Molecular evidence of human T-cell lymphotropic virus types 1 and 2 (HTLV-1 and HTLV-2) infections in HTLV seroindeterminate individuals from Sao Paulo, Brazil

Background: Using enzyme immunoassays and Western blot (Wb) tests, HTLV serodiagnosis yields indeterminate results in a significant number of cases. Objective: To determine the prevalence of HTLV infection among HTLV-seroindeterminate individuals. Study design: We studied peripheral blood mononuclear cells from 65 anti-HTLV Wb-seroindeterminate individuals by attempting to amplify proviral DNA sequences (tax and pot) to identify HTLV-I and HTLV-2 infections. Results: These 65 specimens exhibited predominantly (43%) anti-HTLV antibodies to gag-coded antigens in the absence of anti-p24 on Wb analysis. Tax proviral sequences were detected in 6 (9.2%) samples. According to restricted fragment polymorphism analysis (RFLP), we identified HTLV-1 proviral DNA in 4 samples. HTLV-2 in one and sequences from both in another. Nested PCR for the pot region was positive in 3 (4.6%) specimens, which were also positive for tax sequences. After hybridization HTLV-1 infection was confirmed in 2 samples (3.1%) and HTLV-2 in another (1.5%). Detection of a single HTLV DNA sequence may be due to infection by defective provirus, but its significance remains undefined. In this cohort, no Wb reactivity pattern was predictive of proviral detection. HTLV-I infection was demonstrated in an individual who had Wb reactivity to gag-coded antigens only. Conclusions: This emphasizes the importance of clinical and laboratory follow-up of HTLV-seroindeterminate individuals from endemic areas. (c) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.

Serological patterns and temporal trends of HTLV-1/2 infection in high-risk populations attending public health units in Sao Paulo, Brazil

Background: HTLV-1/2 diagnosis in high-risk populations from Sao Paulo, Brazil has been problematic due a high proportion of seroindeterminate results. Objectives: To confirm and extend previous findings regarding HTLV-1/2 diagnosis in this geographic area. Study design: Sera from 2312 patients were tested for HTLV-1/2 antibodies using enzyme immunoassay (EIA) and Western blot (WB) analysis. Patients were from AIDS Reference Centers (Group 1; 1393 patients) and HTLV out-patient clinics (Group 11; 919 patients). Results were analyzed according to patients` age, gender, and clinic type. Results: HTLV-1 and HTLV-2 were detected in both groups. Among seropositive females, HTLV-2 was slightly more common in Group 1 (54.5%), while HTLV-1 prevailed in Group II (73.9%). Males from Group II had a higher percentage of HTLV-seroindeterminate results. No correlation between HTLV serological results and age was detected. Temporal analyses disclosed a high number of HTLV-seroindeterminate samples, and a large spectrum of indeterminate WB profiles. GD21 and/or rgp46-II bands were detected in 34.6% of sera from Group 1, and a p24 or p19 band was detected in 35.3% of sera from Group II. Conclusions: High rates of HTLV-indeterminate serological patterns during temporal analyses were confirmed in high-risk populations from Sao Paulo, Brazil. (c) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Neither Molecular Diversity of the Envelope, Immunosuppression Status, Nor Proviral Load Causes Indeterminate HTLV Western Blot Profiles in Samples From Human T-Cell Lymphotropic Virus Type 2 (HTLV-2)-Infected Individuals

Although human T-cell lymphotropic virus type 2 (HTLV-2) is considered of low pathogenicity, serological diagnosis is important for counseling and monitoring. The confirmatory tests most used are Western blot (WB) and PCR. However, in high-risk populations, about 50% of the indeterminate WB were HTLV-2 positives by PCR. The insensitivity of the WB might be due to the use of recombinant proteins of strains that do not circulate in our country. Another possibility may be a high level of immunosuppression, which could lead to low production of virus, resulting in low stimulation of antibody. We found one mutation, proline to serine in the envelope region in the position 184, presented at least 1/3 of the samples, independent the indeterminate WB profile. In conclusion, we found no correlation of immune state, HTLV-2 proviral load, or env diversity in the K55 region and WB indeterminate results. We believe that the only WB kit available in the market is probably more accurate to detect HTLV-1 antibodies, and some improvement for HTLV-2 detection should be done in the future, especially among high-risk population. J. Med. Virol. 82:837-842,2010. (C) 2010 Wiley-Liss, Inc.

