Functional analysis of a novel missense NBC1 mutation and of other mutations causing proximal renal tubular acidosis

Mutations in the Na+-HCO3- cotransporter NBC1 cause severe proximal tubular acidosis (pRTA) associated with ocular abnormalities. Recent studies have suggested that at least some NBC1 mutants show abnormal trafficking in the polarized cells. This study identified a new homozygous NBC1 mutation (G486R) in a patient with severe pRTA. Functional analysis in Xenopus oocytes failed to detect the G486R activity due to poor surface expression. In ECV304 cells, however, G486R showed the efficient membrane expression, and its transport activity corresponded to approximately 50% of wild-type (WT) activity. In Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells, G486R was predominantly expressed in the basolateral membrane domain as observed for WT. Among the previously identified NBC1 mutants that showed poor surface expression in oocytes, T485S showed the predominant basolateral expression in MDCK cells. On the other hand, L522P was exclusively retained in the cytoplasm in ECV304 and MDCK cells, and functional analysis in ECV304 cells failed to detect its transport activity. These results indicate that G486R, like T485S, is a partial loss of function mutation without major trafficking abnormalities, while L522P causes the clinical phenotypes mainly through its inability to reach the plasma membranes. Multiple experimental approaches would be required to elucidate potential disease mechanism by NBC1 mutations.

Mechanisms underlying the long-term regulation of NHE3 by parathyroid hormone

The activity of the Na(+)/H(+) exchanger NHE3 is regulated by a number of factors including parathyroid hormone (PTH). In the current study, we used a renal epithelial cell line, the opossum kidney (OKP) cell, to elucidate the mechanisms underlying the long-term effects of PTH on NHE3 transport activity and expression. We observed that NHE3 activity was reduced 6 h after addition of PTH, and this reduction persisted almost unaltered after 24 h. The decrease in activity was associated with diminished NHE3 cell surface expression at 6, 16, and 24 h after PTH addition, total cellular NHE3 protein at 16 and 24 h, and NHE3 mRNA abundance at 24 h. The lower levels of NHE3 mRNA were associated to a small, but significant, decrease in mRNA stability. Additionally, by analyzing the rat NHE3 gene promoter activity in OKP cells, we verified that the regulatory region spanning the segment -152 to +55 was mildly reduced under the influence of PTH. This effect was completely abolished by the presence of the PKA inhibitor KT 5720. In conclusion, long-term exposure to PTH results in reduction of NHE3 mRNA levels due to a PKA-dependent inhibitory effect on the NHE3 promoter and a small reduction of mRNA half-life, and decrease in the total amount of protein which is preceded by endocytosis of the apical surface NHE3. The decreased NHE3 expression is likely to be responsible for the reduction of sodium, bicarbonate, and fluid reabsorption in the proximal tubule consistently perceived in experimental models of PTH disorders.

Estudos hidroquímicos da água produzida de um determinado campo de petróleo da bacia potiguar

Waste generated during the exploration and production of oil, water stands out due to various factors including the volume generated, the salt content, the presence of oil and chemicals and the water associated with oil is called produced water. The chemical composition of water is complex and depends strongly on the field generator, because it was in contact with the geological formation for thousands of years. This work aims to characterize the hydrochemical water produced in different areas of a field located in the Potiguar Basin. We collected 27 samples from 06 zones (400, 600, 400/600, 400/450/500, 350/400, A) the producing field called S and measured 50 required parameter divided between physical and chemical parameters, cations and anions. In hydrochemical characterization was used as tools of reasons ionic calculations, diagrams and they hydrochemical classification diagram Piper and Stiff diagram and also the statistic that helped in the identification of signature patterns for each production area including the area that supplies water injected this field for secondary oil recovery. The ionic balance error was calculated to assess the quality of the results of the analysis that was considered good, because 89% of the samples were below 5% error. Hydrochemical diagrams classified the waters as sodium chloride, with the exception of samples from Area A, from the injection well, which were classified as sodium bicarbonate. Through descriptive analysis and discriminant analysis was possible to obtain a function that differs chemically production areas, this function had a good hit rate of classification was 85%

Effect of insulin-like growth factor-1 during in vitro oocyte maturation and in vitro culture of bovine embryos

