DNA-dependent Protein Kinase-mediated Phosphorylation of Protein Kinase B Requires a Specific Recognition Sequence in the C-terminal Hydrophobic Motif

DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) has been implicated in a variety of nuclear processes including DNA double strand break repair, V(D)J recombination, and transcription. A recent study showed that DNA-PK is responsible for Ser-473 phosphorylation in the hydrophobic motif of protein kinase B (PKB/Akt) in genotoxic-stressed cells, suggesting a novel role for DNA-PK in cell signaling. Here, we report that DNA-PK activity toward PKB peptides is impaired in DNA-PK knock-out mouse embryonic fibroblast cells when compared with wild type. In addition, human glioblastoma cells expressing a mutant form of DNA-PK (M059J) displayed a lower DNA-PK activity when compared with glioblastoma cells expressing wild-type DNA- PK (M059K) when PKB peptide substrates were tested. DNA- PK preferentially phosphorylated PKB on Ser-473 when compared with its known in vitro substrate, p53. A consensus hydrophobic amino acid surrounding the Ser-473 phospho-acceptor site in PKB containing amino acids Phe at position +1 and +4 and Tyr at position -1 are critical for DNA- PK activity. Thus, these data define the specificity of DNA- PK action as a Ser-473 kinase for PKB in DNA repair signaling.

Bis-guanylhydrazone diimidazo[1,2-a:1,2-c]pyrimidine as a novel and specific G-quadruplex binding motif

A bis-guanylhydrazone derivative of diimidazo[1,2-a:1,2-c]pyrimidine has unexpectedly been found to be a potent stabiliser of several quadruplex DNAs, whereas there is no significant interaction with duplex DNA. Molecular modeling suggests that the guanylhydrazone groups play an active role in quadruplex binding.

Structural basis for the platelet-collagen interaction - The smallest motif within collagen that recognizes and activates platelet glycoprotein VI contains two glycine-proline-hydroxyproline triplets

Collagen-related peptide is a selective agonist for the platelet collagen receptor Glycoprotein VI. The triple helical peptide contains ten GPO triplets/strand (single letter amino acid nomenclature, where O is hydroxyproline) and so over-represents GPO compared with native collagen sequence. To investigate the ability of Glycoprotein VI to recognize GPO triplets in a setting more representative of the collagens, we synthesized a set of triple helical peptides containing fewer GPO triplets, varying their number and spacing within an inert (GPP)(n) backbone. The adhesion of recombinant human Glycoprotein VI ectodomain, like that of human platelets, to these peptides increased with their GPO content, and platelet adhesion was abolished by the specific anti-Glycoprotein VI-blocking antibody, 10B12. Platelet aggregation and protein tyrosine phosphorylation were induced only by cross-linked peptides and only those that contained two or more GPO triplets. Such peptides were less potent than cross-linked collagen-related peptide. Our data suggest that both the sequences GPOGPO and GPO center dot center dot center dot center dot center dot center dot center dot center dot center dot GPO represent functional Glycoprotein VI recognition motifs within collagen. Furthermore, we propose that the (GPO)(4) motif can support simultaneous binding of two glycoprotein VI molecules, in either a parallel or anti-parallel stacking arrangement, which could play an important role in activation of signaling.

IQ-motif selectivity in human IQGAP2 and IQGAP3: binding of calmodulin and myosin essential light chain

The IQGAP [IQ-motif-containing GAP (GTPase-activating protein)] family members are eukaryotic proteins that act at the interface between cellular signalling and the cytoskeleton. As such they collect numerous inputs from a variety of signalling pathways. A key binding partner is the calcium-sensing protein CaM (calmodulin). This protein binds mainly through a series of IQ-motifs which are located towards the middle of the primary sequence of the IQGAPs. In some IQGAPs, these motifs also provide binding sites for CaM-like proteins such as myosin essential light chain and S100B. Using synthetic peptides and native gel electrophoresis, the binding properties of the IQ-motifs from human IQGAP2 and IQGAP3 have been mapped. The second and third IQ-motifs in IQGAP2 and all four of the IQ-motifs of IQGAP3 interacted with CaM in the presence of calcium ions. However, there were differences in the type of interaction: while some IQ-motifs were able to form complexes with CaM which were stable under the conditions of the experiment, others formed more transient interactions. The first IQ-motifs from IQGAP2 and IQGAP3 formed transient interactions with CaM in the absence of calcium and the first motif from IQGAP3 formed a transient interaction with the myosin essential light chain MIc1sa. None of these IQ-motifs interacted with S100B. Molecular modelling suggested that all of the IQ-motifs, except the first one from IQGAP2 formed alpha-helices in solution. These results extend our knowledge of the selectivity of IQ-motifs for CaM and related proteins.

