Derepression of human embryonic ζ-globin promoter by a locus-control region sequence

A multiple protein–DNA complex formed at a human α-globin locus-specific regulatory element, HS-40, confers appropriate developmental expression pattern on human embryonic ζ-globin promoter activity in humans and transgenic mice. We show here that introduction of a 1-bp mutation in an NF-E2/AP1 sequence motif converts HS-40 into an erythroid-specific locus-control region. Cis-linkage with this locus-control region, in contrast to the wild-type HS-40, allows erythroid lineage-specific derepression of the silenced human ζ-globin promoter in fetal and adult transgenic mice. Furthermore, ζ-globin promoter activities in adult mice increase in proportion to the number of integrated DNA fragments even at 19 copies/genome. The mutant HS-40 in conjunction with human ζ-globin promoter thus can be used to direct position-independent and copy number-dependent expression of transgenes in adult erythroid cells. The data also supports a model in which competitive DNA binding of different members of the NF-E2/AP1 transcription factor family modulates the developmental stage specificity of an erythroid enhancer. Feasibility to reswitch on embryonic/fetal globin genes through the manipulation of nuclear factor binding at a single regulatory DNA motif is discussed.

Vascular endothelial growth factor: Direct neuroprotective effect in in vitro ischemia

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a hypoxia-inducible angiogenic peptide with recently identified neurotrophic effects. Because some neurotrophic factors can protect neurons from hypoxic or ischemic injury, we investigated the possibility that VEGF has similar neuroprotective properties. In HN33, an immortalized hippocampal neuronal cell line, VEGF reduced cell death associated with an in vitro model of cerebral ischemia: at a maximally effective concentration of 50 ng/ml, VEGF approximately doubled the number of cells surviving after 24 h of hypoxia and glucose deprivation. To investigate the mechanism of neuroprotection by VEGF, the expression of known target receptors for VEGF was measured by Western blotting, which showed that HN33 cells expressed VEGFR-2 receptors and neuropilin-1, but not VEGFR-1 receptors. The neuropilin-1 ligand placenta growth factor-2 failed to reproduce the protective effect of VEGF, pointing to VEGFR-2 as the site of VEGF's neuroprotective action. Two phosphatidylinositol 3′-kinase inhibitors, wortmannin and LY294002, reversed the neuroprotective effect of VEGF, implicating the phosphatidylinositol 3′-kinase/Akt signal transduction system in VEGF-mediated neuroprotection. VEGF also protected primary cultures of rat cerebral cortical neurons from hypoxia and glucose deprivation. We conclude that in addition to its known role as an angiogenic factor, VEGF may exert a direct neuroprotective effect in hypoxic-ischemic injury.

FGF-2 regulation of neurogenesis in adult hippocampus after brain injury

Fibroblast growth factor-2 (FGF-2) promotes proliferation of neuroprogenitor cells in culture and is up-regulated within brain after injury. Using mice genetically deficient in FGF-2 (FGF-2−/− mice), we addressed the importance of endogenously generated FGF-2 on neurogenesis within the hippocampus, a structure involved in spatial, declarative, and contextual memory, after seizures or ischemic injury. BrdUrd incorporation was used to mark dividing neuroprogenitor cells and NeuN expression to monitor their differentiation into neurons. In the wild-type strain, hippocampal FGF-2 increased after either kainic acid injection or middle cerebral artery occlusion, and the numbers of BrdUrd/NeuN-positive cells significantly increased on days 9 and 16 as compared with the controls. In FGF-2−/− mice, BrdUrd labeling was attenuated after kainic acid or middle cerebral artery occlusion, as was the number of neural cells colabeled with both BrdUrd and NeuN. After FGF-2−/− mice were injected intraventricularly with a herpes simplex virus-1 amplicon vector carrying FGF-2 gene, the number of BrdUrd-labeled cells increased significantly to values equivalent to wild-type littermates after kainate seizures. These results indicate that endogenously synthesized FGF-2 is necessary and sufficient to stimulate proliferation and differentiation of neuroprogenitor cells in the adult hippocampus after brain insult.

