Ataxia-telangiectasia-mutated (ATM) and NBS1-dependent phosphorylation of Chk1 on Ser-317 in response to ionizing radiation

In mammals, the ATM (ataxia-telangiectasia-mutated) and ATR (ATM and Rad3-related) protein kinases function as critical regulators of the cellular DNA damage response. The checkpoint functions of ATR and ATM are mediated, in part, by a pair of checkpoint effector kinases termed Chk1 and Chk2. In mammalian cells, evidence has been presented that Chk1 is devoted to the ATR signaling pathway and is modified by ATR in response to replication inhibition and UV-induced damage, whereas Chk2 functions primarily through ATM in response to ionizing radiation (IR), suggesting that Chk2 and Chk1 might have evolved to channel the DNA damage signal from ATM and ATR, respectively. We demonstrate here that the ATR-Chk1 and ATM-Chk2 pathways are not parallel branches of the DNA damage response pathway but instead show a high degree of cross-talk and connectivity. ATM does in fact signal to Chk1 in response to IR. Phosphorylation of Chk1 on Ser-317 in response to IR is ATM-dependent. We also show that functional NBS1 is required for phosphorylation of Chk1, indicating that NES1 might facilitate the access of Chk1 to ATM at the sites of DNA damage. Abrogation of Chk1 expression by RNA interference resulted in defects in IR-induced S and G2/M phase checkpoints; however, the overexpression of phosphorylation site mutant (S317A, S345A or S317A/S345A double mutant) Chk1 failed to interfere with these checkpoints. Surprisingly, the kinase-dead Chk1 (D130A) also failed to abrogate the S and G2 checkpoint through any obvious dominant negative effect toward endogenous Chk1. Therefore, further studies will be required to assess the contribution made by phosphorylation events to Chk1 regulation. Overall, the data presented in the study challenge the model in which Chk1 only functions downstream from ATR and indicate that ATM does signal to Chk1. In addition, this study also demonstrates that Chk1 is essential for IR-induced inhibition of DNA synthesis and the G2/M checkpoint.

Site-directed mutagenesis of the ATM promoter: Consequences for response to proliferation and ionizing radiation

Although ATM, the protein defective in ataxia-telangiectasia (A-T), is activated primarily by radiation, there is also evidence that expression of the protein can be regulated by both radiation and growth factors. Computer analysis of the ATM promoter proximal 700-bp sequence reveals a number of potentially important cis-regulatory sequences. Using nucleotide substitutions to delete putative functional elements in the promoter of ATM, we examined the importance of some of these sites for both the basal and the radiation-induced activity of the promoter. In lymphoblastoid cells, most of the mutations in transcription factor consensus sequences [Sp1(1), Sp1(2), Cre, Ets, Xre, gammaIre(2), a modified AP1 site (Fse), and GCF] reduced basal activity to various extents, whereas others [gammaIre(1), NF1, Myb] left basal activity unaffected. In human skin fibroblasts, results were generally the same, but the basal activity varied up to 8-fold in these and other cell lines. Radiation activated the promoter approximately 2.5-fold in serum-starved lymphoblastoid cells, reaching a maximum by 3 hr, and all mutated elements equally blocked this activation. Reduction in Sp1 and AP1 DNA binding activity by serum starvation was rapidly reversed by exposure of cells to radiation. This reduction was not evident in A-T cells, and the response to radiation was less marked. Data provided for interaction between ATM and Sp1 by protein binding and co-immunoprecipitation could explain the altered regulation of Sp1 in A-T cells. The data described here provide additional evidence that basal and radiation-induced regulation of the ATM promoter is under multifactorial control. (C) 2003 Wiley-Liss, Inc.