Avaliaram-se o efeito do IGF-I na maturação in vitro (MIV) (experimento I) e no desenvolvimento embrionário (DE) (experimento II) de oócitos bovinos fecundados in vitro, quanto às taxas de clivagem (TC), de blastocistos (TB) e de eclosão (TE). Para MIV, complexos cumulus-oócitos imaturos foram cultivados em meio TCM-199 suplementado com HEPES, bicarbonato e piruvato de sódio, aditivos, soro fetal bovino (meio B-199) e gonadotrofinas 14U/ml de PMSG e 7U/ml de hCG). Para o desenvolvimento embrionário, os oócitos/zigotos foram cultivados em meio B-199 com células epiteliais do oviduto bovino em suspensão sob óleo de silicone. As condições de cultivo in vitro para ambos os experimentos seguiram os tratamentos: 1- meio B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. Todas as culturas foram realizadas a 38,5° C em atmosfera com 5% de CO2 e os dados foram analisados pelo teste do qui-quadrado. No experimento I, não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto às TC, TB e TE, quando o meio de MIV foi suplementado com IGF-I. No experimento II, a adição de IGF-I ao meio de DE resultou em aumento na TC (P<0,05) mas não influenciou a TB e a TE. A adição de 200 ng/ml de IGF-I ao meio DE melhorou a TC (71,1%) quando comparada com a TC dos grupos de 100 ng/ml de IGF-I (57,6%) ou controle (56,7%), entretanto não houve diferença quando comparada com a dos grupos de 50 ng/ml (69,4%) ou 10 ng/ml (73,1%) de IGF-I. Não houve efeito benéfico na adição de 10 a 200 ng/ml de IGF-I nos meios de MIV e de DE com relação ao desenvolvimento de embriões produzidos a partir de oócitos maturados e fecundados in vitro.

Efeitos das fontes e níveis de sódio, cloro e potássio e da relação (Na + K)/Cl, sobre o desempenho e características do plasma sangüíneo de poedeiras comerciais

Dois experimentos foram realizados para estudar os efeitos da relação (Na + K)/Cl na dieta de poedeiras comerciais no final do ciclo de postura, pela adição de bicarbonato de sódio (NaHCO3), cloreto de sódio (NaCl), cloreto de potássio (KCl) e cloreto de amônia (NH4Cl), avaliando-se os parâmetros produtivos e características do plasma sangüíneo. O primeiro experimento envolveu cinco tratamentos: 0,30% de NaCl; 0,30% de NaCl + 0,95% de NaHCO3; 0,38% de KCl + 0,67% de NaHCO3; 0,38% de KCl + 1,62% de NaHCO3; e 0,38% de KCL + 2,56% de NaHCO3. A relação (Na + K)/Cl foi, respectivamente, 3,46; 4,46; 4,46; 5,46; e 6,46. O segundo experimento envolveu quatro tratamentos: 0,30% NaCl; 0,47% de NaHCO3 + 0,19 de NH4Cl; 1,17% NaHCO3 + 0,19% de NH4Cl; e 1,88% de NaHCO3 + 0,19% de NH4Cl. A relação (Na + K)/Cl foi 3,46; 4,46; 5,46; e 6,46, respectivamente. No primeiro experimento, o maior consumo alimentar foi observado nas aves alimentadas com dietas contendo 0,30% de NaCl. As aves que consumiram KCl apresentaram melhor conversão alimentar. Foi observado aumento no fósforo e pH do plasma sangüíneo. Aves que receberam dietas em que a relação (Na +K)/Cl foi de 5,46 apresentaram maiores níveis de fósforo no plasma sangüíneo. O aumento do pH no plasma sangüíneo foi observado em aves que receberam dietas com relações de (Na + K)/Cl de 4,46 e 6,46. No segundo experimento, o peso do ovo diminuiu com o aumento do NaHCO3 da dieta.

Fontes de Sódio e Relação Sódio: Cloro para Frangos de Corte

Foram utilizados 2.880 pintos de corte, para avaliar os efeitos de diferentes fontes de sódio (Na+) e relações sódio:cloro (Na+:Cl-) na ração. As aves receberam ração e água ad libtum. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e seis repetições. O ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar e mortalidade não foram influenciados (p>0,05) pela substituição da fonte tradicional de Na e pelas diferentes relações Na:Cl. A umidade da cama foi afetada pela fonte e níveis de Na na ração. Os resultados mostraram que pode-se utilizar o NaHCO3 como fonte parcial à exigência de Na para frangos de corte de 1 a 47 dias de idade.