Demonstration of the extrinsic coagulation pathway in teleostei: Identification of zebrafish coagulation factor VII

It is not known whether the mammalian mechanism of coagulation initiation is conserved in fish. Identification of factor VII is critical in providing evidence for such a mechanism. A cDNA was cloned from a zebrafish (teleost) library that predicted a protein with sequence similarity to human factor VII. Factor VII was shown to be present in zebrafish blood and liver by Western blot analysis and immunohistochemistry. Immunodepletion of factor VII from zebrafish plasma selectively inhibited thromboplastin-triggered thrombin generation. Heterologous expression of zebrafish factor VII demonstrated a secreted protein (50 kDa) that reconstituted thromboplastin-triggered thrombin generation in immunodepleted zebrafish plasma. These results suggest conservation of the extrinsic coagulation pathway between zebrafish and humans and add credence to the zebrafish as a model for mammalian hemostasis. The structure of zebrafish factor VIIa predicted by homology modeling was consistent with the overall three-dimensional structure of human factor VIIa. However, amino acid disparities were found in the epidermal growth factor-2/serine protease regions that are present in the human tissue factor–factor VIIa contact surface, suggesting a structural basis for the species specificity of this interaction. In addition, zebrafish factor VII demonstrates that the Gla-EGF-EGF-SP domain structure, which is common to coagulation factors VII, IX, X, and protein C, was present before the radiation of the teleosts from the tetrapods. Identification of zebrafish factor VII significantly narrows the evolutionary window for development of the vertebrate coagulation cascade and provides insight into the structural basis for species specificity in the tissue factor–factor VIIa interaction.

Estradiol stimulates tyrosine phosphorylation of the insulin-like growth factor-1 receptor and insulin receptor substrate-1 in the uterus.

The signaling pathways associated with estrogen-induced proliferation of epithelial cells in the reproductive tract have not been defined. To identify receptor tyrosine kinases that are activated in vivo by 17 beta-estradiol (E2), uteri from ovariectomized mice were examined for enhanced tyrosine phosphorylation of various receptors and a receptor substrate following treatment with this hormone. Within 4 hr after hormone exposure, extracts showed increased phosphotyrosine (P-Tyr) immunoreactivity at several bands, including 170- and 180-kDa; these bands were still apparent at 24 hr after E2. Analysis of immunoprecipitates from uterine extracts revealed that E2 enhanced tyrosine phosphorylation of the insulin-like growth factor-1 receptor (IGF-1R) and insulin receptor substrate-1 (IRS-1) by 6 hr. Comparison of supernatants from IRS-1 and control rabbit IgG immunoprecipitates indicated that the 170-kDa P-Tyr band in extracts was equivalent to IRS-1. The receptors for epidermal growth factor, platelet-derived growth factor, and basic fibroblast growth factor did not exhibit an E2-induced increase in P-Tyr content. The nonestrogenic steroid hormones examined did not stimulate the P-Tyr content of IGF-1R or IRS-1. Immunolocalization of P-Tyr and IRS-1 revealed strong reactivity in the epithelial layer of the uterus from E2-treated mice, suggesting that the majority of P-Tyr bands observed in immunoblots originate in the epithelium. Since hormonal activation of IRS-1 is epithelial, estrogen-specific, and initiated before maximal DNA synthesis occurs following treatment with hormone, this protein, as part of the IGF-1R pathway, may be important in mediating estrogen-stimulated proliferation in the uterus.

FRAG1, a gene that potently activates fibroblast growth factor receptor by C-terminal fusion through chromosomal rearrangement.

