Desarrollo y validación de métodos analíticos para la determinación de gatifloxacina en líquido seminal de pacientes con infertilidad

Tesis (Doctorado en Ciencias con Especialidad en Química Biomédica) UANL

A concentração, a composição e a qualidade do plasma seminal na preservação do sêmen eqüino a +4ºC.

O presente trabalho constou de três experimentos. O primeiro objetivou verificar a influência de diferentes concentrações de plasma seminal e de dois diluentes na motilidade e na integridade e funcionalidade da membrana plasmática de espermatozóides eqüinos resfriados. Para tanto, foram utilizados 4 garanhões, comprovadamente férteis e em atividade sexual. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado, diluído 1:2 com EDTA-glicose, dividido em oito alíquotas e centrifugado a 600g, por 10 minutos, para remoção do plasma seminal. O pellet de cada alíquota foi ressuspendido com um determinado volume do plasma seminal, previamente removido e acrescido de um determinado volume de um dos dois diluente (leite desnatado UHT ou leite desnatado-glicose) até atingir uma concentração final entre 40 e 50x106 espermatozóides/ml, contendo as seguintes concentrações finais de plasma seminal: 0%, 2,5%, 5% e 10%. Imediatamente após a diluição, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade progressiva e total e funcionalidade e integridade da membrana plasmática. A seguir, os oito frascos contendo o sêmen, com um volume aproximado de 12 ml cada, foram resfriados em câmara a +4ºC a uma taxa de resfriamento de 0,3º C/min, sendo o sêmen novamente avaliado às 24, 48 e 72 horas.

Avaliação da presença de proteína p53 e receptores de estrogênio e progesterona em espécimes cirúrgicos de vesícula biliar

Resumo não disponível.

Percoll e plasma seminal na preservação do sêmen eqüino a +4º C

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

A scanning electron microscopy study of the seed and post-seminal development in Angelonia salicariifolia Bonpl. (Scrophulariaceae)

The external morphology of seeds and post-germination developmental stages of Angelonia salicariifolia Bonpl. (Scrophulariaceae) were investigated using scanning electron microscopy. Some structural features of the seed exotesta and seedling in Angelonia are presented for the first time and are of potential taxonomic value for this neotropical genus. The seeds are very small (0.9-1.7 mm long and 0.5-0.9 mm wide), ovate, with a reticulate-crested exotesta, reticules arranged uniformly in longitudinal rows, with a high density of microcilia-like projections on the cell wall of the reticule base and on the edge of the crests. The hilum is located beside the micropyle at the narrow end of the seed. Germination is epigeal. During germination the radicle develops, followed by elongation of the hypocotyl and primary root. At this stage dense root hairs develop on the lower part of the hypocotyl. The apical bud-located between the cotyledons-begins to develop after the cotyledons have unfolded. The cotyledons are equal in size, sessile and ovate. The seedlings have two types of trichomes, one characteristic of the cotyledons and first pair of leaves (glandular, sessile, four-celled head with quadrangular shape) and the other characteristic of the hypocotyl and epicotyl (stalked, erect, elongate and three-celled with dome-shaped unicellular head). (C) 2001 Annals of Botany Company.

Aspectos morfológicos do fruto, da semente e desenvolvimento pós-seminal de faveira (Clitoria fairchildiana R. A. Howard. - Fabaceae)

O presente trabalho teve por objetivo descrever a morfologia dos frutos, das sementes e o desenvolvimento pós-seminal de faveira (Clitoria fairchildiana R. A. Howard. - Fabaceae). Os frutos e as sementes foram caracterizados quanto à forma e dimensões. Periodicamente, unidades representativas de cada fase de germinação foram retiradas para as descrições morfológicas. Os frutos são do tipo legume, deiscentes e de coloração marrom. As sementes são exalbuminosas, de forma orbicular e achatada, com tegumento de coloração castanho-esverdeada. O hilo tem forma elíptica, homocromo e de tamanho pequeno em relação à semente. Os cotilédones são livres, de coloração verde, maciços e plano-convexos e o embrião é invaginado. O início do desenvolvimento pós-seminal é marcado pelo rompimento do tegumento e emissão da raiz primária, glabra, de coloração amarelo-esverdeada e de forma cilíndrica. Posteriormente, observa-se o desenvolvimento das raízes secundárias, levemente esbranquiçadas, curtas e filiformes. em seguida, o crescimento do hipocótilo proporciona a emergência dos cotilédones e da plúmula acima do substrato. O epicótilo alonga-se e, em seguida, observa-se a expansão dos eófilos, simples, opostos, com tricomas simples e esparsos, pecíolos curtos com estípulas em sua base. Posteriormente ao desenvolvimento dos eófilos, ocorre a formação do segundo par de folhas, alternas, trifolioladas, estipuladas e com estipelas na base dos peciólulos.

