events have not been fully characterized. In this study we investigated the effects of zoledronate, a nitrogen-containing bisphosphonate, and clodronate, a non-nitrogen-containing bisphosphonate, on human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) adhesion, migration, and survival, three events essential for angiogenesis. Zoledronate inhibited HUVEC adhesion mediated by integrin alphaVbeta3, but not alpha5beta1, blocked migration and disrupted established focal adhesions and actin stress fibers without modifying cell surface integrin expression level or affinity. Zoledronate treatment slightly decreased HUVEC viability and strongly enhanced tumor necrosis factor (TNF)-induced cell death. HUVEC treated with zoledronate and TNF died without evidence of enhanced annexin-V binding, chromatin condensation, or nuclear fragmentation and caspase dependence. Zoledronate inhibited sustained phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) and in combination with TNF, with and without interferon (IFN) gamma, of protein kinase B (PKB/Akt). Constitutive active PKB/Akt protected HUVEC from death induced by zoledronate and TNF/IFNgamma. Phosphorylation of c-Src and activation of NF-kappaB were not affected by zoledronate. Clodronate had no effect on HUVEC adhesion, migration, and survival nor did it enhanced TNF cytotoxicity. Taken together these data demonstrate that zoledronate sensitizes endothelial cells to TNF-induced, caspase-independent programmed cell death and point to the FAK-PKB/Akt pathway as a novel zoledronate target. These results have potential implications to the clinical use of zoledronate as an anti-angiogenic or anti-cancer agent.
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Catecholamines as well as phorbol esters can induce the phosphorylation and desensitization of the alpha1B-adrenergic receptor (alpha1BAR). In this study, phosphoamino acid analysis of the phosphorylated alpha1BAR revealed that both epinephrine- and phorbol ester-induced phosphorylation predominantly occurs at serine residues of the receptor. The findings obtained with receptor mutants in which portions of the C-tail were truncated or deleted indicated that a region of 21 amino acids (393-413) of the carboxyl terminus including seven serines contains the main phosphorylation sites involved in agonist- as well as phorbol ester-induced phosphorylation and desensitization of the alpha1BAR. To identify the serines invoved in agonist- versus phorbol ester-dependent regulation of the receptor, two different strategies were adopted, the seven serines were either substituted with alanine or reintroduced into a mutant lacking all of them. Our findings indicate that Ser394 and Ser400 were phosphorylated following phorbol ester-induced activation of protein kinase C, whereas Ser404, Ser408, and Ser410 were phosphorylated upon stimulation of the alpha1BAR with epinephrine. The observation that overexpression of G protein-coupled kinase 2 (GRK2) could increase agonist-induced phosphorylation of Ser404, Ser408, and Ser410, strongly suggests that these serines are the phosphorylation sites of the alpha1BAR for kinases of the GRK family. Phorbol ester-induced phosphorylation of the Ser394 and Ser400 as well as GRK2-mediated phosphorylation of the Ser404, Ser408, and Ser410, resulted in the desensitization of alpha1BAR-mediated inositol phosphate response. This study provides generalities about the biochemical mechanisms underlying homologous and heterologous desensitization of G protein-coupled receptors linked to the activation of phospholipase C.
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PURPOSE OF REVIEW: Lipoproteins play a critical role in the development of atherosclerosis, which might result partly from their capacity to induce specific intracellular signaling pathways. The goal of this review is to summarize the signaling properties of lipoproteins, in particular, their capacity to induce activation of mitogen-activated protein kinase pathways and the resulting modulation of cellular responses in blood vessel cells. RECENT FINDINGS: Lipoproteins activate the extracellular signal-regulated kinase and p38 mitogen-activated protein kinase pathways in all blood vessel cell types. This may require lipoprotein docking to scavenger receptor B1, allowing transfer of cholesterol and sphingosine-1-phosphate to plasma membranes. Subsequent propagation of the signals probably requires the stimulation of G protein-coupled receptors, followed by the transactivation of receptor tyrosine kinases. Lipoprotein-induced extracellular signal-regulated kinase activity favors cell proliferation, whereas lipoprotein-induced p38 mitogen-activated protein kinase activity leads to cell hyperplasia and promotes cell migration. Some signaling pathways and cellular effects induced by lipoproteins have been observed in atherosclerotic plaques and therefore represent potential targets for the development of anti-atherosclerotic drugs. SUMMARY: The main blood vessel cell types have the capacity to activate protein kinase pathways in the presence of lipoproteins. This induces cell proliferation, hyperplasia and migration, known to be dysregulated in atherosclerotic lesions.