Effectiveness and safety of endotracheal tube cuffs filled with air versus filled with alkalinized lidocaine: a randomized clinical trial

CONTEXTO E OBJETIVO: Os tubos traqueais são dispositivos utilizados para manutenção da ventilação. A hiperinsuflação do balonete do tubo traqueal, causada pela difusão do óxido nitroso (N2O), pode determinar lesões traqueais, que se manifestam clinicamente como odinofagia, rouquidão e tosse. A lidocaína, quando injetada no balonete do tubo traqueal, difunde-se através de sua parede, determinando ação anestésica local na traquéia. O objetivo foi avaliar a efetividade e a segurança do balonete do tubo traqueal preenchido com ar comparado com o balonete preenchido com lidocaína, considerando os desfechos: sintomas cardiovasculatórios (HAS, taquicardia); odinofagia, tosse, rouquidão e tolerância ao tubo traqueal. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo clínico prospectivo, realizado no Departamento de Anestesiologia da Faculdade de Medicina da Unesp, campus de Botucatu. MÉTODOS: A pressão do balonete do tubo traqueal foi medida, entre 50 pacientes, antes, 30, 60, 90 e 120 minutos após o início da inalação de N2O anestésico. As pacientes foram distribuídas aleatoriamente em dois grupos: Air, em que o balonete foi inflado com ar para obtenção de pressão de 20 cm H2O, e Lido, em que o balonete foi preenchido com lidocaína a 2% mais bicarbonato de sódio a 8,4% para obtenção da mesma pressão. O desconforto antes da extubação, e manifestações clínicas como dor de garganta, rouquidão e tosse foram registrados no momento da alta da unidade de cuidados pós-anestésicos, e dor de garganta e rouquidão foram avaliadas também 24 horas após a anestesia. RESULTADOS: Os valores da pressão no balonete em G2 foram significativamente menores do que os de Air em todos os tempos de estudo, a partir de 30 minutos (p < 0,001). A proporção de pacientes que reagiu ao tubo traqueal no momento da desintubação foi significantemente menor em Lido (p < 0,005). A incidência de odinofagia foi significantemente menor em Lido no primeiro dia de pós-operatório (p < 0,05). A incidência de tosse e rouquidão não diferiu entre os grupos. CONCLUSÕES: Durante ventilação artificial, empregando-se a mistura de oxigênio e N2O, a insuflação do balonete com lidocaína 2% alcalinizada impede que ocorra aumento significante da pressão no balonete e determina maior tolerância ao tubo traqueal e menor incidência de odinofagia no pós-operatório, podendo então ser considerada mais segura e com maior efetividade.

Viability of human fibroblasts in coconut water as a storage medium

P>AimTo evaluate the effectiveness of a new storage medium for avulsed teeth, coconut water, in maintaining the viability of human fibroblasts.MethodologyCell viability after different time periods was evaluated in the following storage media: coconut water, coconut water with sodium bicarbonate, milk, saline and still mineral water. Human fibroblasts were seeded in Eagle's minimal essential medium (EMEM) supplemented with 7.5% foetal calf serum. After trypsinisation, 100 mu L of culture medium containing approximately 10(4) cells mL(-1) were collected and pipetted into the wells of 96-well plates, which were incubated overnight in 5% CO(2) and 95% air mixture at 37 degrees C. EMEM was then replaced by the storage media and the plates were incubated at 37 degrees C for 1, 2 and 4 h. Cell viability was determined using the neutral red assay. The proportions of viable cells after exposure to the storage media were analysed statistically by anova and the least significant difference (LSD) test (alpha = 5%).ResultsMilk had the greatest capacity to maintain cell viability (P < 0.05), followed by coconut water with sodium bicarbonate and saline. Coconut water was significantly worse at maintaining cell viability compared to milk, coconut water with sodium bicarbonate and saline. The smallest number of viable cells was observed for mineral water (P < 0.05).ConclusionCoconut water was worse than milk in maintaining human fibroblast cell viability.

Influence of Different Professional Prophylactic Methods on Fluorescence Measurements for Detection of Occlusal Caries

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Roughness of Human Enamel Surface Submitted to Different Prophylaxis Methods