Lower numbers of circulating natural killer T (NK T) cells in individuals with human T lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) associated neurological disease

Human T lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) infects 10-20 million people worldwide. The majority of infected individuals are asymptomatic; however, approximately 3% develop the debilitating neurological disease HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). There is also currently no cure, vaccine or effective therapy for HTLV-1 infection, and the mechanisms for progression to HAM/TSP remain unclear. NK T cells are an immunoregulatory T cell subset whose frequencies and effector functions are associated critically with immunity against infectious diseases. We hypothesized that NK T cells are associated with HAM/TSP progression. We measured NK T cell frequencies and absolute numbers in individuals with HAM/TSP infection from two cohorts on two continents: Sao Paulo, Brazil and San Francisco, CA, USA, and found significantly lower levels when compared with healthy subjects and/or asymptomatic carriers. Also, the circulating NK T cell compartment in HAM/TSP subjects is comprised of significantly more CD4(+) and fewer CD8(+) cells than healthy controls. These findings suggest that lower numbers of circulating NK T cells and enrichment of the CD4(+) NK T subset are associated with HTLV-1 disease progression.

Low DNA HTLV-2 proviral load among women in Sao Paulo city

Background: HTLV-2 infections are almost always asymptomatic, and diseases associated with the infection are rarely reported. Little information is available on the relationship between HTLV-2 proviral load and gender or expression of disease, especially among patients with HlV-1 co-infection. Methods: We studied 77 HTLV-2-infected subjects followed in our clinic for the last 9 years; 53 (69%) of them were co-infected with HIV-1. HTLV-2 DNA proviral load (PVL) was measured by real time PCR, a test with a sensitivity of 10 in 10(4) PBMCs. Results: Six of 53 HTLV-2/HIV-1 cases had a myelopathy (all of them had undetectable PVL of HTLV-2). Only 3 of 35 women (2 out of 3 co-infected with HIV) had a detectable PVL, whereas 10 of 42 men had a detectable PVL. Regardless of their HIV status women had significantly lower PVL than men (10 vs. 43 CopieS/10(4) PBMCs, p < 0.05). Conclusions: We noticed the occurrence of myelopathy in HTLV-2/HIV-1 co-infected patients, with undetectable HTLV-2 viral load. There was a sex difference in viral load for HTLV-2, what may be the result in mode of transmission or acquisition of the virus. (c) 2008 Elsevier B. V. All rights reserved.

Inhibition of Expression of HTLV-1 Structural Genes Mediated by Short Hairpin RNA In Vitro

Background: Human T-lymphotropic virus 1 (HTLV-1) is associated with the T-cell malignancy known as adult T-cell leukemia! lymphoma (ATLL) and with a disorder called HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). Currently, the treatment of these diseases is based on symptom relief. RNA interference (RNAi) technology has been described as an efficient mechanism for development of new therapeutic methods. Thus, the aim of this study was to evaluate the inhibition of HTLV-1 structural proteins using short hairpin RNAs (shRNAs) expressed by non-viral vectors. Materials and Methods: Reporter plasmids that express enhanced green fluorescent protein-Gag (EGFP-Gag) and EGFP-Env fusion proteins and vectors that express shRNAs corresponding to the HTLV-1 gag and env genes were constructed. shRNA vectors and reporter plasmids were simultaneously transfected into HEK 293 cells. Results: Fluorescence microscopy, flow cytometry and real-time PCR showed that shRNAs were effective in inhibiting the fusion proteins. Conclusion: These shRNAs are effective against the expression of structural genes and may provide an approach to the development of new therapeutic agents.

Silencing of HTLV-1 gag and env genes by small interfering RNAs in HEK 293 cells

Since the discovery of RNAi technology, several functional genomic and disease therapy studies have been conducted using this technique in the field of oncology and virology. RNAi-based antiviral therapies are being studied for the treatment of retroviruses such as HIV-1. These studies include the silencing of regulatory, infectivity and structural genes. The HTLV-1 structural genes are responsible for the synthesis of proteins involved in the entry, assembly and release of particles during viral infection. To examine the possibility of silencing HTLV-1 genes gag and env by RNA interference technology, these genes were cloned into reporter plasmids. These vectors expressed the target mRNAs fused to EGFP reporter genes. Three small interference RNAs (siRNAs) corresponding to gag and three corresponding to env were designed to analyze the effect of silencing by RNAi technology. The plasmids and siRNAs were co-transfected into HEK 293 cells. The results demonstrated that the expression of the HTLV-1 gag and env genes decreased significantly in vitro. Thus, siRNAs can be used to inhibit HTLV-1 structural genes in transformed cells, which could provide a tool for clarifying the roles of HTLV-1 structural genes, as well as a therapy for this infection. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