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Division site positioning is critical for both symmetric and asymmetric cell divisions. In many organisms, positive and negative signals cooperate to position the contractile actin ring for cytokinesis. In rod-shaped fission yeast Schizosaccharomyces pombe cells, division at midcell is achieved through positive Mid1/anillin-dependent signaling emanating from the central nucleus and negative signals from the dual-specificity tyrosine phosphorylation-regulated kinase family kinase Pom1 at the cell poles. In this study, we show that Pom1 directly phosphorylates the F-BAR protein Cdc15, a central component of the cytokinetic ring. Pom1-dependent phosphorylation blocks Cdc15 binding to paxillin Pxl1 and C2 domain protein Fic1 and enhances Cdc15 dynamics. This promotes ring sliding from cell poles, which prevents septum assembly at the ends of cells with a displaced nucleus or lacking Mid1. Pom1 also slows down ring constriction. These results indicate that a strong negative signal from the Pom1 kinase at cell poles converts Cdc15 to its closed state, destabilizes the actomyosin ring, and thus promotes medial septation.
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Angiotensin II (ANG II), the main effector of the renin-angiotensin system, is implicated in endothelial permeability, recruitment and activation of the immune cells, and also vascular remodeling through induction of inflammatory genes. Matrix metalloproteinases (MMPs) are considered to be important inflammatory factors. Elucidation of ANG II signaling pathways and of possible cross-talks between their components is essential for the development of efficient inhibitory medications. The current study investigates the inflammatory signaling pathways activated by ANG II in cultures of human monocytic U-937 cells, and the effects of specific pharmacological inhibitors of signaling intermediates on MMP-9 gene (MMP-9) expression and activity. MMP-9 expression was determined by real-time PCR and supernatants were analyzed for MMP-9 activity by ELISA and zymography methods. A multi-target ELISA kit was employed to evaluate IκB, NF-κB, JNK, p38, and STAT3 activation following treatments. Stimulation with ANG II (100 nM) significantly increased MMP-9 expression and activity, and also activated NF-κB, JNK, and p38 by 3.8-, 2.8- and 2.2-fold, respectively (P < 0.01). ANG II-induced MMP-9 expression was significantly reduced by 75 and 67%, respectively, by co-incubation of the cells with a selective inhibitor of protein kinase C (GF109203X, 5 µM) or of rho kinase (Y-27632, 15 µM), but not with inhibitors of phosphoinositide 3-kinase (wortmannin, 200 nM), tyrosine kinases (genistein, 100 µM) or of reactive oxygen species (α-tocopherol, 100 µM). Thus, protein kinase C and Rho kinase are important components of the inflammatory signaling pathways activated by ANG II to increase MMP-9 expression in monocytic cells. Both signaling molecules may constitute potential targets for effective management of inflammation.