A constitutively active form of fibroblast growth factor 2 (FGFR2) was identified in rat osteosarcoma (ROS) cells by an expression cloning strategy. Unlike other tyrosine kinase receptors activated by N-terminal truncation in tumors, this receptor, FGFR2-ROS, contains an altered C terminus generated from chromosomal rearrangement with a novel gene, designated FGFR activating gene 1 (FRAG1). While the removal of the C terminus slightly activates FGFR2, the presence of the FRAG1 sequence drastically stimulates the transforming activity and autophosphorylation of the receptor. FGFR2-ROS is expressed as a unusually large protein and is highly phosphorylated in NIH 3T3 transfectants. FRAG1 is ubiquitously expressed and encodes a predicted protein of 28 kDa lacking significant structural similarity to known proteins. Epitope-tagged FRAG1 protein showed a perinuclear localization by immunofluorescence staining. The highly activated state of FGFR2-ROS appears to be attributed to constitutive dimer formation and higher phosphorylation level as well as possibly altered subcellular localization. These results indicate a unique mechanism of receptor activation by a C terminus alteration through a chromosomal fusion with FRAG1.

The role of NF-kappaB in the angiogenic response of coronary microvessel endothelial cells.

The activation of nuclear factor (NF)-kappaB by 12(R)-hydroxyeicosatrienoic acid [12(R)-HETrE], an arachidonic acid metabolite with potent stereospecific proinflammatory and angiogenic properties, was examined and its role in the angiogenic response was determined in capillary endothelial cells derived from coronary microvessels. Electrophoretic mobility-shift assay of nuclear protein extracts from cells treated with 12(R)-HETrE demonstrated a rapid and stereospecific time- and concentration-dependent increase in the binding activity of NF-kappaB, which was inhibitable by the antioxidants N-acetylcysteine, butylated hydroxyanisole, and pyrrolidine dithiocarbamate and was partially attenuated by the protein kinase C inhibitors, staurosporine and calphostin C. Neither 12(S)-HETrE nor other related eicosanoids--e.g., 12(R)-HETE, 12(S)-HETE, and leukotriene B4--stimulated the activation of NF-kappaB relative to 12(R)-HETrE, substantiating the claim for a specific receptor-mediated mechanism. 12(R)-HETrE stimulated the formation of capillary-like cords of microvessel endothelial cells distinguishable from a control; this effect was comparable to that observed with basic fibroblast growth factor (bFGF). Inhibition of NF-kappaB activation resulted in inhibition of capillary-like formation of endothelial cells treated with 12(R)-HETrE by 80% but did not affect growth observed with bFGF. It is suggested that 12(R)-HETrE's angiogenic activity involves the activation of NF-kappaB, possibly via protein kinase C stimulation and the generation of reactive oxygen intermediates for downstream signaling.

Estímulos verbales relacionados con la ansiedad social y la depresión para su uso en investigaciones cognitivas

El amplío uso en la ínvestigación psicopatológica de paradigmas experimentales derivados del procesamiento de información exige el desarrollo de estímulos experimentales con adecuadas propiedades psicométricas. En el presente artículo se presentan dos conjuntos de estímulos verbales en español desarrollados para la investigación de constructos cognitivos relacionados con los trastornos de ansiedad social y depresión (p. ej., los autoesquemas depresivos y ansiosos, los nodos cognitivos de depresión y ansiedad, etc.), mediante tareas experimentales como la tarea Stroop, de anticipación semántica, de codificación autorreferente, o de decisión léxica. Estos dos conjuntos están formados por grupos de adjetivos de personalidad de valencia positiva y negativa cuyo contenido está específicamente relacionado con la depresión, la ansiedad social, con ambos trastornos (adjetivos mixtos) y con ninguno de ellos (adjetivos control). Además, los grupos de adjetivos que componen tales conjuntos no difieren entre sí en dimensiones tales como frecuencia objetiva de uso, frecuencia subjetiva de uso, imaginabilidad, emocionalidad y longitud en número de letras, lo que asegura en futuras investigaciones el control de los posibles efectos como variables extrañas de dichas dimensiones.