Polymorphisms at GLUT1 Gene Are Not Associated With the Development of TSP/HAM in Brazilian HTLV-1 Infected Individuals and the Discovery of a New Polymorphism at GLUT1 Gene

The development of HTLV-1 associated clinical manifestations, such as TSP/HAM and ATLL, occur in 2-4% of the infected population and it is still unclear why this infection remains asymptomatic in most infected carriers. Recently, it has been demonstrated that HTLV uses the Glucose transporter type 1 (GLUT1) to infect T-CD4(+) lymphocytes and that single nucleotide polymorphisms (SNP) in the GLUT1 gene are associated with diabetic nephropathy in patients with diabetes mellitus in different populations. These polymorphisms could contribute to a higher GLUT1 protein expression on cellular membrane, facilitating the entry of HTLV and its transmission cell by cell. This could result in a higher provirus load and consequently in the development of TSP/HAM. To evaluate the role of GLUT1 gene polymorphisms in the development of TSP/HAM in HTLV-1 infected individuals, the g.22999G > T, g.15339T > C and c.-2841A > T sites were analyzed by PCR/RFLP or sequencing in 244 infected individuals and 102 normal controls. The proviral load of the HTLV-1 infected patients was also analyzed using Real Time Quantitative PCR. Genotypic and allelic frequencies of the three sites did not differ significantly between controls and HTLV-1 infected individuals. There was no difference in genotypic and allelic distributions among patients as to the presence or absence of HTLV-1 associated clinic manifestations. As regards the quantification of the provirus load, we observed a significant reduction in the asymptomatic individuals compared with the oligosymptomatic and TSP/HAM individuals. These results suggest that g.22999G > T, g.15339T > C, and c.-2841A > T SNP do not contribute to HTLV-1 infection nor to the genetic susceptibility of TSP/HAM in Brazilian HTLV-1 infected individuals. J. Med. Virol. 81:552557, 2009. (C) 2009 Wiley-Liss, Inc.

Risco de infecção tuberculosa em agentes comunitários de saúde

Objetivo: Estimar o risco de infecção tuberculosa em agentes comunitários de saúde envolvidos no controle da doença. Métodos: Foi seguida uma coorte prospectiva, de abril de 2007 a maio de 2008, no município de Cachoeiro de Itapemirim, ES. A coorte foi composta por 61 agentes comunitários, divididos em não-expostos (n=37) e expostos (que acompanharam pacientes com tuberculose, n=24). Durante os 12 meses de seguimento, foi realizado teste tuberculínico, utilizando a tuberculina PPD RT23. Foi calculado o risco relativo e intervalo com 95% de confiança e foi avaliada a correlação entre a viragem tuberculínica e a história ocupacional dos agentes por meio do coeficiente de correlação de Pearson. Resultados: A incidência da viragem foi de 41,7% no grupo dos expostos e 13,5% no grupo dos não expostos. O risco anual de infecção foi de 52,8% no grupo dos expostos e de 14,4% no grupo dos não expostos (p= 0,013). Observou-se associação entre viragem tuberculínica e exposição a paciente com tuberculose (RR= 3,08; IC 95%: 1,201;7,914). Conclusões: Os agentes que acompanharam pacientes com tuberculose em suas rotinas de serviço apresentaram risco de infecção maior que aqueles que não acompanharam pacientes com essa doença. A implementação de medidas administrativas de biossegurança de rotina, entre as quais a prova tuberculínica, devem ser priorizadas, considerando o alto risco de infecção tuberculosa entre os agentes comunitários de saúde.

Prevalência e fatores associados à infecção pelo M. tuberculosis entre agentes comunitários de saúde