Identification of a novel protein kinase mediating Akt survival signaling to the ATM protein

We identified a novel human AMP-activated protein kinase (AMPK) family member, designated ARK5, encoding 661 amino acids with an estimated molecular mass of 74 kDa. The putative amino acid sequence reveals 47, 45.8, 42.4, and 55% homology to AMPK-alpha1, AMPK-alpha2, MELK and SNARE respectively, suggesting that it is a new member of the AMPK family. It has a putative Akt phosphorylation motif at amino acids 595600, and Ser(600) was found to be phosphorylated by active Akt resulting in the activation of kinase activity toward the SAMS peptide, a consensus AMPK substrate. During nutrient starvation, ARK5 supported the survival of cells in an Akt-dependent manner. In addition, we also demonstrated that ARK5, when activated by Akt, phosphorylated the ATM protein that is mutated in the human genetic disorder ataxia-telangiectasia and also induced the phosphorylation of p53. On the basis of our current findings, we propose that a novel AMPK family member, ARK5, is the tumor cell survival factor activated by Akt and acts as an ATM kinase under the conditions of nutrient starvation.

ATP activates ataxia-telangiectasia mutated (ATM) in vitro - Importance of autophosphorylation

Ataxia-telangiectasia Mutated (ATM), mutated in the human disorder ataxia-telangiectasia, is rapidly activated by DNA double strand breaks. The mechanism of activation remains unresolved, and it is uncertain whether autophosphorylation contributes to activation. We describe an in vitro immunoprecipitation system demonstrating activation of ATM kinase from unirradiated extracts by preincubation with ATP. Activation is both time- and ATP concentration-dependent, other nucleotides fail to activate ATM, and DNA is not required. ATP activation is specific for ATM since it is not observed with kinase-dead ATM, it requires Mn2+, and it is inhibited by wortmannin. Exposure of activated ATM to phosphatase abrogates activity, and repeat cycles of ATP and phosphatase treatment reveal a requirement for autophosphorylation in the activation process. Phosphopeptide mapping revealed similarities between the patterns of autophosphorylation for irradiated and ATP-treated ATM. Caffeine inhibited ATM kinase activity for substrates but did not interfere with ATM autophosphorylation. ATP failed to activate either A-T and rad3-related protein (ATR) or DNA-dependent protein kinase under these conditions, supporting the specificity for ATM. These data demonstrate that ATP can specifically induce activation of ATM by a mechanism involving autophosphorylation. The relationship of this activation to DNA damage activation remains unclear but represents a useful model for understanding in vivo activation.

Supervis??o t??cnico-administrativa ??s unidades da Funda????o Nacional de Sa??de

A Supervis??o T??cnico-Administrativa (STA) foi constru??da a fim de contribuir para a avalia????o de desempenho institucional e avaliar a capacidade das equipes das unidades para o desempenho das suas atribui????es e contribuir com o seu aprimoramento. O foco da STA estava centrado no desempenho gerencial e pretendia detectar os gargalos impeditivos do bom desenvolvimento institucional, promover a????es de enfrentamento dos problemas identificados e estimular a cultura avaliativa nas unidades

Relat??rio de avalia????o da pol??tica de Gratifica????o de Desempenho de Atividade T??cnico-Administrativa

O Caderno 22 surgiu da necessidade de identificar at?? que ponto as pol??ticas de avalia????o para fins de gratifica????o (GDATA) est??o formuladas de maneira a realizar uma efetiva gest??o do desempenho dos servidores avaliados. O interesse em pesquisar esse tema surgiu com base em uma preocupa????o em saber se a GDATA est?? trazendo mudan??as na maneira de avaliar do governo ou se ela mant??m os procedimentos anteriores considerados inadequados e ineficientes. O relat??rio a ser discutido avalia os crit??rios adotados (a partir das portarias publicadas pelos ??rg??os) e questiona a maneira como as avalia????es v??m sendo realizadas nas diversas institui????es pesquisadas. Os resultados alcan??ados s??o bastante produtivos e levam a uma reflex??o sobre a necessidade de aprimorar os crit??rios de avalia????o a fim de realizar uma adequada gest??o do desempenho dos servidores p??blicos federais