Behavioural and seminal characteristics of Santa Ines rams subjected to successive semen collections in the Amazonian region

The objective of this study was to evaluate the reproductive performance of Santa Ines rams subjected to successive semen collections in an Amazonian climate. Four rams were subjected to successive ejaculations during a maximum period of three hours. This procedure was repeated three times at 15-day intervals. Sexual and behavioural (libido) and andrological (testicular and seminal) assessments were performed. A total of 81 ejaculates were collected. Libido and semen vigour, volume, appearance and concentration decreased as the ejaculation frequency increased (P<0.05) and sperm motility showed a decreasing trend (P=0.06). The seminal pH increased over the sequence of collections (P<0.05). The only significant differences observed between individual rams were the variable scrotal circumference and the percentages of live sperm and sperm abnormalities (P<0.05). All the parameters of the first ejaculation were within the normal range for this species, which suggests that the local climatic conditions (high temperature and humidity) did not affect the behavioural, testicular or seminal parameters of experimental rams. Our findings indicate that the reproductive performance of Santa Ines rams could be affected by the intensification of ejaculation frequency; however, individual male variation needs to be taken into consideration.

Caracterização morfológica de frutos e sementes e desenvolvimento pós-seminal de monjoleiro (Acacia polyphylla DC.)

Acacia polyphylla DC. é uma espécie arbórea, característica dos estádios iniciais da sucessão secundária, de ocorrência natural no Brasil. Pertence à família Leguminosae-Mimosoideae, sendo recomendada em programas de reflorestamento misto, recuperação de áreas degradadas e manejo de fragmentos florestais. Entretanto, não foi encontrado nenhuma referência que fizesse menção aos aspectos químicos e morfológicos das sementes, bem como, aos aspectos do desenvolvimento pós-seminal desta espécie. Assim sendo, o presente trabalho objetivou caracterizar morfologicamente e ilustrar frutos e sementes, quantificar alguns componentes químicos presentes nas sementes e descrever as diferentes fases do desenvolvimento pós-seminal. Para tanto, foram realizadas descrições associadas às estruturas externa e interna das sementes. As descrições morfológicas dos frutos e das sementes foram efetuadas em relação a forma, ao tamanho, a superfície, a micrópila e a forma e a localização do embrião. Para a descrição morfológica das plântulas, as sementes foram colocadas para germinar em meio de cultura Murashige & Skoog reduzido à metade da concentração e incubadas a temperatura de 25ºC, sendo descritas e ilustradas as plântulas normais e anormais. O fruto é uma vagem deiscente contendo de oito a 16 sementes achatadas, de tegumento testal, embrião axial e invaginado. A germinação das sementes é epígea e as plântulas fanerocotiledonares.

Effects of scrotal insulation in Nellore bulls (Bos taurus indicus) on seminal quality and its relationship with in vitro fertilizing ability