Introdução: A tuberculose é uma doença milenar e que, ainda hoje, constitui grave problema de saúde pública em todo o mundo. Objetivo: Estimar a prevalência e os fatores associados à infecção latente pelo MTB entre Agentes Comunitários de Saúde atuantes na rede básica de saúde de Municípios prioritários para o controle de TB – Cuiabá/MT, Manaus/AM, Salvador/BA e Vitória/ES. Métodos: Estudo de corte transversal no qual os dados foram coletados através de questionário, composto de questões abertas e fechadas sobre características pessoais; informações a respeito da tuberculose; utilização de medidas preventivas, etc. Aplicou-se prova tuberculínica, com leitura após 48-72h por enfermeiros treinados, considerando como ponte de corte positivo 5 e 10 mm de enduração. A análise múltipla foi feita por meio de regressão logística hierarquica. Foram incluídas no modelo as variáveis que mostraram associação com desfecho com p<0,1. Permaneceram no modelo as variáveis independentes que mantiveram associação com desfecho após ajuste (p<0,05). Este estudo obteve aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa com seres humanos do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal do Espírito Santo, n° de registro CEP-07/2010 e das Secretarias Municipais de Saúde, por meio de uma Carta de Apresentação. Resultados: 322 Agentes Comunitários de Saúde (ACS) aceitaram participar voluntariamente do estudo por meio da assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Destes, 10 não compareceram para leitura, sendo estes considerados como perdas, além do que um indivíduo foi excluído pelo fato do teste rápido para HIV ter resultado positivo, perfazendo uma amostra final de 311 participantes. Ainda em relação aos ACS triados, a positividade a Prova Tuberculínica, levando-se em consideração o ponto de corte ao teste de 10 mm e de 5 mm de enduração, foi de 37,30% (IC95%: 0,31-0,42) e de 57,88% (IC95%: 0,52-0,63), respectivamente.Conclusões: Faz-se necessário um programa de realização de Prova Tuberculínica, de rotina, combinado com intervenções para reduzir o risco de transmissão nosocomial, bem como a realização de outros estudos para avaliar a eficácia de novos testes para detecção de tuberculose latente.

Avaliação do teste Quantiferon TB Gold in tube no diagnóstico de infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis em profissionais de saúde da atenção básica

Introdução: Os ensaios de liberação do interferon- γ (ELIG) surgiram como uma alternativa para o diagnóstico de infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis (ILTB). Neste estudo, nós comparamos o desempenho de um dos ELIG, teste Quantiferon TB Gold in tube – QFT, com a prova tuberculínica (PT) em dois pontos de corte (≥ 5 mm e ≥ 10 mm), em profissionais de saúde da atenção básica à saúde (ABS). Métodos: Estudo transversal realizado em profissionais de saúde da ABS de quatro capitais nacionais com alta incidência de TB. O resultado do teste QFT foi comparado com o resultado da PT nos pontos de corte ≥ 5mm e ≥ 10 mm. Resultados: Foram incluídos 632 profissionais de saúde. Ao considerar o ponto de corte ≥ 10 mm para a PT, a concordância entre QFT e a PT foi de 69% (k = 0,31) e para o ponto de corte ≥ 5 mm, a concordância entre os testes foi de 57% (k = 0,22). Devido a baixa concordância entre a PT e o QFT, nós avaliamos os possíveis fatores associados com a discordância entre eles. Ao comparar o grupo PT- / QFT- com o grupo PT+ / QFT-, no ponto de corte ≥ 5 mm, a idade entre 41-45 [OR = 2,70, IC 95%: 1,32-5,51] e 46-64 [OR = 2,04, IC 95%: 1,05-3,93], presença de cicatriz vacinal do BCG [OR = 2,72, IC 95%: 1,40-5,25] e trabalhar apenas na ABS [OR = 2,30, IC 95 %: 1,09-4,86] apresentaram associação estatística significativa. Para o ponto de corte ≥ 10 mm, a presença de cicatriz vacinal do BCG [OR = 2,26, IC 95%: 1,03-4,91], ter tido contato domiciliar com paciente portador de tuberculose ativa [OR = 1,72, IC 95%: 1,01-2,92] e ter feito a PT anteriormente [OR = 1,66, IC 95%: 1,05-2,62] revelaram associação estatística significativa. Curiosamente, a discordância observada no grupo PT- / QFT + não apresentou associação estatistica com nenhuma das variáveis consideradas, independentemente do ponto de corte da PT. Conclusões: Apesar de termos identificado que a vacina BCG contribuiu para a discordância entre os testes, as recomendações brasileiras para o início do tratamento da ILTB não devem ser alteradas devido as limitações do QFT.