Curso de ambienta????o para analista t??cnico de pol??ticas sociais

Apresenta????o do curso na abertura de cada uma das 4 turmas realizadas

Plano integrado de capacita????o dos servidores t??cnico-administrativos

A equipe de Recursos Humanos (PROREH) da Universidade Federal de Uberl??ndia constatou a necessidade de superar a vis??o reducionista da pol??tica de recursos humanos vigente ??? centrada em programas de ???treinamento??? restritos e segmentados ??? e de buscar formas de se adequar ??s exig??ncias de um mundo em mudan??a. A solu????o foi encontrada no estabelecimento de uma pol??tica de capacita????o e desenvolvimento baseada na vis??o do servidor p??blico como cidad??o, inserido na busca dos objetivos da universidade e da sociedade, a partir de uma forma????o global. Como resultado s??o observadas significativas melhorias de desempenho do quadro de pessoal, al??m de manifesta????es positivas das chefias e dos usu??rios dos servi??os

Avalia????o de desempenho dos servidores t??cnico-administrativos

Visando ?? melhoria dos servi??os prestados ?? comunidade e ?? promo????o do desenvolvimento institucional atrav??s do aperfei??oamento da pol??tica de recursos humanos, a Pr??-Reitoria de Recursos Humanos (PROREH) da Universidade Federal de Uberl??ndia estabeleceu o Sistema de Avalia????o de Desempenho dos Servidores t??cnico-administrativos. O Sistema de Avalia????o de Desempenho vem cumprindo a fun????o de orientar a pol??tica de recursos humanos, sob a perspectiva de planejamento, racionaliza????o dos custos com projetos de capacita????o, e maior adequa????o dos processos de progress??o funcional. Tem propiciado, ainda, a percep????o acurada dos obst??culos e empecilhos ?? consecu????o dos resultados desejados, seja do ponto de vista do ambiente f??sico, dos instrumentos de trabalho, da capacita????o dos servidores, do relacionamento interpessoal e das condi????es de sa??de do servidor. O avan??o fundamental, entretanto, refere-se ?? forma????o de uma cultura do planejamento, entendido n??o como a????o do n??cleo central, mas como atividade que afeta toda a universidade. O exerc??cio de pr??ticas estanques dissociadas de um projeto mais amplo vem sendo substitu??do pela pr??tica do trabalho articulado ??s finalidades institucionais, ?? medida que cada servidor ?? chamado a refletir sobre sua pr??pria a????o profissional ?? luz dos objetivos da universidade

Controle de atendimento t??cnico

O atendimento ao cliente no Escrit??rio Regional da Dataprev em Minas Gerais era descentralizado, o que gerava desperd??cio de recursos humanos. A resposta passou por dois momentos. Inicialmente criou-se a Central de Atendimento, mas foi implantada com apenas dois funcion??rios e todos os formul??rios manuais, o que impedia o acompanhamento e controle do atendimento dos problemas e tornava todo o tratamento estat??stico moroso e deficiente. Evoluiu-se, ent??o, para o CAT (Controle de Atendimento T??cnico), um sistema informatizado destinado a profissionalizar o atendimento, garantir seguran??a ao atendente atrav??s do ???Kit Solu????o???, proporcionar conhecimento dos sistemas implantados com informa????es espec??ficas e atualizadas, generalizar o registro de atendimento, mostrar o ambiente de problemas/pedidos do cliente, manter os dados cadastrais atualizados e permitir o acompanhamento de suas tarefas por cada ??rg??o solucionador atrav??s da posi????o de baixa, previs??o ou repasse do chamado. Com a iniciativa houve maior profissionaliza????o no atendimento, podendo-se observar a evolu????o no relacionamento da linha de atendimento ao cliente, atrav??s do pr??-conhecimento do seu ambiente (equipamento e reclama????es em aberto) e seus dados cadastrais. Aumentou o registro de chamadas/m??s, bem como a emiss??o e o controle de todas as Ordens de Servi??os da ??rea de teleprocessamento. Reduziu-se o tempo de atendimento a problemas de teleprocessamento. O cadastramento de diagn??sticos e solu????es de problemas de hardware atingiu ??ndices elevados de confiabilidade. Conseguiu-se tamb??m antecipar os problemas com o cliente