Ejercicio de programación con GRAFCET de un PLC

Ejercicios de la práctica 2. Programación con GRAFCET de un PLC.

La transición sanitaria en España desde 1900 a 1990

Fundamento: El concepto de transición sanitaria trata de explicar, desde un enfoque plural, los cambios en las condiciones de salud que contribuyeron al descenso de la mortalidad que acompaño a la transición demográfica. El objetivo de este trabajo es analizar la transición sanitaria en España a lo largo del presente siglo ( 1900- 1990). Método: El estudio de los distinto componentes de la transición sanitaria (transición epidemiológica, transición de riesgos y transición de la atención sanitaria) se ha basado en las series históricas disponibles procedentes de los Movimientos Naturales de la Población, Anuarios Estadísticas y Censos de viviendas. Resultados: La evolución de las tasas de mortalidad general y mortalidad infantil refleja una tendencia descendente que se manifiesta a lo largo de todo el periodo: la mortalidad general se ha reducido un 70%. mientras que la infantil lo ha hecho en un 96%. Respecto a la esperanza de vida al nacer, la ganancia ha sido de 43 años entre 1900 (35 años) y 1990 (77 años), lo que en términos relativos supone un aumento del 130%. Conclusiones: El nuevo perfil epidemiológico que fue emergiendo durante el período considerado, aparece relacionado con mejoras en las infraestructuras sanitarias, con el aumento del gasto y de las prestaciones sanitarias. pero también con la aparición de nuevos problemas de salud relacionados con las condiciones de trabajo, el crecimiento masivo del medio urbano (a partir, sobre todo, de la década de los 60) o las modificaciones en los patrones de vida.

Tipo de bebidas consumidas por los estudiantes universitarios

Fundamentos: Existe una gran diferencia entre el consumo de agua y las bebidas que contiene agua (bebidas carbonatadas, azucaradas, zumos o bebidas alcohólicas). El consumo de estas bebidas está relacionado con el desarrollo de enfermedades crónicas (obesidad, diabetes tipo 2, hipertensión arterial o dislipemias). El objetivo es determinar la frecuencia de consumo de bebidas de los estudiantes de la Universidad de Alicante. Métodos: Estudio transversal descriptivo. Población 26.273 estudiantes. Se seleccionaron 396 mediante muestreo aleatorio simple. Se utilizó un cuestionario frecuencia consumo para estimar la ingesta individual. Variables: bebidas (n=12) y frecuencia de consumo (n=4). Resultados: El 29,6% de hombres y el 13,0% de mujeres consumen bebidas carbonatadas con azúcar a diario (p-valor<0,001). El consumo diario de vino es nulo. El 41,4% de la población consume cerveza y destilados semanalmente. El 76,1% de hombres y el 58,7% de mujeres, consumen alcohol como mínimo una vez a la semana, p-valor=0,001. Conclusiones: Los resultados plantean la necesidad de estudios epidemiológicos que orienten el desarrollo de políticas nutricionales dirigidas a reducir el consumo de bebidas azucaradas y alcohólicas entre la población joven. Mediante un trabajo conjunto entre las autoridades gubernamentales, medios de comunicación, industria alimentaria y la sociedad en general.

Relación entre la mortalidad materna y la gobernanza de los países iberoamericanos