The purpose of this in vitro study was to evaluate alterations in the surface roughness and micromorphology of human enamel submitted to three prophylaxis methods. Sixty-nine caries-free molars with exposed labial surfaces were divided into three groups. Group I was treated with a rotary instrument set at a low speed, rubber clip and a mixture of water and pumice; group II with a rotary instrument set at a low speed, rubber cup and prophylaxis paste Herjos-F (Vigodent S/A Industria e Comercio, Rio de Janeiro, Brazil); and group III with sodium bicarbonate spray Profi II Ceramic (Dabi A dante Indtistrias Medico Odontologicas Ltda, Ribeirao Preto, Brazil). All procedures were performed by the same operator for 10 s, and samples were rinsed and stored in distilled water. Pre and post-treatment surface evaluation was completed using a surface profilometer (Perthometer S8P Marh, Perthen, Germany) in 54 samples. In addition, the other samples were coated with gold and examined in a scanning electron microscope (SEM). The results of this study were statistically analyzed with the paired t-test (Student), the Kruskal-Wallis test and the Dunn (5%) test. The sodium bicarbonate spray led to significantly rougher surfaces than the pumice paste. The use of prophylaxis paste showed no statistically significant difference when compared with the other methods. Based on SEM analysis, the sodium bicarbonate spray presented an irregular surface with granular material and erosions. Based on this study, it can be concluded that there was an increased enamel stuface roughness when teeth were treated with sodium bicarbonate spray when compared with teeth treated with pumice paste.

Efeito de produtos alternativos para o controle do bolor verde (Penicillium digitatum) em pós-colheita de citros

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

The effect of intracuff alkalinized 2% lidocaine on emergence coughing, sore throat, and hoarseness in smokers

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeitos da correção da acidose metabólica com bicarbonato de sódio sobre o catabolismo protéico na insuficiência renal crônica

A desnutrição protéico-energética constitui problema comum aos pacientes com insuficiência renal crônica, influenciando diretamente na sua morbi-mortalidade. A acidose metabólica tem papel no catabolismo protéico, ativando a via proteolítica proteasoma-ubiquitina, dependente de adenosina trifosfato, e conjuntamente com glicocorticóides induz uma maior atividade na desidrogenase que degrada os aminoácidos de cadeia ramificada. Esta revisão teve como objetivo descrever o mecanismo pelo qual a acidose metabólica nos pacientes com insuficiência renal crônica promove o catabolismo protéico, favorecendo assim a desnutrição, bem como avaliar os efeitos do uso de bicarbonato de sódio na correção da acidose e conseqüentemente redução do catabolismo protéico. Pesquisas mostram melhora da acidose pelo uso de bicarbonato de sódio e conseqüente redução do catabolismo protéico na insuficiência renal crônica, podendo ser esta uma conduta promissora na atenuação da desnutrição nestes pacientes.

Avaliação da vinhaça líquida em substituição à água na terminação de bovinos em confinamento 2. Parâmetros etológicos e perfil metabólico

Fifteen animals from Canchim group and fifteen from Nelore were observed in the following treatments: water (A), molasses soluble + magnesium oxide (V) and molasses soluble + magnesium oxide + sodium bicarbonate (V+B). They were observed during continuous 24 hours every 30 days up to 90 days periods. During the weighting, every 28 days blood samples were collected to determine metabolic outline. Treatments did not affect (P>.05) animal behaviour on metabolic and the obtained mean values were within the normal range. They were, respectively for Canchim and Nelore: Feeding 270 and 223 minutes; Rumination 374 and 356 minutes; Idleness 745 and 863 minutes; Glicose 86 and 88 mg/dl; Urea 10 and 23 mg/dl: Uric acid 1,3 and 1,2 mg/dl; Total protein 7,0 and 6,8 g/dl; Albumin 3,1 and 3,1 g/dl; Creatinin 1,5 and 1,6 mg/dl; Sodium 140 and 142 meq/dl; Potassium 4,2 and 4,3 meq/1 and Calcium 10,0 and 9,8 mg/dl. It was concluded that molasses soluble as a substitute of water has not changed the ethologic parameters neither metabolic outline of both genetic group when in finishing feedlot.

Avaliação da vinhaça líquida em substituição à água na terminação de bovinos em confinamento. 1. Desempenho

During 90 days 243 finishing feedlot animals from two genetic groups, were weighed every 28 days in a randomized experimental procedure in a 2 x 3 factorial arrangement, with two breeds - Nelore (Nel) and Canchim (Can) - and three treatments: water (A), cane stillage + magnesium oxide (V) and cane stillage + magnesium oxide + sodium bicarbonate (V + B). The diet for all treatments was composed of 70% of corn silage and 30% of chopped sugar cane ad libitum plus 1 kg of ground corn and 1,5 kg of soluble yeast per animal. Results showed higher weight gain (P < 0,01) of the Can group relation to those of Nel, having respectively 1,35 and 1,22 kg/head/day. Both Can and Nel groups showed higher weight gain (P <.01) when fed with V + B, with 1,44 and 1,32 kg/head/day respectively when comparing to the other diets: Can (A) = 1,30; Can (V) = 1,31; Nel (A) = 1,16 and Nel (V) = 1,20 kg/head/day. The diet using V + B has also showed a tendency (.05