The objectives of this study were to assess the effects of induced testicular degeneration in Bos taurus indicus (Nellore) bulls on changes in seminal characteristics and fertilizing ability of sperm. Four Nellore bulls (30-36-month-old, 500-550 kg) with good seminal quality (> 80% motile and morphologically normal sperm) had serotal insulation applied for 5 d. Semen was collected by electroejaculation and cryopreserved at a the pre-insulation moment, and 7, 14, and 21 d after insulation was removed. Gross motility, vigor of sperm movement (1-5), acrosome integrity, sperm morphology (phase-contrast microscopy), nuclear vacuoles and abnormal chromatin (Feulgen-stain) were determined after sperm preparations for in vitro fertilization (IVF). Prior to IVF, sperm were separated using a Percoll gradient (45% and 90%). Normal sperm decreased (P < 0.05) 14 and 21 d after insulation was removed. on 14 and 21 d, the incidence of head defects (9.7 +/- 0.6 and 17.0 +/- 0.8, respectively; mean +/- S.E.M) was higher (P < 0.05) in agreement with the incidence of nuclear vauoles (14.0 +/- 5.0 and 12.3 +/- 2.3) and abnormal chromatin (24.4 +/- 7.2 and 30.8 +/- 2.8). Although the frequency of cleaved oocytes decreased only on 21 d (P < 0.05), blastocyst rates were lower (P < 0.05) than pre-insulation on 14 and 21 d. In regression analyses, only nuclear vacuoles, head defects and intact acrosome accounted for differences in cleavage (R(2) = 0.38, 0.48, and 0.30, respectively) and blastocyst rates (R(2) = 0.35, 0.37, and 0.44). Abnormal chromatin was associated only with blastocyst rates (R(2) = 0.35). In conclusion, blastocyst rate was more sensitive than cleavage rate and the assessment of nuclear integrity is recommended to predict the fertilizing ability of bull sperm. (c) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Testicular structure and description of the seminal pathway in Leporinus macrocephalus (Anostomidae, Teleostei)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação da contratilidade da vesícula biliar com leite materno e leite de vaca em lactentes

As múltiplas características distintas do leite materno e do leite de vaca fazem com que o esvaziamento gástrico seja mais rápido após ingestão do primeiro. Esta rapidez do esvaziamento gástrico pode estar associada ao esvaziamento da vesícula biliar, também mais rápido. O objetivo do trabalho foi determinar se há diferença na velocidade de esvaziamento da vesícula biliar, por método ultra-sonográfico, após ingestão de leite materno e leite de vaca. Estudamos 47 crianças menores de dois anos, 22 após uma refeição com leite materno e 25 após uma refeição com leite de vaca. A vesícula biliar foi medida após um período de quatro a seis horas de jejum e uma hora após uma refeição (leite materno ou leite de vaca), e a contração da vesícula biliar foi avaliada, em porcentagem, pela diferença de volume da vesícula biliar entre as duas medidas e expressa em porcentagem do volume inicial. As medianas das porcentagens do volume inicial para as crianças alimentadas com leite materno e leite de vaca foram, respectivamente, 92,25% e 53,8%, diferença estatisticamente significativa. Portanto, a contração da vesícula biliar após uma refeição com leite de vaca é muito mais lenta do que aquela após uma refeição com leite materno.

Characteristics of seminal plasma proteins and their correlation with canine semen analysis

The objectives were to separate canine seminal plasma proteins (with SDS-PAGE) and to determine the correlation between specific proteins and semen characteristics. Three ejaculates from 20 mixed-breed dogs, of unknown fertility, were collected by digital manipulation. Ejaculate volume and color, sperm motility, sperm vigor, percentage of morphologically normal spermatozoa, and membrane integrity (hypoosmotic swelling test and fluorescent staining) were assessed. For each dog, seminal plasma was pooled from all three ejaculates and proteins were separated with SDS-PAGE, using polyacrylamide concentrations of 13% and 22% in the separation gels. After staining, gel images were digitized to estimate molecular weights (MW) and integrated optical density (IOD) of each lane and of individual bands. Total seminal plasma protein concentration was 2.19 +/- 1.56 g/dL (mean +/- SD; range 1.12-5.19 g/dL). A total of 37 protein bands were identified (although no dog had all 37 bands). In the 13% gel, molecular weights ranged from 100.6 to 17.1 kDa, with four bands (49.7, 33.2, 26.4, and 19.5 kDa) present in samples from all dogs. In the 22% gel, molecular weights ranged from 15.6 to 3.6 kDa, with nine bands (15.6, 13.5, 12.7, 11.7, 10.5, 8.7, 7.8, 5.6, and 4.9 kDa) present in samples from all dogs. Combined for both gels, the majority of bands (85%) had molecular weights < 17 kDa, with B20 (15.6 kDa) in high concentrations in samples from all dogs. There were positive correlations (P <= 0.01) between two bands, 134 (67 kDa) and B5 (58.6 kDa), and sperm motility (r = 0.66 and r = 0.46), sperm vigor (r = 0.56 and r = 0.66), percentage of morphologically normal spermatozoa (r = 0.55 and r = 0.59), the hypoosmotic swelling test (r = 0.76 and r 0.68), and fluorescent staining (r = 0.56 and r = 0.59), respectively. In conclusion, 37 proteins were identified in seminal plasma; two were significantly correlated with semen characteristics. (c) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.