Characterization of the highly conserved VFMGD motif in a bacterial polyisoprenyl-phosphate N-acetylaminosugar-1-phosphate transferase

Polyisoprenyl-phosphate N-acetylaminosugar-1-phosphate transferases (PNPTs) constitute a family of eukaryotic and prokaryotic membrane proteins that catalyze the transfer of a sugar-1-phosphate to a phosphoisoprenyl lipid carrier. All PNPT members share a highly conserved 213-Valine-Phenylalanine-Methionine-Glycine-Aspartic acid-217 (VFMGD) motif. Previous studies using the MraY protein suggested that the aspartic acid residue in this motif, D267, is a nucleophile for a proposed double-displacement mechanism involving the cleavage of the phosphoanhydride bond of the nucleoside. Here, we demonstrate that the corresponding residue in the E. coli WecA, D217, is not directly involved in catalysis, as its replacement by asparagine results in a more active enzyme. Kinetic data indicate that the D217N replacement leads to more than twofold increase in V(max) without significant change in the K(m) for the nucleoside sugar substrate. Furthermore, no differences in the binding of the reaction intermediate analog tunicamycin were found in D217N as well as in other replacement mutants at the same position. We also found that alanine substitutions in various residues of the VFMGD motif affect to various degrees the enzymatic activity of WecA in vivo and in vitro. Together, our data suggest that the highly conserved VFMGD motif defines a common region in PNPT proteins that contributes to the active site and is likely involved in the release of the reaction product.

IQ-motif peptides as novel anti-microbial agents

The IQ-motif is an amphipathic, often positively charged, a-helical, calmodulin binding sequence found in a number of eukaryote signalling, transport and cytoskeletal proteins. They share common biophysical characteristics with established, cationic a-helical antimicrobial peptides, such as the human cathelicidin LL-37. Therefore, we tested eight peptides encoding the sequences of IQ-motifs derived from the human cytoskeletal scaffolding proteins IQGAP2 and IQGAP3. Some of these peptides were able to inhibit the growth of Escherichia coli and Staphylococcus aureus with minimal inhibitory concentrations (MIC) comparable to LL-37. In addition some IQ-motifs had activity against the fungus Candida albicans. This antimicrobial activity is combined with low haemolytic activity (comparable to, or lower than, that of LL-37). Those IQ-motifs with anti-microbial activity tended to be able to bind to lipopolysaccharide. Some of these were also able to permeabilise the cell membranes of both Gram positive and Gram negative bacteria. These results demonstrate that IQ-motifs are viable lead sequences for the identification and optimisation of novel anti-microbial peptides. Thus, further investigation of the anti-microbial properties of this diverse group of sequences is merited.

La direction des écoles et l'autodéveloppement, une recherche-action

L'objet de cette recherche-action est la pratique de gestion des membres de la direction des écoles se situant dans la perspective de l'autodéveloppement. Plus d'une quarantaine d'entre eux, sur une période de deux années, se sont réunis dans des cercles d'analyse pour explorer leur pratique de gestion. Lorsque les membres de la direction agissent dans l'optique de l'autodéveloppement, ils se donnent le mandat d'organiser l'auto-organisation de l'école. Notre projet de recherche-action visait à explorer, avec eux, leurs modalités de gestion qui s'inspirent de cette vision. Il visait aussi à explorer des voies nouvelles permettant de mieux utiliser les marges d'action dont ils disposent. L'école est enchevêtrée dans une organisation d'organisations scolaires. La grande organisation scolaire l'intègre en tant que partie. Mais en tant qu'organisation spécifique, elle s'y différencie. À son tour, l'école devient un grand toit intégrant ses parties qui s'y différencient aussi. Les membres de la direction des écoles qui se réfèrent à l'autodéveloppernent veulent amplifier leur différenciation et celle de ses actrices et acteurs. Ils veulent aussi recourir à des modalités de coordination dites de concertation permettant cette différenciation. Les membres de la direction des écoles rencontrés dans les cercles participent et déterminent la mouvance organisationnelle actuellement vécue. Réussiront-ils à actualiser davantage les conceptions de pratique qui'ils avancent? L'idée de l'autodéveloppement est sous-jacente, sinon sous-entendue, à la mouvance organisationnelle vécue dans les écoles actuellement. L'apport principal de cette recherche-action est de rendre compte de pratiques et de conceptions de membres de direction d'école s'inscrivant dans cette idée. Notre cadre théorique, en proposant une articulation conceptuelle de cette vision de l'organisation, a permis de donner corps aux diverses et multiples pratiques et conceptions observées. Il a permis aussi d'y déceler des tendances. Cette articulation, en s'appuyant sur la nouvelle épistémologie de l'auto-organisation, offre une esquisse d'un cadre de référence pour la gestion des écoles. Son application pourrait être approfondie dans de nouvelles recherches-action."--Résumé abrégé par UMI