Uso de manometria computadorizada para estudo do espasmo do segmento faringoesofágico em pacientes com voz traqueoesofágica inadequada antes e após aplicação de toxina botulínica

Voz traqueoesofágica (VTE) com prótese fonatória (PF) é método eficaz e reproduzível na reabilitação vocal após laringectomia total (LT), impedida pelo espasmo do segmento faringoesofágico (SFE). A manometria computadorizada (MC) é novo método objetivo e direto de avaliação do SFE. OBJETIVO: Análise objetiva do espasmo do SFE, com MC, antes e após aplicação de toxina botulínica (TB). DESENHO DO ESTUDO: Prospectivo clínico. MATERIAL E MÉTODOS: Análise de oito pacientes consecutivos submetidos à LT com VTE e PF, sem emissão vocal, com espasmo do SFE à videofluoroscopia, considerado padrão ouro para detecção de espasmo. Todos trataram o espasmo com injeção de 100 unidades de TB no SFE. Avaliação constituiu-se de videofluoroscopia e MC do SFE, antes e após aplicação de TB. RESULTADOS: Houve diminuição na pressão do SFE à MC, após injeção de TB em todos. A média de pressão do SFE à MC, nos oito pacientes, antes da aplicação de TB foi de 25.36 mmHg e após foi de 14.31 mmHg (p=0,004). Houve emissão vocal sem esforço e melhora do espasmo do SFE à videofluoroscopia após o uso da TB. CONCLUSÃO: Foi observada diminuição na pressão do SFE após injeção da TB à MC em todos os pacientes, com melhora do espasmo à videofluoroscopia.

Contributos para a implementação dum modelo de gestão da qualidade num serviço de tomografia computorizada: uma análise prospectiva

Mestrado em Intervenção Sócio-Organizacional na Saúde - Área de especialização: Políticas de Administração e Gestão de Serviços de Saúde.

Medições de dose no cristalino e na tiróide em tomografia computorizada: projecto

Mestrado em Radiações Aplicadas às Tecnologias da Saúde. Área de especialização: Protecção Contra Radiações

Macrociclos tetrapirrólicos e produtos de contraste iodados: uma nova abordagem

O trabalho descrito no presente documento reporta a preparação de derivados tetrapirrólicos iodados de tipo porfirina tornando-os potenciais veículos a meio de contraste iodado, usado em radiodiagnóstico. Com os resultados deste trabalho irá ser realizado um pedido de patente das moléculas e portanto, o acesso a este trabalho será restrito nos termos do Código da Propriedade Industrial, aprovado pelo Decreto de Lei nº 36/2003 de 5 de Março. Na primeira fase do trabalho, foi sintetizado o derivado porfirínico simétrico, meso-substituído, contendo um total de 8 iodos. Este foi preparado por condensação do pirrol e do aldeído iodado em meio ácido e na presença de nitrobenzeno. Foram ainda preparados as respetivas metaloporfirinas contendo os iões metálicos de manganês e gadolínio. Posteriormente foi avaliada a capacidade destes derivados atenuarem o feixe de raio-X, através da mediação das Unidades de Hounsfield, após serem adquiridas imagens por Tomografia Computorizada. Na segunda fase do trabalho procedeu-se ao estudo da influência destes compostos na diferenciação celular, usando como modelo as células de pré-adipócitos 3T3-L1. Foi avaliada a diferenciação celular, através da quantificação de lípidos das células maduras, marcados com Red Oil O, por espectrofotometria de Visível 3 e 10 dias após a administração dos derivados em estudo.