Antecedentes/Objetivos: Pese al aumento de los recursos financieros y ser a menudo el 1er objetivo de los gobiernos, muchos países no están en camino de alcanzar el objetivo de Desarrollo del Milenio relacionado con la reducción de la mortalidad materna (MM). La gobernanza de los países es uno de los determinantes de la MM sobre el que hay disparidad de criterios y escasa literatura sobre el impacto de la misma en la MM. Objetivo: analizar la relación entre los factores de la gobernanza y la mortalidad materna en Iberoamérica, en 2012. Métodos: Estudio transversal ecológico para 2012, que utiliza el país como unidad de análisis sobre relación entre la gobernanza y la MM. Fuentes información: Estadísticas de Naciones Unidas, Banco Mundial, OMS/OPS. Se realizó un modelo de regresión lineal simple, y ajustado por riqueza (PIB). Resultados: Controlado por la riqueza del país, se detectan asociaciones significativas entre la MM con las variables de la gobernanza: Control de la corrupción R2 = 73,2% (p = 0,001), Estado de derecho R2 = 73% (p = 0,001), calidad regulatoria R2 = 70,9% (p = 0,002), efectividad gubernamental R2 = 69,5% (p = 0,003), voz y rendición de cuentas R2 = 68,3% (p = 0,004) y transparencia R2 = 66,8% (p = 0,003). Todas estas variables se asociación inversamente. Conclusiones: La mortalidad materna en 2012 está fuertemente relacionada con la capacidad y calidad gubernamental de los 19 países Iberoamericanos. En concreto, la MM se asocia con 6 de las 7 categorías componentes de la gobernanza. Afrontar la multicausalidad de la MM es un reto, entre los que se debe considerar y analizar el impulso político para la reducción de la corrupción, el desarrollo del estado de derecho, la calidad regulatoria, la efectividad gubernamental, el facilitar la voz y rendición de cuentas y la transparencia.

Motivación y actitudes como variables afectivas en aprendices griegos de español como lengua extranjera

La presente tesis doctoral analiza las variables afectivas motivación y actitudes en aprendices griegos de español como lengua extranjera en Grecia. Partimos de la hipótesis de que nuestros informantes están altamente motivados y poseen unas actitudes positivas hacia el español, lo cual está relacionado con un elevado autoconcepto, una gran motivación del profesorado y un interés hacia el aprendizaje de lenguas en general. Por ello, debido a la inexistencia de trabajos de estas características en dicho contexto, nuestro objetivo es describir el perfil de nuestros informantes en relación con sus motivaciones y actitudes, conocer su grado de motivación, investigar las creencias del profesorado sobre dichas variables y su grado de satisfacción profesional, observar el papel de la competencia existencial en el aula de idiomas y analizar las posibles correlaciones entre la motivación y las actitudes con otras variables presentes en el estudio. Nos servimos de una metodología mixta que combina los paradigmas cualitativo y cuantitativo, adaptando a este contexto los instrumentos empleados (observación de clases, cuestionarios al alumnado y profesorado). La muestra del siguiente estudio está constituida por 284 aprendices y 14 docentes de ELE del Centro de Lenguas Extranjeras (CLE) de la Universidad de Atenas, junto con casi 200 horas de observaciones. Se pueden distinguir fundamentalmente dos fases en la elaboración de este trabajo: en primer lugar, la de revisión bibliográfica y observación de clases y pilotaje de los cuestionarios (2010-2011), y, en segundo lugar, la de recogida de datos con los cuestionarios definitivos (2011-2012) y tratamiento estadístico del contenido para su posterior análisis y discusión. Las conclusiones más relevantes del estudio sobre la motivación y las actitudes en estudiantes grecófonos de ELE han puesto de manifiesto los siguientes aspectos: 1) Los aprendices griegos de ELE del CLE poseen un alto grado de motivación, con predominio de la de carácter intrínseco. 2) Las actitudes hacia el aprendizaje de ELE y su cultura en este alumnado son muy positivas. 3) El profesorado de ELE del CLE posee creencias muy diversas sobre el valor de las variables analizadas, pero coincide en otorgarles un papel relevante en el aula de idiomas. Por otro lado, su desoladora condición laboral a la que han llegado los últimos años debido a la crisis económica no ejerce una influencia excesivamente negativa sobre su motivación ni sobre la de sus alumnos. 4) La competencia existencial ocupa un lugar notable en el aula de idiomas del contexto analizado. 5) La correlación entre el grado de motivación de estos aprendices y su autoconcepto es significativa.