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Les sécrétines peptidiques de l’hormone de croissance (GHRPs) constituent une classe de peptides synthétiques capables de stimuler la sécrétion de l’hormone de croissance (GH). Cette activité est médiée par leur liaison à un récepteur couplé aux protéines G : le récepteur des sécrétines de l’hormone de croissance (GHS-R1a), identifié subséquemment comme le récepteur de la ghréline. La ghréline est un peptide de 28 acides aminés sécrété principalement par les cellules de la muqueuse de l’estomac, qui exerce de nombreux effets périphériques indépendamment de la sécrétion de l’hormone de croissance. Les effets indépendants de la sécrétion de GH incluent, entre autres, des actions sur le contrôle de la prise de nourriture, le métabolisme énergétique, la fonction cardiaque, le système immunitaire et la prolifération cellulaire. L’étude de la distribution périphérique des sites de liaison des GHRPs nous a permis d’identifier un second site, le CD36, un récepteur scavenger exprimé dans plusieurs tissus dont le myocarde, l’endothélium de la microvasculature et les monocytes/macrophages. Le CD36 exprimé à la surface du macrophage joue un rôle clé dans l’initiation du développement de l’athérosclérose par la liaison et l’internalisation des lipoprotéines de faible densité oxydées (LDLox) dans l’espace sous-endothélial de l’artère. L’hexaréline, un analogue GHRP, a été développé comme agent thérapeutique pour stimuler la sécrétion de l’hormone de croissance par l’hypophyse. Sa propriété de liaison aux récepteurs GHS-R1a et CD36 situés en périphérie et particulièrement sa capacité d’interférer avec la liaison des LDLox par le CD36 nous ont incité à évaluer la capacité de l’hexaréline à moduler le métabolisme lipidique du macrophage. L’objectif principal de ce projet a été de déterminer les effets de l’activation des récepteurs CD36 et GHS-R1a, par l’hexaréline et la ghréline, le ligand endogène du GHS-R1a, sur la physiologie du macrophage et de déterminer son potentiel anti-athérosclérotique. Les résultats montrent premièrement que l’hexaréline et la ghréline augmentent l’expression des transporteurs ABCA1 et ABCG1, impliqués dans le transport inverse du cholestérol, via un mécanisme contrôlé par le récepteur nucléaire PPARγ. La régulation de l’activité transcriptionnelle de PPARγ par l’activation des récepteurs CD36 et GHS-R1a se fait indépendamment de la présence du domaine de liaison du ligand (LBD) de PPARγ et est conséquente de changements dans l’état de phosphorylation de PPARγ. Une étude plus approfondie de la signalisation résultant de la liaison de la ghréline sur le GHS-R1a révèle que PPARγ est activé par un mécanisme de concertation entre les voies de signalisation Gαq/PI3-K/Akt et Fyn/Dok-1/ERK au niveau du macrophage. Le rôle de PPARγ dans la régulation du métabolisme lipidique par l’hexaréline a été démontré par l’utilisation de macrophages de souris hétérozygotes pour le gène de Ppar gamma, qui présentent une forte diminution de l’activation des gènes de la cascade métabolique PPARγ-LXRα-transporteurs ABC en réponse à l’hexaréline. L’injection quotidienne d’hexaréline à un modèle de souris prédisposées au développement de l’athérosclérose, les souris déficientes en apoE sous une diète riche en cholestérol et en lipides, se traduit également en une diminution significative de la présence de lésions athérosclérotiques correspondant à une augmentation de l’expression des gènes cibles de PPARγ et LXRα dans les macrophages péritonéaux provenant des animaux traités à l’hexaréline. L’ensemble des résultats obtenus dans cette thèse identifie certains nouveaux mécanismes impliqués dans la régulation de PPARγ et du métabolisme du cholestérol dans le macrophage via les récepteurs CD36 et GHS-R1a. Ils pourraient servir de cibles thérapeutiques dans une perspective de traitement des maladies cardiovasculaires.
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L’activité catalytique du cytochrome P450 dépend de la disponibilité d’électrons produits par la NADPH P450 réductase (NPR). Notre étude a pour but de déterminer comment l’expression de la NPR est modulée chez le lapin. Afin de comprendre comment l’expression de la NPR est modulée, des hépatocytes de lapins témoins ont été incubés pendant 2, 4, 24 et 48 heures en présence de plusieurs activateurs de facteurs de transcription connus du cytochrome P450. De plus, des lapins ayant reçu une injection sous-cutanée de térébenthine afin de produire une réaction inflammatoire aseptique sont sacrifiés 48 heures plus tard dans le but d’étudier les effets de l’inflammation sur l’expression de la NPR. La rosiglitazone, le fénofibrate, l’acétate de plomb et le chlorure de cobalt (des inducteurs des PPAR, PPAR, AP-1 et HIF-1), après 48 heures d’incubation, n’ont provoqué aucun changement d’expression ou d’activité de la NPR. Après 48 heures d’incubation, la dexaméthasone (Dexa) a augmenté la quantité d’ARNm (QT-PCR), l’expression et l’activité de la NPR (p<0,05), en plus d’augmenter l’ARNm des récepteurs nucléaires CAR (récepteur constitutif à l’androstane) et PXR (récepteur X prégnane) (p<0.05). Le phénobarbital (PB) a augmenté seulement l’activité de la NPR (p<0.05). Par contre, après 48 heures d’incubation, la combinaison PB et Dexa a augmenté la quantité d’ARNm, ainsi que l’expression et l’activité de la NPR (p<0.05). La combinaison de PB et Dexa a induit une augmentation d’ARNm des récepteurs nucléaires CAR, PXR et RXR (récepteur X du rétinoïde) plus précocement, soit après 2 heures d’incubation (p<0.05). Le PD098059 (PD), un bloqueur de l’activation de MAPK1 (mitogen-activated protein kinase), et l’acide okadaïque (OA), un inhibiteur de la protéine phosphatase 2A (PP2A), ont bloqué l'augmentation d'expression et d'activité de la NPR induite par le PB après 48 heures d’incubation. La réaction inflammatoire aseptique a diminué l’expression et l’activité de la NPR après 48 heures d’incubation (p<0.05). On conclue que la dexaméthasone et le phénobarbital sont des inducteurs potentiels de la NPR et que les voies de signalisation de CAR, PXR et RXR semblent être impliquées dans le contrôle de cette induction. Des études supplémentaires devront être complétées afin de confirmer ces résultats préliminaires.