Percepção dos agentes comunitários de saúde frente ao risco de infecção da tuberculose

A Tuberculose é um serio problema de saúde, os níveis mundiais no ano 2011 ocorreram 8,7 milhões de casos novos e 1,4 milhões de pessoas morreram de TB. Para horizontalizar as ações no combate da TB na atenção primaria o Agente Comunitário de Saúde assume um papel muito importante, pois eles além de trabalhar na comunidade onde mora ele é um mediador de saberes, espera-se que esse profissional seja capaz de identificar por meio de visitas domiciliares sintomáticos respiratórios. Objetivos: Conhecer a percepção que os ACS têm sobre o risco de infecção à tuberculose no cotidiano de sua prática profissional e analisar como eles se organizam e estruturam sua prática frente a essa percepção. Abordagem Metodológica: O estudo foi dividido em duas fases a primeira responde ao primer objetivo e foi escolhido o Grupo Focal e para a segunda fase que responde ao segundo objetivo foi escolhido a Observação Participante como técnicas de trabalho em campo e Analise de Conteúdo Temático como técnica de análise das informações colhidas que consiste em descobrir os núcleos de sentidos que são temas os quais são unidades de significação que se libertam naturalmente de um texto analisado. Resultados: Na primeira fase do estudo observou-se que o Agente Comunitário de Saúde percebe os riscos que estão expostos, mas muitas vezes eles não sabem como agir em situações, especificas, na segunda fase indicam que o risco não esta presente o tempo todo na vida e no trabalho deles. Conclusão: O PACS é apresentado pelo Ministério da Saúde como uma estratégia de saúde para horizontalizar as ações no controle da TB, neste estudo foi encontrado que o ACS percebe o risco que esta exposto, mas que aquele risco não esta sempre presenta na vida deles, pois eles muitas vezes minimizam os riscos pensando que nada acontece nem acontecera com eles.

Candidíase oral e leucoplasia pilosa como marcadores de progressão da infecção pelo HIV em pacientes brasileiros

Candidíase oral (CO) e leucoplasia pilosa (LP) são importantes indicadores da progressão da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) para o quadro de AIDS, principalmente em locais onde exames específicos são inacessíveis. OBJETO: Relacionar CO e LP ao número de células CD4+ e à carga viral (CV) em pacientes brasileiros HIV-positivos, confirmando-as como marcadores clínicos confiáveis de progressão da doença. FORMA DE ESTUDO: Coorte longitudinal. CASUÍSTICA E MÉTODO: Avaliamos prospectivamente 124 pacientes HIV-positivos, isentos de terapia antiretroviral. Todos foram submetidos a exame ORL, dosagem de células CD4+ e CV, sendo divididos em dois grupos: P e A, de acordo com a presença ou ausência de CO e LP. Depois de seis meses, os pacientes do grupo A foram subdivididos nos subgrupos P6 (presença de lesões) e A6. Dosamos novamente CD4+ e carga viral. Os resultados foram analisados estatisticamente. RESULTADOS: No grupo P (43 pacientes, 28 CO e 15 LP) a contagem de células CD4+ foi menor e a carga viral maior em relação ao grupo A (p<0,001). Após 6 meses, 15 dos 81 pacientes do grupo A foram excluídos por iniciarem terapia antiretroviral. Dezoito (11 CO e 7 LP), passaram a compor o grupo P6. Os demais, sem lesões, compuseram o grupo A6. A contagem de células CD4+ no grupo P6 foi menor (p< 0,001) que no grupo A6. O inverso ocorreu com a carga viral. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: CO e LP indicam contagem de células CD4+ abaixo de 300 cels/mm³ e carga viral elevada, sendo marcadores clínicos confiáveis da progressão da doença.

Rinossinusite fúngica em pacientes com infecção nasossinusal crônica

OBJETIVO: Estudar a rinossinusite fúngica em pacientes com infecção nasossinusal crônica. Nas últimas décadas houve aumento das infecções fúngicas, e a rinossinusite fúngica (RSF) tem sido mais freqüentemente diagnosticada. O conhecimento da flora fúngica, da sua prevalência e da apresentação sintomática em pacientes portadores de rinossinusite crônica (RSC) permitirá um melhor entendimento da doença, fato importante para a realização do diagnóstico, estabelecimento do tratamento e formulação do prognóstico. FORMA DE ESTUDO: clínico retrospectivo com coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: 62 pacientes com diagnóstico de RSF foram selecionados entre 890 portadores de RSC submetidos à cirurgia endoscópica. Avaliou-se anamnese, exame otorrinolaringológico com videoendoscopia nasal, TC dos seios da face e exames microbiológicos e histopatológico. RESULTADOS: A prevalência de RSF foi de 6,7% em portadores de RSC submetidos à cirurgia endoscópica dos seios paranasais, e o tipo de fungo mais encontrado foi do gênero Aspergillus. Bola fúngica foi encontrada em mais da metade dos casos, e RSFA, em mais de um terço dos pacientes. CONCLUSÕES: A evolução sintomática após a cirurgia endoscópica foi mais favorável nos portadores de bola fúngica, que necessitaram menor número de reintervenções.