Recherche phénoménologique sur l'impact de l'identification des subpersonnalités chez des enseignants en difficulté dans leur vie professionnelle

Cette recherche phénoménologique s’adresse aux enseignants qui vivent des difficultés professionnelles. Plus précisément, elle étudie l’impact de l’identification des subpersonnalités en utilisant la méthode de l’étude de cas. Les données sont recueillies grâce à des entrevues nous permettant de voir le cheminement de cinq personnes qui ont travaillé avec la technique des subpersonnalités. Ces dernières représentent différentes facettes de la personnalité. Nous en avons tous plusieurs en nous qui entrent en jeu selon les événements. La question spécifique de recherche est la suivante: Quel est l’impact de l’identification des subpersonnalités chez les enseignants qui éprouvent de la difficulté dans leur vie professionnelle? Cette question de recherche soulève les trois sous-questions suivantes: • Quels sont les outils et les moyens disponibles pour amener l’enseignant à identifier ses subpersonnalités? • Quelles sont les subpersonnalités présentes chez les enseignants qui éprouvent des difficultés dans leur vie professionnelle? • Quel cheminement les enseignants en difficulté suivent-ils en identifiant leurs subpersonnalités? Le premier chapitre de la recherche fait état de notre inquiétude face à la tâche d’enseignement. Il énumère des difficultés rencontrées dans l’enseignement. Il est également question de l’introspection qui procure une meilleure connaissance de soi. Le deuxième chapitre définit trois concepts clés: le monde intérieur des enseignants, la psychosynthèse et les subpersonnalités. Plusieurs auteurs sont cités afin de clarifier ces concepts. Le troisième chapitre présente le cadre méthodologique de cette recherche phénoménologique. L’approche qualitative, la méthode inductive, l’enjeu ontogénique, l’étude de cas, les entrevues et le déroulement de la recherche sont expliqués. De plus, il présente les cinq sujets (cas) ainsi que le déroulement des rencontres avec ceux-ci. Dans le quatrième chapitre, il est question de l’analyse des résultats de la première entrevue individuelle, de l’analyse des résultats de la deuxième entrevue ainsi qu’une synthèse de l’expérience des sujets. Le cinquième chapitre répond à la question spécifique de recherche ainsi qu’aux sous-questions. Suite à un travail personnel et aux rencontres avec les sujets d’étude, nous pouvons affirmer que les subpersonnalités sont un outil d’introspection qui permet de se connaître davantage et de faire un travail sur soi. Les subpersonnalités sont une façon d’évoluer et de réfléchir à nos réactions lors de moments difficiles. Elles sont, sans contredit, une avenue à connaître par tous les enseignants, particulièrement ceux qui éprouvent des difficultés dans leur vie professionnelle.

Recherche-formation-action sur l'expérience de la persévérance, deux enseignantes au primaire, lors de l'implantation d'approches ou d'outils pédagogiques