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Le syndrome de Leigh, type canadien français (LSFC) est une maladie infantile orpheline causée par une mutation du gène lrpprc. Elle se caractérise par une déficience tissu spécifique de cytochrome c oxydase (COX), une dysfonction mitochondriale et la survenue de crises d’acidose lactique fatales dans plus de 80% de cas. Selon les familles des patients, ces crises apparaissent lors d’une demande excessive d’énergie. Malheureusement, les mécanismes sous-jacents à l’apparition des crises et notamment la physiopathologie du LSFC demeurent inconnus. Afin de mieux comprendre les mécanismes de régulation du métabolisme énergétique chez les patients LSFC, nous avons examiné la régulation de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), une enzyme clé de l'homéostasie énergétique, de même que certaines de ses voies cibles (SIRT1/PGC1α et Akt/mTOR) dans les fibroblastes de patients LSFC et de témoins en conditions basales et conditions de stress. En conditions basales, l’activité de l’AMPK était similaire dans les cellules LSFC et les témoins. Par contre, les cellules LSFC montraient une surexpression significative des voies Akt/mTOR et SIRT1/PGC1α comparativement aux cellules témoins. Nous avons aussi examiné ces voies de signalisation suite à une incubation de 4h avec 10 mM de lactate et 1 mM de palmitate (LP), nous permettant de mimer les conditions de « crise ». Nos résultats ont démontré que le LP augmentait les niveaux de phosphorylation de l’AMPK de 90% (p<0,01) dans les cellules témoins mais pas dans les cellules LSFC. Pourtant, l’AMPK est activée dans les cellules LSFC en réponse à une hypoxie chimique induite par le 2,4 dinitrophénol. Dans les cellules témoins, le LP augmentait aussi les niveaux d’expression de SIRT1 (57%, p<0,05), de LRPPRC (23%, p=0,045) et de COXIV (19%, p<0,05). Un prétraitement de 48h au ZMP, un activateur pharmacologique de l’AMPK, a eu un effet additif avec le LP et des augmentations de SIRT1 phosphorylée (120%, p<0,05), de SIRT1 total (75%, p<0,01), de LRPPRC (63%, p<0,001) et de COXIV (38%, p<0,001) ont été observées. Tous ces effets étaient aussi abolis dans les cellules LSFC. En conclusion, nos résultats ont démontré des altérations importantes de la régulation du métabolisme énergétique dans les fibroblastes de patients LSFC.
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Les kinases constituent une famille majeure de protéines qui régulent divers processus par la phosphorylation de leurs substrats, mais aussi par leur activité non- catalytique. Ce rôle indépendant de l’activité kinase a été observé chez quelques protéines dont des membres de la famille Sterile-20. La kinase Ste20 Slik de Drosophila aide au maintien de l’intégrité des tissus épithéliaux en phosphorylant l’ERM Moesin et peut aussi induire une prolifération cellulaire non-autonome indépendamment de son activité catalytique. La méthode de régulation de ces deux rôles était jusqu’ici inconnue. Nous avons identifié 19 sites de phosphorylation chez Slik par spectrométrie de masse. À l’aide de mutants, nous démontrons que les deux fonctions de Slik sont régulées par la phosphorylation d’au moins 2 résidus conservés de son segment d’activation par un mécanisme d’auto- et/ou trans-phosphorylation. Cette étude amène une meilleure compréhension de la régulation de l’intégrité épithéliale et de la croissance, deux processus clés qui sont souvent déréglés dans le cancer et certaines maladies génétiques.
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L’angiogenèse et l’augmentation de la perméabilité vasculaire sont des éléments clés pour la croissance et la progression tumorale. Par conséquent, de nombreux efforts sont déployés à comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans la formation et le remodelage des vaisseaux sanguins de manière à identifier de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles. De cette optique, les travaux de cette thèse se sont concentrés sur la protéine tyrosine phosphatase DEP-1, initialement identifiée comme un régulateur négatif de la prolifération et de la phosphorylation du VEGFR2 lorsque fortement exprimée dans les cellules endothéliales. Toutefois, en utilisant une approche d’ARNi, il a été démontré que via sa capacité à déphosphoryler la tyrosine inhibitrice de Src (Y529), DEP-1 était également un régulateur positif de l’activation de Src dans les cellules endothéliales stimulées au VEGF. Puisque Src joue un rôle central dans la promotion de l’angiogenèse et la perméabilité vasculaire, nous avons en plus démontré que DEP-1 était un promoteur de ces fonctions in vitro et que la tyrosine phosphorylation de sa queue C-terminale, permettant l’interaction et l’activation de Src, était requise. Les travaux de recherche présentés dans cette thèse démontrent dans un premier temps à partir d’une souris Dep1 KO, dont le développement ne présente aucun phénotype apparent, que la perte de l’expression de DEP-1 se traduit en une inhibition de l’activation de Src et de l’un de ses substrats, la VE-Cadherine, en réponse au VEGF chez la souris adulte. Nos résultats démontrent donc, pour la première fois, le rôle primordial de DEP-1 dans l’induction de la perméabilité vasculaire et de la formation de capillaires in vivo. Conséquemment, la croissance tumorale et la formation de métastases aux poumons sont réduites due à une inhibition de leur vascularisation ce qui se traduit par une diminution de la prolifération et une augmentation de l’apoptose des cellules cancéreuses. De façon intéressante, l’expression élevée de DEP-1 dans les vaisseaux sanguins tumoraux de patientes atteintes du cancer du sein corrèle avec une vascularisation accrue de la tumeur. En plus du rôle de DEP-1 dans la réponse angiogénqiue à l’âge adulte, nos travaux ont également démontré le rôle important de DEP-1 lors de la vascularisation de la rétine, un modèle in vivo d’angiogenèse développementale. Dans ce contexte, DEP-1 inhibe la prolifération des cellules endothéliales et limite leur bourgeonnement et la complexification du réseau vasculaire rétinien en permettant l’expression adéquate du Dll4, un régulateur crucial de l’organisation de la vascularisation développementale. Cette expression du Dll4 découlerait de la stabilisation de la β-caténine par l’inactivation de la GSK3β, un régulateur important de la dégradation de la β-caténine, en réponse au VEGF selon la voie de signalisation VEGFR2-Src-PI3K-Akt-GSK3β. Ainsi, ces travaux identifient DEP-1 comme un régulateur important de l’organisation vasculaire rétinienne. Les rôles positifs de DEP-1 dans les cellules endothéliales découlent principalement de sa capacité à lier et activer la kinase Src. En plus de contribuer à la réponse angiogénique, Src est également un oncogène bien caractérisé notamment pour sa contribution au programme invasif des cellules cancéreuses mammaires. Les travaux de cette thèse illustrent que DEP-1 est préférentiellement exprimée dans les cellules cancéreuses mammaires invasives et qu’il régule l’activation de Src, de voies de signalisation invasives et, par le fait même, de l’invasivité de ces cellules in vitro et in vivo. De façon intéressante, ces observations corrèlent avec des données cliniques où l’expression modérée de DEP-1 est associée à un mauvais pronostic de survie et de rechute. Ces résultats démontrent donc, pour la première fois, le rôle positif de DEP-1 dans l’activation de Src au niveau des cellules endothéliales et des cellules cancéreuses mammaires ce qui permet la régulation du bourgeonnement endothélial, de la perméabilité vasculaire, de l’angiogenèse normale et pathologique en plus de l’invasion tumorale.