Si vous êtes présentement à la recherche d’un ouvrage traitant de la persévérance, cet essai vous est destiné. C’est par le biais de l’implantation de la pédagogie par ateliers, du portfolio et des intelligences multiples que nous, deux enseignantes-chercheuses du primaire, avons exploré notre persévérance. Cette exploration nous a permis de mieux comprendre le phénomène de la persévérance pour, par la suite, identifier des composantes telles que des comportements, des attitudes ou des structures qui ont une incidence positive sur notre persévérance lors de l’implantation d’approches ou d’outils pédagogiques. Ce projet a pris naissance suite à l’avènement du nouveau curriculum de 2001, en éducation. La nouvelle philosophie qu’il proposait est venue déstabilisée nos pratiques professionnelles. Pour remédier à la situation, nous nous sommes retournées vers la formation continue offerte par notre commission scolaire Ayant le besoin d’approfondir les sujets abordés, nous nous sommes engagées dans un programme universitaire de deuxième cycle offert par l’Université de Sherbrooke. Au cours de cette formation, nous avons eu l’opportunité de nous familiariser avec différentes approches ou outils pédagogiques. Parmi ceux-ci, trois nous ont rejointes davantage puisqu’ils correspondaient à nos valeurs de pédagogues: la pédagogie par ateliers, le portfolio et les intelligences multiples. Nous avons donc décidé de les implanter dans nos classes. Cette implantation signifiait pour nous une façon d’adapter nos pratiques pour davantage répondre à la nouvelle philosophie du curriculum. À chaque fois, nous faisions face au même problème: nous abandonnions, soit de façon partielle ou totale, l’implantation d’approches ou d’outils pédagogiques. Nous voulons donc résoudre notre problème de persévérance pour en arriver à une implantation complète. L’objectif de ce projet de recherche est de comprendre le phénomène de la persévérance pour, par la suite, identifier les composantes qui contribuent à persévérer lors de l’implantation d’approches ou d’outils pédagogiques retenus. Pour ce faire, nous avons établi un cadre méthodologique et nous avons sélectionné des instruments de recherche. Tout d’abord, nous avons privilégié l’approche qualitative puisque ce projet de recherche est destiné à recueillir des informations afin de comprendre nos attitudes et nos comportements à l'égard de notre persévérance. Par la suite, nous avons retenu un type de recherche inspirée de Fernandez, la recherche-formation-action (combinaison de la recherche-formation et de la recherche-action) puisqu’elle permet, à la fois, de nous former sur notre persévérance et d’agir sur elle. Par conséquent, l’enjeu de cette recherche est ontogénique parce qu’il s’agit du propre développement des enseignantes-chercheuses. Finalement, pour atteindre notre objectif de recherche, nous avons besoin d’instruments pour colliger les données. Dans un premier temps, le récit de pratique traite de la dimension professionnelle par le biais de la synthèse rétrospective et du journal de bord. En ce qui concerne la dimension personnelle, nous avons privilégié l’histoire de vie et c’est le journal personnel qui est utilisé pour recueillir les faits liés à notre persévérance. Toutes les démarches ou lectures entreprises nous ont amenées à des conclusions positives. Lors de nos lectures, nous avons découvert une procédure pour persévérer, les qualités d’une personne persévérante, les ennemis de la persévérance, les cinq domaines principaux de l’intelligence émotionnelle, le self-control, les étapes de résolution de problème, les variables de la motivation ainsi que les quatre facteurs influençant les actes volontaires. Tous ces concepts ont une incidence positive sur notre persévérance lors de l’implantation d’approches ou d’outils pédagogiques. Certains de ces concepts prennent encore plus d’importance lorsqu’ils sont interliés à d’autres. Pour ce faire, nous avons créé une allégorie qui permet de réunir tous ces concepts puisqu’ils jouent un rôle majeur sur notre persévérance. Les composantes trouvées ainsi que nos lectures constituent des outils essentiels pour nous permettre de vivre l’expérience de la persévérance. Au-delà des découvertes réalisées, nous sommes unanimes pour dire que pour apprendre à persévérer il faut, d’abord et avant tout, vivre l’expérience de la persévérance, qui fait l’objet de cette recherche. Nous estimons que les composantes (comportements, attitudes et structures), trouvées par l’entremise de nos lectures et de cet essai, constituent de précieux outils pour aider une personne à persévérer puisqu’il y a peu de travaux qui ont traité de ce sujet. Finalement, nous espérons que notre essai encouragera d’autres chercheurs à innover dans leur recherche, comme nous l’avons fait avec l’élaboration de nos étapes de recherche et le choix du type de recherche, puisque c’est en explorant de nouvelles avenues que nous apportons de la nouveauté dans le monde de la recherche. Bref, nous considérons notre essai comme une contribution à la recherche tant par les découvertes que nous y avons faites concernant la persévérance que par la nouveauté que nous avons apporté au niveau méthodologique.

La publication en libre accès : étude sur les niveaux de connaissance et d'intérêt de la communauté de recherche des Facultés d'administration, de droit, d'éducation, d'éducation physique et sportive, de lettres et sciences humaines et de théologie et d'études religieuses de l'Université de Sherbrooke

Le présent essai est l'aboutissement d'une réflexion sur la place qu'occupe le libre accès dans la communauté scientifique. Bien que le libre accès ne constitue pas en soi une nouveauté, il occupe une place relativement marginale. L'auteur s'est d'abord penché sur l'évolution du libre accès dans le monde avant d'entreprendre une recherche terrain a l'Université de Sherbrooke pour mesurer l'intérêt et les connaissances de la communauté de recherche. Au terme de cette recherche, l'auteur a produit une analyse à partir des données qu'il a récoltées. Des recommandations ont par la suite été produites à l'intention de la direction du Service des bibliothèques et archives (SBA) dans le but de promouvoir le libre accès, porteur selon l'auteur d'économies potentielles pour les universités et d'une plus grande accessibilité au savoir autant pour les chercheurs que pour le grand public. Voici un bref aperçu desdites recommandations: Recommandation 1: Mettre sur pied une séance d'information et une brochure présentant le libre accès aux professeurs et aux étudiants de l'Université de Sherbrooke. Recommandation 2: Encourager les facultés à faire en sorte que soient déposés sur Savoirs UdeS les articles publiés par les professeurs. Recommandation 3: Entamer un dialogue personnalise avec les représentants de l'ensemble des facultés de l'Université de Sherbrooke pour établir la voie verte au libre accès. Recommandation 4: Assurer la synergie des dépôts institutionnels des universités québécoises. Recommandation 5: Assurer la défense des intérêts universitaires par un réseautage auprès des organismes subventionnaires.